第三章 培养基的配制与灭菌
实验三：培养基的制备与灭菌
实验三：培养基的制备与灭菌一、实验目的与要求：（1）熟悉玻璃器皿的洗涤包装和灭菌前的准备工作。
（2）学习微生物培养基和无菌水的制备，了解培养基配方中各成分的作用、制备流程及各环节的操作技术与应用。
（3）学习并掌握培养基的高压蒸气灭菌原理、操作关键技术和灭菌技术。
二、实验原理培养基的制备原理培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质调制而成的营养基质。
人工制备培养基的目的，在于给微生物创造一个良好的营养条件。
把一定的培养基放入一定的器皿中，就提供了人工繁殖微生物的环境和场所。
自然界中，微生物种类繁多，由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究上的目的不同，所以培养基在组成原料上也各有差异。
但是，不同种类和不同组成的培养基中，均应含有满足微生物生长发育的水分、碳源、氮源、无机盐和生长素以及某些特需的微量元素等。
此外，培养基还应具有适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力及一定的氧化还原电位和合适的渗透压。
根据制备培养基对所选用的营养物质的来源，可将培养基分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基三类。
按照培养基的形态可将培养基分为液体培养基和固体培养基。
根据培养基使用目的，可将培养基分为选择培养基、加富培养基及鉴别培养基等。
培养基的类型和种类是多种多样的，必须根据不同的微生物和不同的目的进行选择配制，本实验分别配制常用培养细菌、放线菌和真菌的牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号合成培养基和马铃薯蔗糖培养基等固体培养基。
固体培养基是在液体培养基中添加凝固剂制成的，常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅酸钠，其中以琼脂最为常用，其主要成份为多糖类物质，性质较稳定，一般微生物不能分解，故用凝固剂而不致引起化学成份变化。
琼脂在95℃的热水中才开始融化，融化后的琼脂冷却到45℃才重新凝固。
因此用琼脂制成的固体培养基在一般微生物的培养温度范围内(25℃-37℃)不会融化而保持固体状态。
高压蒸气灭菌原理高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
培养基的配制与灭菌
课题四: 微生物的实验室培养基础知识（一）培养基培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不同的营养类型, 对营养物质的要求也各不相同, 加之实验和研究的目的不同, 所以培养基的种类很多, 使用的原料也各有差异, 但从营养角度分析, 培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。
另外, 培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原及合适的渗透压。
琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质, 是应用最广的凝固剂。
加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化, 于45℃以下凝固。
但多次反复融化, 其凝固性降低。
任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌, 以备纯培养用。
一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。
（二）无菌技术1、获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。
要获得微生物培养基, 必须避免杂菌污染, 因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。
主要包括以下几个方面2、对实验操作者的空间、操作者的衣著和手进行清洁和消毒。
3、将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。
4、为避免周围环境中微生物的污染, 实验操作者应在酒精灯火焰附近进行。
5、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。
对培养基而言, 更是要进行严格的灭菌。
对培养基一般采取高压蒸汽灭菌, 一般培养基用1.05kg/cm2, 121.3℃条件下维持15～30min可达到灭菌目的。
消毒: 用物理或化学方法杀灭或消除传播媒介上的病原微生物, 使其达到无害化。
最初消毒是指环境消毒, 既无生命的物体表面。
目前一般认为也包括有生命集体的体表和浅表体腔。
通常认为, 在医用器材和医疗环境中消毒, 若能使人工污染的微生物减少原有微生物的99.90%, 就达到消毒要求, 对自然污染的微生物, 能杀灭或除去90.0%亦认为合格。
灭菌：用物理或化学方法杀灭传播媒介上所有的微生物, 使其达到无菌。
这里所指的所有微生物, 包括致病的和非致病的微生物。
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）n源：包括无机氮和有机氮。
（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
《环境微生物学》实验三 微生物培养基的配制和灭菌
实 验 程 序13
实 验 程 序14
实验程序15
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
间歇灭菌法： 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1次，每 次煮沸1h，连续3d重复进行。在每两次蒸煮之间，将 物品（指培养基）放在370C恒温条件下培养过夜，这 样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营养体， 以便下次蒸煮时杀灭。 过滤除菌法： 不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般 可用细菌过滤器进行除菌。（教师示范）
实 验 程 序5
（培养基的配制方法和步骤）
实验程序6
（培养基的配制方法和步骤）
实 验 程 序7
（三种培养基的配方及配制）
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（用于分离和培养细
菌，是一种天然培养基）配方如下：
牛肉膏
3g
蛋白胨
5g
氯化钠
3g
琼脂
20g
自来水
1000mL
pH
7.2~7.4
灭菌
1.05kg/cm2，25~30min
实 验 程 序9
（三种培养基的配方及配制）
淀粉琼脂培养基（高氏一号Gause´1），用于分离 和培养放线菌，是一种合成培养基。配方如下：
可溶性淀粉
KNO3 K2HPO4 MgSO4• 7H2O NaCl
FeSO4• 7H2O 琼脂 自来水
灭菌： 1.05kg/cm2
20.0g 1.0g 0.5g 0.5g 0.5g
实验程序16
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
实验程序17
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h， 就使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂， 可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使 一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气 及表面杀菌。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告一、实验目的1、掌握培养基的配制方法和原理。
2、学习并掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法和操作要点。
3、了解灭菌在微生物实验中的重要性。
二、实验原理（一）培养基的配制培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。
不同的微生物对营养物质的需求不同，因此需要根据培养的微生物种类和实验目的来选择合适的培养基配方。
培养基通常包含碳源、氮源、无机盐、生长因子和水等成分。
在配制培养基时，需要按照一定的比例准确称量各种成分，并将其溶解在水中，调节 pH 值至合适范围，最后定容至所需体积。
（二）灭菌灭菌是指杀灭或去除物体上所有微生物（包括芽孢和孢子）的方法。
在微生物实验中，为了防止杂菌污染，必须对培养基、实验器具等进行灭菌处理。
高压蒸汽灭菌是一种常用的灭菌方法，其原理是利用高温高压使微生物的蛋白质和核酸变性失活，从而达到灭菌的目的。
一般在 121℃、1034 kPa 的条件下灭菌 15 20 分钟，可以杀灭包括芽孢在内的所有微生物。
三、实验材料和仪器1、材料牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、NaOH 溶液、HCl 溶液、蒸馏水等。
2、仪器电子天平、药匙、玻璃棒、烧杯、量筒、pH 试纸、三角瓶、移液管、高压蒸汽灭菌锅、培养皿等。
四、实验步骤（一）培养基的配制1、计算根据培养基配方，计算所需各种成分的用量。
例如，配制 1000 mL 牛肉膏蛋白胨培养基，需要牛肉膏 3 g、蛋白胨 10 g、氯化钠 5 g、琼脂 15 20 g。
2、称量用电子天平准确称量各种成分。
先称取琼脂，放入三角瓶中，然后分别称取牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，放入另一个烧杯中。
3、溶解在烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌，使各种成分溶解。
将溶解后的溶液倒入三角瓶中，用少量蒸馏水冲洗烧杯，冲洗液也倒入三角瓶中。
4、调节 pH 值用 pH 试纸测定培养基的初始 pH 值，然后用 1 mol/L 的 NaOH 溶液或 1 mol/L 的 HCl 溶液调节 pH 值至 72 74。
培养基的配制、分装、灭菌
8）培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规定进 行，以保证灭菌效果和不损培养基的必要成份。培养基经 灭菌后，必须放37℃温室培养24h，无菌生 Nhomakorabea者方可使用。
斜面制作
包
扎
成
捆
挂
标
培养基分装
签
（4）关键步骤及注意事项 ①要严格按配方配制。 ②调pH不要过头。 ③干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，
（4）巴氏灭菌法：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质 量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来 杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风 味，又进行了消毒，保证了食品卫生。该法一般在 62℃，30分钟既可达到消毒目的。此法为法国微生物学 家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。
高压蒸汽灭菌法
1．加水 将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的 水，以水面与三角架相平为至。
2．装料 将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。装有培 养基的容器放置时要防止液体溢出，瓶塞不要紧贴桶 壁，以防冷凝水沾湿棉塞。
3．加盖 将盖上与排气孔相连接的排气软管插人内层灭菌 桶的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以同时旋紧 相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，并打开排气阀；
4．排气 加热。待水煮沸后，水蒸汽和空气一起从排气孔 排出。一般认为，当水沸后约5min，表明锅内空气已排 净。
5．升压 当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始 上升。
6．保压 当压力表指针达到所需压力刻度时，控制热源。 开始计时并维持压力至所需时间。本实验用121℃， 20min灭菌。
7．降压 达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下 降到零后，打开排气阀。放净余下的蒸汽后，再打开锅 盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告培养基的配制与灭菌实验报告引言：细菌培养是微生物学实验中常见的一项技术，而培养基的配制和灭菌则是细菌培养的基础。
本实验旨在探究培养基的配制方法和灭菌技术对细菌培养的影响，为后续的微生物实验打下坚实的基础。
一、培养基的配制培养基是细菌生长和繁殖所需的营养物质，其配制需要考虑细菌的营养需求和生长环境。
本实验选取了常用的液体培养基和固体培养基进行配制。
1. 液体培养基的配制液体培养基的配制相对简单，主要包括基础成分和营养物质的添加。
首先，按照配方中的要求称取所需的基础成分，如蛋白胨、肉汤等。
然后，将基础成分溶解在适量的蒸馏水中，加热至沸腾，搅拌均匀。
待溶液冷却至室温后，再添加适量的营养物质，如葡萄糖、氨基酸等。
最后，用蒸馏水将溶液稀释至所需的体积，调节pH值至适宜范围。
2. 固体培养基的配制固体培养基的配制相对复杂，需要考虑到培养基的凝固和固化。
首先，按照液体培养基的配制方法，将基础成分和营养物质溶解在蒸馏水中。
然后，将溶液加热至沸腾，搅拌均匀。
接着，将溶液倒入试管或培养皿中，待溶液冷却至40-50℃时，添加适量的琼脂或琼脂糖，充分搅拌均匀。
最后，将试管或培养皿密封，放置于室温下，待培养基凝固后，进行灭菌处理。
二、灭菌实验灭菌是为了避免培养基受到外界细菌污染，保证实验的准确性和可靠性。
常用的灭菌方法包括高温灭菌、滤过灭菌和化学灭菌。
1. 高温灭菌高温灭菌是最常见的灭菌方法之一，通过加热培养基使其中的细菌被杀灭。
将配制好的培养基装入培养瓶中，盖上瓶盖，放入高压锅或高温灭菌器中。
加热至121℃，保持15-20分钟，使培养基充分灭菌。
待培养基冷却后，即可进行细菌接种。
2. 滤过灭菌滤过灭菌是一种物理灭菌方法，通过滤器将培养基中的细菌过滤掉。
将配制好的培养基装入滤器中，选择合适的孔径和材质的滤膜。
然后，将滤器连接到真空泵或压力泵上，启动泵进行过滤。
待培养基完全通过滤器后，即可得到无菌的培养基。
实验三 培养基的配制、灭菌及混合微生物的分离和纯化培养
试管培养：
1,准备干净试管 ；
2,培养基的配制及试管分装；
3,含培养基的试管灭菌；
4,灭菌后试管趁热摊斜面；
5,试管无菌接种
6,恒温箱中培养
7,菌种的保存
实验 三 微生物实的培验养 内容（3人为小组单位）
6X 培养皿 包扎，干热灭菌，160度，2h
实验要求
每人完成
培养皿 2 个，混合菌种划线分离用；
（ 一般每个皿可加10···15ml 的培养基）
试管 1 个，做试管斜面用；
实验 三 微生物的培养
实验过程及内容
一、器皿的准备（30 分钟内完成）
空白培养皿包扎，干热灭菌，160度，2 h
二、培养基的配制、分装及灭菌（ 75 分钟完成）
六、在一定温度下培养，几天后至可见菌落，镜检。
实验 三 微生物的培养
微生物实验室培养的基本操作程序
培养皿作为培养容器时： 1,空白培养皿包扎、灭菌 2,培养基的配制 3,培养基的灭菌 4,倒平板 5,平皿无菌接种 6,恒温箱中，倒置培养 7,菌种的保存
实验 三 微生物的培养
如何实现：烘箱160-170 ℃下加热1-2h，
实验 三 微生物的培养
常用灭菌、无菌技术
4,高温高压蒸气灭菌: 系指用高压饱和水蒸气加热杀灭微生物的方 法。能杀灭所有细菌繁殖体和芽孢，适用于耐 高温和耐高压蒸汽的所有药物制剂 、玻璃容 器、金属容器、瓷器、橡胶塞、滤膜过滤器等。
常用灭菌温度（蒸气表压）和时间： 含糖分高、或含氨基酸高的培养基 115℃、30min； 大多数，比较耐高温培养基 121℃、20min；
实验 三 微生物的培养
培养基的配制与灭菌的实验原理
培养基的配制与灭菌的实验原理1. 培养基的配制1.1 配制的基本概念好啦，各位小伙伴，今天我们要聊聊培养基的配制，听上去是不是有点小复杂，但别急，让我们一起来简单搞懂这玩意儿。
培养基呢，就是我们用来培养微生物的“餐桌”，给它们提供一切所需的营养，好让它们在实验室里像“锅里煮的饺子”一样，茁壮成长。
要想培养基配制得恰到好处，就得搞清楚它的成分，这些成分一般包括碳源、氮源、矿物质、维生素等等，基本上就是“食材”的大合集。
我们会根据不同的微生物选择不同的“食谱”，这样才能让它们在我们的“餐桌”上大快朵颐。
比如，细菌特别喜欢在“营养琼脂”这个大餐上打滚，而真菌则偏爱“马铃薯葡萄糖培养基”，就像你喜欢披萨，他喜欢汉堡一样。
1.2 配制步骤说到配制过程，可得细细说说。
这可不是随便往一盆里搅几下就完事儿的事儿。
首先，我们得准备好各种原料，按照规定的比例把它们混合在一起。
像是“调味料”，我们也得精确计算，比如要加多少克的氨基酸，多少克的糖类，精确得就像给蛋糕配方量糖一样。
混合好了之后，还得将它们溶解在水里，搅拌的时候可别急，慢慢搅拌，避免出现“结块”的情况。
然后，接下来就要将混合液加热，通常是用高温高压的方式来杀死液体中的所有微生物，这一步就像是在做“清汤”，得彻底干净。
2. 灭菌的必要性2.1 为什么要灭菌那么，为啥培养基在配制好后还得做一轮灭菌呢？这就好比是咱们在吃饭前，要把手洗干净一样。
灭菌的目的是为了杀死所有可能的细菌、真菌和其他微生物，确保它们不会在咱们的培养基里横行霸道，影响实验结果。
试想一下，如果咱们的培养基里还有其他微生物，那就像是餐桌上多了几个“讨厌的客人”，它们不仅抢走了微生物的“食物”，还可能把“餐厅”弄得一团糟。
灭菌的过程，就是通过高温、高压或化学药品，把所有可能的干扰因素一网打尽，确保微生物的培养环境是“干净整洁”的。
2.2 常用的灭菌方法谈到灭菌，常用的方法有几种。
最常见的就是高压蒸汽灭菌，这种方法就像是给培养基做“深层清洁”，通过高温高压杀死所有微生物。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告实验名称：培养基的配制与灭菌实验
实验目的：了解培养基的配制方法和灭菌技术，掌握实验操作
技能，培养实验室操作能力。
实验原理：
1. 培养基配制
培养基的配制是在一定比例下将各种营养成分混合组成的，包
括碳水化合物、胺基酸、氮源、矿物质等，以提供生长和繁殖细
菌所需的条件。
2. 灭菌
细菌培养需要具备无菌环境，因此必须对培养基进行灭菌处理。
实验中常用的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌和紫外线灭菌。
实验器材和试剂：
1. 水浴锅
2. 培养瓶和试管
3. 称量硬度高的玻璃容器
4. 试剂：琼脂、提取物、蔗糖、酵母提取物、胆汁、NaCl，
实验步骤：
1. 培养基配制
按照比例将各种营养成分混合，加入含有一定含量的蔗糖和酵母提取物的琼脂，再加入一定量的胆汁和NaCl，配制成固体培养基。
将琼脂和提取物等放入庞大的试管中；配合无水熔点管等研磨出来的溶液进行试管的分离悬胶操作，所得的琼脂可以冷藏保存。
2. 灭菌
将培养基装入培养瓶中，放入水浴锅中加热，使水温达到100℃左右，进行高压蒸汽灭菌。
灭菌后将培养基放置在无菌环境中，
待其温度降至40℃左右，即可使用。
实验结果和分析：
实验结果表明，配制的培养基已可以暂存和使用，经过高温蒸
汽灭菌可以达到无菌效果。
实验结论：
本实验灭菌技术和培养基配制方法是现代微生物学实验检测的
基础，熟练掌握这些操作技能可以提高实验室操作能力，为实验
的顺利开展提供有力保障。
培养基的配制和灭菌-
三.实验步骤—培养基的配制
4．灭菌 ❖ 将上述培养基以0.103Mpa,121℃,20min高压蒸气灭菌. 5. 搁置斜面 ❖ 将灭菌的试管培养基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太
多),将试管口端搁在玻棒或其他合适高度 的器具上,搁置 的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 6.到固体平板
❖ 将灭菌培养基降温50℃，到固体平板。
谢谢大家
三.实验步骤—培养基的配制
二．牛肉膏蛋白胨培养基的制备（斜面1支/人、
培养皿1个/人、三角瓶固体200mL/3组）
配方：
❖ 营养肉汤
1.8g
❖ 琼脂
2g
❖ 固体培养基
2%L
三.实验步骤—培养基的配制
1. 斜面的制备
❖ 准确地称取营养肉汤1.8*2 g放入烧杯中。在上述烧杯中 先加入200 ml水，用玻棒搅匀，然后，将称好的琼脂4g 加入，再加热溶化，溶化时需要用玻棒不停搅拌。必要 时补足所损失的水分。将配制的培养基分装入试管内，
灭菌效果。三角瓶与试管口端不要与桶壁接触， 以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞
三.实验步骤—高压蒸汽灭菌
❖ 3.加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气 槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个 螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
❖ 4. 加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅 内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀， 让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅 内压力升到所需压力时，控制电源，维持压力至 所需时间。本实验用0.1MP，121.5℃，20分钟灭 菌。
每支试管约4ml。（注意：每人1支试管，3个组一起 做）。加塞，包扎后，灭菌。
❖ 注意：在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因 沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧 焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离 子进入培养基中，影响细菌生长。
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）n源：包括无机氮和有机氮。
（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
培养基的配制与灭菌技术
培养基的配制与灭菌技术⼀、培养基的配制与灭菌技术培养基是将微⽣物⽣长繁殖所需要的各种营养物质，⽤⼈⼯的⽅法配制⽽成的⽤于培养微⽣物的营养基质。
培养基种类很多，不同的微⽣物所需培养基不同。
就培养基中营养物质的来源可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。
按培养基特殊⽤途可分加富培养基，选择培养基、鉴别培养基。
按培养基制成后的物理状态可分为固体培养基，液体培养基和半固体培养基。
固体培养基是在液体培养基中加⼊1.5 %-2.0 %琼脂作凝固剂; 半固体培养基则加⼊0.5 %-0.8 %的琼脂。
⼀般培养基除含有⼤量⽔分外, 还含有碳素、氮素、⽆机盐类和维⽣素等。
此外, 由于徽⽣物⽣长繁殖必须在最适的酸碱度范围内, 才能表现出最⼤的⽣命活⼒, 因此应根据不同种类的徽⽣物. 将培养基调节到⼀定的pH值范围。
培养基配制后还必须进⾏灭菌, 灭菌是指杀死或消灭所有微⽣物, 包括营养体、孢⼦和芽孢。
灭菌的⽅法很多，可分为物理⽅法与化学⽅法两⼤类。
物理⽅法包括湿热灭菌、⼲热灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等; 化学⽅法主要是利⽤化学药品对接种室空间、⽤具和其它物体表⾯进⾏灭菌与消毒。
消毒⼀般是指消灭有害微⽣物的营养体和病原菌。
(⼀) 培养基的配制⽅法⼀般培养基的配制⽅法如下 (各种天然培养基的配制⽅法略有不同)：l. 按照配⽅的组分及⽤量先分别称量并配成液体；2. 根据要求调到⼀定的酸碱度(pH值)；3. 若要制成固体则加⼊2%琼脂并加热融化；4. 根据需要的数量分装⼊试管或三⾓瓶中, 加上棉塞或盖上纱布；5. 包扎好灭菌后备⽤。
配制斜⾯培养基的⼀般操作步骤为：称量→溶解→调pH值→加琼脂→过滤→分装→加棉塞→包扎→灭菌→摆斜⾯→⽆菌检查。
(图9-7)(⼆) 培养基及常⽤器⽫的灭菌培养微⽣物常⽤的玻璃器具主要有试管、三⾓瓶、培养⽫、吸管等, 在使⽤前必须先进⾏灭菌, 使容器中不含任何杂菌；培养微⽣物⽤的营养基质(培养基), 在接⼊纯种前也必须先⾏灭菌, 使培养基呈⽆菌状态。
培养基配制和灭菌方法验证
培养基配制和灭菌方法验证一、培养基配制培养基是一种供养菌落生长的基础物质，可以提供细菌所需的营养物质和环境条件。
培养基的配制是非常关键的步骤，如果配制不当会影响到培养菌落的生长和观察结果的准确性。
1.1固体培养基的配制固体培养基是通过在液体培养基中加入凝固剂（如琼脂）使其凝固，形成固体的培养基。
固体培养基可以用来分离纯菌、观察菌落特征以及保存菌种。
配制固体培养基的主要步骤如下：步骤一：准备配方根据不同的菌种需要，选择适当的培养基配方。
常见的培养基如营养琼脂(NA)、大肠杆菌琼脂(MacConkey)、血琼脂(Blood Agar)等。
步骤二：计量和溶解根据配方，按照适当的比例称量需要的成分，并加入适量的蒸馏水。
然后，将成分加热溶解，直至成分完全溶解。
步骤三：凝固将已溶解的培养基液倒入培养皿或试管中，装入适量的培养基液。
温度下降至约50℃时，可以添加相应的抗生素(如青霉素)等，促进无菌条件的保持。
待培养基液凝固后，即可进行灭菌处理。
1.2液体培养基的配制液体培养基主要用于培养大量的菌落或进行革兰氏染色等实验。
液体培养基的配制步骤与固体培养基配制类似，只是不需要加入凝固剂。
为了确保培养基无菌，常常需要进行灭菌处理。
2.1常见的灭菌方法常见的灭菌方法主要包括以下几种：1)高压灭菌法：利用高温高压的环境，将培养基中的微生物逐一被杀死。
常用的高压灭菌法是使用高压蒸汽灭菌器进行处理。
2)紫外线灭菌法：使用紫外线灭菌器，将细菌暴露在紫外线下，排除细菌生长的可能性。
3)化学灭菌法：使用化学物质，如乙醛、次氯酸钠等，浸泡培养基或在培养基上喷雾，杀灭细菌。
2.2检验培养基灭菌效果的验证方法验证培养基灭菌效果的方法主要有两种：物理指标法和培养法。
1)物理指标法：即通过检测物理指标，如温度、压力等，来验证灭菌效果。
例如，在培养基中放置一个温度计，通过测量温度变化来判断灭菌的有效性。
2)培养法：即将培养基在灭菌前后进行对照培养，观察菌落的生长情况，或通过采样培养基，进行菌种分离和鉴定。
培养基的配制与灭菌的注意事项
培养基的配制与灭菌的注意事项培养基配制：1.选择合适的成分：根据实验需求选择合适的成分，常见的成分包括碳源、氮源、无机盐、维生素和其他添加剂等。
不同菌株具有不同的营养需求，因此需要根据菌株的特点进行选择。
2.称量成分：准备好所需的成分，并根据实验方案的要求称量合适的量，注意遵循慎重、准确的原则。
称量时要注意卫生和避免污染，避免手直接接触培养基成分。
3.溶解和调节pH：将所需的成分加入适量的去离子水中，用磁力搅拌器充分溶解。
根据菌株的要求，调节培养基的pH值。
常用的调节剂有氢氧化钠（NaOH）和盐酸（HCl）。
4.加入琼脂糖：将配制好的液体培养基加热至沸腾并搅拌，然后加入适量的琼脂糖，再次搅拌直至琼脂糖完全溶解。
5.分装和灭菌：将配制好的培养基分装到培养皿或试管中，然后灭菌。
灭菌的注意事项：1.选择合适的灭菌方法：常见的灭菌方法包括高压灭菌、滤液灭菌和热灭菌等。
选择合适的灭菌方法应基于培养基的成分和需求。
2.准备好实验室器具：在灭菌前，要确保实验室器具和操作台面都是清洁的，并准备好所需的灭菌设备和物品，如高压锅、培养皿、试管和酒精灯等。
3.严格操作：灭菌前要对培养基容器进行必要的清洁，如使用酒精进行消毒。
然后将培养基装入容器中，并用适当的方法进行密封，如用铝箔纸包裹或用锡纸密封。
4.控制温度和时间：根据选择的灭菌方法和设备的要求，设置合适的温度和时间。
灭菌时间一般为15-30分钟，不同的培养基和设备可能有所不同，需要根据实际情况进行调整。
5.检查培养基质量：灭菌后，打开培养基试管或培养皿的盖子，观察培养基是否有异常变化，如出现颜色变化、气泡或异味等。
若有异常，应立即进行处理。
总结：培养基的配制与灭菌是微生物学实验中必不可少的环节。
正确的配制和灭菌可以保证培养基的纯度和质量，从而确保实验结果的可靠性。
在培养基的配制过程中，要选择合适的成分，准确称量，并注意卫生和避免污染。
灭菌时，要选择合适的灭菌方法，并控制温度和时间，同时注意实验室器具的清洁和消毒。
微生物学实验三 培养基的配制及灭菌
实验三培养基的配制及灭菌培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质。
主要用于微生物的分离、培养、鉴定以及菌种保藏等方面。
培养基一般应含有微生物生长繁殖所需要的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。
此外，为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基的pH。
一般细菌、放线菌适于生长在中性或微碱性的环境中，而酵母菌和霉菌则适于生长在偏酸性的环境中。
因此，在配制培养基时，须将培养基调节在一定pH的范围内。
迄今为止，培养基的种类极其繁多。
按培养基的成分，可将培养基分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。
天然培养基是指利用动物、植物、微生物或其它天然有机成分配制而成的培养基。
其优点是营养丰富、价格便易；缺点是成分不能准确确定且不稳定。
实验室常用的牛肉汁或麦芽汁培养基即为天然培养基。
合成培养基是指完全利用已知种类和成分的化学试剂配制而成的培养基。
优点是各成分均为已知且含量稳定，缺点是价格较贵。
实验室常用的高氏一号培养基即为合成培养基。
半合成培养基是指由天然有机成分和已知化学试剂混合组成的培养基。
实验室常用的马铃薯葡萄糖培养基即为半合成培养基。
按培养基的物理状态，可将培养基分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。
固体培养基是指在液体培养基中加入一定量的凝固剂（常加1.5％～2％的琼脂）经融化冷凝而成；半固体培养基是指在液体培养基中加入0.2％～1％左右的琼脂，经融化冷凝而成；液体培养基是指培养基中不加凝固剂琼脂，培养基呈液体状态。
按培养基的用途，可将培养基分为加富培养基、选择培养基和鉴别培养基。
加富培养基是指在培养基中加入某些特殊营养物质，促使某种持殊性能的微生物迅速生长，有利从混合菌群中分离出所需种类微生物。
例如为了分离能够利用石蜡的微生物，常在培养基中加入石蜡作为碳源。
选择培养基是指在培养基中加入某些微生物生长抑制剂，抑制那些不需要的微生物的生长，以达到从混杂微生物菌群的环境中分离到所需的微生物。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告培养基的配制与灭菌实验报告引言：在微生物学研究中，培养基的配制和灭菌是非常重要的实验步骤。
培养基是供养菌落生长和繁殖所必需的营养物质的混合物，而灭菌则是为了杀灭培养基中可能存在的有害微生物，以保证实验结果的准确性和可靠性。
本实验旨在探究不同培养基的配制方法以及灭菌的效果，并提供一种简单可行的实验方案。
一、培养基的配制1. 培养基的种类在微生物学实验中，常用的培养基有固体培养基和液体培养基两种。
固体培养基主要用于菌落计数、分离纯种菌落以及观察微生物生长形态等实验，而液体培养基则适用于大规模培养、生物化学分析等实验。
2. 培养基的配方培养基的配方根据不同微生物的需求而定，常见的培养基配方包括营养物、水和琼脂。
营养物可以是有机物如蛋白胨、肉汤，也可以是无机盐如硝酸钠、磷酸氢二钾等。
水的选择要注意纯净度，最好使用经过蒸馏或纯化的水。
琼脂是一种提供凝胶状基质的物质，常用于制备固体培养基。
3. 培养基的制备步骤（1）称取所需的营养物和琼脂，按照一定比例加入适量的水中。
（2）将容器密封，并在高压蒸汽灭菌器中进行高温高压灭菌，以杀灭培养基中的有害微生物。
（3）取出灭菌后的培养基，待其冷却至适宜生长温度后，即可使用。
二、灭菌实验1. 灭菌的重要性灭菌是为了消除培养基中的有害微生物，以保证实验结果的准确性和可靠性。
如果培养基未经灭菌处理，其中可能存在的细菌、真菌等微生物会与待测微生物相互干扰，导致实验结果的偏差。
2. 灭菌方法（1）高温高压灭菌：将培养基密封于容器中，放入高压蒸汽灭菌器中进行高温高压处理。
高温高压可以有效杀灭细菌、真菌等微生物。
（2）化学灭菌：使用化学消毒剂如酒精、过氧化氢等进行灭菌处理。
这种方法适用于一些耐热菌种，但需要注意化学消毒剂的浓度和作用时间，以避免对待测微生物产生不良影响。
3. 灭菌效果的验证为了验证灭菌效果，可以将灭菌后的培养基分别接种于无菌平板上，并进行培养观察。
培养基的配制与灭菌的注意事项
培养基的配制与灭菌的注意事项
培养基是微生物学实验中必不可少的一种实验用品，它是用来培养微生物的营养物质基础。
培养基的配制和灭菌是影响实验结果的重要因素，下面我们来详细了解一下。
一、培养基的配制
1.选择合适的培养基配方
不同的微生物需要不同的营养物质，因此在选择培养基配方时需要根据实验需要选择合适的培养基配方。
2.准确称量
在配制培养基时需要准确称量每种成分，以保证培养基的质量。
3.加热溶解
将配制好的培养基加入适量的蒸馏水中，加热溶解，使其均匀混合。
4.调节pH值
不同的微生物对pH值的要求不同，因此在配制培养基时需要根据实验需要调节pH值。
5.滤过灭菌
配制好的培养基需要进行滤过灭菌，以去除其中的微生物和杂质。
二、灭菌的注意事项
1.选择合适的灭菌方法
常用的灭菌方法有高压灭菌、干热灭菌、紫外线灭菌和滤过灭菌等。
在选择灭菌方法时需要根据实验需要选择合适的灭菌方法。
2.控制灭菌时间和温度
不同的灭菌方法需要不同的时间和温度，因此在灭菌时需要控制好灭菌时间和温度，以保证灭菌效果。
3.注意灭菌器的清洁和维护
灭菌器需要定期清洁和维护，以保证其正常工作和灭菌效果。
4.注意灭菌后的保存
灭菌后的培养基需要保存在干燥、阴凉、避光的地方，以保证其质量。
培养基的配制和灭菌是微生物学实验中非常重要的环节，需要严格按照操作规程进行操作，以保证实验结果的准确性和可靠性。
培养基的配制及灭菌
.培育基的配制及灭菌一．实验目的1.三角瓶，培育皿，试剂瓶，试管，枪尖盒等仪器的冲洗。
2.三角瓶棉塞的制作，三角瓶，吸管，培育皿，试剂瓶，试管，枪尖盒的包装与灭菌。
3.高温蒸汽灭菌原理的学习。
4.LB 和 MacConkey培育基的制作与灭菌。
二．实验原理1.高温灭菌的原理：因为培育基配置过程中并不是是无菌操作，所以要经过立刻灭菌来防备配制过程中混入的杂菌利用培育基中的营养物质进行生殖进而损坏培育基的性能。
高压蒸汽灭菌是生物试验应用最广，成效最好的一种湿热灭菌法。
在密闭的蒸锅内，此中的蒸汽不可以外溢，压力不停上涨，使水的沸点不停提升，进而锅内温度也随之增添。
在 0.1MPa的压力下，锅内温度达 121℃。
在此蒸汽温度下，能够很快杀死各样细菌及其高度耐热的芽孢。
注意：①使用高压蒸汽灭菌前必定要完好清除锅内空气，使锅内所有是水蒸气，灭菌才能完全。
不然在同一压力下，锅内实质温度和理想温度就会有差距，不可以达到最好灭菌成效。
②在使用灭菌锅前切勿忘掉加水，水加至与三角搁架相平，以防灭菌锅烧干而惹起炸裂事故。
③使用完后要等到压力降为零再翻开锅盖，不然会因为锅内外压力不均衡而致使棉塞蹦出造成污染，也简单损害到操作者。
2.培育基的配置原理：微生物的生长依靠于可利用的营养物质和适合的生长环境。
培育基是用于培育，转移，储存微生物的固体，半固体或液体的营养物质。
培育基中含有微生物所需的所有营养物质，包含碳源、氮源、能源、无机盐、水分和生长因子。
适合的 pH对微生物的生长是必不行少的。
培育基的物理状态有三种：液体、半固体和固体。
这些培育基的主要差别是在固体和半固体培育基里面加了固化剂------琼脂。
当将琼脂加入溶液中时，在98℃能消融成有必定粘性的液体。
并在42℃凝结。
琼脂拥有的特征有：不易被微生物降解；靠近无色等。
关于固体培育基需要加入琼脂量约为 1.4%~1.6%，半固体培育基加入约 0.6%~0.8%。
培育基在配制过程中简单遇到污染，所以一定进行灭菌，同时不可以将培育基中的营养物质损坏。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一、培养基及其作用：是向植物细胞提供营养 的场所。其作用是向植物细胞提供所需的各种 营养；调节渗透压、酸碱度；供给水分。固体 培养基还起着支撑作用。
培养基多以命名人的名字命名。 目前，比较流行的培养基有：
❖ MS培养基，其特点是无机盐和离子浓度较高； ❖ B5培养基，其特点是含有较低的铵； ❖ White培养基，其特点是无机盐低，适于生根； ❖ N6培养基，其特点是KNO3和(NH4)2SO4含量较高，适于花
(3) 肌醇：又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要 作用。用于构建细胞壁。使用肌醇能促进愈伤组织 的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁 殖、 分化有促进作用。
(4) 氨基酸：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利 用。培养基中常用甘氨酸。有时用水解乳蛋白或水 解酪蛋白，由于它们营养丰富，极易引起污染。如 在培养中无特别需要，以不用为宜。
(1) 氮：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物 碱等的组成成分。供应的氮化物有硝酸铵、硫酸铵、硝酸钾 等。有时，也添加氨基酸来补充氮素。
(2) 磷：是生物膜、核苷酸（ 如ATP）、核酸的重要组成部分。 常用于培养基的磷化物有ＫH2PO4或ＮaH2PO4等。
(3) 钾：Ｋ对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切 关系。制备培养基时，常以KCl、KNO3等盐类提供。
药培养； ❖ KM－8P培养基，其特点是有机成分较多，适于原生质体培
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ养。
二、培养基的成分：主要可以分水、 无机盐、有 机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。
1、水：植物原生质体的组成成分，代谢过程的介质和溶媒。 大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水， 防止贮藏过程发霉变质。
２、无机元素：大量元素，指浓度大于0.5mmol/l的元素，有N、 P、K、Ca、Mg、S等。其作用是：
4、植物激素：在培养基的各成分中，植物激素是培养基的关 键物质， 对植物组织培养起着决定性作用。
(1) 生长素类：在组织培养中，生长素主要被用于诱导愈伤组 织形成，诱导根的分化和促进细胞分裂、伸长生长。
IAA(吲哚乙酸)是天然存在的生长素，亦可人工合成，其 活力较低,是生长素中活力最弱的激素， 对器官形成的副作 用小，高温高压易被破坏，也易被细胞中的IAA分解酶降解， 受光也易分解。
① 诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。 ② 促进细胞分裂与扩大。 ③ 抑制根的分化。
因此，细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化、茎、苗 的增殖，而避免在生根培养时使用。
5、培养材料的支持物 (1) 琼脂：在固体培养时琼脂是最好的固化剂。固体培养
基利于组织置于培养基表面。琼脂是一种由海藻中提 取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何营养。
(5) 天然复合物：其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、 酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织的增殖与分化 有明显的促进作用。
①椰乳：它在愈伤组织和细胞培养中有促进作用 ②香蕉：主要在兰花的组织培养中应用，对发育有促进
作用。 ③马铃薯：添加后可得到健壮的植株。 ④水解酪蛋白：为蛋白质的水解物，主要成分为氨基酸。 ⑤其它：酵母提取液、麦芽提取液等。
NAA(萘乙酸) 在组织培养中的起动能力要比IAA 高出3～4倍，且由于可大批量人工合成， 耐高温高压， 不易被分解破坏，所以应用较普遍。
IBA(吲哚丁酸)是促进发根能力较强的生长调节物 质。
2,4-D（2,4－二氯苯氧乙酸）起动能力比IAA高10 倍，特别在促进愈伤组织的形成上活力最高， 但它强 烈抑制芽的形成，影响器官的发育。
3、有机化合物：培养基中若只含有大量元素与微量元 素，常称为基本培养基。为不同的培养目的往往要加 入一些有机物以利于快速生长。常加入的有机成分主 要有以下几类：
(1) 碳水化合物：最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖
也是较好的碳源，可支持许多组织很好的生长。
(2) 维生素(Vitamin)：维生素类化合物在植物细胞里主要是以 各种辅酶的形式参与多项代谢活动，对生长、分化等有很好 的促进作用。主要有： VB1 (盐酸硫胺素)：对愈伤组织的产生和生活力有重要作用。 VB6(盐酸吡哆醇)：能促进根的生长。 VPP(烟酸)：与植物代谢和胚的发育有一定关系。 VC(抗坏血酸)：有防止组织变褐的作用。
Fe是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组 成成分。在制做培养基时常用FeSO4·7H2O和Ｎa2EDTA结合成螯合物使用。
B、Mn、Zn、Cu、Mo、Co等，也是植物组织培养中不 可缺少的元素，缺少这些物质会导致生长，分裂异常。
这些整株植物生长所必需的营养元素，对于植物 组织培养来说也是必需的。当某些营养元素供应不足 时，愈伤组织表现出一定的缺素症状。如缺氮，会表 现出一种花色素苷的颜色，不能形成导管；缺铁，细 胞停止分裂；缺硫，表现出非常明显的褪绿；缺锰或 钼，则影响细胞的伸长。
(4) Mg、S和Ca： Mg是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂； S是含S蛋白质的组成成分。它们常以MgSO4·7H2O提供。 Ca是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、保护质膜不 受破坏有显著作用，常以CaCl2·2H2O提供。
(5) 微量元素：指小于0.5mmol/l的元素，Fe、B、Mn、 Cu、Mo、Co等。
赤霉素溶于酒精，配制时少量可用95％酒精助溶。 赤霉素不耐热，高压灭菌后将有70～100％失效，应 当采用过滤灭菌法加入。
(3) 细胞分裂素类： 这类激素是腺嘌呤的衍生物，包括 6-BA(6－苄基氨基嘌呤)、Kt(激动素)、ZT(玉米素)等。 其中ZT活性最强，但非常昂贵。常用的是6-BA。 在培养基中添加细胞分裂素有三个作用：
生长素配制时可先用少量95％酒精助溶。2, 4-D 可用0.1mol/l的NaOH或KOH助溶。生长素常配成 1mg/ml的溶液贮于冰箱中备用。
(2) 赤霉素(GA)：培养基中添加的是GA3，主要用于刺 激在培养中形成的不定胚发育成小植株，促进幼苗 茎的伸长生长。一般在器官形成后，添加赤霉素可 促进器官或胚状体的生长。