ADA 酶比色法
腺苷脱氨酶(ADA)测定及意义
腺苷脱氨酶（ADA）测定及意义
腺苷脱氨酶（ADA）是嘌呤核苷代谢中重要的酶类，属于巯基酶，每分子至少含2个活性巯基，其活性能对氯汞甲酸完全抑制。
ADA广泛分布于人体各组织中，以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高，肝、肺、肾和骨胳肌等处含量较低。
血液中ADA主要存在于红细胞、粒细胞和淋巴细胞，其活性约为血清的40～70倍，T淋巴细胞比B淋巴细胞该酶活性更高。
1．正常参考值：
速率法：健康成年人：0-19.6 U/L。
比色法：按ADA的习用单位计算，健康成年人为：0-25 U/L。
按国际单位计算，健康成年人为：≤30 U/L。
2．临床意义
血清ADA活性增高见于：
①肝脏疾病：急性黄疸性肝炎，肝细胞出现损伤，在黄疸尚未出现前，可见增高。
因
ADA分子量较ALT小，当肝细胞轻度受损时ADA比ALT先释入血内。
慢性肝炎活动期，慢性迁延性肝炎升高明显；肝硬化、原发性肝癌时，ADA活性也升高。
②肿瘤引起的阻塞性黄疸、前列腺癌和膀胱癌、网状细胞瘤、淋巴瘤、溶血性贫血、
风湿热、伤寒、痛风、重症地中海贫血、骨髓性白血病、结核、自身免疫性疾病、传染性单核细胞增多症和心力衰竭等均可引起此酶升高。
③结核性胸腹水ADA活性显著增高，癌性胸腹水不增高，而血清中ADA活性二者无
明显差别，故测定胸腹水中ADA活性有助于将两者鉴别。
④结核性脑膜炎ADA显著增高，而病毒性脑膜炎则不增高，颅内肿瘤及中枢神经系统
白血病稍增高。
所以脑脊液ADA检测可以作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标。
ADA 腺苷脱氨酶
拼音
xiàngāntuōānméi
英文参考
adenosinedeaminase
腺苷脱氨酶 adenosine deaminase 催化腺苷的氨基水解脱氨生成次黄核苷和氨反应的酶。
EC 3．5．4．4。
主要存在于肝脏和肌肉，而其他动物器官也广泛存在。
另外，也存在于曲霉中。
来自前者的酶特异性强，对腺苷和脱氧腺苷以外的核酸及其分解物不起作用，但来自后者的酶（高峰淀粉酶）是非特异性的，可对5′－AMP、ADP、ATP、嘧啶二核苷酸等起脱氨作用。
化验
英文名
adenosinedeaminase
别名
血清腺苷脱氨酶,ADA
正常值
(1)酶速率法(37℃)：0～30U/L
(2)分光光度法：＜25U
(3)比色法：5～25U/ml
化验结果意义
升高：急、慢性病毒性肝炎、肝硬化、药物性肝损害、酒精性肝纤维化症(中度以上)、原发性肝癌、自身免疫性肝疾病、各种白血病、传染性单核细胞增多症、类肉瘤病等。
化验取材
血液
化验方法
酶类测定
化验类别
血液生化检查、酶类测定
参考资料
《新编临床检验与检查手册》、《新编化验员工作手册》相关疾病
肝硬化。
ADA 酶比色法
腺苷脱氨酶（ADA ）测定试剂盒（酶比色法） 使用说明书【产品用途】本试剂用于测定血清、胸腹水、脑脊液中的腺苷脱氨酶活性。
【临床意义】肝脏疾病时，本酶活性往往升高，有助于黄疸的鉴别诊断。
在阻塞性黄疸时，此酶活性升高很少，而在肝实质性损伤时，此酶和转氨酶往往同时升高，特别在慢性活动性肝炎和肝硬变时，转氨酶阳性率较低，增高幅度也不明显，而ADA 活性的阳性率可达90%左右，增高程度也较明显。
同时ADA 检测对白血病、伤寒、出血热也有辅助诊断作用。
测定胸腹水及脑脊液标本中的ADA 活性，有鉴别诊断价值。
结核性胸腹水中ADA 活力显著高于癌症及炎症胸腹水中ADA 活力，对早期诊断结核性胸、腹膜炎有较高的敏感性和一定的特异性。
此外，脑脊液ADA 检测可作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标，结核性脑膜炎ADA 活性升高，病毒性脑膜炎不升高。
【适用范围】液体双试剂，即开即用，自动化分析仪用。
【产品规格】R 1 50ml ×2 R 2 50ml ×1【试剂成份】R 1Tris-HCl pH8.0 50mM4-AA 2mM PNP 0.1kU/mLXOD 0.2kU/mL POD 0.6kU/mL 稳定剂 R 2 Tris-HCl ph4.0 50mM 腺苷 10mMEHSPT 2mM【检测原理】腺苷在腺苷脱氨酶作用下脱氨基形成次黄苷，次黄苷在PNP 作用下生成次黄嘌呤，次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶（XOD ）作用下转化为尿酸和过氧化氢（H 2O 2），H 2O 2与EHSPT 和4-氨基安替比林（4-AA ）反应生成醌色物，显色强度与ADA 活性成正比。
腺苷−−−→−ADA次黄苷 + NH 3 次黄苷 + Pi −−→−PNP次黄嘌呤 + 核酸-1-磷酸 次黄嘌呤 + 2H 2O + 2O 2−−−→−XOD 尿酸+ 2H 2O 22H 2O 2 + 4-AA + EHSPT −−→−POD醌亚氨染料+ H 20【样本采集】新鲜非溶血血清或血浆，ADA 在4℃时可稳定1周。
腺苷脱氨酶(ADA)
腺苷脱氨酶（ADA）参考值：0-15U/L 海丰参考区间4~24U/L介绍：腺苷脱氨酶(ADA)为一种与机体细胞免疫活性有重要关系的核酸代谢酶，其作用是催化水解腺苷生成肌苷和氨。
ADA广泛存在于各组织中，以盲肠、小肠黏膜、脾脏、胸腺中含量最高，肝脏、肺、肾、心脏、骨骼肌、神经组织等处含量较低，肝脏含量约为小肠的7%~10％。
肝内ADA90％存在与细胞浆水溶性部分，其余在细胞核内。
此外，血细胞(红细胞、粒细胞、淋巴细胞)内ADA活性约为血液中40倍~70倍，因此测定ADA时应避免溶血。
血清中的ADA主要来自肝脏，所以肝细胞损伤或膜通透性增强，均可使血中酶活性增高，故可依据该酶活性增高或降低反映肝细胞损伤和恢复程度。
血清腺苷脱氨酶（ADA）正常值：(1)酶速率法(37℃)：健康成年人：7.7-19.3 U/L(2)分光光度法：<25 U/L(3)比色法：健康成年人为：5～25 U/L诊断参考：肝脏疾病：ADA活性是反映肝损伤的敏感指标，可作为肝功能常规检查项目之一，与ALT或GGT等组成肝酶谱能较全面地反映肝脏病的酶学改变。
一．ADA活性是反映肝损伤的敏感指标，可作为肝功能常规检查项目之一，与AIT或GGT等组成肝酶谱。
（1）用于判断急性肝损伤及残留病变急性肝炎时ALT明显升高。
ADA仅低度，中度升高。
但重症肝炎发生酶胆分离时，尽管ALT不高，而ADA常明显升高。
而ALT恢复正常，ADA持续升高者，常易复发或易迁延为慢性肝炎。
（2）协助诊断慢性肝病在反映慢性肝损伤时ADA较ALT为优。
慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌患者血清ADA活性显著升高，因而可判断慢性肝病的程度。
另外，慢性活动性肝炎活性明显高于慢性迁延性肝炎。
故可用于二者的鉴别诊断。
（3）有助于肝纤维化的诊断ADA活性差异与肝细胞损害关系不大，与肝纤维化程度相关。
肝纤维化程度增加，ADA活性增加。
（4）有助于黄疸的鉴别据文献报道，阻塞性黄疸血清ADA活性明显低于肝细胞性黄疸及肝硬化伴黄疸。
酶活性的检测方法
酶活性的检测方法
酶活性的检测方法通常包括以下几种常见的技术：
1. 吸收光谱法：利用酶底物与产物在不同波长下的吸光度差异，通过光谱仪测量反应过程中的吸光度变化来检测酶的活性。
2. 色谱法：利用色谱仪对酶底物和产物进行定量分析，可测定酶催化反应中底物和产物的浓度变化，从而确定酶的活性。
3. 比色法：利用对比试剂和酶底物反应后产生的色素溶液颜色深浅的变化来测定酶的活性。
比色法一般适用于检测酶对底物的催化活性。
4. 酶标测定法：利用酶对底物的特异性催化作用来标记或测定其他物质的方法，包括酶联免疫吸附分析（ELISA）和酶标记免疫测定法等。
以上是一些常见的酶活性检测方法，具体的选择取决于酶的特性和所需测定的参数。
值得注意的是，不同酶可能需要不同的检测方法，并且在进行实验时应根据实际情况选择合适的检测方法。
体外诊断试剂：最大稀释倍数及基质影响的性能研究资料
体外诊断试剂：N-乙酰-β-D-氨基葡糖糖苷酶测定试剂盒（比色法）最大稀释倍数及基质影响的性能研究资料
依据国家食品药品监督管理局《体外诊断试剂注册管理办法》，参考《体外诊断试剂分析性能评估指导原则（征求意见稿）》和CLSI有关标准，对本品的最大稀释倍数及基质影响作如下实验研究，结果如下：
1. 仪器：
日立7060全自动生化仪
2. 试剂：
本公司生产的N-乙酰-β-D-氨基葡糖糖苷酶测定试剂盒（比色法），批号为：20140115、20140117、20140119
3. 最大稀释倍数及基质影响实验研究
3.1 实验方法
选取接近于线性范围上1/3区域内的3个高浓度样本，分别使用生理盐水对高浓度样本进行稀释，并记录稀释倍数，各浓度样本的制备方法见表1；在一次运行中将高浓度样本及各稀释样本重复测定3次，记录测试结果见表2-4。
表1 7个浓度水平的样本制备方法
3.2 实验数据及分析结果
表2 多倍稀释实验数据记录和结果（批号：20140115）
表3 多倍稀释实验数据记录和结果（批号：20140117）
表4 多倍稀释实验数据记录和结果（批号：201400119）
3.3 实验结论
从上述实验数据及统计分析结果中选取还原浓度与理论浓度的相对偏差（%）等于或小于本试剂盒性能指标中准确度相对偏差的最大稀释倍数为本试剂盒推荐的最大稀释倍数。
通过以上实验结果表明，当稀释倍数≤32倍时，相对偏差＜15%，故本试剂盒能做的最大样本稀释倍数为32倍。
在该最大稀释倍数下，样本使用生理盐水进行稀释对基质的影响在规定范围之内。
血清腺苷脱氨酶ADA测定
血清腺苷脱氨酶ADA测定1.实验原理应用ADA偶联嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)，黄嘌呤氧化酶(XOD)和过氧化物酶(POD)反应连续监测法。
ADA酶解腺苷(Adenosine)脱氨产生次黄苷(Inosine)；再通过偶联PNP的作用，生成次黄嘌呤(Hypoxanthine);后者在XOD氧化作用下生成尿酸和过氧化氢；最后在POD的作用下H2O2再与N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-3-甲基苯胺(EHSPT)、4-氨基安替比林(4-AAP)反应(Trinder氏反应)，生成紫红色的有色醌。
通过测量有色醌550nm处吸光度上升的速度来测算ADA的活性。
ADAAdenosine + H2O Inosine + NH3PNPInosine + Pi Hypoxanthine + Ribose 1-phosphateXODHypoxanthine + 2H2O + 2O2 Uric acid + 2H2O2POD2H2O2 + 4-AA P+ EHSPT 4H2O + Quinone dy e2. 标本：2.1 病人准备：新鲜血清，采血后应及时分离，避免溶血。
2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。
3. 标本存放：血清，采血后应及时分离避免溶血，ADA在4℃稳定一个星期。
4. 标本运输：冰冻条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血等存运输的标本。
6. 实验材料6.1 试剂：亚太ADA试剂盒（H013 090920 试剂1＋试剂2）6.1.1 试剂组成6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为12个月。
试剂必需避光保存。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：试剂出现颗粒或浑浊，被视作变质，应停止使用。
6.1.5 注意事项：试剂请勿直接接触皮肤、眼睛，如有接触，请用大量清水清洗。
请勿吞服。
6.2 校准品：使用亚太提供的专用校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU640生化分析仪项目测定参数.SOP文件。
医学检验·检查项目：血清腺苷脱氨酶(ADA)_课件模板
血清ADA活性增高见于： ① 肝脏疾 病：急性黄疸性肝炎，肝细胞出现损伤， 在黄疸尚未出现前，可见增高。因ADA分 子量较ALT小，当肝细胞轻度受损时ADA比 ALT先释入血内。慢性肝炎活动期，慢性 迁延性肝炎升高明显；肝硬化、原发性肝 癌时，ADA活性也升高。 ② 肿瘤引起的 阻塞性黄疸
相关症状： 黄疸、腹水、咳嗽、血红蛋白尿、血尿、 尿频伴尿急和尿痛。
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相关疾病：
溶血过度所致贫血、原发性肝癌、再生障 碍性贫血、膀胱癌、前列腺癌、小儿腺苷 脱氨酶缺乏、肝硬化、溶血性贫血、急性 淋巴细胞性白血病、黏脂贮积症Ⅰ型、病 毒性肝炎、肺结核、肠结核。
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简介：
40～70倍，T淋巴细胞比B淋巴细胞该酶活 性更高。
腺苷脱氨酶是一种与机体细胞免疫活 性有重要关系的核酸代谢酶。测定血液、 体液中的ADA及其同工酶水平对某些疾病 的诊断、鉴别诊断、治疗及免疫功能的研 究日趋受到临床重视。
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临床意义：
前列腺癌和膀胱癌、网状细胞瘤、淋巴瘤、 溶血性贫血、风湿热、伤寒、痛风、重症 地中海贫血、骨髓性白血病、结核、自身 免疫性疾病、传染性单核细胞增多症和心 力衰竭等均可引起此酶升高。 ③ 结核性 胸腹水ADA活性显著增高，癌性胸腹水不 增高，而血清中ADA活性二者无明显差别， 故测定胸腹水中A
谢谢！
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α-淀粉酶(α-AL活性检测试剂盒(碘-淀粉比色法)说明书__可见分光光度法UPLC-MS-6003
α-淀粉酶（α-AL）活性检测试剂盒（碘-淀粉比色法）说明书可见分光光度法UPLC-MS-600350T/24S试剂名称规格保存条件试剂一粉剂×1瓶2-8℃保存试剂二液体10mL×1支2-8℃保存试剂三液体30mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入12.5mL试剂三，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解，用不完的试剂2-8℃保存8周；2、标准品：10mg淀粉标准品。
临用前加10mL试剂三，置沸水浴中振荡溶解，配成1mg/mL淀粉标准液，2-8℃保存四周。
淀粉酶负责水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。
α-淀粉酶(EC3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。
α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘可以与未被水解的淀粉结合，生成在570nm下有特征吸收峰的复合物，其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。
α-AL耐热，但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。
因此粗酶液经过70℃钝化15min，就只有α-AL能够催化淀粉水解。
Unhydrolyzed Starch+Iodine Blue Complex（570nm）注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：称取约0.1g样本，加1mL蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；6000g，室温离心10min，吸取上清液即为淀粉酶原液。
2、液体：直接检测。
（若有浑浊则离心后进行测定）二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。
腺苷脱氨酶（ADA）检测试剂盒（波氏比色法）
腺苷脱氨酶（ADA）检测试剂盒（波氏比色法）腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)简介：腺苷脱氨酶(Adenosine Deaminase ，ADA)是嘌呤核苷代谢中重要的酶类，属于一种巯基酶，每分子至少含2个活性巯基。
ADA 能催化腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷，再经核苷磷酸化酶作用生成次黄嘌呤，其代谢缓和终产物为尿酸。
ADA 广泛分布于人体各组织中，以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高，而肝、肺、肾和骨胳肌等含量低。
Leagene 腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)其检测原理是待测样品中的ADA 催化腺嘌呤核苷水解脱氨，产生次黄嘌呤核苷和铵离子，利用波氏显色法，测定氨离子生成量。
其反应公式为：腺苷+H 2O →次黄嘌呤+NH 3。
通过分光光度计检测处吸光度，根据计算公式可得ADA 活力，100T 试剂盒可测50个样本。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、离心管或小试管2、水浴锅3、比色杯4、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，冻存，用于ADA 的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，冻存，用于ADA 的检测。
编号名称TE0233 100T Storage试剂(A):氨氮标准(1mg/ml) 1ml 4℃ 试剂(B): 底物缓冲液30ml 4℃ 试剂(C): 波氏ADA 显色液250ml 4℃ 避光试剂(D): ADA Assay b uffer 250ml 4℃ 避光使用说明书高活性样品：如果样品中含有较高活性的ADA，可以使用ddH2O稀释。
④(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的ADA含量。
2、稀释标准品：用ddH2O准确稀释氨氮标准(1mg/ml)至25μg/ml，即为氨氮标准工作液，4℃保存，备用。
ADA
腺苷脱氨酶测定(ADA)测定操作规程（SOP文件）1实验原理和检验目的ADA腺嘌呤核苷+ H2O———→次黄嘌呤核苷+NH3PNP次黄嘌呤核苷+Pi———→次黄嘌呤+磷酸核糖XOD次黄嘌呤+2H2O+2O2 ———→2H2O2+尿酸POD2H2O2+4-AAP+ TOOS———→醌化合物在波长546nm处测定醌化合物生成速率，计算出ADA活力。
2标本采集和处理2.1标本种类和采集方法标本：血清、血浆、脑脊液、胸腹水，采血后应及时分离，避免溶血。
2～8℃贮存可用三天。
受检者（体检对象或病人）的准备：对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯。
静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布。
2.2标本处理方法标本要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
样品采集后要离心标本，吸出血清。
标本应立即测定。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3试剂3.1试剂组成3.2试剂准备试剂为液体双试剂，开瓶即可使用，用后及时置于2～8℃避光保存。
3.3试剂稳定性试剂在2-8℃避光保存可稳定12个月，试剂开盖稳定2周。
配成单一工作试剂稳定1周。
4校准4.1校准品每日进行试剂空白校准操作。
建议使用本公司ADA校准品进行全点校准操作。
4.2校准品准备本公司ADA校准品复溶30分钟，充分溶解混匀后即可使用。
4.3校准品稳定性本公司ADA冻干校准物2～8℃密闭保存稳定至有效期，复溶后校准物15℃～25℃稳定8小时，2℃～8℃稳定2天，-15℃～-25℃稳定2周。
4.4试剂校准周期推荐校准周期为2天。
当试剂批号更换时应重新校准。
5质控5.1质控品建议采用本公司ADA质控品进行室内质控。
5.2可接受性判断质控物的检测值应在给定质控范围，或可以通过参加卫生部室间质评对实验室的运作情况进行系统评估。
5.3质控操作每日进行样本检测之前首先应进行质控操作，以考察系统的在控情况。
如果检测结果符合质控要求则进行样本操作；如果不符合质控要求，则应重复质控操作，以排除可能发生的偶然误差；如果仍不符合质控要求，则应考虑质控品的重新准备、试剂的重新校准或更新、仪器的维护等。
腺苷脱氨酶、癌胚抗原和乳酸脱氢酶检测在胸腔积液病因诊断中的意义
1.1 一 般 资料 2006 年 1 月~2006 年 12 月 胸 水住 院患 者共 49 例 , 结 核组 32 例中 男 23 例 , 女 9 例 , 年 龄 20~90 岁 , 平 均 53.9 岁, 诊断 标 准: 有 结核 病 史或 密切 接触 史, 有 结核 中 毒症 状, 痰中 找到 结 核菌 或肺 内有 结核 病 灶, 抗 结核 药 物治 疗 有效 ;` 恶 性 组 17 例 中男 14 例, 女 3 例 , 年 龄 54~88 岁 , 平 均 69.1 岁 , 恶 性胸 腔积 液诊 断标 准: 病 理学 依据 或(和)转移 证据 。 1.2 方 法 采 用 BECKMAN LX- 20 全 自 动 生 化 分 析仪 、美 国贝 克曼 公 司的 ACCESS 全自 动 微粒 子化 学发 光免 疫分 析仪 测定 。试 剂盒 分别 为: 腺 苷脱 氨酶 检测 试剂 盒 ( 宁波 美康 生物 科 技有 限公 司 生产 ) 、乳 酸脱 氢 酶试 剂 盒 ( KHB 上海 科 华生 物 工 程股 份 有限 公司 生产 ) 、癌 胚抗 原 1020 试剂 盒( 德国 罗 氏公 司生 产) 。 正常参 考值 : 腺苷 脱氨酶 ( ADA) 2~25 U/L, 癌胚 抗原( CEA) 0~10 ng/ml, 乳酸 脱氨 酶( LDH) <220 U/L。 1.3 统 计学 方法 采 用 SPSS10.0 统 计 软件 , 定 量资 料组 间比 较采 用成 组 t 检 验, 以 P<0.05 为 差异 有统
LDH 比值 2.9 5±0. 36 3.9 5±0. 63
注: 与结核组比较, *P<0.05
2.2 两组 各指 标胸 水/血 清比 值 见表 2。
3讨 论
酶的测定(详细)
一、脲酶测定(比色法)1.方法原理脲酶广泛存在于土壤中，它能酶促尿素分解生成氨、二氧化碳和水。
测定脲酶的方法很多，包括比色法、扩散法、电极法等，其中比色法最为常用。
现介绍苯酚一次氯酸钠比色法，该方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚次氯酸钠作用(在碱性溶液中及在亚硝基铁氰化钠催化剂作用下)生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。
2.试剂配制（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。
（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。
称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。
使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。
（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，溶液稳定。
（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。
（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL含0.1mgN的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。
3.操作步骤取5g风干土置于50mL三角瓶中，加1mL甲苯。
15min后加10mL10％尿素溶液和20mLpH=6.7柠檬酸盐缓冲液。
摇匀，37℃恒温箱中培养24h。
过滤，取1mL滤液注入50mL 容量瓶中，然后按配制标准曲线显色方法进行比色测定（为了消除土壤中原有的尿素而引起的误差，每一土壤需做无基质对照，整个试验需做无土壤对照。
）。
标准曲线配制：分别取0、l、3、5、7、9、11、13mL氮工作液，移于50mL容量瓶中，然后加蒸馏水至20mL。
再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液。
随加随摇匀。
20min 后显色，定容。
lh内在分光光度计上于波长578nm处比色。
根据吸光值与氮溶液浓度绘制标准曲线。
酶检测方法
酶检测方法酶是生物体内一类具有特定功能的蛋白质，它们在生物体内发挥着关键的催化作用。
酶的活性能够反映生物体内代谢的运行状态，因此酶检测在生物学研究、临床诊断和生物工程等领域起着重要的作用。
本文将介绍酶检测的方法，并分析其原理和应用。
一、酶检测的原理每种酶都具有特定的底物，当底物被酶催化后产生一定的产物，可以通过测量产物的数量或者相关反应的速率来间接反映出酶的活性。
酶的检测方法主要有光度法、荧光法、比色法和电化学法等。
光度法是利用酶催化反应后产生的物质溶液的吸收特性来检测酶活性的方法。
首先，选择具有特定光学属性的底物，使酶催化后的产物能够吸收特定波长的光线。
然后，通过测量反应体系中吸光度的变化来确定酶的活性。
举例：以辣根过氧化物酶的检测为例，辣根过氧化物酶能够将辣根过氧化物（HRP）和底物间的过氧化氢催化成高活性的自由基，进而氧化显色底物，形成有色产物。
利用比色法测定产物的吸光度变化，即可定量检测出辣根过氧化物酶的活性。
荧光法是利用酶催化反应产物的荧光特性来检测酶活性的方法。
在酶催化反应中，有些底物和产物具有荧光特性，通过测量产物的荧光强度变化可以确定酶的活性。
举例：以葡萄糖氧化酶的检测为例，葡萄糖氧化酶能够将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，产生荧光物质NADH。
通过测量NADH的荧光强度变化，可以判断葡萄糖氧化酶的活性。
比色法是利用酶催化反应后产生的有色产物来检测酶活性的方法。
在酶催化反应中，底物与其他试剂反应产生有色产物，通过测量产物的吸光度变化来确定酶的活性。
举例：以碱性磷酸酶的检测为例，碱性磷酸酶能够将对硝基苯磷酸钠底物催化成黄色产物对硝基苯胺。
通过测量对硝基苯胺的吸光度变化，可以确定碱性磷酸酶的活性。
五、电化学法电化学法是利用酶在电极表面催化产生电流来检测酶活性的方法。
在电极表面固定酶，底物被酶催化后，产生电荷转移，可以通过测量电流变化来确定酶的活性。
举例：以谷胱甘肽还原酶的检测为例，谷胱甘肽还原酶能够将还原型谷胱甘肽（GSH）氧化为氧化型谷胱甘肽（GSSG）。
总胆汁酸检测
酶比色法测定总胆汁酸
-----临床意义
胆汁酸的生成和代谢与肝脏生理关系 密切，血清胆汁酸水平是反映肝实质损伤 的一个重要指标。血清总胆汁酸(TBA)测定 对肝病的诊断有十分重要的价值。 1．急性肝炎：急性肝炎时血清TBA显著增 高，可达正常人水平的10～100倍，甚至更 高，急性肝炎初愈患者血清TBA由最初的高 值几乎与AST在同一时间降至正常水平，若 持续不降或反而上升者则有发展为慢性的 可能。 2．慢性肝炎：慢性肝炎分为轻度、中度和 重度三个类型，空腹总胆汁酸(F-TBA)和餐 后2h总胆汁酸(P-TBA)测定对慢性肝炎的分 型、监测、预后及疗效有着重要意义。
循环法测定胆汁酸
【计算】 TBA(μmol/L) =A测定2-A测定1/A标准2-A标准1×C标准 【参考范围】 40名健康成人的空腹TBA为3.71±2.98μmol/L。 【注意事项】 血清TBA测定的酶循环法是一种通过脱氢酶辅酶体系来循环底物的方法，因此要求①这种酶 对硫代-NAD和NADH都应有高亲和力；②反应体系 的pH和缓冲液应允许正反应(底物氧化)和逆反应 (底物还原)都能进行；③还要求硫代-NAD和NADH 浓度比例合适。这些条件使反应的循环速率相当 快(约100次/min),在一定的反应时间内通过胆汁 酸的重复反应来增加硫代-NADH的量,提高反应灵 敏度。
酶比色法测定总胆汁酸
-----临床意义
3．肝硬化：肝硬化时，肝脏对胆汁酸的代谢能力 减低，血清TBA在肝硬化的不同阶段均增高，增高 幅度一般高于慢性活动性肝炎。即使在肝硬化晚期 亦如此。当肝病活动降至最低时，胆红素、转氨酶 及碱性磷酸酶等指标转为正常，血清TBA仍维持在 较高水平。 4．乙醇性肝病：乙醇性肝病血清TBA可增高，当乙 醇性肝病(包括肝硬化)发生严重的肝损伤时，血清 TBA明显增高，而轻、中度损伤增高不明显。有报 道认为，血清TBA测定对乙醇性肝病肝细胞损伤诊 断的可信度和灵敏度远优于各种酶学检查和半乳糖 耐量试验等指标，甚至建议将血清TBA再加上β-氨 基己糖苷酶作为乙醇性肝病的诊断指标。有人认为， 餐后60min-TBA测定对乙醇性肝病诊断更有意义。
角质酶 比色法
角质酶比色法
角质酶比色法是一种常见的生物化学分析方法，其原理是利用酶反应系统中释放出巯基胆碱，使用Ellman 试剂后，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物，出现吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中酶的活性。
酶比色法的优点包括：灵敏度高，可以检测到非常小量的物质；选择性好，可以特异性地检测某种物质，不易受到其他干扰物质的影响；操作方便，不需要特殊的设备和复杂的处理流程；适用范围广，可以用于检测各种生物大分子和小分子化合物。
然而，酶比色法也存在一些缺点，如检测结果可能受到环境因素的影响，如温度、pH 等；需要较长的反应时间，在实际应用中需要耐心等待结果；需要酶的纯度和活性达到一定要求，否则会影响检测结果的准确性和灵敏度；在样品处理过程中可能引入误差，需要注意样品的预处理和存储条件。
总的来说，酶比色法是一种优秀的生物化学分析技术，但在实际应用中需要综合考虑其优缺点，并结合实际情况选择合适的检测方法。
婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定—酶比色法(一)
婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定—酶比色法（一）本标准规定了婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定办法。
本标准适用于婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定。
2 原理试样中的胆碱经酸水解后变成游离态的胆碱，再经酶氧化后与显色剂反应生成有色物质，其色彩的深浅在一定浓度范围内与胆碱含量成正比。
3 试剂和材料注：除非另有解释，本办法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。
3.1 试剂 3.1.1 ［(CH2OH)3CNH2]。
3.1.2 (C6H5OH)。
3.1.3 浓盐酸(HC1)。
3.1.4 (NaOH)。
3.1.5 ：置于-20℃保存。
3.1.6 ：置于2℃～8℃保存。
3.1.7 4-氨基安替比林(C11H13N3O)。
3.1.8 磷脂酶D：置于-20℃保存。
3.2 试剂配制 3.2.1 盐酸(1mol/L):量取85mL浓盐酸加水稀释至1000mL。
3.2.2 盐酸(3mol/L)：量取125mL浓盐酸加水稀释至500mL。
3.2.3 Tris缓冲溶液(0.05mol/L):pH=8.0±0.2。
称取6.057g溶入500mL蒸镏水中，用1mol/L盐酸调pH至8.0±0.2,用蒸馆水定容至1000mL。
此溶液在4℃冰箱中可保存一个月。
3.2.4 用于酶反应的显色剂：取100～120活力单位的胆碱氧化酶、250～280活力单位的过氧化物酶、 75个～100个活力单位的磷脂酶D、15mg 4-氨基安替比林,50mg苯酚置于100mL的容量瓶中，用0.05mol/LTris缓冲溶液稀释至刻度。
临用时配制。
3.2.5 溶液(500g/L)：称取500g，溶于水并稀释至1000mL。
3.3标准品胆碱酒石酸氢盐标准品（C9H19NO7）:纯度≥99%。
3.4标准溶液配制 3.4.1 胆碱氢氧化物标准贮备溶液（2.5 mg/mL）:称取在102℃±2℃烘至恒重的523 mg置于100mL容量瓶中，用蒸镏水稀释至刻度。
酶法和比色法
酶法和比色法是两种常用的生化分析方法，用于检测和定量样品中的特定物质。
酶法：酶法利用了酶作为生物催化剂的高度特异性和高效性。
例如，在医学检验或食品工业中，通过酶催化的特定生化反应来测定样品中的某种化合物含量。
如上文提到的甘油三酯测定，就是先用脂肪酶将甘油三酯分解为甘油，然后通过一系列酶促反应生成可被检测的产物，以此计算甘油三酯的量。
比色法：比色法是一种光学分析方法，基于物质对光的吸收特性，通过比较溶液颜色深浅变化来测定溶液中特定成分的浓度。
当酶法和其他化学反应产生的物质具有颜色或者能与显色剂反应产生颜色时，就可以应用比色法进行测量。
比如尿酸测定试剂盒采用酶比色法，即通过酶催化反应后生成的颜色强度与尿酸含量成一定比例关系，从而间接测得尿酸浓度。
酶的测定方法
一、脲酶测定(比色法)1、试剂配制：（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。
（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。
称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。
使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。
（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，溶液稳定。
（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。
（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL含0.1mgN 的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。
2、操作步骤称取5ｇ土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理,加塞塞紧轻摇15ｍｉｎ;往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液(ｐＨ6.7),仔细混匀。
在37℃恒温箱中培养24ｈ。
然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。
取滤液1mL 置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至10mL,然后加入4mL苯酚钠溶液,并立即加入3mL次氯酸钠溶液，加入每一试剂后,立即将混合物摇匀,20ｍｉｎ后,将混合物稀释至刻度,在波长578ｎｍ处测定吸光值。
脲酶活性以样品所得的吸光值减去对照样品吸光值之差,根据标准曲线求出氨态氮量。
标准曲线绘制：分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至20mL，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀，20min后显色，定容。
1h内再分光光度计上于578nm处比色。
3、结果计算以24小时后1g土壤中NH3－N的质量（mg）表示脲酶活性（Ure）Ure＝a·V·n/m式中：a为由标准曲线求得的NH3－N浓度（mg/mL）；V为显色液体积（50mL）；n为分取倍数；m为烘干土重（g）。
酶的测定方法
酶的测定方法
酶是一种生物催化剂，能够加速化学反应的速率，使得生物体内的代谢过程更加高效。
因此，酶的测定方法对于生物学、医学、食品工业等领域都具有重要的意义。
酶的测定方法主要有两种：定量测定和定性测定。
其中，定量测定是指通过测定酶催化反应的速率或产生的产物量来确定酶的含量或活性。
而定性测定则是通过观察酶催化反应的结果来确定酶的种类。
在定量测定中，最常用的方法是比色法。
比色法是通过测定酶催化反应后产生的产物的吸光度来确定酶的活性。
例如，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成过氧化氢，过氧化氢与间苯二酚反应生成紫色产物，紫色产物的吸光度与酶的活性成正比。
因此，可以通过测定紫色产物的吸光度来确定酶的活性。
除了比色法外，还有许多其他的定量测定方法，如荧光法、放射性同位素法、电化学法等。
这些方法各有优缺点，可以根据实验需要选择合适的方法进行测定。
在定性测定中，最常用的方法是酶活性凝胶电泳。
酶活性凝胶电泳是通过将样品在凝胶中进行电泳，然后在凝胶上加入酶底物，观察凝胶上的酶催化反应结果来确定酶的种类。
例如，蛋白酶可以将凝胶上的蛋白质分解成小分子，因此可以通过观察凝胶上的蛋白质分解情况来确定蛋白酶的种类。
酶的测定方法是生物学、医学、食品工业等领域中不可或缺的技术手段。
通过选择合适的测定方法，可以准确地测定酶的含量和活性，为相关领域的研究和应用提供有力的支持。
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腺苷脱氨酶（ADA ）测定试剂盒
（酶比色法） 使用说明书
【产品用途】
本试剂用于测定血清、胸腹水、脑脊液中的腺苷脱氨酶活性。
【临床意义】
肝脏疾病时，本酶活性往往升高，有助于黄疸的鉴别诊断。
在阻塞性黄疸时，此酶活性升高很少，而在肝实质性损伤时，此酶和转氨酶往往同时升高，特别在慢性活动性肝炎和肝硬变时，转氨酶阳性率较低，增高幅度也不明显，而ADA 活性的阳性率可达90%左右，增高程度也较明显。
同时ADA 检测对白血病、伤寒、出血热也有辅助诊断作用。
测定胸腹水及脑脊液标本中的ADA 活性，有鉴别诊断价值。
结核性胸腹水中ADA 活力显著高于癌症及炎症胸腹水中ADA 活力，对早期诊断结核性胸、腹膜炎有较高的敏感性和一定的特异性。
此外，脑脊液ADA 检测可作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标，结核性脑膜炎ADA 活性升高，病毒性脑膜炎不升高。
【适用范围】
液体双试剂，即开即用，自动化分析仪用。
【产品规格】
R 1 50ml ×2 R 2 50ml ×1
【试剂成份】
R 1
Tris-HCl pH8.0 50mM
4-AA 2mM PNP 0.1kU/mL
XOD 0.2kU/mL POD 0.6kU/mL 稳定剂 R 2 Tris-HCl ph4.0 50mM 腺苷 10mM
EHSPT 2mM
【检测原理】
腺苷在腺苷脱氨酶作用下脱氨基形成次黄苷，次黄苷在PNP 作用下生成次黄嘌呤，次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶（XOD ）作用下转化为尿酸和过氧化氢（H 2O 2），H 2O 2与EHSPT 和4-氨基安替比林（4-AA ）反应生成醌色物，显色强度与ADA 活性成正比。
腺苷−−
−→−ADA
次黄苷 + NH 3 次黄苷 + Pi −−→−PNP
次黄嘌呤 + 核酸-1-磷酸 次黄嘌呤 + 2H 2O + 2O 2−−−→−XOD 尿酸+ 2H 2O 2
2H 2O 2 + 4-AA + EHSPT −−→−POD
醌亚氨染料+ H 20
【样本采集】
新鲜非溶血血清或血浆，ADA 在4℃时可稳定1周。
【测定方法】
1.试剂1、2在使用前恢复到37℃。
2.180μl R 1与5μl 血清（浆）样品混合，在37℃孵育3min-5min 。
3.加入90μl R 2孵育3min ，在540nm 或546nm 处测2分钟，计算每分钟平均光度变化△A/min 。
【参考范围】
血 清：4~24U/L 胸腹水：0~35 U/L 脑脊液：0~6 U/L
各实验室应建立自己的参考范围;
【产品性能】
1.试剂空白吸光度：A 340nm(1cm) ≥0.800
2.本试剂线性范围：0-150 U/L
3.精密度：批内CV ≤5% 批间相对极差CV ≤8%
4.准确度：相对偏差≤±10%
【试剂保存】
R 1、R 2为液体试剂，直接使用。
2-8℃避光稳定1年。
【注意事项】
1.本方法特异测定ADA ，其它核苷与本方法不发生反应。
2.血清胆红素达20mg/dL ，血红蛋白100mg/dL ，甘油750mg/dL ，抗坏血酸4mg/dL 对实验无干扰。
【单位意义】
在37℃条件下，每分钟用于产生1 umol 次黄苷的量定义为一个单位的ADA 。
【生产许可证】
【注册标准号】
【注册证号】。