薄层色谱扫描仪测枸杞子中甜菜碱

KH-2100型薄层色谱扫描仪

操作步骤

（1）按照药典要求制作薄层板。一般样品制作两个，做平行样。

甜菜碱取本品剪碎，取约2g，精密称定，加80%甲醇50ml（0.5h），加热回流1小时，放冷，滤过，用80%甲醇30ml分次洗涤残渣和滤器，合并洗液与滤液，浓缩至10ml，用盐酸调节pH值至1，加入活性炭1g，加热煮沸（水提前烧），放冷，滤过，用水15ml 分次洗涤，合并洗液与滤液，加入新配制的2.5%硫氰酸铬铵溶液20ml，搅匀（1.5h），10℃以下放置3小时（之后可制对照品溶液）。用G4垂熔漏斗滤过，沉淀用少量冰水洗涤，抽干，残渣加丙酮溶解，转移至5ml量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，作为供试品溶液（1.5h）（过程可伴随硅胶板干燥、展开剂配置）。

另取甜菜碱对照品适量，精密称定，加盐酸甲醇溶液（0.5→100）制成每1ml含4mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，精密吸取供试品溶液5μl、对照品溶液3μl与6μl，分別交叉点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮-无水乙醇-盐酸（10:6:1）为展开剂，预饱和30分钟（0.5h）（过程可配置改良碘化铋钾），展开，取出，挥干溶剂，立即喷以新配制的改良碘化铋钾试液，放置1～3小时至斑点清晰（1.5h），照薄层色谱法（通则0502）进行扫描，波长：λS=515nm，λR=590nm，测量供试品吸光度积分值与对照品吸光度积分值，计算，即得（0.5h）。整个过程保守10h左右。

本品按干燥品计算，含甜菜碱C5H11NO2）不得少于0.30%。

注：①制作薄层板过程中喷显色剂后，无论放置1-3h，还是加热显色都不是很清晰，据文献报道可换展开剂（丙酮:无水乙醇:甲酸=10:6:3），喷显色剂后无需放置1-3h，可于105℃加热5min左右即可。

②前期加热回流滤过，杂质多，速度慢，可抽滤。

（2）打开计算机电源，双击桌面KH-2100波层色谱扫描系统，密码admin—进入工作站—主页面（数据管理系统缩小化）—参数设置

（3）参数设置：测试类型、样品设定、峰设置等（一般设置前面俩）

测试类型—样品选择，选择所需样品，自动添加波长。

样品设定，包括样品组数、等/不等间距（根据个人点样板设定，间距相等，选择等间距，不等手动设置间距），起始点位置（垂直扫描），垂直扫描范围（所有组的斑点包括在内）

其他：一般不动，默认。

（4）用户信息报告

用户信息报告按照要求填写完整，点击确认，进入样品扫描页面。

（5）放样

样品头朝外放入，箱内左上角，卡片卡住，关上门（样品扫描过程中，门勿打开）。（6）扫描

扫描结束，自动停止，点击样品切换，可查看每个样品图谱。点击打印，会出来测试报告（用户参数、扫描参数与单个样品图谱即数据信息）。

（7）含量计算

点击含量计算，点击上方工具栏“刷新”，图谱即显示出。点击图谱中代表样品/标准品的谱峰，会有阴影显示，输入标准品浓度，样品数量，针对选中的谱峰（标准品/样品）输入点样量，点击样品/标准品，自动出现数据信息，其他样品同上操作，结束后，点击计算含量按钮，会显示数据结果，点击保存即可。点击打印即可将结果（浓度）打印出来。其中：（6）中测试报告与（7）中浓度测试结果便是总测试报告。

根据测出浓度，计算样品中甜菜碱含量。

样品中甜菜碱含量（%）：（样品浓度*5*10-3）*100/样品重量

其中：5为样品提取后最终转移至5ml容量瓶中，作为供试品。

（8）关机

取出薄层板——关仪器——电脑

注：

1、实验完毕后做仪器使用登记记录

2、实验所用甲醇、盐酸、活性炭、硫氰酸铬铵、丙酮、无水乙醇、碘化铋钾，实验之前检查是否有库存。