病毒感染的实验诊断
病毒感染的实验诊断
病毒感染的实验诊断病毒感染的实验诊断（一）● 考点病毒的生物学性状病毒的实验室检查方法常见病毒的感染 [讲义编号NODE70103300270100000101：针对本讲义提问]【内容讲解】第一节概述一类非细胞型微生物，个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察。
仅含一种核酸作为遗传物质，外被蛋白质衣壳或还有包膜。
病毒只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。
在临床微生物感染中，近75%的传染病是由病毒引起的。
[讲义编号NODE70103300270100000102：针对本讲义提问]一、病毒的基本性状（一）形态结构 1.大小和形状：大小：测量单位用纳米表示，一般在20-300nm之间。
形态大致可分为：球形或近似球形、杆状、弹形、砖形、蝌蚪形等。
[讲义编号NODE70103300270100000103：针对本讲义提问]2.结构[讲义编号NODE70103300270100000104：针对本讲义提问]（二）病毒的增殖病毒必须依赖宿主细胞，以特殊的自我复制方式进行增殖。
病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装与成熟、释放6个阶段。
[讲义编号NODE70103300270100000105：针对本讲义提问]异常增殖：顿挫感染：病毒进入细胞后的环境不利于它的复制，不能合成本身的成分或不能组装和释放有感染性的病毒颗粒。
缺陷病毒：由于病毒基因组不完整或基因位点改变而不能进行正常增殖的病毒。
[讲义编号NODE70103300270100000106：针对本讲义提问]干扰现象：当两种不同的病毒或两株性质不同的同种病毒，同时或先后感染同一细胞或机体时，可发生一种病毒抑制另一种（三）噬菌体以细菌、真菌等为宿主，能引起细菌等裂解的病毒。
噬菌体特异性识别细菌表面受体，可用于进行细菌的鉴定与分型。
噬菌体感染细菌后产生两种后果：溶菌周期和溶源性周期。
[讲义编号NODE70103300270100000107：针对本讲义提问]（四）非寻常病毒比病毒更小更简单的致病因子，又称为亚病毒因子，包括类病毒、卫星病毒和朊粒等。
病毒感染的实验诊断
采集各种器官时要分开使用器械和
容器。
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（二）标本的运送和保存
标本采集后注意无菌、冷冻、保湿、 立即送检。
分离培养病毒的标本要尽快送到实 验室处理和接种。如不能及时送检，可 在4℃冷藏数小时，如需较长时间保存则 应 置 -70℃ 。 放 置 在 -20℃ ， 病 毒 容 易 灭 活，冻存液中需加入甘油或二甲亚砜等 作保护，避免反复冻融使病毒灭活。
应部位采取标本，处理标本时要考虑病
毒的生物学特性。常见分离病毒标本的
选择见教材P64表4-2。
（1） 心脏疾病
（2） 中枢神经系统感染
（3） 先天或新生儿感染
（4） 胃肠道疾病
（5） 呼吸道感染
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3．常见标本的采集方法
（1） 血液：以无菌手续抽取抗凝血10ml， 抗凝剂可选用100u/ml肝素钠。为了血清 学检查的需要，应抽取另一管5ml血液， 不抗凝送检。
程度上取决于标本的恰当采样和处理，为了保 证标本质量，应注意以下问题：
1．采样时间 尽可能在发病的初期，急性期 或患者入院的当天进行，越早越好，最好在治 疗之前。疾病后期体内产生免疫力，病毒量减 少或消失。
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2．标本种类的选择
根据临床感染的症状及流行病学资
料，判断可能感染病毒的种类，选择相
清学实验；后者主要是核酸杂交与PCR 及现代免疫学技术。
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病毒分离培养
病原学诊断 形态学检测
病 毒
分子生物学技术——病毒核酸
学
补体结合试验
检
中和试验
验
血清学诊断 血凝抑制试验
2016资格考试微生物检验分章节复习(二十七)
2016资格考试微生物检验分章节复习（二十七）第二十七章病毒感染的实验诊断一、A11、下列哪一点为病毒与其他微生物（细菌、立克次体和衣原体等）的明显不同（）。
A、病毒不含氨基糖酸B、病毒不含氨基酸C、病毒不含核酸D、病毒含氨基糖酸E、病毒只含核酸2、下列哪种细胞适合于乙脑病毒的分离和培养（）。
A、C6/36细胞B、鸡胚细胞C、鸭胚细胞D、Hela细胞E、CER细胞3、检测到下列哪种抗体可确诊病毒引起的新生儿先天性感染（）。
A、IgGB、IgMC、IgAD、IgDE、IgE4、HBsAg（-）、抗-HBs（+）、HBeAg（-）、抗HBe（-）、抗HBc（-），表明（）。
A、急生肝炎初期B、慢性活动性肝炎C、乙肝恢复并产生免疫力D、既往乙肝病毒感染E、慢性迁延性肝炎5、埃博拉病毒致病性的差异主要取决于（）。
A、血清型的不同B、病毒科的不同C、被感染者不同D、性别不同E、人种不同6、不能用于检查病毒的方法是（）。
A、动物接种B、鸡胚尿囊接种C、鸡胚卵黄囊接种D、细胞培养E、人工培养基培养7、出血热病毒属于下列哪一种基因类型的病毒（）。
A、负链RNAB、正链RNAC、分节段D、不分节段E、双链RNA8、噬菌体的核酸，最常见的是（）。
A、双链环状DNAB、双链线状DNAC、单链环状DNAD、单链线状NAE、单链RNA9、呼吸道合胞病毒因在组织培养繁殖时能引起下列哪一种现象而定为现在的名称（）。
A、细胞聚合B、细胞融合C、细胞核消失D、细胞界限不清E、细胞破裂10、下列哪种病毒不属于肝炎病毒（）。
A、HCVB、HBVC、HEVD、HAVE、CMV11、对甲型肝炎早期有诊断价值的免疫球蛋白是（）。
A、IgAB、IgGC、IgMD、IgEE、IgD12、登革休克综合征主要诊断依据不包括（）。
A、出血B、休克C、肾脏损伤D、口唇发绀E、肌肉关节酸痛13、脊髓灰质炎病毒主要经过下列（）途径传播。
A、人畜途径B、血液途径C、破损皮肤D、粪-口途径E、性传播14、HIV造成免疫系统的多种功能发生缺陷的主要原因是下列哪一点（）。
病毒病的常规实验室诊断
胞现象也可被特异性抗血清所抑制，故在病毒鉴定，特别是对
某些不产生细胞病变的病毒，常用红细胞吸附和吸附抑制试验 进行快速鉴定。
2.4 补体结合试验（CFT）
原理：CFT是根据任何抗原抗体复合物可激活、固定补体的特 性，用一定量的补体与致敏红细胞来检测抗原、抗体间有无特 异性结合的一类实验。 参与本实验的五种成分分为两个系统 ①待检系统：已知抗原（或抗体）和待检 抗体（或抗原细胞代谢的测定
病毒间的干扰现象
抗原的测定
电子显微镜观察
1.5 病毒感染力的测定—半数细胞培养物感染量 （TCID50)
Reed-Muench
内插法
Karber法
细胞病变孔：50%以上细胞发生病变才可算为细胞病变孔。
病毒种类 狂犬病病毒 接种途径 卵黄囊 ++ 绒毛尿囊膜 ++ 尿囊腔 养膜腔 脑内 +++ 病变 特征 鸡胚死亡 备注
流感病毒
新城疫病毒 痘病毒 蓝舍病病毒 传支 法氏囊 鹅细小
++++
++++ +++ +++ +++ ++ +++++ ++ ++++ ++++
2.9 单扩溶血试验
是在琼脂单扩散基础上发展起来的，又称为被动溶血技术，主要用于流感 病毒血凝素和神经氨酸酶抗体的测定。 吸附在红细胞表面上的抗原与同种抗体结合，再加上补体的作用，就会使 红细胞溶血，由于糠油抗体血清的稀释度与溶血圈直径或面积的大小成直 线关系，所以可对血清抗体进行定量测定。
EB病毒感染实验室检测方法
EB病毒感染实验室检测方法摘要本文档详细描述了EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）感染的实验室检测方法，包括病毒培养、血清学检测、核酸扩增和病毒载量测定等。
这些检测方法在临床诊断、流行病学研究以及疫苗研发等领域具有重要意义。
1. 病毒培养1.1 原理EBV属于疱疹病毒科，是一种专性细胞内寄生的DNA病毒。
病毒培养可以充分展示病毒的感染性、复制能力和生物学特性。
1.2 方法1. 选择合适的细胞系，如B95-8或Daudi细胞。
2. 将临床样本（如唾液、血液等）接种至细胞系。
3. 在适宜的条件下（如37°C、5% CO2）培养细胞，观察病毒复制和感染现象。
4. 定期观察细胞病变，如细胞增大、核固缩等。
5. 采用免疫荧光染色、电子显微镜等方法检测病毒颗粒。
2. 血清学检测2.1 原理血清学检测基于病毒感染后诱导的免疫反应，通过检测特异性抗体来诊断EBV感染。
2.2 方法1. 收集患者血清样本。
2. 使用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测EBV特异性抗体，如VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG等。
3. 采用免疫荧光染色、免疫组化等方法进行抗体检测。
4. 根据抗体类型和滴度判断感染状态，如急性感染、慢性感染或回忆性感染。
3. 核酸扩增3.1 原理核酸扩增技术通过特异性引物和DNA聚合酶酶链反应（PCR）来检测EBV的DNA序列。
3.2 方法1. 提取临床样本的DNA。
2. 设计针对EBV DNA的特异性引物，进行巢式PCR或实时定量PCR（qPCR）。
3. 扩增EBV特异性基因，如EBNA1、EBNA2、LMP1等。
4. 分析扩增产物，判断病毒感染情况。
4. 病毒载量测定4.1 原理病毒载量测定通过检测病毒颗粒的数量来评估病毒感染的程度。
4.2 方法1. 提取临床样本的病毒颗粒。
2. 采用实时定量PCR、定量荧光显微镜等方法测定病毒载量。
3. 根据病毒载量判断感染程度，为临床治疗提供依据。
动物微生物--病毒感染实验诊断
病毒传送培养基以Hanks液为基础加 灭活的小牛血清。为抑制细菌生长加 青霉素100U／ml和链霉素100μg／ml， 为了抑制真菌的生长加入2．5μg／ml 二性霉素B或40μg／ml制霉菌素。
五、病毒检验的结果评价
通过实验手段，从标本中获得有 关病毒感染的证据，从而确定病毒 感染和临床疾病之间的因果关系， 是病毒实验诊断的目标。
通过分离和鉴定获得致病性病毒， 发现病毒感染的特异征象，如机 体内产生特异性抗体,急性期和恢 复期血清中相应的特异性抗体有4 倍以上的升高，细胞内包涵体的形 成等,就可得出病原学诊断。
二、病毒抗原检测
病毒抗原是病毒特异性的标志， 通过免疫学技术检测标本中特 异性抗原存在，可以早期诊断 病毒感染。
1．免疫荧光技术 适合于型别少， 细胞培养难以成功的病毒，如流 感病毒、副流感病毒、疱疹病毒、 巨细胞病毒、腺病毒等。肝活检 组织中的肝炎病毒、神经组织中 的单纯疱疹病毒、脑组织中的狂 犬病毒或其他脱落细胞和活检组 织中的病毒抗原检测。
必须通过全面了解其特性才能 得到鉴定。 1.根据临床特点，流行病学资 料，标本来源，大致了解病 毒的一些特性，有助于确认 病毒的种类。
2.动物感染范围及特点 病毒感 染动物的范围、发病的潜伏期。 3.细胞培养特点。 综合上述资料作出鉴定。
病毒鉴定的方法
1.细胞培养的结果观察
病毒增殖后导致细胞发生:①细胞病 变效应(CPE)。细胞肿大，变圆堆积 成葡萄状，细胞溶解出现空斑，细胞 融合形成多核巨细胞，胞浆内或核内 出现嗜酸性或嗜碱性包涵体等；
第一节标本采集与运送
医学微生物学：病毒感染的检查方法与防治原则
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本采集与送检
原则：与细菌类似 •用于分离培养的标本： 采取采取急性期标本、使用抗生素处 理防细菌污染
无菌操作、低温保存、尽快送检
•血清学诊断的标本： 双份血清？
早期采集
标本的采集和送检六原则
无菌采集 采集合适的标本
采集双份血清
尽快送检 正确标记
❖ 种类：常用的传代细胞有HeLa（宫颈癌）细胞、KB（口 腔癌）细胞、HEp-2（喉癌）细胞、Vero（非洲绿猴肾） 细胞等。
❖ 特点及作用：由于传代细胞系能有规律地持续传代，容
易保存（-70℃~-196℃）且对某些病毒易感，因此，在
诊断、科研等非疫苗生产的项目中常被采用。目前广泛 用于病毒的实验室诊断工作，根据病毒对细胞的亲嗜性 ，选择敏感的细胞系使用传代细胞系
病毒1:100稀释
病毒1:1000稀释
中性红染色：活细胞呈红色，受病毒感染破坏的细胞不着色
三、病毒感染的诊断
1.病毒形态学检查 2.病毒成分（病毒蛋白和核酸）检查 3.病毒感染的血清学（病毒抗体）检查
❖ 标本类型？ 与细菌标本类似 ❖ 好的标本？ 正常无菌性体液 ❖ 标本内容物一般需要含有宿主细胞
二、病毒的分离培养与鉴定
病毒的实验室诊断方法
动物接种
病 毒
鸡胚培养
分离培养方法（金标准）
检 细胞培 养 测 病毒成分检测
活细胞
血清学诊断
（一）病毒的分离培养
1.动物接种
❖ 最原始的病毒培养方法 多用于没有敏感细胞进行细胞培养的病毒 （乙肝、丙肝、丁肝、戊肝病毒等）
二倍体细胞培养(diploid cell culture )
病毒感染的实验诊断
2.保湿送检
• 50%甘油盐水保存送检 • 病毒转运培养基（virus transport medium ，VTM）
含0.5%明胶或牛血清白蛋白的Hank’s液
3.无菌送检
• 抑制细菌生长 100U/ml青霉素＋100μg/ml链霉素 • 抑制真菌生长 2.5μg/ml二性霉素B 或40 μg/ml制霉
细胞变圆、融合、肿胀、细胞空 泡、核浓缩、形成嗜酸性或嗜碱 性包涵体等。
某些病毒感染细胞后不出现CPE
3. 干扰现象（interference）
当两种不同的病毒同时或先后感染同一细胞时， 其中一种病毒可抑制另一种病毒的增殖，称为 病毒的干扰现象。
干扰现象也可被相应特异性抗体抑制，称为干 扰抑制现象
绒毛尿囊膜表现有痘病毒的特异性损伤
优点 鸡胚来源充足，操作简便，有多种接种途径 病毒增殖快，可收获大量病毒
鸡胚本身是无菌的，对接种的病毒不产生抗 体
缺点
易感病毒少，目前主要用于流感病毒、腮腺 炎病毒、疱疹病毒和痘类病毒的分离培养。
某些病毒在鸡胚内传代后，其毒力下降
3. 动物接种
常用动物 小鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猴等。 不同病毒对动物的敏感性不同，根据病毒种类
一般比细菌强，耐甘油，对抗生素及磺胺类药物不 敏感，干扰素可抑制病毒复制。
病毒感染的实验诊断方法
病原学诊断
✓ 病毒分离培养 ✓ 显微镜检查 ✓ 抗原检测 ✓ 核酸检测
血清学诊断
✓ 抗体检测 IgM、IgG
一、标本采集、运送和处理
（一）标本采集
➢ 采集时间：尽早采集（越早越好） ➢ 标本种类：根据感染的部位、可能感染的病毒类
醚作用后，失去感染性 4. 耐酸试验 肠道病毒耐酸，在pH3的环境下稳
病毒性感染的血清学诊断
病毒性感染的血清学诊断检查受微生物感染的机体有无特异性抗体，称为血清学诊断。
利用抗原与抗体能发生特异性结合的特点，用已知的病毒抗原检测患者血清中相应抗体，是病毒血清学诊断的基本原理。
对病毒性感染的血清学诊断最常用的办法是中和实验、补体结合实验、血凝抑制实验等，其中中和实验最为常用。
用动物、鸡胚和细胞培养均可举行。
中和实验多采纳细胞培养办法举行测定，其原理是将系列稀释的血清与病毒液混合后，再分离感染细胞，测定病毒的感染性，观看血清对细胞的庇护作用。
假如细胞不浮现病变，则证实血清中有病毒特异抗体存在。
效价凹凸是以能庇护半数细胞不产生CPE的血清最高稀释倍数来表示。
用此实验可检测患者血清中抗体的消长状况，常用于病毒感染的流行病学调查；也可用来鉴定未知病毒或讨论病毒的抗原结构。
下面以单纯疱疹病毒（herpes simplex virus, HSV）为例，介绍细胞培养法中和实验来测定抗中和抗体，包括蚀斑削减法和细胞病变法。
一、蚀斑削减法测定中和抗体【材料】 1．待测血清无菌采集受检者末梢血5m1置离心管中，凝固后2000r/min离心5分钟，吸血清，经56℃灭活30分钟后冰箱冻存。
2. HSV-1型病毒（预测定PFU)。
3. Vero单层细胞培养皿（60mm）或培养瓶14支。
4. PBS、培养基A液、B液和C液等，配制办法同空斑定量法。
5．无菌试管、各种吸管（2ml,lml,5ml)、无菌注射器及离心管（10ml)。
【办法】 1．待测血清稀释取7支小试管，按表8-5倍比稀释血清。
2．病毒稀释将HSV-1型病毒稀释，使其浓度为1000PFU/ml, 3．取各稀释度血清0.5 ml加入试管中，各管中分离再加入0.5 ml病毒液（1000PFU/ml)，混匀后37℃作用1小时。
4．取各管血清与病毒混合物0.2m1，分离加入单层培养Vero细胞培养皿（瓶）中，每稀释度接种2支平皿（瓶），加预温A,B混合培养液4m1，凝固后反转培养3～4天后，再加C液(1％中性红琼脂培养基）2m1，凝固后培养数小时或过夜，测定各平皿（瓶）的空斑数。
病毒的血凝实验报告
病毒的血凝实验报告病毒的血凝实验报告在医学领域中，血液检测是一项非常重要的诊断手段。
而其中的血凝实验更是在病毒感染的检测中扮演着至关重要的角色。
血凝实验通过观察血液在凝集过程中的变化，可以帮助医生判断患者体内是否存在病毒感染的风险。
血凝实验是一种基于血液凝集反应原理的检测方法。
当机体受到病毒感染时，免疫系统会释放一种叫做凝血酶的物质，以抵御病毒的侵袭。
在血凝实验中，我们可以通过观察血液在凝集过程中形成的凝块来判断患者体内是否存在病毒感染。
在进行血凝实验之前，医生通常会先收集患者的血液样本。
血液样本可以通过静脉采集或者指尖采血的方式获得。
获得血液样本后，医生会将其注入到一种特殊的试管中，然后加入一种叫做凝血酶的试剂。
接着，医生会观察血液在试管中的变化。
正常情况下，血液在凝集过程中会形成一个坚实的凝块。
然而，当体内存在病毒感染时，凝血酶的释放会受到抑制，导致血液凝集的过程变得缓慢或者无法形成凝块。
这种现象在血凝实验中通常被称为凝血时间延长。
凝血时间延长可以提示患者体内可能存在病毒感染的风险。
除了凝血时间延长之外，血凝实验还可以通过观察凝块的形状和质地来判断病毒感染的程度。
一般来说，病毒感染越严重，凝块就越小且质地较松散。
这是因为病毒感染会导致机体免疫系统的异常反应，从而影响血液凝集的过程。
然而，需要注意的是，血凝实验并不能确定具体的病毒类型。
它只能提示患者体内可能存在病毒感染的风险，而具体的病毒类型需要通过其他检测手段来确定。
因此，在进行血凝实验时，医生通常会结合患者的病史、临床表现以及其他检测结果来进行综合判断。
此外，血凝实验还可以用于监测病毒感染的治疗效果。
在治疗过程中，医生可以通过连续进行血凝实验来观察凝血时间是否逐渐恢复正常。
如果凝血时间逐渐缩短，说明治疗有效；反之，如果凝血时间没有明显改善，可能需要调整治疗方案。
总之，血凝实验是一种重要的病毒感染检测手段。
通过观察血液在凝集过程中的变化，可以帮助医生判断患者体内是否存在病毒感染的风险，并监测治疗效果。
如何检验判断是细菌感染还是病毒感染的
如何检验判断是细菌感染还是病毒感染的与感染鉴别诊断有关的问题在临床上是一个值得关注的问题。
因此，本文通过分析如何检验判断是细菌感染还是病毒感染的，希望对相关朋友有所帮助。
一、经典的鉴别方法—血常规到医院就诊时，一般的验血项目是有道理的，感染类型鉴别主要有白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞三种。
常认为“中性粒细胞百分比升高为急性感染，尤其是革兰阳性球菌感染”、“白细胞总数升高或中性粒细胞比例增加提示细菌感染”以及“白细胞总数减少或淋巴细胞提升提示病毒感染”、“淋巴细胞比例增加提示病毒感染”等，具体如下：1.白细胞提升合并中性粒细胞比例提升（1）感染因素：①中性粒细胞提升和白细胞总数提升可引起如金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌等急性细菌性感染；②白细胞减少，可能提示存在沙门菌感染、结核和布鲁菌病；③白细胞总数如果大幅度下降，提示可能存在如脓毒症某些细菌引起的严重感染；④另外，也可提示患者存在流行性出血热、流行性乙型脑炎等病毒感染情况，但较少发生。
（2）非感染因素（白细胞升高合并中性粒细胞比例升高，也提示患者存在病理和生理方面的因素）：①生理：月经期、妊娠、新生儿、分娩及心理影响等。
②病理：血管炎及肾上腺皮质激素等。
2.白细胞下降白细胞可因病毒、非典型病原体和一些如疟原虫等原虫感染而下降。
3.白细胞正常或下降同时合并嗜酸粒细胞减少一般表示存在沙门菌感染。
4.白细胞提升合并淋巴细胞比例提升一般提示患者存在传染性单核细胞增多症等急性病毒感染，如果白细胞提升合并淋巴细胞比例提升长期持续增加，一般提示应与白血病等血液系疾病相鉴别。
6.白细胞提升合并嗜酸粒细胞比例提升一般表示可能存在结核、寄生虫、药物等因素。
7.淋巴细胞提升（1）感染性因素：主要包括如水痘、百日咳杆菌、结核分枝杆菌、流行性腮腺炎等病毒感染。
（2）非感染因素：移植排斥反应等。
另外，使用这些指标来判断感染型并不是特异的。
但由于血常规由来已久，初筛也有其意义，我们发现因为血常规检查是最简便的，血常规检测已经成为临床判断感染类型的第一步。
病毒感染的实验室诊断
病毒感染的实验室诊断病毒感染的试验室检查包括病毒分别与鉴定、病毒核酸与抗原的直接检出以及特异性抗体的检测。
临床医师依据流行病学资料，疾病的症状与体征综合推断可能为何种病毒感染，留取相宜的标本送检。
一、检材的采集与送检病毒性疾病通常采集血液、鼻咽分泌液、咯痰、粪便、脑脊液、疱疹内容物、活检组织或尸检组织等。
供分别病毒、检出核酸及抗原的标本的，要求：(一)尽早实行在发病初期(急性期)实行，较易检出病毒，越迟阳性率越低。
(二)部位相宜由感染部位实行，如呼吸道感染实行鼻咽洗漱液或咯痰；肠道感染实行粪便；脑内感染实行脑脊液；皮肤感染实行病灶组织；有病毒血症时实行血液。
(三)冷藏速送病毒离活体后在室温下很易死亡，故采得检材应尽快送检。
若距离试验室较远，应将检材放入装有冰块或干冰的空器内送检。
病变组织则应保存于50%的甘油缓冲盐水中。
污染检材，如鼻咽分泌液、粪便等应加入青霉素、链霉素或庆大毒素等，以免杂菌污染细胞或鸡胚，而影响病毒分别。
检测特异性抗体需要实行急性期与恢复期双份血清，第一份尽可能在发病后马上实行，其次份在发病后2～3周实行。
血清标本放4℃-20℃保存，试验前血清标本以56℃30分钟处理去除非特异性物质及补体。
无菌性脑炎患者也可取脑脊液检测特异性lgM。
表80-1 病毒检材采集与检验结果的关系实行标本的时期检查病毒及其成分测定抗体埋伏期及前驱期刚发病或急性期恢复期及康复期较难查见最多查见很难查见未增多未增多或增多不明显明显增多(常超过4倍)表80-2 供病毒分别的检材临床表现常见病毒关心诊断有用的检材呼吸道感染腺病毒巨细胞病毒流感病毒副流感病毒呼肠孤病毒合胞病毒咽试、肛拭咽试或含漱液、尿液咽拭或含漱液咽拭含漱液咽拭、粪便或肛拭咽拭或含漱液、鼻咽洗液出疹疾病柯萨奇病毒巨细胞病毒埃可病毒EB病毒单纯疱疹病毒麻疹病毒风疹病毒水痘带状疱疹病毒粪便或肛拭、咽拭咽拭或含漱液、尿液粪便或肛拭、咽拭咽拭或含漱液病灶棉拭或吸取液、咽拭咽拭或含漱液、尿液咽洗液、鼻咽拭病灶棉拭或吸取液、咽拭脑炎虫媒病毒单纯疱疹病毒麻疹病毒血液、脑脊液脑活检、脑脊液、疱疹棉拭或吸取液脑脊液、咽拭或含漱液、尿液粪便或肛拭、咽拭、脑脊液无菌性脑膜炎柯萨奇病毒埃可病毒腮腺炎病毒脑脊髓液、粪便或肛拭、咽拭脑脊液、粪便或肛拭、咽拭脑脊髓液、口颊粘膜棉拭失天或新生儿感染巨细胞病毒风疹病毒单纯疱疹病毒尿液、咽拭或含漱液咽拭或含漱液、尿液病灶棉拭或吸取液、回拭眼部感染腺病毒结膜棉拭、咽拭、肛拭结膜棉拭、病灶棉拭或吸取液、咽拭其它感染巨细胞包涵体疾病单核细胞增多综合征心包炎、心肌炎巨细胞病毒巨细胞病毒EB病毒柯萨奇B病毒埃可病毒尿液、咽拭尿液、咽拭咽拭或洗液心包液、粪便、咽拭心包液、粪便、咽拭二、病毒的分别与鉴定(一)病毒的分别病毒分别的一般程序见表80-3。
病毒的基本形态和分类病毒的感染与免疫病毒感染的实验室诊断全
病毒的感染与免疫
病毒的感染方式
水平传播： 通过黏膜表面：呼吸道、消化道、泌尿生殖 道 通过皮肤传播：媒介昆虫叮咬皮肤 医源性传播：经输血、注射、拔牙、手术等
垂直传播： 经胎盘传播 经产道传播
病毒感染的类型
病毒的鉴定－－最后鉴定
中和试验
已知抗体＋待检病毒－→细胞培养－→观察有无细胞病变
交叉保护试验
病毒免疫动物－→2周后，用标准动物作攻击试验 不接种病毒的动物－→2周后，用标准动物作攻击试验
病毒的血清学诊断
标本采集：早期和恢 复期双份血清
急性期单份血清IgM 的测定
双份血清的IgG 的测 定
常用方法 中和试验 补体结合试验 血凝抑制试验 免疫荧光试验 酶免试验 胶乳凝集试验 间接血凝试验
隐性感染：成为病毒携带者；获得免疫 显性感染： 急性感染 持续性感染 慢性感染 潜伏感染： 慢发感染
病毒的致病机制
一、病毒对宿主细胞的直接作用 影响细胞的生命力 杀细胞感染 非杀细胞感染 细胞融合 形成包涵体：有些病毒感染的细胞在普通光学显 微镜下可观察到胞浆或胞核内出现圆形或卵圆形 的斑块状结构 细胞转化 细胞凋亡
互补DNA
RNA:DNA
双股DNA
整合宿主细胞DNA
RNA 逆转录病毒的合成
呼吸道病毒
种类 正粘病毒：
流感病毒 副粘病毒：
麻疹病毒 腮腺炎病毒 风疹病毒 呼吸道合胞病毒
流行性感冒病毒
属正粘病毒科 是引起流行性感冒的病原体 分甲、乙、丙三型 甲型流感病毒常引起流感的大流行
生物学特性
形态结构：球形；属RNA病毒；有包膜
病毒感染的基因检测及诊断
病毒感染的基因检测及诊断随着现代医学技术的不断发展，基因检测已经成为诊断疾病、预防疾病和制定个性化治疗方案的重要手段之一。
特别是在病毒感染方面，基因检测技术为医学专家提供了更准确、更快速和更便捷的诊断方法。
本文将从基因检测技术的原理、病毒感染的临床表现和诊断方法这三个方面来探讨病毒感染的基因检测及诊断。
一、基因检测技术的原理基因检测是指对DNA或RNA进行检测，旨在发现与疾病相关的基因突变或多态性。
基因检测可以通过一系列的实验室测试来确定人类遗传物质的变化。
基因检测可以分为两种类型：一种是直接检测某一具体基因是否有突变；另一种是采用全基因组扫描技术，检测所有基因中的突变。
基因检测技术的主要原理是PCR，即聚合酶链式反应。
PCR可以通过复制DNA使其放大，从而从微量样品中检测目标基因的存在。
PCR技术优点是快速、可靠和灵敏。
此外，新一代测序技术的引入，如灵敏性更高的NGS（下一代测序），使得基因检测更加灵活和高效。
二、病毒感染的临床表现病毒感染是由病毒通过进入宿主细胞体内对宿主细胞的生长影响而引起的。
病毒感染的临床表现多种多样，不同病毒感染对于患者的危害程度也不同。
病毒感染可以引起一系列的症状，包括发热、咳嗽、流鼻涕、疼痛等。
此外，病毒感染也可能导致严重疾病，如艾滋病、克隆氏病毒病（EBV）和乙肝等，这些疾病甚至可能危及患者的生命。
三、病毒感染的诊断方法传统的病毒感染诊断方法主要依靠病毒培养、病毒抗体检测和核酸检测等。
尽管这些诊断方法在某些病毒感染的早期诊断中有一定的优势，但是它们也存在一些缺点，如低敏感度和低特异性等。
而基因检测可以通过检测病毒基因的存在和表达，快速、准确地诊断病毒感染。
目前，基因检测在病毒感染的准确诊断和治疗中发挥了重要作用。
例如，PCR技术已经成功应用于流感、人乳头瘤病毒、乙型肝炎等几乎所有常见病毒的检测。
同时，基因检测还是制定针对个体患者的治疗方案的必备手段之一。
例如，在艾滋病治疗中，通过检测HIV病毒中的基因突变，医生可以制定个性化治疗方案，将治疗效果最大化。
麻疹实验室诊断标准
麻疹实验室诊断标准
麻疹是由麻疹病毒引起的病毒感染性传染病，实验室检查包括血常规、血清学检查和病原学检查。
一、血常规：
白细胞总数减少，淋巴细胞比例相对增多。
如果白细胞数增加，尤其是中性粒细胞增加，提示继发细菌感染；若淋巴细胞严重减少，常提示预后不好。
二、血清学检查：
酶联免疫吸附试验测定血清特异性IgM和IgG抗体敏感性和特异性好。
抗体包括血凝抑制抗体、中和抗体或补体结合抗体。
三、病原学检查：
1、病毒分离：取早期患者眼、鼻、咽分泌物或血、标本接种于原代人胚肾细胞，分离麻疹病毒，但不作为常规检查；
2、病毒抗原检测：取早期患者鼻咽分泌物、血细胞及尿沉渣细胞，用免疫荧光或免疫酶法查麻疹病毒抗原，如阳性，可早期诊断；
3、核酸检测：采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)从临床标本中扩增麻疹病毒RNA，是一种非常敏感和特异的诊断方法，对免疫力低下而不能产生特异抗体的麻疹患者，尤为有价值。
动物微生物3.4 病毒感染的实验室诊断
项目三病毒任务五病毒感染的实验室诊断一、病毒的一般诊断程序（一）标本的采集和处理用于分离病毒的标本应含有足够量的活病毒，因此必须根据病毒的生物学特性、病毒感染的特征、流行病学规律以及机体的免疫保护机制，来选择所需要采集标本的种类、确定最适采集时间和标本处理的方法。
标本采集必须无菌操作，如有细菌污染，可通过加抗菌素、过滤和离心等方法处理。
由于大多数病毒对热不稳定，所以标本经处理后一般应立即接种。
若需要运送或保存，数小时内可置于50％中性甘油内4℃保存，对需较长时间冻存的标本最好置于-20℃以下或干冰保存。
以感染病毒的动物病料采集为例，一般说来，应从病畜体内存在病毒最多的器官或组织采取病料。
例如上呼吸道疾病取鼻分泌物，脑炎取脑组织，痘症取患部皮肤。
采集病料的时间，以症状刚出现时为佳。
检查抗体时，则采取一个病畜的初期和恢复期的血清，以了解抗体滴度的变化。
（二）病毒的分离培养病毒与细菌不同，病毒是严格的活细胞内寄生的，因此分离培养病毒应采用寄主接种法、鸡胚培养法或细胞培养法，而且还必须根据不同病毒的要求进行选择，才能得到满意的结果。
1、寄主接种法分离的标本接种于实验寄主的种类和接种途径主要取决于病毒寄主范围和组织嗜性，同时还应考虑操作、培养及结果判定的简便。
噬菌体标本可接种于生长在培养液或培养基平板中的细菌培养物。
植物病毒标本可接种于敏感植物叶片，产生坏死斑或枯斑。
动物病毒标本可接种于敏感动物的特定部位，嗜神经病毒接种于动物脑内，嗜呼吸道病毒接种于动物鼻腔。
常用动物有小白鼠、大白鼠、地鼠、家兔和猴子等。
在兽医病毒学实践中，还常用本动物进行实验感染试验。
例如，应用健康马驹作马传染性贫血病毒接种试验；应用健康猪、鸡分别作猪瘟病毒、鸡新城疫病毒接种试验等等。
接种病毒后，隔离饲养，每日观察动物发病情况，根据动物出现的症状，初步确定是否有病毒增殖。
2、鸡胚培养法不同的病毒可选择不同日龄的鸡胚和不同的接种途径，如痘病毒接种于10～12d的鸡胚绒毛尿囊膜上，鸡新城疫病毒宜接种在10d尿囊腔和羊膜腔内，虫媒病毒宜接种于5d卵黄囊，继续培养观察。
病毒感染性疾病的检验诊断及方法
病毒感染性疾病的检验诊断及方法病毒性疾病检验诊断应首先根据临床特征和流行病学资料，初步判断可能感染的病毒。
然后根据可疑病毒的生物学特点、机体免疫应答和临床过程，结合患者当前所处的时机，确定检验诊断的方法。
有些病毒感染潜伏期较短，发病时机体免疫系统尚未完全应答，没有抗体产生，因此可选择测定病毒颗粒、病毒抗原或病毒核酸。
对于潜伏期超过10天的病毒感染，可检测特异性的IgM抗体来进行早期快速诊断、区别初次和再次感染。
对可在机体内形成持续感染或潜伏感染的病毒，可检测急性期和恢复期双份血清的IgG抗体滴度有无4倍以上升高，或直接检测病毒核酸。
对原因不明，可能有新病毒感染时，应采集相应部位的标本进行病毒分离，同时应采取双份血清以确认分离的病毒为病原病毒。
对同一症状可由多种病毒引起的情况，应同时检测几种相关病毒的病毒颗粒、抗原或抗体，对由多个型别组成的病毒可测定它们的共同抗原。
病毒感染的实验室检查包括病毒分离与鉴定、病毒核酸与抗原的直接检出以及特异性抗体的检测。
1 标本的采集与送检临床医师根据流行病学资料，疾病的症状与体征综合判断可能为何种病毒感染，留取适宜的标本送检。
实验结果对诊断病毒感染的价值，很大程度上取决于标本的采集和处理的方式是否恰当。
正确采集标本，及时运送和处理，是极为重要的。
1.1 采集标本的时间尽可能在发病的初期，急性期或患者入院的当天进行。
疾病后期由于机体产生免疫力，开始清除病毒，使病毒数量减少或消失，不易检出。
1.2 标本种类的选择根据临床感染的症状及流行病学资料，判断可能感染病毒种类，选择相应部位采取标本。
处理标本时要考虑病毒的生物学特性，如有包膜病毒冻融易被灭活。
某些病毒如麻疹病毒吸附茬白细胞上，为了有效分离病毒，血液标本应加抗凝剂。
1.2.1 心脏疾病可采取咽拭子、粪便、心脏组织或心包液标本。
分离相关的肠道病毒，包括埃可病毒、柯萨奇A组和B组病毒，也可采取血液标本进行血清学诊断。
1.2.2 中枢神经系统感染可采取咽拭子、粪便标本、脑脊液标本进行肠道病毒的分离；采取咽拭子、脑膜组织分离单纯疱疹病毒，亦可采取脑脊液进行PCR检查；采取咽拭子，尿液、脑脊液或唾液标本用于分离腮腺炎病毒。
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病毒感染的实验诊断病毒感染的实验诊断（一）●考点病毒的生物学性状病毒的实验室检查方法常见病毒的感染[讲义编号NODE70103300270100000101：针对本讲义提问]【内容讲解】第一节概述一类非细胞型微生物，个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察。
仅含一种核酸作为遗传物质，外被蛋白质衣壳或还有包膜。
病毒只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。
在临床微生物感染中，近75%的传染病是由病毒引起的。
[讲义编号NODE70103300270100000102：针对本讲义提问]一、病毒的基本性状（一）形态结构1.大小和形状：大小：测量单位用纳米表示，一般在20-300nm之间。
形态大致可分为：球形或近似球形、杆状、弹形、砖形、蝌蚪形等。
[讲义编号NODE70103300270100000103：针对本讲义提问]2.结构[讲义编号NODE70103300270100000104：针对本讲义提问]（二）病毒的增殖病毒必须依赖宿主细胞，以特殊的自我复制方式进行增殖。
病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装与成熟、释放6个阶段。
[讲义编号NODE70103300270100000105：针对本讲义提问]异常增殖：顿挫感染：病毒进入细胞后的环境不利于它的复制，不能合成本身的成分或不能组装和释放有感染性的病毒颗粒。
缺陷病毒：由于病毒基因组不完整或基因位点改变而不能进行正常增殖的病毒。
干扰现象：当两种不同的病毒或两株性质不同的同种病毒，同时或先后感染同一细胞或机体时，可发生一种病毒抑制另一种[讲义编号NODE70103300270100000106：针对本讲义提问]（三）噬菌体以细菌、真菌等为宿主，能引起细菌等裂解的病毒。
噬菌体特异性识别细菌表面受体，可用于进行细菌的鉴定与分型。
噬菌体感染细菌后产生两种后果：溶菌周期和溶源性周期。
[讲义编号NODE70103300270100000107：针对本讲义提问]（四）非寻常病毒比病毒更小更简单的致病因子，又称为亚病毒因子，包括类病毒、卫星病毒和朊粒等。
朊粒个体微小，不含核酸，其主要成分是一种蛋白酶抗性蛋白，对各种理化作用的抵抗力强，具有传染性，是引起传染性海朊粒致中枢神经系统退化性病变，引起牛海绵状脑病（疯牛病）。
克雅病（CJD）和Kuru病被认为与朊粒感染有关。
[讲义编号NODE70103300270100000108：针对本讲义提问]二、病毒的分类与命名科、属、种3级或科、亚科、属、种4级。
DNA病毒、RNA病毒、DNA和RNA逆转录病毒三大类。
按传播途径可分为呼吸道病毒、胃肠炎病毒、经性传播感染的病毒等。
按感染部位与症状特征可分为肝炎病毒、出血性热病毒、疱疹病毒等。
[讲义编号NODE70103300270100000109：针对本讲义提问]第二节病毒感染的实验诊断病毒学实验室诊断有三个方面：①直接检测和分离鉴定；②检测病毒蛋白抗原成分和核酸；③检测抗体。
[讲义编号NODE70103300270100000110：针对本讲义提问]一、标本采集、运送及处理（一）标本采集1.采样时机：应在病人急性期或发病初期采集标本。
2.标本种类：根据不同病毒感染采集不同标本，如鼻咽分泌物、脑脊液、血液、粪便等。
（二）标本的运送及保存快速传递，立即处理和接种。
采集和运送过程注意冷藏。
如不能立即处理和接种，可在4℃保存数小时，长时间保存需置-70℃。
[讲义编号NODE70103300270100000111：针对本讲义提问]（三）标本处理凝固的血液需先离心，得到的血清可以用于病毒分离。
肝素抗凝全血、脑脊液、胸腔液、水痘液以及尿液均可直接用于病毒分离培养。
有些标本如粪便等,常需粗提、提纯和浓缩等复杂处理过程。
[讲义编号NODE70103300270100000112：针对本讲义提问]二、分离培养与鉴定（一）分离培养1.组织培养包括器官培养、组织块培养和细胞培养。
目前常用的方法是细胞培养；常用细胞：①原代和次代细胞培养；②二倍体细胞株；③传代细胞系。
[讲义编号NODE70103300270100000113：针对本讲义提问]2.鸡胚接种一般选用9-12日龄鸡胚。
鸡胚中的部位适宜病毒卵黄囊嗜神经病毒，如乙型脑炎病毒羊膜腔流感病毒尿囊腔流感病毒、腮腺炎病毒，还可制备疫苗和大量病毒抗原绒毛尿囊膜天花病毒、单纯疱疹病毒脑内狂犬病病毒3.动物接种实验室常用新生小鼠或乳鼠进行病毒分离。
[讲义编号NODE70103300270100000114：针对本讲义提问]（二）病毒鉴定1.初步鉴定根据临床症状、流行病学特点、标本来源、易感动物范围、细胞病变特征及生物学特征、理化性质可初步判断2.最终鉴定在初步鉴定的基础上，选择适当的血清学方法对病毒分离株进行最后鉴定，常用中和试验、补体结合试验、血分子生物学方法也在病毒鉴定方面得到应用。
[讲义编号NODE70103300270100000115：针对本讲义提问]细胞病变效应（CPE）：细胞形态变化病毒细胞圆缩，分散，不聚集，全部细胞被破坏肠道病毒细胞肿大，颗粒增多，病变细胞聚集呈葡萄状腺病毒细胞融合成多核细胞副粘病毒，空泡状，多核巨细胞麻疹病毒脂溶剂敏感实验：有包膜（+），无包膜（-）；耐酸实验：肠道病毒（R），鼻病毒（S）。
[讲义编号NODE70103300270100000116：针对本讲义提问]三、病毒感染的诊断（一）显微镜检查1.用光学显微镜直接检查病毒包涵体。
可作为病毒感染的辅助诊断，不是特异性试验。
核内包涵体：常见DNA病毒。
如巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘-带状疱疹病毒和腺病毒等。
胞浆内包涵体：常见RNA病毒。
如呼吸道合胞病毒、狂犬病病毒和痘类病毒等。
胞质内和胞核内包涵体：麻疹病毒等。
2.用电子显微镜直接检查病毒颗粒。
数小时即可从病毒形态上作出明确的鉴别诊断。
应用免疫电镜灵敏度更高。
[讲义编号NODE70103300270100000117：针对本讲义提问]（二）病毒抗原检查利用特异性免疫血清检测标本中的病毒抗原。
常用方法有：免疫荧光技术、酶免疫技术、放射免疫法、反相间接血凝和对流免疫电泳等方法。
对于一些血清型别不多或在一般细胞培养系统中尚不能成功增殖的病毒，直接检测病毒抗原是快速而实用的方法。
[讲义编号NODE70103300270100000118：针对本讲义提问]（三）病毒抗体检查利用特异性抗原检测病毒感染者血清中的IgM和IgG抗体。
常用的方法有中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验及免疫扩散等，还可以利用放射免疫法及酶联免疫吸附法。
IgM抗体出现在病毒感染的早期，所以标本采集时间对检测结果的影响很大。
IgG抗体检测需采集感染急性期与恢复期双份血清，恢复期IgG效价必须比急性期增高4倍或4倍以上时，才有诊断意义。
（四）病毒核酸检测利用核酸杂交和PCR技术检测病毒特异基因片段。
检出病毒核酸并不等于检出具有传染性的病毒颗粒。
[讲义编号NODE70103300270100000119：针对本讲义提问]第三节各类病毒感染的简介一、呼吸道病毒六、疱疹病毒二、肠道病毒七、肝炎病毒三、急性胃肠炎病毒八、反转录病毒四、黄病毒九、狂犬病病毒五、出血热病毒十、人乳头瘤病毒[讲义编号NODE70103300270200000101：针对本讲义提问]一、呼吸道病毒（一）流行性感冒病毒（二）呼吸道合胞病毒（三）麻疹病毒（四）风疹病毒[讲义编号NODE70103300270200000102：针对本讲义提问]（一）流行性感冒病毒1.生物学性状（1）形态：具有多形性，一般为球形或丝状，丝状多见于新分离株，感染性较强。
（2）结构：[讲义编号NODE70103300270200000103：针对本讲义提问]（2）分型与变异1）分型：根据核蛋白抗原和M蛋白的不同，将流感病毒分为甲（A）、乙（B）、丙（C）型；甲型流感病毒根据NA和HA的抗原性不同又分为若干亚型。
2）变异：变异的物质基础是HA和NA。
抗原变异幅度小时称为抗原漂移；变异幅度大形成新的亚型，引起大规模流行，为抗原转变。
（3）培养特性：常用鸡胚接种培养，初次分离接种羊膜腔为最佳，传代适应后可移种尿囊腔。
细胞培养一般用原代猴肾细胞（PMK）或犬肾传代细胞（MDCK）。
利用红细胞凝集试验确定病毒的存在。
（4）抵抗力：不耐热，对干燥、日光、紫外线以及甲醛、乙醇等均敏感。
[讲义编号NODE70103300270200000104：针对本讲义提问]2.微生物检验（1）标本采集和处理：在发病急性期，以前3天为最好。
采集鼻腔洗液、咽拭子、鼻拭子等，置于Hanks液中。
放入冰壶中，速送实验室。
若48小时内未能进行接种，标本应放于低温中保存。
（2）分离培养与鉴定：标本接种于鸡胚羊膜腔，35℃3天后，收集羊水和尿囊液进行血凝试验并测定滴度。
血凝阳性者，用已知抗体作血凝抑制试验进行鉴定。
若血凝阴性时，需用鸡胚盲传1～2次，仍不出现血凝阳性者，方可判断病毒分离阴性。
也可接种原代猴肾细胞（PMK）或犬肾传代细胞（MDCK）。
[讲义编号NODE70103300270200000105：针对本讲义提问]（3）快速诊断1）免疫荧光技术和酶免疫技术。
2）分子杂交技术。
3）PCR技术。
4）免疫电镜技术。
（4）血清学诊断：需同时检测急性期（5天以内）和恢复期（2～4周）血清，在相同条件下进行血凝抑制试验，如恢复期抗体效价比急性期高[讲义编号NODE70103300270200000106：针对本讲义提问]3.临床意义病毒随飞沫传播进入易感者呼吸道，依靠血凝素与黏膜柱状上皮细胞相应受体结合，感染细胞。
主要在呼吸道柱状上皮细胞内复制增殖，很少入血，但代谢毒素样物质可进入血流引起发热、头痛和全身酸痛。
甲型流感可以是散发，也可以是全球性大流行。
乙型流感的播散速度及范围不如甲型。
[讲义编号NODE70103300270200000107：针对本讲义提问]（二）呼吸道合胞病毒1.生物学性状：属副粘病毒科、肺病毒亚科、肺病毒属。
球形，具有多形性。
核酸为单负股RNA，不分节段。
包膜上有两种刺突：G蛋白作用于类似于流感病毒的血凝素蛋白HA；F蛋白是融合蛋白，介导病毒穿入和细胞融合。
[讲义编号NODE70103300270200000108：针对本讲义提问]2.微生物学检查（1）标本采集和处理：可采用鼻腔洗液或鼻咽拭子，置转运培养基中冷藏（4℃）运送至实验室，尽可能立即接种。
（2）分离培养与鉴定：不能在鸡胚中增殖，可在人类上皮细胞传代细胞系内增殖。
培养后3～7天，细胞病变为合胞体形成即细胞融合成多核巨细胞，胞质内形成嗜酸性包涵体。
（3）直接检测病毒抗原：可利用免疫荧光技术和酶免疫技术。
（4）血清学诊断：常用中和试验、免疫荧光试验和酶免疫试验检查血清中IgG、IgM及IgA。