RNA的提取及其组分的鉴定
实验4 酵母RNA的分离及组分鉴定
实验4 酵母RNA的分离及组分鉴定酵母RNA是由酵母细胞合成的核糖核酸，包含了酵母细胞的遗传信息，并参与了细胞的生理代谢过程。
本实验旨在通过离心分离和酸性酚/氯仿法提取，纯化酵母RNA，并通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳等方法对酵母RNA进行组分鉴定。
一、材料与方法1.材料酵母细胞、DTT、Tris、EDTA、NaCl、硝酸、醋酸等。
2.方法1)制备样品a.在液氮中将酵母细胞粉磨成细粉；b.称取10mg酵母细胞粉末加入1ml去离子水中，振荡混匀，制成1mg/ml的酵母细胞悬液。
2)离心分离a.取1ml稀释后的酵母细胞悬液，离心10000rpm/10min，弃去上清液；b.用10μl无菌去离子水重悬沉淀，制成1mg/ml的RNA悬液。
3)RNA的提取和纯化a.取1ml离心沉淀物加入700μl去离子水，混合均匀，加入100μl10%SDS和100μl 酸性酚(pH4.5)混合，振荡15min；b.加入300μl氯仿，振荡混合，离心12,000g/10min；c.取上层水相(约600μl)，加入等量异丙醇混合，振荡；d.离心12,000g/5min，弃去上清液，将胶状RNA沉淀用70%酒精重悬，制成1mg/ml的RNA溶液。
4)鉴定RNAa.测定RNA含量和纯度b.通过琼脂糖凝胶电泳检测RNA条带。
c.用紫外吸收光谱测定RNA吸收光谱曲线。
5)结果分析a.通过鉴定RNA的吸收峰和电泳图谱来分析RNA组分。
二、实验结果1.酵母RNA提取和纯化效果良好，制得1mg/ml的RNA溶液。
2.根据紫外吸收光谱结果，可以看到RNA在260nm的吸收峰高于280nm，证明纯化后的RNA具有良好的纯度。
3.琼脂糖凝胶电泳显示，RNA溶液中有一个清晰的28S条带和一个模糊的18S条带，证明RNA转录水平较高。
三、讨论和结论通过离心分离和酸性酚/氯仿法提取纯化酵母RNA，可以得到高质量和高纯度的RNA样品。
此外，琼脂糖凝胶电泳和紫外吸收光谱可以对RNA组分和质量进行鉴定，为后续的RNA研究提供了有价值的基础数据。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告一、实验目的本次实验旨在通过实验方法，对酵母细胞中的核糖核酸进行分离和组分鉴定，了解酵母细胞中核糖核酸的基本特性和组成。
二、实验原理1. 酵母细胞中RNA的基本特性RNA是一种由核苷酸构成的生物大分子，它与DNA类似，但其主要功能是参与蛋白质合成。
RNA包括mRNA、tRNA和rRNA三种类型。
其中mRNA是转录过程中产生的信息分子，tRNA则将氨基酸运输到肽链上进行合成，而rRNA则是构成核糖体的重要组成部分。
2. RNA的提取方法常用的RNA提取方法包括：碱裂解法、有机溶剂提取法、硫酸盐沉淀法等。
其中硫酸盐沉淀法在提取纯度高、效率高等方面表现较好。
3. RNA电泳将提取出来的RNA样品经过琼脂糖凝胶电泳后可以得到不同大小的带状图谱，根据不同大小可以初步判断出样品中含有哪些类型的RNA。
三、实验步骤1. 酵母细胞的培养和收获将酵母菌株接种到含有YPDA培养基的锥形瓶中，在室温下静置培养48小时，直至菌落生长到一定程度。
然后将菌液离心收获，去除上清液。
2. RNA的提取和纯化将离心后的酵母细胞加入10ml Tris-EDTA缓冲液中，加入等体积的酚/氯仿混合液混合均匀，离心分离上清液中的DNA和蛋白质。
再用等体积异丙醇沉淀RNA，在70%乙醇中洗涤，最后用DEPC水重悬RNA。
3. RNA电泳将提取出来的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，经过染色后在紫外线下观察不同大小带状图谱。
四、实验结果与分析通过实验方法得到了纯化后的RNA样品，并进行了琼脂糖凝胶电泳。
实验结果显示，在琼脂糖凝胶电泳中可以看到明显的28S、18S两种大小不同的RNA带，表明样品中含有rRNA和mRNA两种类型的RNA。
五、实验结论通过本次实验，成功地提取出了酵母细胞中的RNA，并进行了琼脂糖凝胶电泳分析。
结果表明，酵母细胞中含有rRNA和mRNA两种类型的RNA。
这为我们深入了解酵母细胞内部核糖核酸的组成和特性提供了基础数据。
酵母RNA的提取及组分鉴定
一、目的与要求 了解RNA提取的原理，掌握RNA组分鉴定的方法
二、实验原理 酵母细胞中所含的核酸主要是RNA,DNA含量很少，故本实验采用酵母提取RNA。由于酵母细胞中所含的核蛋白不溶于水和稀酸，但能溶于稀碱，所以先用稀碱加热煮沸处理，使RNA成为可溶性的钠盐而与酵母中其它的成分分离。然后加乙醇沉淀溶液中的RNA，最后加酸将其完全水解，并用下列方法鉴定其中组分： (一) 钼酸铵试剂与无机磷酸结合生成的磷钼酸易被还原生成钼蓝，以鉴定核酸中的磷。 (二) 3,5-二羟基甲苯与核糖在浓酸中共热呈绿色，以鉴定核糖的存在。 (三) 嘌呤碱与硝酸银共热产生褐色的嘌呤银沉淀，以鉴定嘌呤的存在。
(二) RNA的水解 两管沉淀物中各加入1.5mol/L H2SO4 2.5ml后合并，沸水浴10min，使其充分水解。 (三) RNA组分鉴定（取试管3支编号） 1. 磷酸试验：1号管，取钼酸铵试剂10滴，加RNA水解液10滴摇匀，再加4%维生素C 6滴混匀后，置沸水浴中加热5～10min，观察颜色变化。 2. 核糖试验：2号管，取3,5-二羟基甲苯试剂6滴，加RNA水解液10滴摇匀后，置沸水浴中加热5～10min，观察颜色变化。 3. 嘌呤试验：3号管，取5% AgNO3 10滴，加氨水2-3滴（至沉淀消散后），再加RNA水解液10滴摇匀后，置沸水浴中加热约5～10min，观察颜色变化。
四、结果与计算 管水中加热时要时常摇动试管； (三) 硝酸银中加氨水应逐滴加入，白色沉淀消散后再加水解液。
思考题 1．本实验为什么要选用酵母作为提取RNA的实验原料？ 2．实验过程中酵母细胞为什么要充分研磨？
三、操作步骤 (一) 酵母中RNA的制备 1. 取0.5g干酵母置研钵中，加入0.04mol/L NaOH 4ml，磨3～5min，使其成匀浆； 2. 将酵母匀浆倒入1支大试管中，在沸水中加热30min； 3. 把大试管中匀浆分别放入2支小试管中，配平； 4. 2000r/min离心15min，将两上清液分别倒入另两小试管中，弃去沉淀； 5. 各加3mol/L HAc 2滴，立即摇匀酸化，用石蕊试纸检查。 6. 上述溶液猛力摇匀后，徐徐倒入两支各盛有2.5ml酸性乙醇的试管中，即有白色沉淀析出。 7. 2000r/min离心15min，倾去上清液，作下一步实验。
生化实验 酵母RNA的提取及组分鉴定
酶的特异性及影响酶活性的因素
滴瓶、滴管与细口瓶 生 物 化 学 实 验
1、提出滴头，排出空气。 2、伸入液面下，吸取液体。 3、按量排出液体。 4、将剩余液体排出，放松手指，将滴 头自然放入滴瓶内
Exit
生命科学学院
蛋白质的提取、分离纯化及定量
离心机
生 物 化 学 实 验
⑴将字心机置于平坦结实的地面或实验台上。 ⑵检查离心机调速旋钮是否处在0置 ⑶装入待离心液体后，把离心机转头对称位 置上的离心管（包括外套管）放在天平上平 衡，装入液体量以距管口1--2cm为宜
反应，产生显色复合物。
⑶ 嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化合物沉淀。
Exit
生命科学学院
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验步骤
生 物 化 学 实 验
一、RNA的粗提取：
二、水解RNA
三、RNA组分鉴定
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酵母RNA的提取及组分鉴定
实验步骤
生 物 化 学 实 验
一、RNA的提取 1.7g酵母悬浮于0.2％ 氢氧化钠溶液70ml中。
生命科学学院
Exit
酵母RNA的提取及组分鉴定
实验原理
⑵ 核糖：RNA与浓盐酸共热时，发生降解，形成的核
生 物 化 学 实 验
糖继而转变成糠醛，后者与地衣酚反应，在Fe3+或Cu2+催化
下生成鲜绿色复合物。脱氧核糖与二苯胺试剂反应成蓝色
化合物，而核糖无此反应。 地衣酚鉴定戊糖时特异性较差， 凡属戊糖均有此反应。微量DNA无影响，较多DNA存在时有 干扰作用，在试剂中加入适量CuCl2· 2H2O可减少DNA的干扰， 甚至某些戊糖持续加热后生成的羟甲基糠醛也能与地衣酚
实验6酵母RNA的分离及组分鉴定
结果讨论与结论
01
根据分光光度计的读数分析，实验组的RNA浓度较高且纯度良 好，而对照组的RNA浓度较低，可能受到了其他物质的干扰。
02
通过电泳结果观察，实验组的RNA完整性较好，而对照组 的RNA可能受到了降解。
03
综合以上结果，可以得出实验组分离得到的酵母RNA质量较高 ，适合用于后续的分子生物学实验。而对照组的RNA质量较差
条带。
RNA的组分鉴定
01
02
03
将提取的RNA进行反转 录，合成cDNA。
利用PCR仪对cDNA进行 扩增，并进行电泳检测
。
根据电泳结果判断RNA 的完整性，并分析其组
分。
04
结果分析
分光光度计的读数分析
实验组
在260nm和280nm处的吸光度分别 为0.85和0.78，表明RNA浓度较高， 纯度良好。
实验中遇到的问题和解决方案
问题1
解决方案
问题2
酵母细胞破碎不完全， 导致提取的RNA不纯。
采用更剧烈的破碎方法， 如超声破碎，以提高细
胞破碎率。
电泳过程中出现条带模 糊。
解决方案
优化电泳条件，如调整 缓冲液浓度和电泳温度
等。
对实验的改进建议和展望
01
改进建议1
在细胞破碎步骤中，尝试使用不同的破碎方法以提高破碎效率和RNA提
了解RNA的组成成分
了解RNA的基本组成
RNA由核糖核苷酸组成，包括腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和尿 嘧啶四种碱基，以及磷酸和核糖。
学习通过电泳分离RNA组分
通过电泳技术可以将RNA分离成不同大小的组分，如rRNA 、mRNA和tRNA等。
学习并掌握分光光度计的使用方法
RNA的提取和鉴定
利用高效液相色谱仪检测RNA溶液中的杂质含量，从而评估其纯度。
rna的完整性评估
生物信息学分析
利用生物信息学软件对RNA序列进行 分析，可以评估其完整性。完整的 RNA序列在软件中呈现为一条连续的 线，而降解的RNA则呈现为多个片段。
实时荧光定量PCR
通过实时荧光定量PCR技术检测特定基因的 表达水平，可以间接评估RNA的完整性。 完整的RNA能够更好地逆转录成cDNA，进 而进行PCR扩增，而降解的RNA则会影响 逆转录和PCR扩增的效果。
提取的rna降解
总结词
降解的rna可能无法用于某些实验。
详细描述
如果提取的rna发生了降解，可能会影响其后续的应用，如Northern blot、实时定量 PCR等。为了解决这个问题，可以尝试使用更稳定的提取试剂、优化提取步骤、减少操 作时间等方法。同时，也可以通过电泳或分光光度法检测rna的完整性，以确定其是否
04 rna提取的常见问题及解 决方案
提取的rna浓度过低
总结词
浓度过低可能是由于提取过程中丢失或 降解造成的。
VS
详细描述
在rna提取过程中，如果操作不当或使用 的试剂不适当，可能导致rna的丢失或降 解，从而使得提取的rna浓度过低。为了 解决这个问题，可以尝试增加样本量、优 化提取步骤、使用高质量的试剂等方法。
疾病预防和筛查
通过rna提取和分析，可以发现早期 疾病迹象，为疾病预防和筛查提供 有力手段。
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样本保存
在收集样本后应立即进行rna提取，或 将其保存在适当的介质中短期保存。
细胞裂解和分离
细胞裂解
使用适当的裂解液处理样本，使细胞裂解释放出rna。
实验 酵母RNA的分离及组分鉴定
※实验六酵母RNA的分离及组分鉴定【实验目的】了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
【实验原理】酵母核酸种RNA含量较多。
RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀。
由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。
加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
鉴定依据：磷酸与定磷试剂反应产生蓝色物质。
核糖与苔黑酚作用产生绿色物质。
嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤碱银化合物沉淀。
【实验器材】150ml锥形瓶、水浴、量筒、漏斗及抽虑瓶、吸管7、滴管8、试管及试管架9、烧杯、离心机、漏斗【试剂和材料】1、0.04 mol/L氢氧化钠溶液；2、酸性乙醇溶液：将0.3毫升浓盐酸加入30毫升乙醇中；3、95%乙醇；4、乙醚；5、1.5 mol/L硫酸溶液；6、浓氨水；7、0.1 mol/L硝酸银溶液；8、三氯化铁浓盐酸溶液：将2 ml 10%三氯化铁溶液（用FeCl3·6H2O配制）加入到400ml浓盐酸中；9、苔黑酚（地衣酚）乙醇溶液：溶解6 g苔黑酚于100 ml 95%乙醇中（可在冰箱中保存一个月）；10、定磷试剂：（1）17%硫酸溶液：将19ml浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83ml水中（2）2.5%钼酸铵溶液：将2.5 g钼酸铵溶于100 ml水中（3）10%抗坏血酸溶液：10g抗坏血酸溶于100ml水中，贮棕色瓶保存（溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失败，需纯化抗坏血酸）。
临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合。
17%硫酸溶液：2.5%钼酸铵溶液：10%抗坏血酸溶液：水=1：1：1：2 (V/V)；11、酵母粉。
【实验操作】1、溶解RNA将5 g酵母悬浮于90 ml 0.04 mol/L氢氧化钠溶液于150 ml锥形瓶中，在沸水浴中加热30分钟，制成碱提取液，将其冷却。
2、解聚RNA将冷却的碱提取液离心（6000ｒ/min）5分钟，将上清液用乙酸调节pH至酸性（pH5~6））缓缓倾入30 ml乙醇溶液中，注意要一边搅拌一边缓缓倾入。
生化技术实验指导书(20学时)
生化技术实验指导书湖北工业大学生物工程学院二0一0年三月修订实验一酵母RNA的提取及其组分的鉴定一、实验目的1.了解稀碱法提取RNA及提取物组分鉴定的基本原理；2. 掌握稀碱法提取RNA及提取物组分鉴定的具体操作方法。
二、实验原理酵母中RNA的含量比较丰富（2.67%~10%），而DNA的含量相对地较少（据资料报道，酵母DNA的含量低于RNA的20%），因此从酵母中提取RNA比较方便。
RNA溶于碱性溶液，碱性溶液使蛋白质带负电荷，促进RNA(带负电荷)与蛋白质的分离，碱性溶液可使酵母细胞壁变性，同时进行加热，可增加细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
因此，酵母粉用稀碱液加热抽提时，可将其中的RNA抽提出来。
当碱性抽提液中和后，加入2倍体积的95%乙醇时，可以使抽提物沉淀出来。
抽提物的主要成分是RNA的钠盐，并带有少量的蛋白质。
用碱抽提时，RNA会有不同程度的降解。
地衣酚（3，5-二羟基甲苯）是比较灵敏的测定戊糖的试剂，常用于测定RNA。
核糖与地衣酚试剂反应呈现鲜绿色。
地衣酚试剂反应灵敏，也易被其他物质干扰。
DNA中的脱氧核糖也可与地衣酚反应，因此，单靠地衣酚显色实验不能作为RNA 与DNA鉴别依据。
二苯胺试剂是常用于测定DNA中脱氧核糖的试剂，脱氧核糖与二苯胺试剂反应产生蓝色物质，而RNA中的核糖一般不与苯胺起反应。
嘌呤碱可与硝酸银反应生成白色的嘌呤银化合物的沉淀。
双缩脲反应是检验蛋白质常用的颜色反应。
双缩脲或含有两个以上肽键的化合物（蛋白质、肽等）在碱性条件下与硫酸铜反应生成紫红色的配合物。
如果蛋白质含量很低时，此颜色反应不易观察到。
三、试剂与器材1. 试剂：（1）酵母粉（药用）；（2）0.5%NaOH溶液；（3）乙酸；（4）10%硫酸溶液；（5）氨水；（6）5%硝酸银溶液；（7）95%乙醇；（8）地衣酚试剂（硫酸铁铵1.35g，地衣酚2g，用蒸馏水配成50mL作为母液，保存于冰箱中。
使用前，取母液2.5mL，加浓盐酸41.5mL再加蒸馏水60mL）；（9）二苯胺试剂（1.5g二苯胺溶于100mL高纯度的冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸）；（10）10%氢氧化钠溶液；（11）1%硫酸铜溶液。
实验六 酵母RNA的提取及组份鉴定
2.5g鉬酸铵溶于100mL水中；
10％抗坏血酸溶液：10g抗坏血酸溶于100mL水，棕色并保存溶液；
临用时将三种溶液和水按下列比例混合：
17％硫酸：
2.5％鉬酸铵：10％抗坏血酸：
水＝1：1：1：2（V/V）。
二、材料
干酵母粉。
三、器材
移液管
2.0mL（×1）,1mL（×4）；移液枪；量筒10mL（×1）,50mL（×1）；滴管；水浴锅；低速离心机；研钵；天平。操作方法
二、RNA组份鉴定
将所提取的核酸转移到试管中，加入
1.5M硫酸5mL,沸水浴加热10分钟制成水解液，然后进行组份鉴定。
1．嘌呤碱：
取水解液1mL加入过量浓氨水。然后加入1mL
0.1M硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱银化合物沉淀。
2．核糖：
取水解液1mL，三氯化铁浓盐酸溶液2mL和苔黑酚乙醇溶液
0.2mL。放沸水浴中10min。注意观察核糖是否变成绿色。
一、酵母RNA提取
称5g干酵母粉悬浮于30mL
0.04M NaOH溶液中并在研钵中研磨均匀。悬浮液转入大试管，沸水浴加热30min，冷却，转入离心管。3000r/min，离心10分钟后，将上清慢慢倾入10mL酸性乙醇，边加边搅动。加毕，静置，待RNA沉淀完全后，3000r/min离心5min。弃去上清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，第一次洗涤后3000r/min离心5min，第二次洗涤后过滤，将沉淀转移到滤纸上，沉淀在空气中干燥。称量所得RNA粗品的重量，计算：
实验六酵母
目的要求
（1）了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。
（2）了解核酸的组分并掌握其鉴定方法。
实验原理
由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后,上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH
rna的鉴定实验报告
rna的鉴定实验报告RNA的鉴定实验报告引言：RNA（核糖核酸）是一种重要的生物分子，它在细胞内起着传递遗传信息和蛋白质合成的关键作用。
为了深入了解RNA的结构和功能，本实验旨在通过一系列鉴定实验，对RNA进行详细的分析和研究。
实验一：RNA的提取与纯化首先，我们从细菌或植物细胞中提取RNA。
这一步骤的关键是使用合适的缓冲液和酶来破坏细胞膜和核膜，释放出RNA。
随后，通过离心等手段，将RNA从其他细胞组分中分离出来。
最后，通过酒精沉淀法将RNA纯化，去除杂质。
实验二：RNA的电泳分析为了确定提取到的RNA的纯度和完整性，我们进行了RNA的电泳分析。
首先，将RNA样品与一定浓度的缓冲液混合，然后将混合物加载到琼脂糖凝胶上。
随后，通过电场作用，RNA在琼脂糖凝胶中移动，根据RNA分子量的不同，形成不同的条带。
最后，通过紫外光照射，观察和记录RNA的分离情况。
实验三：RNA的逆转录与扩增为了进一步研究RNA的表达情况，我们进行了RNA的逆转录与扩增实验。
逆转录是将RNA转化为DNA的过程，通过引入逆转录酶和适当的引物，将RNA的信息转录成相应的DNA序列。
随后，通过PCR（聚合酶链式反应）扩增DNA，使其数量增加，以便进行下一步的分析和研究。
实验四：RNA的序列测定为了确定RNA的具体序列，我们进行了RNA的序列测定实验。
通过使用高通量测序技术，我们能够快速、准确地测定RNA的碱基序列。
这一步骤的关键是将RNA转化为cDNA，并引入特定的DNA引物，然后通过测序仪对DNA进行测序。
最终，我们可以得到RNA的详细序列信息。
实验五：RNA的功能研究在了解RNA的序列后，我们进行了RNA的功能研究。
通过生物信息学分析和实验验证，我们可以确定RNA的功能和作用机制。
例如，我们可以通过敲除实验来验证某个RNA在细胞中的功能，或者通过RNA干扰技术来研究RNA对基因表达的调控作用。
结论：通过一系列的实验，我们对RNA进行了全面的鉴定和研究。
实验三酵母核糖核酸的提取及组分鉴定一目的了解并掌握稀碱
实验五酵母核糖核酸的提取及组分鉴定一、实验目的1、了解并掌握稀碱法提取核糖核酸（RNA）的原理和方法；2、掌握苔黑酚显色法鉴定RNA组分的基本原理和操作方法。
二、实验原理酵母中含有丰富的RNA，含量达2.67%~10.0%，而DNA含量很少，仅为0.03%~0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。
提取制备RNA的方法较多，一般有苯酚法，去污剂法、浓盐法和稀碱法等。
其中苯酚法是实验中最常见的方法。
工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。
本实验用稀碱法提取RNA。
先用稀碱（本实验用0.04mol/L的NaOH溶液）使酵母细胞裂解，RNA可溶于稀碱溶液，在碱性提取液中加入酸性乙醇可使核糖核酸沉淀出来，由此即可得到RNA的粗制品。
RNA含有核糖、嘌呤碱，嘧啶碱和磷酸各组分，加入硫酸煮沸可使RNA水解，从水解液中可用定糖、定磷和加银沉淀等方法测出上述组分的存在。
三、仪器、试剂和材料1、仪器（1）100mL烧杯1个；（2）移液管：2.0mL1个，5.0mL1个，1.0mL4个；（3）量筒：10mL1个，50mL1个；（4）试管：15mL4个；（5）恒温水浴锅（6）离心机；(7）布氏漏斗；（8）抽滤瓶；（9）研钵；（10）滴管；（11）洗耳球；（12）电子天平。
2、试剂（1）0.04mol/L的NaOH溶液；（2）95%乙醇；（3）乙醚；（4）1.5mol/L的硫酸；（5）浓氨水；（6）0.1mol/L的硝酸银；（7）酸性乙醇溶液：0.3mL浓盐酸加入30mL乙醇中；（8）三氯化铁浓盐酸溶液：2mL10%的三氯化铁溶液加到400mL浓盐酸中。
（9）苔黑酚乙醇溶液：称取6g苔黑酚溶于100mL 95%乙醇中（可在冰箱中保存1个月）；（10）2.5%钼酸铵溶液3、材料干酵母粉四、操作步骤1、酵母RNA 提取称2g干酵母粉置于研钵中，加少许石英砂和2mL0.04mol/LNaOH溶液，在研钵中充分研磨，然后将匀浆液转移到100mL的烧杯中，再用8mL0.04mol/LNaOH溶液分两次洗涤研钵，洗涤液并入匀浆液中，沸水浴上加热30min，经常搅拌。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告目录1. 实验目的1.1 研究背景1.2 实验目的2. 实验原理2.1 酵母核糖核酸2.2 分离技术3. 实验步骤3.1 样品制备3.2 离心分离3.3 纯化提取3.4 鉴定分析4. 实验结果与讨论5. 实验结论6. 参考文献1. 实验目的1.1 研究背景在细胞内，核糖核酸（RNA）是一种重要的核酸分子，其功能涉及到基因的转录和翻译。
酵母细胞中的RNA有着重要的生物学功能，因此进行酵母核RNA的分离与组分鉴定具有一定的研究意义。
1.2 实验目的通过实验，掌握酵母核RNA的分离技术，了解其基本组成和结构特点，为后续RNA在生物学领域的应用提供基础支持。
2. 实验原理2.1 酵母核糖核酸酵母核RNA是一种由核糖核酸组成的RNA，主要参与酵母细胞内的基因表达和蛋白质合成过程。
2.2 分离技术本实验将采用离心分离和纯化提取的方法，通过差速离心将细胞裂解液中的酵母核RNA和其他细胞组分进行分离，再利用纯化技术进行酵母核RNA的提取。
3. 实验步骤3.1 样品制备准备酵母细胞样品，通过适当的处理方法制备得到待分离的样品。
3.2 离心分离采用差速离心技术，以不同细胞组分的密度差异进行分离，获得含有酵母核RNA的分离物。
3.3 纯化提取通过特定的纯化方法，将酵母核RNA从其他细胞组分中纯化提取出来，得到较纯的酵母核RNA溶液。
3.4 鉴定分析对分离得到的酵母核RNA样品进行各种分析技术，如凝胶电泳和质谱分析，确定其组分、纯度和结构特点。
4. 实验结果与讨论根据实验结果进行数据分析，探讨实验过程中出现的现象和可能的问题，进一步加深对酵母核RNA的理解。
5. 实验结论总结实验过程中取得的重要发现和结论，反思实验方法的可行性和局限性，为未来相关研究提供借鉴。
6. 参考文献列出本实验报告涉及的参考文献，方便读者进一步了解酵母核RNA分离及组分鉴定的相关知识。
实验四 RNA的提取及其纯度检测
实验四RNA的提取及其纯度检测实验目的：了解Trizol提取总RNA的原理，掌握高质量完整总RNA提取的技术以及电泳变性胶电泳检测和浓度及纯度鉴定方法。
实验原理Trizol是一种酚与异硫氰胍的混合物，非常容易把组织和细胞中的总RNA提取出来。
在加入氯仿离心后，RNA保留在水相中，与DNA和蛋白质分离开来（保留在有机相中）。
吸取水相，加入异丙醇成淀RNA，从而得到完整纯度高的总RNA。
实验内容材料小鼠新鲜肝试剂总RNA提取纯化试剂：Trizol(Invitrogen)；DEPC(Amersham)，无水乙醇，已丙醇；电泳试剂：TAE，上样缓冲液（50%甘油，10 mM EDTA，0.25% 溴酚蓝，0.25%二甲苯青），琼脂糖。
操作步骤总RNA的提取1小鼠肝组织的匀浆裂解断颈处死小鼠，立即解剖取出肝脏，取50-100mg到玻璃匀浆器中，假如1mlTrizol反复匀浆膜碎组织，使细胞完全裂解。
按1 ml Trizol加入0.2 ml氯仿，震荡15秒，室温放置3分钟，12000×g，4℃离心15分钟。
2 RNA的沉淀将离心的上清转移到新的离心管中，按1 ml Trizol加入0.5ml异丙醇，震荡15秒，室温放置10分钟，12000×g，4℃离心10分钟。
3 RNA的洗涤与溶解吸掉上清，加入1 ml 75% 乙醇洗涤沉淀，4℃，7500×g离心5分钟。
吸掉上清，空气干燥RNA沉淀10分钟，加入适量的DEPC处理水（50μl）溶解RNA，立即电泳和紫外浓度和纯度鉴定，剩余-70℃保存备用。
结果在凝胶上可以看到一般可以看到三条带，其中从上样孔开始对应的带的分别是28S,18S和5S，其中18S和28S的条带明显清晰，而5S的带比较弱，28S的带的亮度是18S带亮度的2背左右，说明RNA保持完整。
紫外分光光度法测定RNA的浓度和纯度总RNA用10mM的Tris-HCl(pH8.0)稀释，利用紫外分光光度计测定A260和A280值，根据1OD=40ug定量,并计算A260/A280比值，每一样品重复3次。
生物化学实验-酵母RNA的分离、组分鉴定及含量分析
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①磷酸与钼酸铵试剂作用产生黄色的磷钼酸铵沉淀 (1mL $ + 1mL定磷试剂)：
(NH4)2MoO4 + H3PO4 → (NH4)3PO4·12MoO3↓(黄色)
Mo6+
SnCL2
Mo4+
Mo(MoO4)2 (兰色)
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② 核糖与地衣酚(orcin)试剂反应呈鲜绿色 (1mL $ + 1mL FeCl3 + 2mL orcin→水浴加热)
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OD260/OD280的比值用于估计核酸的纯度,OD260/OD230估计 去盐的程度。
对于RNA纯制品，其OD260/OD280≈2.0，OD260/OD230应大于 2。
OD260/OD230<2说明去盐不充分, 可以再次沉淀和70%乙醇洗 涤。
浓度计算： DNA样品的浓度（μg / μl）:OD260×稀释倍数×50/1000 RNA样品的浓度（μg / μl）：OD260×稀释倍数×40/1000
当OD260＝1时，dsDNA浓度约为50μg / ml ssDNA浓度约为37μg / ml RNA浓度约为40μg / ml
纯DNA：OD260/OD280≈1.8 (＞1.9,表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白质、酚等污染） 纯RNA：1.7 ＜OD260/OD280＜2.0 （＜1.7时表明有蛋白质或酚污染,可以增加酚 /氯仿抽提）
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5.RNA的组分鉴定
①RNA的酸解 将装有待测RNA的三角瓶，在电炉上加热，至溶液透明 为止，得到RNA的水解液，期间不停晃动，以使受热均 匀。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告引言：酵母核糖核酸（RNA）是一种重要的生物分子，具有多种功能。
通过对酵母RNA的分离和组分鉴定实验，我们可以更好地了解其结构和功能。
本实验旨在通过一系列实验步骤，从酵母细胞中分离出RNA，并对其进行组分鉴定。
实验材料和方法：1. 酵母细胞培养液2. 细胞裂解液3. 高速离心机4. RNase酶5. RNA提取试剂盒6. 紫外可见光分光光度计实验步骤：1. 酵母细胞的培养和收获：将酵母细胞培养液置于适宜的培养条件下，培养至细胞密度达到一定程度后，用离心机将细胞沉淀下来。
2. 细胞裂解：将细胞裂解液加入细胞沉淀中，充分裂解细胞膜，释放出内部的细胞器和分子。
3. RNA提取：使用RNA提取试剂盒，按照说明书的步骤进行RNA的提取。
这一步骤主要是通过化学方法将RNA分离出来。
4. RNase酶处理：为了去除可能存在的DNA和蛋白质的污染物，可以使用RNase酶对提取的RNA进行处理。
5. 紫外可见光分光光度计测定：使用紫外可见光分光光度计对提取的RNA溶液进行测定，以确定RNA的浓度和纯度。
结果与讨论：通过以上的实验步骤，我们成功地从酵母细胞中分离出了RNA，并对其进行了组分鉴定。
在RNase酶处理后，我们发现RNA的纯度得到了明显的提高。
通过紫外可见光分光光度计的测定，我们确定了RNA的浓度。
酵母RNA的组分鉴定是一个复杂而重要的过程。
通过进一步的实验，我们可以对RNA进行凝胶电泳分析，以确定RNA的大小和分子量。
此外，我们还可以使用逆转录酶和聚合酶链反应（RT-PCR）等技术，对RNA进行进一步的研究，以了解其在基因表达调控中的作用。
结论：通过本实验，我们成功地从酵母细胞中分离出了RNA，并对其进行了组分鉴定。
这为我们进一步研究RNA的结构和功能奠定了基础。
酵母RNA在生物学研究中具有重要的意义，对于深入了解细胞的基因表达调控机制具有重要的参考价值。
RNA的提取及其组分的鉴定
一、实验目的
学习从酵母中提取RNA和鉴定RNA组分的方法。
二、原理：
核酸（nucleic acid)
核苷酸(nucleotide)
磷酸(phosphate)
核苷(nucleoside)
核糖 (ribose)
嘌呤（嘧啶）碱 Purine (pyrimidine) base
RNA的分离
RNA和DNA分别存在于细胞质和细胞核中，分离提 出核酸，首先要将破碎制成匀浆、使核酸充分提取出来。 酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液， 在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸
组分鉴定
RNA在硫酸液中煮沸可水解成核糖、嘌呤碱、嘧啶 碱和磷酸，可分别进行鉴定。
核苷酸
核糖+（嘌呤碱or嘧啶碱）+磷酸
RNA的水解：
1、用10ml 1.5mol/L硫酸溶液小心将RNA沉淀洗至 试管中，沸水浴10min；
2、冷却后离心3min；
3、取5mL上清液加蒸馏水定容至50mL,每人从中取 1mL至1.5mL Ep管上交老师，留做下次定量实验； 4、用剩余的定容前的上清液做定性分析。
沉淀。但蛋白质的存在干扰核酸的测定，因此在沉淀中 加入95%乙醇溶液洗涤，以除去蛋白，由此可得到RNA 的粗制品。
三、材料与试剂
1、酵母 2、0.04mol/L的NaOH溶液 3、酸性乙醇溶液 0.3mL浓盐酸加入到30mL乙醇 中 4、95％乙醇溶液 5、乙醚 6、1.5mol/L硫酸溶液 7、浓氨水 8、0.1mol/L硝酸银溶液 9、三氯化铁浓盐酸溶液 2mL10％三氯化铁加入到 400mL浓盐酸中 10、苔黑酚乙醇溶液 6g苔黑酚溶于100mL95％乙醇（4℃ 保存） 11、定磷试剂 （１）17％的硫酸溶液 （２）2.5％钼酸氨溶液 （３）10％抗坏血酸溶液 （４）蒸馏水 使用时按下比例临时配置（体积比）： 17％的硫酸溶液: 2.5％钼酸氨溶液:10 ％抗坏血酸溶液:蒸馏水＝1 : 1 : 1 : 2
生化实验 酵母RNA的提取及组分鉴定
验
迅速冷却，提取液离心后，上清液用乙醇沉淀RNA。稀
碱法是用稀碱溶液使细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋
白质和菌体后
,的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。
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酵母RNA的提取及组分鉴定
实验原理
生
酵母含RNA,2.62---10％,DNA含量仅为0.03-0.516%，所 以提取RNA多以酵母为原料。
甚至某些戊糖持续加热后生成的羟甲基糠醛也能与地衣酚 反应，产生显色复合物。 ⑶ 嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化合物沉淀。
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酵母RNA的提取及组分鉴定
实验步骤
生 物
一、RNA的粗提取：
化
二、水解RNA
学
三、RNA组分鉴定
实
验
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实验步骤
酵母RNA的提取及组分鉴定
生 一、RNA的提取 物 1.7g酵母悬浮于0.2％ 化 氢氧化钠溶液70ml中。 学 2.将悬浮液转移至 实 150ml锥形瓶中，在沸 验 水浴上加热30分钟，冷
开吸耳球，立即用右手的食指按住管口，大拇指和中指拿住管刻度线
上方，再使管离开液面，管末端仍靠在盛溶液器皿的内壁上。略松食
指，使液面平稳下降，直到溶液的弯月面与刻度标线相切。
Exit
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酶的特异性及影响酶活性的因素
移
液
生 物 化 学 实 验
生 入水解液1ml ，加入三氯
物
化铁的浓盐酸溶液2ml和
化
苔黑酚的乙醇溶液3滴，
学
实
在沸水浴中加热，观察试
验
管内颜色变化。解释原因。
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酵母RNA的提取及组分鉴定
酵母RNA的提取测定及组分分析
实验三酵母RNA的提取、测定及组成成分的分析Ⅰ酵母RNA的提取——浓盐法【目的和要求】了解用浓盐法提纯RNA的基本原理和方法【基本原理】核酸是一类不稳定的生物大分子，在制备过程中很容易发生降解。
因此，要使制得的核酸尽可能保持其在生物体内的天然状态，制备核酸必须采取温和的条件，例如避免过酸碱，避免剧烈的搅拌，防止核酸降解酶类的作用。
由于RNA种类较多，所以制备方法也各异。
工业上制备RNA一般选用成本较低、适宜于大规模操作的稀碱法和浓盐法。
稀碱法是用1%NaOH溶液，将细胞壁溶解，用酸中和，升高温度使蛋白质变性，将蛋白质与核酸分离，然后除去菌体，将pH调至RNA的等电点(pH2.5)，使RNA沉淀出来。
稀碱法的优点是抽提时间短，但RNA在此条件下不稳定，容易分解。
浓盐法是用10%NaCL溶液改变细胞膜的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
用浓盐法提取RNA，则就注意掌握温度，避免在20～70℃之间停留时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA因降解而降低提取率。
利用加热至90～100℃，使蛋白质变性，破坏该酶类，有利于RNA的提取。
若要提取接近天然状态RNA，可采用苯酚法或氯仿-异戊醇法去蛋白，然后用乙醇沉淀RNA。
离心收集。
本实验采用浓盐法（10% NaCL）【操作方法】1．提取称取干酵母粉2g于50mL三角瓶内。
加10% Nacl溶液10mL，搅拌均匀，然后于沸水浴中提取半小时。
2．分离将上述提取液取出，用自来水冷却，分装在离心管内，以3500r/min离心10min，使提取液与菌体残渣等分离。
3．沉淀RNA将离心得到的上清液倾于50mL烧杯内，并置于放有冰块250mL烧杯中冷却。
待溶液冷至10℃以下时，在搅拌下小心地用6mol/L HCL溶液调节pH至2.0～2.5。
随着pH值的下降，溶液中白色沉淀逐渐增加，到等电点时沉淀量最多（注意严格控制pH值）。
调好后继续于冰浴中静置10min，使沉淀充分，颗粒变大。
实验三 酵母核糖核酸(RNA)的提取[1]
![实验三 酵母核糖核酸(RNA)的提取[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/938b0425ccbff121dd36832a.png)
三、试剂及仪器
（一）试剂及材料 （1）松针 （2）酸化蒸馏水 （3）2，6–DCPIP；将50mg 2，6–DCPIP溶解于约200ml含有52mg 碳酸氢钠的热水中。冷后稀释至250ml。装入棕色瓶内。放在 冰箱里保存。2，6–DCPIP不稳定, 每周必须重新配制，使用前 需按照下法标定： 取5ml标准抗坏血酸溶液加5ml 1％草酸，以2，6–DCPIP滴定 呈粉红色，并在15秒钟内不退色为终点。计算2，6–DCPIP溶液 的浓度。 （4）标准抗坏血酸溶液：溶解100mg纯抗坏血酸粉状结晶于1％ 草酸中，然后稀释到500ml。 使用前临时配制。 （二）器材 （1）锥形瓶（50ml）（2）小研钵（3）吸量管（10ml）（4）漏 斗（5）滤纸（6）容量瓶（50ml）（7）微量滴定管（5ml）
计算程序 ①加人H2O2 ml 数 ②加人H2O2mmol=①×标定浓度 ③底物浓度［S］=②÷4
0.004 ④酶作用后，KMnO4滴定ml
1 0.50
2 1.00
3 1.50
4 2.00
5 2.50
⑤剩余H2O2mmol=④×0.005×5/2
实验七 维生素C的定量测定 2.6- DCPIP（2.6-二氯酚靛酚）滴定法
四、操作步骤
1.准确称取松针约1g。样品必须用温水洗去泥土，并在空气中 风干。放入研钵中，加1g石英砂，再加酸化蒸馏水5～10ml 一起研磨。 2. 离心（3500转/分）10分钟，将上清液移入容量瓶，用酸化 蒸馏水定容至50ml。 3.取10ml上述溶液放入小锥形瓶内，用微量滴定管，以2，6– DCPIP（蓝色）滴定至提取液呈现淡粉红色，并保持15～30 秒不褪。(滴定过程必须迅速，不要超过2min。因为在本滴 定条件下，一些非维生素C还原物质的还原作用较迟缓，快 速滴定右以避免或减少它们的影响) 4.另取10ml酸化蒸馏水作空白对照滴定。 • 提取液和空白对照各做三份，对结果取平均值进行计算
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四、实验步骤
１、酵母RNA的提取：
取酵母1.0g（3片）、 0.04MNaOH+8ml 研磨匀浆 沸水浴20min 冷却至室温 离心10min（3000r /min） 95%乙醇洗沉淀一次， 离心3min（3000r /min） 收集上清液于50mL烧杯中 无水乙醇洗沉淀一次 加入10mL酸性乙醇沉淀RNA 离心3min（3000r /min） 沉淀即为RNA粗品 转移至10mL 离心管 收集沉淀 离心3min（3000r /min）
2、RNA组分的鉴定
RNA的水解：
用10m1.5mol/L硫酸溶液小心将RNA沉淀洗至试管中，沸水浴 10min，冷却后离心，然后将上清液定容至100mL,分别取1mL至两个 1.5mLEp管中留做定量用,余下做定性分析。
RNA组分的鉴定：
（１）嘌呤碱
取水解液1ml+浓氨水（5滴）+1mlAgNO3，观察嘌呤银化合物 的絮状沉淀。
组分鉴定
RNA在硫酸液中煮沸可水解成核糖、嘌呤碱、嘧啶碱 和磷酸，可分别进行鉴定。
核苷酸
核糖+（嘌呤碱or嘧啶碱）+磷酸
三、材料与试剂
1、酵母 2、0.04mol/L的NaOH溶液 3、酸性乙醇溶液 0.3mL浓盐酸加入到30mL乙醇 中 4、95％乙醇溶液 5、乙醚 6、1.5mol/L硫酸溶液 7、浓氨水 8、0.1mol/L硝酸银溶液 9、三氯化铁浓盐酸溶液 2mL10％三氯化铁加入到 400mL浓盐酸中 10、苔黑酚乙醇溶液 6g苔黑酚溶于100mL95％乙醇（4℃ 保存） 11、定磷试剂 （１）17％的硫酸溶液 （２）2.5％钼酸氨溶液 （３）10％抗坏血酸溶液 （４）蒸馏水 使用时按下比例临时配置（体积比）： 17％的硫酸溶液: 2.5％钼酸氨溶液:10 : ％抗坏血酸溶液:蒸馏水＝1 : 1 : 1 : 2 :
（２）核糖 取0.5ml水解液+0.2ml苔黑酚+2ml三氯化铁盐酸溶液，沸水浴10min， 观察颜色变化（亮绿色） （３）磷酸 取0.2ml水解液+0.8ml水 +1ml定磷试剂 ，沸水浴10min ，观察颜色变 化（蓝色）
五
思考题
１、如何得到高产量的RNA粗品？ ２、本实验RNA组分是什么？怎样验证？
RNA的分离
RNA和DNA分别存在于细胞质和细胞核中，分离提 出核酸，首先要将破碎制成匀浆、使核酸充分提取出来。 酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在 碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉 淀。但蛋白质的存在干扰核酸的测定，因此在沉淀中加 入95%乙醇溶液洗涤，以除去蛋白，由此可得到RNA的 粗制品。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
一、实Байду номын сангаас目的
学习从酵母中提取RNA和鉴定 和鉴定RNA组分的方法。 组分的方法。 学习从酵母中提取 和鉴定 组分的方法
二、原理：
核酸（nucleic acid) 核苷酸(nucleotide)
磷酸(phosphate)
核苷(nucleoside)
核糖 (ribose)
嘌呤（嘧啶）碱 Purine (pyrimidine) base
RNA(ribonucleic acid)背景知识
细胞RNA通常都是单链分子（但病毒RNA双链、环状、 线型等多种形式），由核糖、碱基（A、U、G、C）和磷 酸组成，其种类繁多。目前有许多具有特殊功能的RNA不 断被发现，几乎涉及细胞功能的各个方面，其中参与蛋白 质合成的RNA有三类：转移RNA（transfer RNA）、核糖 体RNA（ribosomal）和信使RNA（messenger RNA）。 研究表明，RNA不仅仅是遗传信息的中间传递体 （from DNA to protein）。RNA的功能总结起来可以分为 以下几类：控制蛋白质的合成；作用于RNA转录后加工与 修饰；基因表达与细胞功能的调节；生物催化与其他细胞 持家功能；遗传信息的加工与进化。