石蜡切片教学文档
实验六 石蜡切片法1
四、实验结果
包埋后的石蜡快应为均匀的半透明状，蜡块中没有 气泡。
包埋材料摆放的位置是否符合要求？
修块效果：每个蜡边与材料平行，蜡边的上下左右摇 平行。
切片效果：得到厚薄均匀的蜡带，蜡带无破损。 展片效果：展片后蜡带或蜡片平整，无气泡、粘附牢 固，蜡带略呈透明状，后续制片不易脱落。
五、作业
实验完毕，每人交包埋块一个，在纸盒上写
上材料名称及自己的姓名和日期；
实验完毕，每人交玻片两张，用铅笔在载玻
片上写上材料名称及自己的姓名和日期；
实验报告（姓名和日期）。
苦味酸液（波茵氏液）
甲液： 1％铬酸 10％醋酸 乙液： 甲醛 苦味酸饱和水溶液 50ml 20ml 25ml 75ml
包埋过程中易出现的问题及解决办法
问题：包埋后的石蜡块应为均匀半透明状，有时出现白色浑浊 结晶（像雪花一样）部分，这样在切片时就有妨碍，不易切出 薄的切片。 原因：①组织内部或石蜡中混有透明剂；②脱水不干净；③石 蜡本身品质不良；④组织块移入纸盒时动作太慢，周围的石蜡 已成凝固状态；⑤冷却用水温度不够低，石蜡凝固太慢。 解决办法：属于前三个原因者应在包埋之前就须注意；属于后 二个原因者，可将包埋块再投入Ⅲ蜡中熔化后重新包埋，但必 须注意熔化包埋过的石蜡块的时间不宜过久。
实验六 石蜡切片法
—— 包埋、切片和贴片
石蜡切片法
石蜡切片法是显微制片技术中最常用的一种方法，除了
藻类、菌类、木材和骨骼外一般的材料均可以使用，既 可制成较薄的切片，使材料各部分都清晰可见，同时也
可制成连续切片，观察材料的动态发生及层次，所以，
它在显微制片技术中占有非常重要的地位，必须掌握， 同时也是进行透射电镜观察超薄切片的基础。
石蜡切片
一、石蜡切片方法步骤：
1.锁定手轮；
2.将预先包埋好的石蜡块装在标本夹上；
3.安装切片刀，调节切削角度；
4.将基体上的刀架尽可能靠近标本；
5.调整标本的表面位置，使之与刀刃尽可能平行；
6.转动手轮，开始修片；
7.当修片达到所希望的表面时，停止修片；
8.选择想要的切片厚度（5 m）；
9.顺时针匀速转动手轮，切片。
二、调换标本或停止切片
在操作切片刀和标本前，或调换标本和切片刀前，或是在休息时，应锁定手轮，用护刀罩盖住刀片边缘！
1.锁定手轮；
2.用护刀罩遮盖住刀刃；
3.从标本夹上取下标本，取新标本蜡块夹入标本夹。
三、选片
1.轻轻挑起平整、无断裂的单个石蜡切片，平铺于37℃清洁水面；
2.用清洁载玻片，于水面成45°角，在标本附近轻轻插入水面；
3.缓缓向上提起载玻片，使标本平整贴附于载玻片适当位置。
四、切片结束
1.锁定手轮；
2.将切片刀从刀架上取出，把它放入刀盒中；
3.将标本从标本夹上取下；
4.把切片机上所有的残渣、废片清理干净；
5.盖上防尘罩，填写记录本。
石蜡切片实验设计
“优一”花芽解剖实验设计背景资料：核果类花芽生理分化的时间：5月下旬或6月上旬至7月初或7月中旬，在长梢生长量达全生长量的60%-95%时为盛期。
7月中旬至8月中旬开始进入形态分化期，部分品种6月中旬就开始进入形态分化，7月中旬至8月中旬是分化高峰时期，8月下旬至10月初为性器官分化阶段。
由于今年气温高整个物候期提前，所以计划于5月10号开始观察。
一、实验目的此次杏的花芽解剖实验从花芽生理分化开始，对杏的各个时期的花芽进行观察，力求找出雌蕊败育的时期和原因。
二、实验时间试验于2014年5 月10 日始至2015 年3月（开花前）三、实验材料选取原阳基地9年生以上的优一品种，在同一棵树上选取树冠外围南部中、短果枝上的中、下部芽为主。
四、实验方法先对优一挂牌采样，每隔10 d 取样1 次，每次取50个芽，每次从短枝取芽后用F A A 固定液(70％乙醇90mL ：福尔马林5mL ：冰醋酸5mL)保存。
将花芽材料需在固定液中固定24h以上。
五、实验方法与步骤采用石蜡切片法制片方案一：采用常规石蜡切片法制片1、染色将固定液中的芽取出，放人盛有50%乙醇的培养皿中，用镊子与解剖针小心剥去鳞片之后，移入装有蒸馏水的小瓶中，再用注射器吸干水，然后加入2～3 滴爱氏苏木精，封盖静置10～1 5 d。
2、材料冲洗用注射器将小瓶内的染色剂吸出，回收，然后将小瓶用纱布蒙口，倒置入水槽，后用自来水冲洗12～24 h 。
3、脱水材料取出后依次放入70% 乙醇、83％乙醇、90%乙醇、95%乙醇、100％乙醇、100%乙醇的脱水剂中脱水，每级脱水剂中处理50分钟(100 %乙醇中为30分钟／次)。
4、透明脱水后迅速将材料放人100％乙醇与一二甲苯的混合物中，混合物按2 ：1、1 ：1、1 ：2 的比例混合，再将混合物各放置20分钟，接着各放入两组纯一二甲苯15 分钟。
5、浸蜡将试验材料与二甲苯一并倒入玻璃杯中，放置在37℃恒温处12～24 h，后移人56～60℃的恒温箱中3 d ，期间更换恒温箱中纯蜡3～4次。
石蜡切片步骤
⽯蜡切⽚步骤⽯蜡切⽚基本步骤（⼀）取材和固定根据实验⽬的选择材料。
将整个⾍体或⾍体的内部器官（如肠道、马⽒管、唾液腺等）取出后，⽴即投⼊固定液。
取材⼤⼩：0.5cm×0.5 cm×0.2或者1.0 cm×1.0 cm×0.2，厚度不宜超过3mm。
固定液：2.5%的戊⼆醛固定液，Bouin⽒液，10%甲醛等。
固定时间：4oC固定24⼩时。
注意事项：取材：1．勿使组织块受挤压切取组织块所⽤⼑、剪要锋利，切割时不可来回切割。
夹取组织时，镊⼦要轻，切勿挤压，以免损伤组织。
取材时，组织块可稍⼤⼀点，以便在固定后，将组织块的不平整部分修去。
2.选好组织块的切⾯应熟悉器官组织的组成，并根据观察⽬的来确定纵切或横切。
3．保持材料的清洁组织块上如有⾎液、污物、粘液、⾷物等，先⽤⽣理盐⽔冲洗⼲净，再⼊固定液。
4．切除（清除）不需要的部分特别是组织周围的脂肪等，应尽可能清除掉，以免影响以后的程序和观察。
固定：1．材料新鲜取出组织后须⽴即固定。
否则时间相隔过久，体积就要收缩变形或发⽣⾃溶现象。
2．抽⽓⽣物组织常有⽓体的存在，使材料不能沉⼊固定液中，抽⽓使得固定液有效渗⼊。
真空泵抽⽓或者⽤空针管抽⽓。
昆⾍整体固定，固定前⽤解剖针刺数个⼩孔，以利⽤固定液渗透。
3．固定剂⽤量⼀般为组织体积的10~20倍。
勿使组织贴于瓶底或瓶壁，以免影响固定剂的渗⼊。
4．避免阳光尽可能避免接触阳光以免失去固定作⽤。
5．加速固定轻轻摇动盛器使组织移动有利于固定液渗⼊，对长期固定的标本可经常更换固定液。
（⼆）洗涤2.5%戊⼆醛固定液固定的组织：0.2M, pH7.2磷酸缓冲液漂洗三次，每次10minBouin⽒固定液固定的组织：直接⼊70%酒精更换数次即可脱⽔，注意苦味酸。
甲醛固定的组织：直接投⼊50%或70%酒精脱⽔，不经⽔洗。
但如果在甲醛中时间过长，则仍应当⽤流⽔冲洗。
陈旧性标本和混合性固定液应及时洗涤，有利于脱⽔、切⽚和染⾊。
实验八石蜡切片法一
盐酸、蛋清、甘油。 • 3、材料 • 各类你感兴趣的固定标本。
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四、实验步骤
• 1、取材 • 2、固定 • 3、漂洗 • 4、脱水 • 5、透明 • 6、透蜡 • 7、包埋 • 8、修块 • 9、切片 • 10、染色
实验八 石蜡切片法
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1
一 、实验目的
• 学习石蜡切片法 • 了解组织染色原理
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2
二、实验原理
• 用石蜡渗透固化组织；
• 用碱性染料如苏木精、碱性品红等，使细 胞核着色；
• 用酸性染料如伊红、酸性品红等，使细胞 中的嗜酸性成分着色，如蛋白质。
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三 、实验用品
• 1、器材： • 切片机、水浴锅、染色缸、玻片、显微镜、试剂瓶、剪刀、
• 未注明时间的一律处理2-3min。
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五、作业
• 简述石蜡切片过程，绘制你所观察到的细 胞形态。
• 提交一张你认为制作较好的玻片。
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பைடு நூலகம்
5
取材到切片
• 取材——固定（Cannoy’s），材料厚度 2mm。
• 100%酒精——100%酒精——二甲苯:酒精 （1:1）——二甲苯——二甲苯——二甲苯: 石蜡（65℃ 1:1）——石蜡（65℃）——石 蜡（65℃），以上处理各10-30min，视材 料大小而定，最后一步石蜡20min 。
• 包埋——修块——切片——贴片
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6
脱蜡与复水
• 二甲苯——二甲苯——二甲苯/无水乙醇 (1/1)——无水乙醇 ——无水乙醇——95% 乙醇——80%乙醇——70%乙醇——50% 乙醇——蒸馏水。
生物显微技术 第一章 石蜡切片制作技术
三、包埋
是把被石蜡浸透的材料连同熔化的石蜡一起 倒入一定形状的容器内，并立即投入冷水中， 使它凝固成含材料的蜡块，以备切片。
从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，倒入包埋 用的纸盒中，取出存放材料的蜡杯，用温镊 子夹取材料平放于纸盒底部，使之排列整齐。 将纸盒两侧的把手提起，慢慢地平放在面盆 的水面，待石蜡的表面凝固，将 纸盒慢慢 浸入水中，待石蜡完全凝固（约30分钟） 后即可取出备用。
包埋前应先把必需的用具（恒温箱、温台、纸盒） 准备好。 包埋用的镊子要先放在温箱中预热。
第五节 切片、展片和贴片
一、切 片 是把包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带。 实验程序 1. 切片前的准备工作 （1）整修：用单面刀片将蜡块四周修整平行。 （2 ）石蜡块的固着：先将蜡块用刀片切成方形或长
四、注意事项
1 透明的注意事项
使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中水 分进入； 更换透明剂，动作要迅速； 材料周围 出现白色雾状，应退回纯酒精中重新脱水。
2 透蜡的注意事项
动物材料常用的石蜡熔点为52-56ºC；植物材料 为54-60ºC。 透蜡温度要恒定，不可忽高忽低；
3 包埋的注意事项
第一节 动物的选择、杀死和取材
一、动物的选择 根据实验目的选择合适的动物和组织 如：健康状况的选择 观察不同组织、器官选择不同的动物（如：
肥大细胞、肝小叶、环层小体等）
二、动物致死法 根据动物的大小、种类和观察目的不同，进
行适当的选择。 1、麻醉法 2、空气栓塞法 3、断头法 4、击头法 5、股动脉放血法 要求动作迅速、及时取材、迅速固定
4 实验三 石蜡切片技术-取材、固定.
⑦固定材料适宜浓度为0.3%-5%。
（3）铬酸（chromic acid）
①穿透速度缓慢。
②能沉淀所有蛋白质，凝固核酸，增强核的着色能力，可作为核蛋白核核酸的固定液。能固定高尔基体及线粒体。常用于细胞学观察。
③只有铬酸能真正固定肝糖原，使之不溶于水。对脂类无影响；
样品采集与分割取样部位取样部位玉米叶主根侧根不定根一级侧根二级侧根根尖分区根的初生构造有丝分裂核型分析胚囊的发育单核胚囊第一次有丝分裂二核胚囊第二次有丝分裂四核胚囊八核胚囊植物材料的分割取材根据不同的实验目的选择相应的材料材料要求新鲜准确完整材料要避免挤压挫伤干枯
石蜡切片法
以石蜡作包埋剂，用旋转切片机将材料切成薄片，经一系列处理制成永久制片的方法。
⑦固定材料适宜浓度为0.5-2%。
锇酸的配制：用重蒸水配成母液2%，使用时，用PH7.0、0.2M磷酸缓冲液稀释一倍到1%。
（2）戊二醛
①穿透速度很快。
②固定微管蛋白，是微管的很好的固定液。
③用PH6.8-7.0、0.2M磷酸缓冲液配成25%母液，固定材料适宜浓度为3-6%。
（3）丙烯酸
①固定蛋白、核酸和聚多糖。
⑥市售的为37-40%甲醛，称为福尔马林，固定和保存材料的适宜浓度是10%福尔马林。（四）混合固定液：
由几种试剂，适量配制而成。混合遵循原则：①优缺点互补；②膨胀与收缩相
互平衡；③强氧化剂与还原剂应分别配置。
Bouin氏液
卡诺(Carnoy)氏固定液：
福尔马林-醋酸-酒精混合液：（FAA）
铬酸-醋酸中液
苦味酸、升汞、铬酸、碘均能使胞质蛋白和核蛋白凝固；酒精能沉淀胞质蛋白，而核蛋白沉淀后溶于水；醋酸不能凝固胞质蛋白,但能凝固核蛋白;福尔马林、锇酸、重铬酸钾对两种蛋白都不凝固。
植物石蜡切片的制作
一、实验目的：通过对材料的固定、脱水透明、浸蜡、包埋、切片等实验操作，了解石蜡切片的基本过程，掌握石蜡切片的制作方法。
二、实验准备：1．用具小标本瓶，指管，眼科镊子，蜡杯，载玻片，毛笔，蜡铲，刀片，量筒（10）毫升，漏，滴管，酒精灯，小木块，切片木框，切片盒，吸水纸，标签纸，切片刀，熔蜡箱，展片台，真空泵，解剖针。
2．器皿的清洗指管的清洗：切片所用的载玻片必须洗得很干净，否则切片容易脱落。
新的载玻片用洗液浸泡半天取出，用自来水冲洗后，用纱布擦干净，放入盒内备用。
擦拭时应捏住玻片两端的边缘操作，手指勿与玻片的表面接触，以免手指上的脂肪沾污玻片。
盖玻片的擦洗：新的盖片可放入95%酒精内浸泡数十分钟，或用洗液浸泡。
注意盖片要一片片投入，使盖片的二面都接触到液体，浸泡后，水冲洗干净后再放入95%酒精中浸泡，然后用干净白布擦拭。
擦拭时应注意，手指不能接触玻面，应以左手拇指和食指夹持盖片，右持布趁酒精未干时，一一擦拭之。
3．实验需用药品及其配制70%、85%、95%、100%的酒精，二甲苯，甘油蛋白，固定液，石蜡。
1各种浓度酒精配制实验室常以95%酒精来配制各种低浓度的酒精，因100%纯酒精系由95%酒精再蒸馏而成，价格昂贵，一般不用于稀释。
配制方法：配70%酒精时，可取95%酒精70毫升再加入蒸馏水25毫升即得。
一般遵照以下原则：无论用任何浓度的酒精稀释时，即稀释多大浓度就取多少毫升的酒精，然后用蒸馏水加至该酒精原有浓度即可。
2固定液的配制采用卡诺氏醋酸酒精固定液，醋酸用冰醋酸，酒精用纯酒精，体积比为醋酸：酒精=1：3。
注意须现配现用。
取鸡蛋的蛋白加入等量的甘油搅拌混合，至均匀为止。
加入约为1%量的麝香酚小块，借以防止微生物的侵入和腐败。
放入冰箱备用。
三、实验材料：蚕豆根尖或洋葱根尖等。
四、实验步骤：取材固定发芽的蚕豆，当其根尖长到一粒米大小时，用刀片切下来，立即投入盛有固定液体的标本瓶中，贴上标签，注明固定日期、固定液名称。
实验三石蜡切片法
30min-1h 1-2h
1-2h
? 包埋：将浸蜡后的组织块包在石蜡之中，并使组织块 与石蜡一起凝固成均匀一致的蜡块的过程叫包埋。
? 方法：将纸盒盛满已融化的石蜡，随即将第三杯中已 浸蜡的材料放入其中，并排出里面的气泡待石蜡表面 凝结后，将纸盒进入水中冷却石蜡全部凝结后，拆去 纸盒即成蜡块。动物致死方法：常用方法有麻醉法、空气栓塞法、断头 法、击头法、股动脉放血法等；无尾两栖类常用探针破 坏脑和脊髓的方法处死，鼠类可用两手（戴手套）用力 拉，使颅骨和颈椎分离而导致延髓损伤致死。
? 动物保护 组织材料新鲜
动作迅速
取材注意事项：
① 要熟悉取材部位； ② 所取材料尽可能新鲜； ③ 组织块力求小而薄：厚度一般不超过5mm为宜，较理想的
? 组织块修整：经过固定后的组织有一定的硬度，此时就可以 做一些修整，但改变不要太大，只要将组织材料切取平整， 修掉一些不规则的部位；过大、过厚的组织改小、改薄。
4.洗涤
? 洗涤：将残余在组织内的固定液清洗干净，以免影响对组织 内部结构的观察、分析、研究。
? 常用的洗涤方法 水洗法（含有铬、锇的固定液固定的组织块） 酒精洗涤法（含有苦味酸、酒精固定液固定的组织块）
厚度为2mm左右； ④ 勿使组织块受挤压，以免破坏组织； ⑤ 保持材料清洁，以免影响观察。
2.固定
? 固定：固定是指处死的动物体或新取的组织块投入固定 液使其结构得以凝固为不溶性物质的过程。其目的在于 保持组织内细胞的形态、结构及其组成，防止细胞组织 死后的自溶和腐败，使之尽量保持生前的状态和结构。
3)切片：在旋转式切片机上将蜡块切成 5-10um厚的薄片。 切下的薄片会连成蜡带。用毛笔轻托轻取蜡带，放在蜡带盒 内备用。
修块
第六章 石蜡切片技术
硝酸脱钙液 配方：福尔马林 5ml 硝酸（比重1.41） 7.5－15ml 蒸馏水 加至100ml
脱钙步骤
取材：骨组织固定于10%福尔马林24小时后再 锯取厚度约0.5厘米骨片。 固定：再以10%福尔马林固定2天。将组织置于 脱钙剂中，每日更换新鲜液、直至组织软化 为止。流水冲洗24小时（除酸）。进行常规 脱水，透明，浸蜡，切片。
酒精还可溶解血红蛋白和损害多数其他色素，因此， 如果证明组织蛋白的色素时也不宜以酒精作为固定剂
福尔马林主要是由甲醛的聚合形式构成，然而聚合形 式的固定效果低于单体形式构成的10%福尔马林，为阻 止在放置一定时间的重聚作用，一般将溶液的PH值调 节至中性或偏碱性。
甲醛与蛋白质是在分子间的交联上起反应，最终产生 一种不溶性产物。它经过络合交联，使蛋白质固定， 能较好地保存脂类；对肝糖也有固定作用，但必须及 时固定及时处理，以免产过0.5mm厚的薄骨 片，再以10%福尔马林固定后进行脱钙。（未固定 的组织在酸性脱钙液中受到的损伤比已固定的组织 约大三倍）。骨组织过厚则需延长脱钙时间，长时 间浸于强酸影响切片染色效果。 在不影响诊断的条件下，应将骨组织周围的软组织 全部剥去。如果切片目的在于观察骨髓病变或骨组 织肿瘤，最好除去一部分正常的致密的骨组织，以 利于脱钙和制片。 脱钙前最好先将骨组织进行脱脂。 脱钙要彻底，脱水应充分，在脱水过程中，要注意 不使其过度硬化。
二、取材的注意事项：
（一）大体标本
应选择病变或可疑病变的组织。必要时选取病
变与正常组织交界处。切取标本的原则是求准 而不是求量多，所以切取组织宜小不宜大，以 不超过20x15mmx3mm为度，过大过厚会影响对 标本的固定，另方面也影响切片的制作。特殊
实验九 石蜡切片制作
组织固定后的处理
①冲洗或漂洗：组织固定后应充分水洗，除去留在组 织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染 色效果。
②材料经过固定后，需要保存下来以备利用，通常使 用的保存剂是70%的酒精溶液，可以使一般的材料 保存较长的时间而不至于变坏。
③通常在冰箱中4℃存放。
3. 脱水
• 水和透明剂不能互溶，只有脱去水分后，才能让透 明剂进入。
蒸馏水 100毫升 甘油 15毫升 苯酚 2克 乙液：甲醛 4毫升 蒸馏水 100毫升
8. 脱蜡及复水
干燥后的切片需脱蜡及复水才能在水溶性染 液中进行染色。 用二甲苯脱蜡，再逐级经梯度酒精复水。
• 脱蜡（溶蜡）：将切片上的石蜡溶去。一般都用二 甲苯溶脱蜡。如果脱蜡不彻底，材料的染色就困难。
• 复水：脱蜡后的材料从高浓度的酒精溶液（100%） 开始，逐级进入低浓度的酒精溶液，最后一级通常 是30%酒精或水，使材料中的水分逐渐增加。如果 不经过复水，材料脱蜡后直接进入染色剂中，材料 将会严重变形，甚至难以染色。
5.浸蜡与包埋
• 用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。 • 通常先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等
量混合液浸渍1～2小时或者过夜，再先后移入熔化 的石蜡液中浸渍几天。 • 浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右的温箱中进行，以 利石蜡浸入组织内。
• 石蜡熔点： 45-50℃ 软蜡 55-60℃ 硬蜡
实验九 石蜡切片制作
一、实验目的与要求： 掌握石蜡切片制作的基本过程及其注意事项。
二、实验材料和仪器： 实验材料: 向日葵幼茎、石蜡、酒精、二甲苯、番红/固
绿染色液等；实验仪器和器皿：石蜡切片机、展片机、染色 缸、载玻片、盖玻片等。 三、实验内容与方法：
实验十四、石蜡切片法(三)切片、贴片.docx
实验十四石蜡切片法（三）切片、贴片一、实验原理切片是把包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带。
贴片是用粘贴剂把切片平铺贴在载玻片上，以便于染色。
1、试剂与器材1.试剂|： Haupt5s明胶粘片剂。
2.器材：切片机、切片刀、单面刀片、酒精灯、蜡铲、台木、毛笔、蜡带盘、载玻片、蹑子、滴瓶、展片台。
三、实验程序（一）切片1.切片前的准备工作（1）石蜡块的固着：先将蜡块用刀片切成方形或长方形，组织四周留下2—3mni宽的石蜡。
点燃酒精灯，然后用烤热的蜡铲放在台木和蜡块之间，利用蜡铲的温度熔化两者的蜡，把蜡块粘附在台木上。
（2 ）整修：用单面刀片将蜡块四周修整平行。
2.切片机,,切片机的式样很多，一般常用的为轮转式切片机，这种切片机的夹物部分是上下移动，前后推进的，而夹刀部分则固定不动。
通过调整控制刀片厚度的微动装置就可以切出不同厚度的连续切片。
切片的方法将已固定和修好的石蜡块台木装在切片机的夹物台上。
将护刀盖推至打开位置。
摇动快速进退手轮，使石蜡块与刀口贴近，但不超过刀口。
（注意：在转动手轮时，应保证机头在红、绿线之间移动。
）调整石蜡块与刀口之间的角度与位置，刀片与石蜡切片约成15-30度。
调整厚度调节器到所需的切片厚度，一般4-10微米。
一切调整好后就可以切片。
此时右手摇动大手轮，左手持毛笔将蜡带提起，摇转速度以每分钟40-50转为宜。
切成的蜡带到20-30厘米时，右手用另一支毛笔将蜡带挑起，平放在蜡带盘上（注意：靠刀面的一面较光滑朝下）。
（二）贴片1.取一清洁的载玻片，滴一小滴粘片剂于玻片中央，用手指涂抹均匀。
2・滴1-2滴蒸憾水于已涂粘片剂的载玻片上。
3.用刀片割一小段蜡带，放在水面上。
注意蜡片光面贴于玻片上。
并使之偏玻片的一端，另一端贴标签。
4.把玻片标本置于展片台上（温度保持在40-45°0 , 直到蜡片伸展摊平。
5.展片后把玻片标本编好记号，放在平盘上。
四、注意事项7,要产辖按妲糅作程藩进行切片。
石蜡切片(固定切染色)步骤讲解
石蜡切片染色 1、器材切片刀，切片机，恒温箱，温台，熔蜡炉，蜡杯，酒精灯，蜡铲，展片台，解剖刀，解剖针，解剖剪，解剖盘，培养皿，吸管，镊子，单面刀片，台木，毛笔，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。
2、试剂卡诺氏固定液、FAA固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、埃利希苏木精染液， 1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，郝普特氏粘片剂，中性树胶。
1%番红，1%固绿，1%过碘酸，Schiff试剂，0.5%偏重亚硫酸钠溶液，醋酸酐-吡啶混合液，0.5%~1%淀粉糖化酶溶液。
3、材料鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。
4、每个实验小组的用量 (一)器材切片机，切片刀，温台，恒温箱，熔蜡炉，水浴锅等这类几个小组用一台就行；解剖刀，单面刀片，小台木，毛笔一只，蜡铲一个，盖玻片和载玻片30个，脸盆一个，酒精灯各一个，包埋纸盒2~3个，染色缸一个，瓷杯3个，显微镜一台。
（二）试剂 FAA固定液50ml、1%番红100ml、1%固绿100ml、1%过碘酸100ml、Schiff试剂100ml、亚硫酸盐300ml、醋酸酐-吡啶混合液100ml、0.5%~1%淀粉糖化酶溶液200ml，石蜡半盒、蜂蜡10块、埃利希苏木精染液100ml、1%伊红酒精溶液100ml、1%盐酸酒精溶液100ml、95%酒精5瓶、二甲苯2瓶，甘油蛋白粘片剂数滴，中性树胶数滴。
（三）材料小白鼠一只、蚕豆种，小麦和大豆种10~20粒，洋葱和大蒜由实验室统一种，然后取其所需部分。
石蜡切片法实例（一）—苏木精-伊红对染法一、目的要求 1、熟悉石蜡切片的制作过程。
2、掌握HE染色的基本原理和染色方法。
二、实验原理石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。
苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。
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石蜡切片（paraffin section）组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
教学中，光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。
活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。
石蜡切片制作基本技术石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。
一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。
1.取材应根据要求选取材料来源及部位。
例如植物细胞有丝分裂多选取洋葱根尖，细胞分裂快又便于切取；猪的肝小叶边界清晰明确；耳蜗以豚鼠的内耳易于定位和剥离。
材料必须新鲜，搁置时间过久则产生蛋白质分解变性，导致细胞自溶及细菌的滋生，而不能反映组织活体时的形态结构。
2.固定用适当的化学药液——固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。
固定能使组织硬化，有利于切片的进行，而且也有媒浸作用，有利于组织着色。
固定液的种类很多，其对组织的硬化收缩程度以及组织内蛋白质、脂肪、糖类等物质的作用各不相同。
3.洗涤与脱水固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。
多数用流水冲洗；如果组织经酒精或酒精混合液固定，则不必洗涤，可直接进行脱水。
固定后或洗涤后的组织内充满水分，如不除去水分就无法进行以后的透明、浸蜡与包埋，因为透明剂多数是苯类，苯类和石蜡均不能与水相融合，水分不脱尽，苯类不能浸入。
酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行，通常从30％或50％酒精开始，经70％、85％、95％直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1～数小时，如不能及时进行各级脱水，材料可以放在70％酒精中保存，因高浓度酒精易使组织收缩硬化，不宜处理过久。
正丁醇、叔丁醇、丙酮及二氧陆环等也可做脱水剂。
4.透明纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的酒精。
材料块在这类媒浸液中浸渍，出现透明状态，此液即称透明剂，透明剂浸渍过程称透明。
常用的透明剂有二甲苯、苯、氯仿、正丁醇等，各种透明剂均是石蜡的溶剂。
通常组织先经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1～2小时，再转入纯透明剂中浸渍。
透明剂的浸渍时间则要根据组织材料块大小及属于囊腔抑或实质器官而定。
如果透明时间过短，则透明不彻底，石蜡难于浸入组织；透明时间过长，则组织硬化变脆，就不易切出完整切片，最长为数小时。
5.浸蜡与包埋用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。
通常先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1～2小时，再先后移入2
个熔化的石蜡液中浸渍3小时左右，浸蜡应在高于石蜡熔点3℃左右的温箱中进行，以利石蜡浸入组织内。
浸蜡后的组织材料块放在装有蜡液的容器中（摆好在蜡中的
位置），待蜡液表层凝固即迅速放入冷水中冷却，即做成含有组织块的蜡块。
容器
可用光亮且厚的纸折叠成纸盒或金属包埋框盒。
如果包埋的组织块数量多，应进行
编号，以免差错。
石蜡熔化后应在蜡箱内过滤后使用，以免因含杂质而影响切片质量，且可能损伤切片刀。
通常石蜡采用熔点为56～58℃或60～62℃两种，可根据
季节及操作环境温度来选用。
6.切片包埋好的蜡块用刀片修成规整的方形或长方形，以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上，夹在轮转式切片机的蜡块钳内，使蜡块切面与切片刀刃平行，旋紧。
切片刀的锐利与否、蜡块硬度适当都直接影响切片质量，可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。
通常切片厚度为4～7微米，切出一片接一片的蜡带，用毛笔轻托轻放在纸上。
7.贴片与烤片用粘附剂将展平的蜡片牢附于载玻片上，以免在以后的脱蜡、
水化及染色等步骤中二者滑脱开。
粘附剂是蛋白甘油。
首先在洁净的载玻片上涂抹
薄层蛋白甘油，再将一定长度蜡带（连续切片）或用刀片断开成单个蜡片于温水（4 5℃左右）中展平后，捞至玻片上铺正，或直接滴两滴蒸馏水于载玻片上，再把蜡
片放于水滴上，略加温使蜡片铺展，最后用滤纸吸除多余水分，将载玻片放入45℃
温箱中干燥，也可在37℃温箱中干燥，但需适当延长时间。
8.切片脱蜡及水化干燥后的切片需脱蜡及水化才能在水溶性染液中进行染
色。
用二甲苯脱蜡，再逐级经纯酒精及梯度酒精直至蒸馏水。
如果染料配制于酒精中，则将切片移至与酒精近似浓度时，即可染色。
9.染色染色的目的是使细胞组织内的不同结构呈现不同的颜色以便于观察。
番
红-固绿对染法，为植物制片上最普遍的一种二重染色法，其染色程序简单并能清晰地显示出细胞的
结构。
番红为碱性染料，能使细胞核及木质化的细胞壁染成红色；固绿为酸性染料，能使细胞质及纤
维素的细胞壁染成绿色。
注意：
（1）番红与固绿在酒精中很容易脱色，因此在酒精中脱水时，不能放置太久。
（2）用固绿对染之前应检查番红染色的是否合适，所染颜色应稍深一些，以防其在以后脱水步骤
中仍会脱色，如果太浅，应退回重染。
10.切片脱水、透明和封片染色后的切片尚不能在显微镜下观察，需经梯度酒
精脱水，在95％及纯酒精中的时间可适当加长以保证脱水彻底；如染液为酒精配制，则应缩短在酒精中的时间，以免脱色。
二甲苯透明后，迅速擦去材料周围多余
液体，滴加适量（1～2滴）中性树胶，再将洁净盖玻片倾斜放下，以免出现气泡，封片后即制成永久性玻片标本，在光镜下可长期反复观察。
注意有些染料需特定厂
家生产的产品。
根据各种染色方法、组织类别及切片厚度，掌握适宜的染色时间，
才能达到较好的染色效果。
学染色既简化步骤又节省时间，且能促进免疫染色效果。