Rh血型系统DEL型的免疫特性与输血研究

Rh血型系统DEL型的免疫特性与输血研究

【中图分类号】r434+1【文献标识码】a【文章编号】

1005-0515(2010)010-0045-01

del作为一种d变异体,del抗原有可能诱发抗d免疫,如何通过准确的基因分型建立1个真正的rh阴性供者库(目前的rh阴性血型包括del型)和分子鉴定各种d突变体成为输血医学的新热点。现将rh血型系统的del型研究进展与输血的关系论述如下。

1 rhd血型变异体概述

随着输血医学的发展,特别是在rhd基因被克隆后,在全世界已发现了许多d变异体,比如弱d、部分d和del等。这些d变异体由氨基酸突变、缺失、插入或rhd/rhce置换产生。它们在不同人群中的发生频率不同,且具有临床意义。 del型在不同民族中表型频率差别较大,在中国汉族rh阴性人群中,其比例高达26%左右。

1.1 del分子机制:实际上,在目前已观察到的6种del mrna转录本中,它们都有1个正常的开放阅读框,编码6种含不同数目氨基酸且有不同c末端的蛋白。其中,del9与正常rhd mrna最相似,它含有1个1 389bp长度的核苷酸,并编码463个氨基酸残基。这种蛋白比正常的rhd蛋白(417个氨基酸)多46个氨基酸,且从384位密码子后就与rhd不同。在正常rhd蛋白中,384位之后的氨基酸是主要的转移膜和细胞内区域[1]。del中的6个同分异构体都缺少外显子9,且外显子9末端的1227g>a突变实际上影响了转录本的mrna 的拼接。同时,仅在del型中可以检测到含有1个rhd内含子7序

列片断的转录本del9+170和del89+170。

1.2del相关单倍型已经证实了ce单倍型对弱d表型的抑制作用,因为当出现dccee或dccee表型时,弱d型单个红细胞上的抗原密度会显著下降至500个以下。因此,可以推断rhdel与ce单倍型有关,这种单倍型可能抑制了d抗原的表达。所以,我们可以通过简单测定rhc(+)表型和进行rhd1227a分析来检测rhd阴性个体中的rhdel型。

1.3del等位基因目前已发现的del等位基因

有:rhd(ivs1+1g>a)、rhd(ivs3+1g>a)、rhd(ivs5~38del4)、

rhd(m295i)、rhd(del ex9)、rhd1227a(k409k)、rhd(x418l)和

rhd(del ex8)。这些等位基因中,rhd(del ex9)和rhd(ivs538del4)涉及多个核苷酸的变化。rhd(del ex9)缺失了包括全部第9外显子在内的1 013bp碱基。rhd(ivs538del4)缺失内含子5第38位起的4个碱基。rhd(del ex8)缺失了包括部分内含子7、外显子8和内含子8在内的995bp碱基。其它del等位基因均是由1个核苷酸突变所引起的,作用机理包括:错义突变、剪并连接位点突变、阅读框移动。由此引起的氨基酸替换多见于d蛋白的穿膜区和膜内结构域。

2del的免疫特性

del是一种极弱的d变异体,即使用1种敏感的间接抗球蛋白试验进行抗d定型时也为d阴性。del红细胞上d抗原的表达如此之少,以至于在血清学方法中,仅能通过吸收放散试验检测到。与正常

的d抗原相比,一般del表型的d抗原表位数目不变,但d抗原分子数量明显下降。至于为何del红细胞上d位点表达减少,邵超鹏等[2]在试验中发现,del个体中观察到的rhd1227a等位基因,其碱基突变为无义突变,但由于1227a为rhd基因第9外显子3’端最后1位碱基,可能影响mrna 的正常拼接而形成短mrna,或者这一突变影响mrna 的拼接效率,导致并非所有未成熟mrna 均可形成正常成熟的rhd mrna,使rhd 基因的表达效率降低,这在一定程度解释了del 个体d 抗原表位数目不变,但抗原分子数量明显减少的原因。

3del与输血

del作为一种特殊的rhd变异体,血清学检测方法的步骤比较繁琐,并且del抗原的意义不甚明确。根据许多国家的输血指南,del表型个体的红细胞与真正d阴性没有差别,因此作为“d阴性”输给d阴性受血者。尽管del红细胞上的d抗原,比能引起输血相关抗d

的最弱d变异体弱d2型上的抗原(450个/细胞)要少得多,但已有因输注del型红细胞而产生抗d免疫的报道,与此相关的del等位基因是rhd(k409k)、rhd(ivs538del4)和rhd(ivs3+1g>a),而并非所有的del等位基因。根据免疫学的基本原理,若del红细胞膜表达完整的d抗原,del个体将可能不被d抗原免疫产生同种免疫反应,即del患者可以输注rh阳性红细胞,del女性妊娠rh阳性胎儿将可能不会面临发生新生儿溶血病的风险。但是,由于常规定型方法的局限性,绝大多数的del表型被误认为d阴性。所以,del个体发生抗d同种免疫可能并非罕见。相反,可能是由于不认识del

表型而已。

由于del表型在中国人rhd阴性人群中比率较高[3],通过对其分子机制及抗原表达的研究以确立del表型相关的输血策略,对我国临床输血意义重大。揭示del表型的遗传背景及基因多态性,设计相应的pcr试验准确而高效地检测del表型,是提高临床输血安全性的重要手段。

参考文献

[1] daniels g. human blood groups[m]. 2nd ed.

oxford:blackwell science,2002,195~274

[2] 邵超鹏,legler tj. rhd放散型相关的等位基因的鉴定[j].中华免疫学杂志,2003,9(19):631~633

[3] yang yf, wang yh, chen jc, et al. prevalence of rhd 1227a and hybrid rhesus box in the general chinese population[j]. transl res,2007,149(1):31~36

作者单位:158300 黑龙江省密山市血站