淋巴细胞分离液说明书

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人外周血淋巴细胞分离液使用说明

人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液是一种常用的实验试剂，用于分离和提取人体外周血中的淋巴细胞。

下面是使用该试剂的详细说明：
1. 实验准备：
- 准备干净的工作台和操作工具。

- 检查分离液是否过期，确保其保存条件良好。

- 为实验准备足够数量的外周血样本。

2. 样本处理：
- 从被试者的外周血中采集适量的血液。

- 使用无菌技术将血液转移至无菌离心管中。

3. 样本离心：
- 将含有外周血的离心管放入离心机中。

- 以2000-2500转速离心10分钟，使细胞沉淀到离心管底部。

4. 废液处理：
- 弃去上层的血浆和血小板，只留下上清或底部的细胞悬浮液。

5. 细胞分离：
- 将分离液缓慢倒入含有细胞沉淀的离心管中，通常使用10 mL分离液对应1 mL的细胞悬浮液。

- 轻轻摇晃离心管，使分离液均匀混合。

- 静置15-20分钟，使淋巴细胞在分离液中上浮。

6. 细胞收集：
- 将含有上浮淋巴细胞的上清缓慢转移到新的离心管中。

- 用相同的方法重复上述步骤，以提高细胞收集率。

- 将收集到的细胞悬浮于适当的培养基中，进行后续实验。

请注意，这只是一个基本的使用说明，具体的实验步骤和分离效果可能会因实验目的和细胞样本的来源而有所不同。

在进行实验前，建议查阅供应商提供的用户手册，以获得更加详细的使用说明和操作技巧。

同时，使用过程中严格遵守实验室安全操作规范，确保个人和实验室的安全。

希望以上使用说明能够对您的实验工作有所帮助。

percoll 细胞分离液

北京华越洋生物提供Percoll 细胞分离液Gt0253-100mlPercoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞Percoll 细胞分离液(一)原理Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。

渗透压很低(<20mosm／kg H２O), 粘度也很小，可形成高达1.3g／ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。

由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。

此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。

Percoll 细胞分离液(二)操作方法及注意事项1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5％NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。

2.不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。

在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll比重相差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。

3.装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。

4.离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。

由于多层Percoll之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

5.取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。

收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。

Percoll 细胞分离液使用说明

Percoll 细胞分离液编号品名规格单位WX0181 Percoll 细胞分离液 500ml 瓶WX0183 Percoll 细胞分离液 1L 瓶Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞(一) 原理Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。

由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。

此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。

(二) 操作方法及注意事项1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M P BS)稀释到所需浓度。

Percoll浓度(％)706050403020 比重g／ml 1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.0312.不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。

3.装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。

4.离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。

由于多层Percoll之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

5.取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。

淋巴细胞分离液的原理

淋巴细胞分离液的原理
淋巴细胞分离液是一种用于分离淋巴细胞的溶液。

它的原理是利用淋巴细胞和其他细胞在密度上的差异来进行分离。

淋巴细胞分离液通常是由密度梯度离心法制备而成的。

首先，一种或多种高密度物质（如Ficoll、Percoll等）被溶解在无菌
生理盐水或缓冲液中，形成密度梯度溶液。

然后，这个溶液被注入到离心管中。

接下来，待分离的淋巴细胞样品被加入到离心管中的密度梯度溶液上方。

离心管被放置在离心机中进行离心操作。

离心的过程中，样品中的细胞会向下沉降，并在密度梯度中找到自己的位置。

由于淋巴细胞在密度上相对较轻，它们通常会沉降到密度梯度溶液的较低密度区域。

而其他细胞（如红细胞、血小板等）普遍比淋巴细胞密度高，它们会沉降到密度梯度溶液的较高密度区域。

当离心结束后，离心管中的密度梯度溶液会形成不同的层次，每个层次含有不同种类的细胞。

淋巴细胞分离液将淋巴细胞与其他细胞有效地分离开来。

最后，通过使用适当的技术，如离心、吸引、冲洗等，从密度梯度中提取和收集分离的淋巴细胞。

这种方法能够获得高纯度、高活力的淋巴细胞样品，用于进一步的实验研究。

人外周血淋巴细胞分离液使用说明

人外周血淋巴细胞分离液使用说明使用人外周血淋巴细胞分离液的步骤如下：1.样本准备：准备外周血样本，并将其采集到一个干净的试管中。

确保样本是新鲜的，并在使用前充分混合。

2.离心：将样本离心，以去除血浆或血浆和血小板，通常以低速（300×g）离心5-10分钟。

将离心管中的血浆小心吸除。

3.阻止红细胞溶解：加入足够的红细胞阻断缓冲盐溶液到血细胞沉淀中，使其与样本体积相等。

这将阻止红细胞的溶解和污染淋巴细胞。

4.包裹淋巴细胞：将滤质或管中的混合物转移到一个滤筒或离心管中，并加入合适的分离液。

分离液的添加量通常是样本体积的2-3倍。

5.混合和离心：彻底混合分离细胞和分离液，然后以适当的速度和时间进行高速离心（500×g，5-10分钟）。

此步骤将导致淋巴细胞在分离液的底部形成一个沉淀。

6.转移沉淀：使用无菌吸管或移液器小心地将沉淀转移到干净的离心管中，以避免污染。

7.洗涤：向沉淀中加入足够的平衡缓冲盐溶液，如磷酸缓冲盐溶液，轻轻混合后进行低速离心。

再吸去上清液，保留沉淀。

8.储存：沉淀可在冷藏条件下暂时储存，或冷冻保存以备将来使用。

需要注意的是，在使用人外周血淋巴细胞分离液时，一些步骤可能因其具体的类型和制造商而有所不同。

因此，建议在使用前仔细查阅并遵守产品说明书和使用手册。

此外，使用前要确保实验室操作是在严格的无菌条件下进行的，以避免污染和细胞的损伤。

总而言之，人外周血淋巴细胞分离液是一种用于从人类外周血样本中分离和富集淋巴细胞的试剂。

准确遵循产品说明和使用手册中的步骤和建议，能够帮助实验者在研究和临床应用中有效地使用该分离液。

人淋巴细胞分离液说明书(3篇)

第1篇一、产品概述本产品为一种生物医学试剂，主要用于从人血液中分离纯化淋巴细胞。

淋巴细胞是人体免疫系统的重要组成部分，广泛用于免疫学研究和临床诊断。

本产品采用特殊的分离技术，能够高效、快速地从人外周血中分离出高纯度的淋巴细胞，为后续的免疫学研究提供高质量的实验材料。

二、产品规格| 产品规格 | 批号 | 有效期 || :-------: | :---: | :----: || 100ml/瓶 | ABC123 | 2025年12月 |三、产品特性1. 高效分离：本产品采用独特的分离介质，能够高效地将淋巴细胞与其他血细胞分离，分离效率高，纯度好。

2. 操作简便：本产品使用方法简单，无需特殊设备，适合实验室常规操作。

3. 稳定性好：本产品在规定的储存条件下，稳定性良好，保质期内质量稳定。

4. 无污染：本产品在生产过程中严格遵循无菌操作规程，产品无细菌、病毒等生物污染。

四、产品用途1. 免疫学研究：用于分离淋巴细胞，进行细胞因子检测、细胞培养、细胞因子基因表达等研究。

2. 临床诊断：用于检测血液中的淋巴细胞，辅助诊断某些疾病，如自身免疫性疾病、肿瘤等。

3. 药物研发：用于药物筛选、药效评价等。

五、使用方法1. 准备工作：- 将分离液室温下平衡至室温。

- 准备无菌试管、移液器、吸头等实验器材。

- 准备适量抗凝剂（如EDTA-K2）。

2. 操作步骤：- 将抗凝全血加入分离管中，轻轻混匀。

- 将分离液加入另一支无菌试管中，加入量约为全血量的2倍。

- 将全血和分离液轻轻混合，避免产生气泡。

- 将混合后的样品垂直静置1-2小时，直至形成清晰的三层界面。

- 小心吸取淋巴细胞层，避免混入其他细胞层。

- 将淋巴细胞转移至新的无菌试管中，加入适量磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤，重复洗涤2-3次，以去除残留的分离液和杂质。

- 最后，将洗涤后的淋巴细胞悬浮于适量的PBS中，即可进行后续实验。

六、注意事项1. 操作过程中应严格遵守无菌操作规程，防止污染。

人外周血淋巴细胞分离液使用说明

人外周血淋巴细胞分离液使用说明人外周血淋巴细胞分离液（Peripheral Blood Lymphocyte Separation Medium）是一种广泛应用于分离人外周血中淋巴细胞的试剂，被广泛应用于免疫学和生物医学研究领域。

该试剂通过层析技术，可快速、高效地分离出外周血中的淋巴细胞，供后续的分析和实验使用。

一、试剂组成人外周血淋巴细胞分离液的主要成分包括离心管分层缓冲液、细胞分离密度悬液、所需的辅助试剂和脏器灭菌液等。

离心管分层缓冲液的成分通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、酵母精、酵母根、胰蛋白水解物、洋葱提取物、N-酰胺毛细管蓝等。

细胞分离密度悬液则通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、葡萄糖、胰蛋白水解物等，以及一些辅助试剂如生理盐水、浓度为2%的纯度高粘度明胶等。

辅助试剂方面，常用的有人凝血酶、去细菌酶、维生素C和青霉素等。

脏器灭菌液则是为了确保细胞分离过程中试剂和设备的无菌。

二、试剂使用方法1.准备工作在开始实验前，应准备好所需的实验试剂和设备，并确保所用的所有物品和材料都是无菌的。

同时，应将离心管分层缓冲液和细胞分离密度悬液放在常温下静置30分钟以上。

2.外周血分离取相应容量的外周血标本，在无菌条件下加入带有抗凝剂的离心管中，并轻轻倾转混合均匀，避免凝块形成。

置于无菌离心管架中，以1000-1500r/min离心5-10分钟，离心后分血浆、白细胞层和红细胞层。

3.分离淋巴细胞将离心后的中间白细胞层完全转移至新的离心管中，加入适量的生理盐水进行洗涤，离心1500r/min 5分钟。

倒掉上清液，留下沉淀。

重复该步骤2-3次。

洗涤后，加入等量的细胞分离密度悬液轻轻混合，再次离心。

离心1000r/min 20分钟。

此步骤可以使淋巴细胞充分分离。

4.收集淋巴细胞将分离好的淋巴细胞沉淀取出，加入等量的生理盐水或适宜的培养基中进行悬浮，使淋巴细胞悬浮液浓度适宜。

然后可以根据实验需要进行后续分析和实验操作。

MD PACIFIC 淋巴细胞分离液说明书

MD PACIFIC 淋巴细胞分离液说明书主要用途：淋巴细胞分离试剂是一种旨在通过葡聚糖和泛影酸钠混合液，达到特定比重，然后离心分层以获得纯化完整的单核细胞/淋巴细胞的权威而经典的技术方法。

可以被用于动物（大鼠、小鼠等）单核细胞/淋巴细胞的分离、鉴定、染色、标记、培养、DNA萃取、线粒体分离、细胞因子测定和细胞流式仪分析等研究。

产品严格无菌，即到即用，操作简易，分离出色，性能稳定，细胞活性保证。

技术背景：全血溶液含有血清、各种蛋白因子、无核血红细胞、血小板、多核白细胞和单核白细胞等。

为了获得纯化完整的单核白细胞/淋巴细胞，采用Boyum（1968）的离心技术，可以方便快速地从全血和骨髓中分离。

产品内容：淋巴细胞分离液（200）毫升产品说明书1份产品特点：-密度变化率依照Ficoll400泛影酸和氢氧化钠。

-最佳分离溶液的密度为参照具体产品的标签-生理学参数-在低粘度时高密度-无菌-即用型-溶液产品规格检测标准：热源检测结果：＜0.5EU∕ml无菌检测结果：已检测应用人外周血中分离出淋巴细胞的最佳试剂。

这种分离液同样可被用作从其它途径分离人的淋巴细胞，包括骨髓血细胞、脐带血细胞及组织匀浆。

实验步骤实验开始前，室温预热淋巴细胞分离液。

然后进行下列操作。

（注：上述方法适用于从外周血中分离淋巴细胞。

如从骨髓、脐带及组织匀浆中分离，需要先去除红细胞后再进行上述步骤分离淋巴细胞。

1．准备无菌的锥形离心管2．加入淋巴细胞分离液3. 用hank’s 液或用户自备的PBS缓冲液1：1比例（如果全血样本粘稠，可适当增大比例）稀释抗凝过的全血样品。

3．小心沿着管壁，接近分离液层面，非常缓慢地加入新鲜的稀释过的全血样品在淋巴分离液上面。

（注意：切记不要搅浑淋巴细胞分离液）4．小心放进台式离心机离心30分钟，速度为400g5．小心取出离心管，切记不要震动6．可见，最上层为淡红色透明血浆，其次为薄薄的致密白色环状层，然后为离心液层，最后为红色沉淀在管底的红细胞层。

Percoll 细胞分离液

qq:2374366200Percoll 细胞分离液Gt0253-100mlPercoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞Percoll 细胞分离液(一)原理Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。

由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。

此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。

2.不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。

3.装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。

4.离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。

由于多层Percoll之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。

5.取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。

收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。

深圳市达科为生物工程有限公司小鼠淋巴细胞分离液说明书

深圳市达科为生物工程有限公司生产地址：深圳市坪山区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园区1号楼702、703518122小鼠淋巴细胞分离液说明书Cat#7211011/7211012本品为深圳市达科为生物工程有限公司研发的新一代密度梯度分离液。

主要成份为Iodixanol ，分子量为1550。

它是完全化学惰性、无生物毒性的碘化物，不会结合任何已知的生物功能蛋白，不会干扰任何细胞表面膜蛋白，不会抑制酶活性，不会干扰抗原抗体反应。

本产品分离的淋巴细胞纯度高、状态好、得率高；分离方法简单易学，对操作者的经验要求不高。

本公司的研究表明，小鼠脾脏淋巴细胞在该分离液中暴露1小时，离心分离后，淋巴细胞的数量和质量没有明显变化，随后的ELISPOT 检测结果同对照组完全一致。

【产品信息】【使用方法】自备材料：35mm 培养皿、10mL 玻璃注射器内活塞、70μm 细胞筛网或200目尼龙网——裁成90mm ×90mm 正方形（以上材料均为无菌要求）、离心管、移液管、加样枪、水平转子离心机等。

【实验步骤】1.断颈处死小鼠，浸泡于75%的乙醇中。

2.在超净台中取出小鼠脾脏。

注意无菌操作。

3.在35mm 培养皿中放入4mL-5mL 小鼠淋巴细胞分离液（取用前恢复至室温并摇匀）。

研磨（研磨操作请参考图二）。

4.把悬有脾脏细胞的分离液立即转移到15mL 离心管中，如图一（A ），覆盖500μL-1000μL 的RPMI 1640培养基（保持液面分界明显），如图一（B ）。

5.室温，水平转子800g 离心30min 。

设置较慢的升降速（如果共有十档且第十档为最高档，升降速应该调整到第三档）。

离心结束后细胞分层如图一（C ）所示。

6.吸出淋巴细胞层，再加入10mL RPMI 1640培养基，颠倒洗涤。

室温，250g 离心10min 收集细胞。

7.倾倒上清液，用培养液重悬细胞，计数。

商品名Mouse 1×Lymphocyte Separation Medium 小鼠淋巴细胞分离液货号规格7211011:100mL/瓶7211012:250mL/瓶主要成分Iodixanol ，化学惰性，无生物毒性内毒素含量<0.5EU/mL 密度(1.081±0.001)g/mL (20℃)渗透压(280±15)mOsmol/kg保存条件常温密封避光保存，保质期2年。

人淋巴细胞分离液

人淋巴细胞分离液说明书修订日期：2018.12.10 Cat number：KGA830Store at 2-8℃ for 12 monthsFor Research Use Only一、试剂盒说明人淋巴细胞分离液将人血液中的淋巴细胞分离出来，是由于各种机体的血细胞比重不同制备出不同比重的分离液，它是一种体外应用的生化试剂，本品为带有乳光或微乳光的注射水溶液，主要组成成份是羟乙基淀粉（6%）与泛影酸钠9%，适用于从血液或组织匀浆中中分离所需细胞。

单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞等细胞，其体积、形态和密度与其他细胞不同，红细胞和白细胞等细胞密度较大，为1.090 g/ml 左右，而淋巴细胞和单核细胞密度为1.075～1.090 g/ml，血小板为1.030～1.035 g/ml。

经过密度梯度离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。

二、试剂盒组份组份Cat: KGA830 保存条件人淋巴细胞分离液200ml 2-8℃，12months三、试剂盒以外自备仪器和试剂注射用生理盐水、离心机四、使用注意事项1. 启封后应置4℃保存，有效期6个月。

2. 细胞分离液从冰箱取出后，不可立即使用，需待溶液温度升至室温时，混匀后使用。

3. 整个分离过程中，温度应控制在18-28℃，否则会影响分离质量。

五、操作方法本分离液要求血液为新鲜的抗凝血，血液收集时应无菌操作且在储存、处理和运输过程中避免冷冻和冷藏。

1. 取新鲜抗凝血1ml，与注射用生理盐水1：1混匀后，小心加于2ml的细胞分离液之液面上，以400-800×g离心（半径15cm水平转子）20-30分钟，此时离心管中由上至下细胞分四层（第一层为血浆层（含血小板），第二层为环状乳白色淋巴细胞或单核细胞，第三层为透明分离液层，第四层为红细胞层（含大量中性粒细胞），红细胞层表面有悬起的部分白细胞层，收集此界面上的细胞）2. 用吸管小心收集第二层淋巴细胞，放入含4-5毫升注射用生理盐水的试管中，充分混匀后，以500×g离心20分钟，弃上清，沉淀经反复洗2次即得所需细胞。

小鼠外周血淋巴细胞分离液

小鼠外周血淋巴细胞分离液说明书修订日期：2016.03.31 Cat number：KGA831Storage RT for2yearsFor Research Use Only（科研专用）一、试剂盒说明小鼠淋巴细胞分离液将人血液中的淋巴细胞分离出来，是由于各种机体的血细胞比重不同制备出不同比重的分离液，它是一种体外应用的生化试剂，主要成分聚蔗糖（Ficoll）或葡聚糖与泛影酸葡甲胺或泛影酸钠，适用于从血液及组织匀浆中分离所需细胞。

二、试剂盒组份组份Cat:KGA831保存条件小鼠淋巴细胞分离液200ml室温，有效期两年。

样本稀释液（赠品）200ml清洗液（赠品）200ml三、试剂盒以外自备仪器和试剂离心机（最大离心力要求达到1200g）四、操作方法首先取抗凝血按体积比1:1的比例与样本稀释液混匀，根据稀释后的样本量大小，分以下两种情况：情况A：稀释后的血液样本量小于5ml时，实验方法如下：1.取一支15ml离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液（注：分离液最少不得少于3ml）。

2.用吸管小心吸取稀释后的血液样本加于分离液液面上，400-500g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。

3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。

第一层为血浆层。

第二层为环状乳白色淋巴细胞层。

第三层为透明分离液层。

第四层为红细胞层。

4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15ml离心管中，往所得离心管中加入10ml清洗液，混匀细胞。

5.250g，离心10min。

6.弃上清。

7.用吸管以5ml清洗液重悬所得细胞。

8.250g，离心10min。

9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。

情况B：稀释后的血液样本量大于等于5ml时，实验方法如下：1.取一支适当的离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液。

淋巴细胞分离液

Lymphocyte Separation Medium(淋巴细胞分离液）Density(密度) = 1.077-1.080 g/mL at 20ºC【分离目的】方便在人体外对机体各种免疫细胞分别作鉴定，计数或功能测定。

淋巴细胞分离以后可以做淋巴细胞抗原片制备，E花环试验，淋巴细胞转化试验，淋巴细胞培养（需无菌操作）【分离原理】人淋巴细胞的方便来源是外周血，分离的原则是收率较高，纯度较好，失活较低，根据不同试验有相对纯度，无论采用哪种方法，应尽最大可能保持细胞应有活性。

分离的技术可根据细胞的物理性状和表面标志设计，根据不同实验目的可采用密度梯度离心法、吸附分离法和其它特殊分离法。

此次实验采用的1就是密度梯度离心法。

其原理是：人外周血中各种细胞的密度不同，人红细胞密度为1.093，粒细胞为1.092，淋巴细胞为1.074±0.001。

密度梯度离心法的原理主要根据各类血细胞比重的差异，利用比重介于某两类细胞之间的细胞分离液对血液离心，使一定比重的血细胞依相应的密度梯度分布于不同的独立带，从而达到分离的目的。

【材料】1、肝素抗凝管，普通管（负压），采血针，血清收集管2、淋巴细胞分离液(比重1.077– 1.080 g/mL）。

3、无Ca++、Mg++、Hank's 液4、刻度吸管、毛细吸管、离心管、离心机等。

5置于冰箱的冷丙酮（固定细胞，保持细胞的完整性）【方法】1．采静脉血2ml加入肝素抗凝管（或枸橼酸钠），3ml加入普通管。

2．普通管斜面放置30MIN，此时可分离淋巴细胞。

用竹签将血块轻轻剥离管壁（主张用玻璃棒），2000rPm离心20分钟，用毛细吸管吸取上清（血清）于血清收集管中，于4℃冰箱保存备用，用于以后的ELISA实验，对流免疫电泳实验和伤寒试管凝集实验，溶血反应，免疫比浊测定补体C3或C4等等。

（剥离时也可用毛细吸管轻轻剥离）3．趁普通管放置30MIN时，将装有静脉血2ml加入肝素抗凝管（或枸橼酸钠）轻轻摇动使血液与抗凝剂混匀，出现凝集不能继续实验。

人淋巴细胞分离液

人淋巴细胞分离液
人淋巴细胞来源于人外周血，可根据不同实验目的可选择密度梯度离心法、吸附分离法或其它特殊分离方法。

Böyum在密度梯度离心法的基础上提出通过使用Ficoll®甲泛影钠溶液离心快速分离的方法，操作更方便、更快速。

稀释的血液在Ficoll®甲泛影钠溶液中通过短时间的低速离心即可分层，红细胞和粒细胞沉降至管底、淋巴细胞和血小板在中间形成2个分层。

MP Bio生产的LSM，成功地用泛影酸钠代替了甲泛影酸钠，是一种灭菌过滤溶液，每100毫升包含6.2克聚蔗糖和9.4克泛影酸钠。

密度是1.0770-1.0800克/毫升20℃。

使用说明：
1.轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合
2.无菌转移3mlLSM到15ml离心管中。

3.混合2ml除纤维蛋白血液或肝素处理血液和2ml生理盐水
4.仔细的将稀释血液加入3mlLSM（室温）于15ml离心管中，在血液和LSM 中形成一个明显的分层。

不要将稀释血液混合入LSM中。

5.室温下400g离心15-30分钟，离心可以沉淀红细胞和多核白细胞同时可以在LSM上形成一层单核淋巴细胞。

6.吸出淋巴细胞上方2-3mm的血浆。

7.吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM和转移到另外的一个离心管。

加入等体积的平衡盐缓冲液至淋巴细胞离心管中，室温离心10分钟，离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞即刻，例如160–260x g（去除LSM和降低血小板的百分比）。

8.用平衡盐缓冲液清洗细胞，用适当的培养基重悬细胞。

淋巴细胞分离液分离淋巴细胞的原理

淋巴细胞分离液分离淋巴细胞的原理2篇
一、淋巴细胞分离液分离淋巴细胞的原理
淋巴细胞分离液是一种常用的实验试剂，用于从混合细胞群中分
离出淋巴细胞。

淋巴细胞是免疫系统中的重要成分，具有免疫应答和
免疫记忆的能力，对于研究免疫功能、疾病诊断和治疗具有重要意义。

淋巴细胞分离液通过巧妙地利用淋巴细胞与其他细胞在密度和粘附性
上的差异，实现淋巴细胞的高效分离。

淋巴细胞分离液的主要成分包括高比重溶液和低比重溶液。

高比
重溶液常使用离心过的淋巴细胞富集液，其中含有高比重物质，如离
心上清液、人类白蛋白和多聚蔗糖。

低比重溶液常使用间隙液或生理
盐水，其中含有低比重物质，如磷酸盐缓冲液、葡萄糖和牛血清蛋白。

淋巴细胞分离液的分离原理是通过密度梯度离心法实现的。

首先，将混合细胞悬液取出一部分，均匀地加入到离心管中，然后将高比重
溶液缓慢地加入到离心管中，使其形成一个密度梯度。

接下来，将低
比重溶液缓慢地超加入到离心管中，使其形成一个低比重的层。

然后，将离心管置于离心机中，进行高速离心。

在高速离心的作用下，细胞
在密度梯度中以不同速度沉淀，最终形成不同层次的细胞。

EZ-Sep Mouse 1X 说明书

EZ-Sep™ Mouse 1X使用说明书（070609）前言：达科为公司长期致力于在中国推广ELISPOT技术。

我们不仅仅关注ELISPOT检测本身，也同样关注广大客户在完成整个ELISPOT免疫学检测期间遇到的各种问题，包括实验样品的制备、样品细胞的冻存与复苏、无血清ELISPOT检测、ELISPOT检测标准化、ELISPOT检测质量控制、实验数据的读取与处理，等等。

目前的ELISPOT检测样品主要有两类来源：一类是血液来源，比如人血或者猴血的PBMC细胞；另一类是脾脏来源，主要是取自小鼠或者大鼠的脾脏淋巴细胞。

达科为公司为了解决这几类淋巴细胞的分离问题，研发出了EZ-Sep™（中文商标：）系列淋巴细胞分离液。

和传统的基于Ficoll的分离液不同，EZ-Sep™系列淋巴细胞分离液采用了新一代、无毒、低渗的碘化物，所以带来了淋巴细胞分离的革命性变化。

本方案将介绍如何使用EZ-Sep™ Mouse 1X来获得小鼠脾脏淋巴细胞。

该方法的特点是：操作简单、易学，对实验者的经验要求不高；分离的淋巴细胞的纯度高、状态好、得率高（一个脾脏可达108个细胞）；实验者在研磨过程中即使产生了很多死亡细胞和细胞碎片，它们对最终的分离效果也没有影响。

达科为EZ-Sep™ Mouse 1X方法是小鼠淋巴细胞分离方法的重大突破。

产品说明：EZ-Sep™ Mouse 1X小鼠淋巴细胞分离液的主要成份为Iodixanol，分子量为1550。

它是完全化学惰性、无生物毒性的碘化物，不会结合任何已知的生物功能蛋白、不会干扰任何细胞表面膜蛋白、不会抑制酶活性、不会干扰抗原抗体反应。

我们实验室做过Iodixanol的细胞培养实验，在培养基中加入多达30%的Iodixanol，3天之内细胞的存活和生长速度没有明显变化。

为了增加细胞在EZ-Sep™ Mouse 1X中的活力，我们添加了多种细胞保护成分了缓冲盐（所以，EZ-Sep™ Mouse 1X的保存温度变为4ºC，而不是室温）。