液氮超低温冻结保藏技术规范
液氮储存和使用技术说明
液氮储存和使用技术说明液氮是一种低温制冷剂，通常用于实验室、医疗、食品加工等领域。
其极低的温度能够使很多材料变得脆性，同时还具有杀菌、杀虫等功能。
液氮的储存和使用需要一定的技术，下面就详细介绍一下。
一、液氮的制备和特性液氮的制备主要是利用物理方法降低氮气的温度，使其从气态变为液态。
一般采用制冷机、压缩机等方式制冷，制出的液氮温度约为-196℃。
液氮在环境下快速挥发，由于液态氮的沸点为-196℃，在常温下液氮会迅速转变成气态氮。
同时，液氮没有颜色、没有气味，不能直接感知其存在。
二、液氮储存技术1、储存容器的选择液氮的储存需要用到液氮容器，常用的液氮容器有两种：气化式和球形真空式。
气化式液氮容器是容量较大、适用于长期储存，但使用过程中容器内压力较高，对安全要求比较高。
球形真空式液氮容器是容量较小，通常用于液氮的短期存储和运输。
球形真空式液氮容器在使用时需要放置在平稳的水平面上，并且需要经常保持液氮的液位不低于指示线，以便及时添加液氮。
2、安全使用液氮容器在液氮的储存和使用过程中，必须注意安全。
尤其是在使用气化式液氮容器时，由于容器内压力较高，有可能引起气体泄漏或爆炸等危险。
因此必须严格遵守液氮容器的使用规程，以确保液氮的安全使用。
使用液氮容器时，应按照容器的使用说明进行操作，并确保容器安装在平稳的水平面上。
在加注液氮时，应分多次进行，并等待液氮完全挥发后再进行下一次加注。
加液时应注意缓慢注入，避免过度注入导致液氮外泄。
当液氮容器中的液位下降到规定的安全线时，应及时添加液氮，以保持液位不低于安全线。
3、液氮的储存环境设置液氮的储存环境需要保证干燥、通风和安全。
在室内储存液氮时，应确保通风良好，防止室内液氮浓度过高。
在室外储存液氮时，需要设置合适的防护措施，以防止液氮被紫外线照射并产生过高温度。
此外，还应设置不易被刺激的地方，以防止人员因误操作而受伤。
三、液氮的使用技术1、液氮的安全使用液氮的使用需要注意安全。
整理微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏
精品文档国家自然科技资源平台微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏技术规程（试行）《自然科技资源收集整理保存技术规程研究制定》项目组二00四年十二月十日精品文档目次前言 (2)弓I 言 (3)1范围 (4)2规范性引用文件 (4)3术语和定义 (4)4内容 (5)参考文献 (10)精品文档*»-t-刖言本规程由微生物菌种资源平台建设项目提出。
本规程起草单位：中国农业科学院土壤肥料研究所、中国兽医药品监察所、中国科学院微生物研究所、中国林业科学研究院森林保护研究所、中国药品生物制品检定所、中国医学科学院医药生物技术研究所、中国食品发酵工业研究院。
本规程主要起草人：张月琴、刘红宇、黄明玉、姜瑞波、顾金刚、周宇光、朴春根、叶强、陈敏、程池等。
精品文档精品文档引言微生物菌种资源的长期有效保藏是微生物菌种资源有效实施共享的前提，采用操作性简便、保藏周期长、遗传变异率低是菌种资源保藏方法的首要选择。
精品文档精品文档微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏技术规程1范围本规程规定了冷冻干燥和低温冷冻保藏技术的定义、原理、技术要求、方法与步骤。
本规程适用于普通病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌及担子菌等微生物菌种的保藏。
对于病原微生物及其他需要特殊操作技术的微生物的参见相应的技术规程。
2规范性引用文件下列文件中的条款通过本规范的引用而成为本规范的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本规范，然而，鼓励根据本规范达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规范。
国务院令第424号《病原微生物实验室生物安全管理条例》GB 19489实验室生物安全通用要求科技部自然科技资源平台联合管理办公室文件自然科技资源共性描述规范（试行）3术语和定义下列术语和定义适用于本规范。
3.1冷冻干燥freeze-drying将微生物冷冻，在减压下利用升华作用除去水分，使细胞的生理活动趋于停止，从而长期维持存活状态。
实验室储存液氮的安全操作指南
实验室储存液氮的安全操作指南液氮是一种极低温流体，它的存储和使用需要特殊的安全措施。
液氮的温度可达到零下196摄氏度，因此必须严格遵守以下液氮的安全操作指南，以确保实验室的安全和人员的健康。
一、液氮存储设备及容器选择1. 应选择质量可靠、国家标准认证的液氮储存设备和容器。
储存设备和容器必须能够有效密封，以防止液氮的挥发和泄漏。
2. 储存设备和容器应定期进行检查和维护，确保其完好无损，避免潜在的泄漏和安全隐患。
二、液氮的安全操作1. 个人防护措施a. 使用液氮前，必须戴上绝缘手套、护目镜和长袖衣物，以保护手部和眼睛免受液氮的损伤。
b. 避免直接接触液氮，特别是避免将液氮倒入皮肤或眼睛中，以免造成灼伤。
c. 在操作液氮时，不得穿戴裙子或短裤等暴露部位过多的服装，以免液氮的温度对皮肤造成伤害。
2. 液氮的安全存储a. 液氮储存设备和容器应远离明火和热源，放置在通风良好的地方，以防止液氮的挥发和积聚。
b. 液氮的存储区域应保持干燥，避免存放其他易燃物品，以降低火灾的风险。
c. 液氮容器应放置在稳固的平台上，避免碰撞和翻倒，以免引发液氮泄漏和意外事故。
3. 液氮的使用和操作a. 在需要使用液氮之前，必须经过专业培训和指导，并熟悉相关的安全知识和操作规程。
b. 需要低温条件的实验应尽量在防护屏幕下进行，以减少液氮的波及范围。
c. 在操作液氮时，必须小心轻放容器，避免剧烈摇晃和振荡，以免液氮喷溅或溅射出容器。
d. 操作液氮时，应使用专门的工具和设备，避免直接用手触碰容器，降低操作风险。
e. 操作液氮的区域应明确标识并设置明显的安全警示标识，以提醒工作人员注意安全。
4. 液氮的废弃处理a. 液氮的废弃物必须按照相关规定进行处理，不得随意倾倒或排入污水系统。
b. 液氮容器的废弃处理必须彻底清洗干净，确保液氮完全蒸发，并按照规定的方式进行回收或处置。
三、液氮的紧急处理1. 液氮泄漏a. 发现液氮泄漏时，第一时间通知相关人员，并迅速撤离人员，确保人员的安全。
关于病毒的液氮罐超低温保存法介绍
关于病毒的液氮罐超低温保存法介绍大多数微生物都可以用超低温来保存，超低温保存法是适用范围最广泛的微生物保存法。
需要复杂营养的微生物种，如用其他的贮存方法不能保持其活力（如植物的病原性真菌），通常可用超低温的方法保存（ATCC1983；Halliday，Baker1985）。
此法是将冻存在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率（1℃／分钟）冷冻，直至—150℃，再将这些小管贮存在—150～－196℃的液氮中。
超低温的冷冻保护剂不同于冻干法所用的冷冻剂。
ATCC常用一种由甘油（10％）、二甲亚砜（5％）和培养液制成的混合剂保存多数的细胞株。
这些化学试剂进入细胞内可避免内膜的冷冻损伤。
贮存在低温容器内的细胞复苏时必须小心操作。
当小管被加热时，所形成的冰晶会将细胞杀死，正确操作就可避免这种事故。
只要迅速将样品解冻就能减少活力的丢失，做法是：将封口的小管迅速放入37℃的水中，直至所有的冰融化，然后打开管口，将内容物移入培养基。
超低温保藏的微生物必须始终贮存在温度非常低的环境中，因此需要液氮罐。
在长期贮存的过程中必须经常注意补充液氮。
这种贮存方式比冻干法需要更多的经费，包括为了维持贮存温度所必要的劳动力和液氮等。
1材料病毒超低温保存所需材料有：热收缩塑料管（NuncCryoflex），液氮罐，防护手套和面罩，永久性记号笔，气体喷灯，装液氮的保温瓶。
2方法（1）剪一段两端各超出冷冻管长度2cm的热收缩塑料管。
（2）将含有澄清病毒悬液（组织培养的上清培养基，或组织培养基内的细胞溶解产物均可）冰浴几分钟，用灭菌移液管将0.2ml冰浴过的上清悬液分装到冷冻管内，并将盖子拧紧。
（3）将有病毒的冷冻管放入热收缩塑料管中部，插入正确的标签。
（4）用喷灯小心加热热收缩塑料管，并使之包住冷冻管。
注意不要用太高的温度加热热收缩塑料管。
（5）再小心加热热收缩塑料管的两端，用大号镊子夹紧管的端口至完全密封。
（6）将密封好的冷冻管快速在装有液氮的保温瓶中冷冻（操作时要求戴面罩和手套）。
液氮超低温冻结保藏技术规范
液氮超低温冻结保藏技术规范液氮超低温冻结保藏技术规范1. 目的规范液氮超低温冻结方法保存各类微生物菌种的操作，保证菌种长期保藏的质量和安全。
2. 范围本规程适用于各类微生物菌种的液氮超低温冻结保存。
3. 基本原则和要求针对接收的不同类群的微生物菌种资源，保藏中心应根据工作经验和微生物菌种提供人的建议，选择合适的冻结速度和保护剂系统，进行微生物菌种的液氮超低温冻结保存，以保证这些微生物菌种在长期保藏过程中的活性和稳定性。
4. 规程4.1 准备冻存管4.1.1 用蒸馏水浸泡、冲洗干净耐低温（聚丙烯）塑料冻存管，干燥后备用。
4.1.2 保藏中心应为保存菌种的每一支冻存管标注明确的标识，标签内容应至少包括菌种的保藏编号和制备批号（日期），可将保藏编号排在第一行，制备批号用连续的年月日（八位数字）表示，排在第二行，并根据冻存管的容积将标签裁成合适的大小。
保藏中心应根据标签的放置位置选择符合要求的标签材质，以确保在长期的保藏过程中，标签不会发生自然或人为的脱落、污损。
4.1.2 将准备好的标签放置于冻存管规定的位置，加入或不加入合适体积的保护剂，拧上冻存管帽，装入塑料冻存盒中，1 公斤压力蒸汽灭菌30 分钟，备用。
4.2 准备保护剂根据需要保藏的微生物类别选择适宜的保护剂种类，按照配方配制、分装、灭菌备用。
用于保存厌氧微生物的保护剂，应除去保护剂中的溶解氧。
4.3 菌种保藏4.3.1 无菌操作将符合质量要求的、需要保藏的菌种接种在规定的培养基上，并尽量涂满整个斜面，置最适宜的条件下培养，单细胞微生物菌种培养至对数生长期后期（静止期初期），对于放线菌和产孢丝状真菌应培养至形成成熟的孢子。
对于生物量较低的菌种，应多准备几只斜面菌种。
对于不产孢子的丝状真菌，无菌操作将需要保藏的菌种接种在规定的平板培养基上，培养时间根据菌种的生长速度确定。
4.3.2 用无菌滴管将一定体积的灭菌保护剂无菌操作注入培养好的斜面菌种试管中，并将菌苔（或孢子）轻轻刮下，吹打数次，制成细胞或孢子悬浮液。
液氮锁鲜技术
液氮锁鲜技术液氮锁鲜技术目前，随着人们生活水平的不断提高，对鱼类产品质量的要求也越来越高。
作为鱼类产品的贮藏方法，以冷冻加工为主，但所谓的冷冻产品并不是简单地把鱼类产品放入冷库冻结贮藏即成，而是经超低温冷冻液体生产过程而加工制成的。
在使用—般冷冻库冷冻食品时，由于需要时间长造成食品中的水分结冰时会膨胀、破坏细胞膜。
但是丹东天茂气体生产的鱼类液氮速冻机通过-196的液氮为制冷剂，对水产品进行超低温极速冻结，这种极速冻结保护了细胞膜以及水产品中的各种组织不被破坏，水分子也不会膨胀，更不会导致细胞壁的破裂，而且排列均匀，有效抑制了水产品微生物的生长，让食品在解冻后与冻结前口味一致，新鲜美味。
与其他普通水产品速冻设备相比，丹东天茂气体研发生产的鱼类液氮小型速冻机有着不可相比优势。
1.当液氮与被冻结食物接触时，在-35~-85的超低温状态下，用极短时间使被冻物品通过最大的冰晶生成区。
2.使食物细胞内外的压力达到相对平衡，最大限度地保护被冻物品的细胞组织，保持细胞活性，保证被冻物品的鲜活品质，最大限度保留原营养成分。
减少细胞内水份外析，解冻时汁液流失少。
3.细胞组织内部浓缩溶质和食品组织，胶体以及各种成分相互接触的时间显著缩短，浓缩的危害性下降到最低程度。
4.将食品迅速降低到微生物生长活动温度之下，有利地抵制微生物的增长及其生化反应。
由于采用超低温冷冻技术，所以在产品速冻时能完全有效杀毒灭菌作用。
产品速冻完直接进冷藏库冷藏就可以，也不需要担心食品附带的细菌繁殖破坏食品。
5.解冻后营养物质不流失，保持食品原有的风味、口感和营养价值，甚至在口感上比新鲜食品更胜一筹。
6.一般常规冻结需要4小时以上甚至十几小时，而速冻技术只需几分钟到十几分钟。
7.液氮速冻技术在甲壳纲、全条鱼、贝类，金枪鱼，大黄鱼，龙虾，其它海鲜水产品以及牛肉，羊肉单冻方面有着无可挑剔的优势，真空包装的生鱼片、虾仁也是液冻技术的优势所在，在品质上具有极强的竞争性。
液氮冷冻标准
液氮冷冻标准
液氮冷冻的标准涉及多个方面，以下是部分相关标准：
1. 温度控制：液氮冷冻的关键在于温度的控制。
在冷冻过程中，要保证常温下的小食品在加入液氮后能够迅速降温至-30℃\~-40℃，以达到快速冻结的效果。
2. 冷冻速度：食材从周围进行解冻，厚度或直径为厘米（cm）的食材，中心温度降低到-5摄氏度所需要的时间为小时。
根据此标准，液氮的超低温可以瞬间吸收食材的温度，且极速超速冻结食材，属于超速冻结的一种物理速度技术的操作。
3. 冷冻环境：液氮冷冻需要在特定的环境下进行，以确保安全和有效性。
例如，液氮罐应存放在通风良好的地方，远离火源和易燃物品，以防止意外发生。
需要注意的是，不同的应用领域和具体情况可能会有不同的液氮冷冻标准。
因此，在实际应用中，应根据具体情况制定合适的液氮冷冻标准，并遵循相关规范和操作要求，以确保安全和有效性。
液氮保藏法
液氮保藏法液氮保藏法是目前保存微生物菌种最可靠的方法，多数国家级菌种保藏单位都采用此法。
1准备安培管用于液氮保藏的安培管，要求能耐受温度突然变化而不致破裂，因此，需要采用硼硅酸盐玻璃制造的安培管。
安培管的大小通常使用75×10mm的安培瓶。
2加保护剂与灭菌保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的细胞时，则将空安培管塞上棉塞，在压力0.11MPa，温度121℃条件下灭菌15min；若保存霉菌菌丝体则需在安培管内预先加入保护剂，如10%的甘油蒸馏水溶液或10%二甲亚砜蒸馏水溶液，加入量以能浸没以后加入的菌种块为限，而后再进行高压灭菌。
3接入菌种将菌种用10%的甘油蒸馏水溶液制成菌悬液，装入已灭菌的安培管；霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器，从平板内切取菌落圆块，放入含有保护剂的安培管内，然后用火焰熔封。
浸入水中检查有无漏洞。
4冻结再将已封口的安培管以每分钟下降1℃的慢速冻结至－30℃。
若细胞急剧冷冻，则在细胞内会形成冰的结晶，因而降低存活率。
5保藏经冻结至－30℃的安培管立即放入液氮冷冻保藏器的小圆筒内，然后再将小圆筒放入液氮保藏器内。
液氮保藏器内的气相为－150℃，液态氮为－196℃。
6恢复培养保藏的菌种需要用时，将安培管取出，立即放入38～40℃的水浴中进行急剧解冻，直到全部融化为止。
再打开安培管，将内容物移到适宜的培养基上培养。
此法除了适宜于一般微生物的保藏外，对于一些用冷冻干燥法都难以保藏的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞都可长期保藏，而且不易发生变异。
缺点是需要特殊设备。
关于液氮复苏样品的方法及建议：方法一：准备吸水纸两张，干净毛巾一条。
1.在地面或是桌面上铺两层干净吸水纸。
2.迅速从液氮罐中取出冻存管后，放在吸水纸上（注意一定要将冻存管放到，不要直立起来，因为直立起来的冻存管内液氮很难在短时间内挥发出来，而放平以后，液氮会快速从管缝隙中渗漏出来）3.用干净毛巾罩住冻存管样品（还是为了防止爆炸造成伤害），大约3-5min即可进行后续试验。
超低温冷冻保存20110908
长期保存方法
1．超低温冷冻保存此种方法主要将菌种保存于超低温的冷冻柜中，其程序如下：（1）准备工作
将甘油及蒸馏水以1：4的比例混合，配制成100mL或少于100mL的甘油溶液，于灭菌锅中以120℃，20min灭菌备用。
取小量的甘油溶液，分装于保存菌种用的小瓶子中，勿大量装在一起，否则反复冷冻、解冻及接种的过程，均会增加污染或菌株死亡的机会，每次以小量分装，且准备多重复，可以减少前述的缺点。
（2）培养及分装过程
以准备好的的甘油溶液制备孢子、菌丝或细胞的悬浮液后，分装于容积为2mL的小塑料瓶中，每瓶各加入1mL的悬浮液，若须盛装较大体积的悬浮液时，亦可选择较大的容器；分装后贮存于-50℃的冷冻柜中，如果菌株已先生长于固体培养基上，也可以将其浸泡于20%(v/v)的甘油溶液中，再贮存于冷冻柜。
（3）贮存
将各个小瓶子做好登记及编号，依序置于具有区隔装置的贮存盒中，贮存盒外亦须登记及注明盒内贮存瓶的编号，以便日后能迅速查询；贮存盒的材质可为塑料或腊质包膜等具有防水功能(如：Nalgene)的冷冻盒。
（4）重新活化
自冷冻库中取出菌种贮存瓶，置于室温使其解冻，或是以37℃水浴迅速解冻，解冻完成后立即取出瓶子，以70%酒精擦拭消毒，再以无菌操作方式打开瓶盖，取出菌液接种至新鲜的培养液中重新活化。
超低温液氮冰冷处理
超低温液氮冰冷处理液氮超低温保藏技术是将菌种保藏在-196℃的液态氮，或在-150℃的氮气中的长期保藏方法，它的原理是利用微生物在-130℃以下新陈代谢趋于停止而有效地保藏微生物。
操作步骤如下：1、安瓿管或冻存管的准备用圆底硼硅玻璃制品的安瓿管，或螺旋口的塑料冻存管。
注意玻璃管不能有裂纹。
将冻存管或安瓿管清洗干净，121℃下高压灭菌15-20分钟，备用。
2、保护剂的准备保护剂种类要根据微生物类别选择。
配制保护剂时，应注意其浓度，一般采用10-20%甘油。
3、微生物保藏物的准备微生物不同的生理状态对存活率有影响，一般使用静止期或成熟期培养物。
分装时注意应在无菌条件下操作。
菌种的准备可采用下列几种方法：刮取培养物斜面上的孢子或菌体，与保护剂混匀后加入冻存管内;接种液体培养基，振荡培养后取菌悬液与保护剂混合分装于冻存管内;将培养物在平皿培养，形成菌落后，用无菌打孔器从平板上切取一些大小均匀的小块(直径约5-10毫米)，真菌取菌落边缘的菌块，与保护剂混匀后加入冻存管内;在小安瓿管中装1.2-2毫升的琼脂培养基，接种菌种，培养2-10天后，加入保护剂，待保藏。
4、预冻预冻时一般冷冻速度控制在以每分钟下降1℃为好、使样品冻结到-35℃。
目前常用的有三种控温方法：——程序控温降温法，应用电子计算机程序控制降温装置，可以稳定连续降温，能很好地控制降温速率。
——分段降温法：将菌体在不同温级的冰箱或液氮罐口分段降温冷却，或悬挂于冰的气雾中逐渐降温。
一般采用二步控温，将安瓿管或塑料小管，先放-20℃至-40℃冰箱中1-2小时，然后取出放入液氮罐中快速冷冻。
这样冷冻速率大约每分钟下降1-1.5℃。
——对耐低温的微生物、可以直接放入气相或液相氮中。
5、保藏将安瓿管或塑料冻存管置于液氮罐中保藏。
一般气相中温度为-150℃，液相中温度为-196℃。
6、复苏方法从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。
液氮和液氮罐的使用注意事项
液氮和液氮罐的使用注意事项液氮是一种特殊的工业制成品，在畜牧品种改良工作中，液氮是精液及胚胎的主要冷冻贮存媒介。
我们在实际生产中，发现由于有好多技术员对液氮及液氮生物容器特性的不了解，而造成的不合理使用现象严重，既易造成液氮的浪费，增加生产成本，严重的还可能发生伤人事故。
下面，我就液氮及液氮储存罐在使用过程中的几个常见问题介绍如下：一、液氮的来源液氮来源于空气。
空气中所含主要气体成分分为氧气和氮气，其中，氮气约占空气的78．09％，氮的分子量为28.0134，比空气略轻,液氮即为液化的氮气。
二、液氮的特性液氮由于是由氮气压缩冷却而来，其理化性质比较特殊。
主要特性如下：1、超低温性：液氮的沸点为零下195．8℃，液氮每升重量为808克，液氮冷却到零下210℃时，将变成霜雪状的固态氮。
液氮这一超低温特性能抑制精子和胚胎等生物体的代谢能力，科学家根据这一特性，用来长期保存精液及胚胎。
其最大优点是可长期保存冻精，使用不受时间、地域以及种用雄性动物寿命的限制。
可充分提高公畜的利用率。
2、液氮同人们日常生活所呼吸的空气中的氮气是同一种物质, 液氮是无色、无臭、无毒、不燃烧、不爆炸的液体。
3、液氮的渗透性很弱。
但当皮肤接触液氮时，却还是会受到冻伤的。
4、膨胀性：液氮是由空气压缩冷却制成，其气化时就恢复为氮气。
据测定，每一立升液氮气化，温度上升15度，体积膨胀约为180倍。
一升液氮在标准大气压下汽化成683升0℃的氮气, 每公斤液氮可夺热48大卡。
5、窒息性：氮气本身不致使人窒息，但在一定空间内，如果氮气过多而隔绝了氧气，操作者也会引起窒息。
据测定，10公斤液氮在10立方米的室内瞬间蒸发，可使空间氧气突然降到13％，造成空间缺氧。
在此条件下，能引起人窒息乃至死亡。
三、液氮罐的种类液氮罐一般可分为贮存罐、运输罐两种。
从容量来说3L、5L、6L、10L、15L、20L、29L、30L、35L、50L、和100L、200L不等，我们常用的液氮罐有3L、５Ｌ、10L、30L,贮存罐主要用于室内液氮的静置贮存，不宜在工作状态下作远距离运输使用；其特点是储存时间长，比如10升液氮罐标准贮存时间为88天-100天；30升液氮储存罐的静止保存时间为243-293天，贮存罐当运输罐使用其贮存的时间就短，而且容易损坏；运输罐为了满足运输的条件，作了专门的防震设计。
液氮深冷箱液氮百科安全操作及保养规程
液氮深冷箱液氮百科安全操作及保养规程1. 引言液氮深冷箱是一种常用于实验室、医疗和工业领域的设备，主要用于液氮的存储和保持低温的功能。
液氮在低温下具有极高的冷却能力，但同时也伴随着一定的风险。
为了确保用户和设备的安全，本文将介绍液氮深冷箱的安全操作和保养规程。
2. 安全操作规程2.1 液氮的使用液氮是一种极低温的液体，使用时需要特别注意以下事项：•使用专用的手套、防护眼镜和面罩等个人防护装备。
•液氮具有极强的冷冻能力，避免将其直接接触皮肤。
•使用时保持充足的通风，避免在封闭的环境中使用。
•避免将液氮倒入密闭容器中，以免造成高压。
2.2 液氮深冷箱的操作液氮深冷箱的操作需要遵循以下安全规程：•在操作液氮深冷箱之前，请先熟悉设备的使用说明书，并确保设备处于良好的工作状态。
•液氮深冷箱应放置在稳定的台面上，在使用过程中避免剧烈震动。
•使用液氮深冷箱时应保持周围的干燥，避免水分进入设备内部。
•在打开液氮深冷箱时，要注意缓慢打开，避免液氮喷溅或瞬间蒸发造成的意外伤害。
2.3 废液处理在使用液氮深冷箱的过程中，产生的废液需要进行正确的处理：•废液中的氮气蒸发会造成空气中的氧气减少，导致窒息的风险。
因此，在使用液氮深冷箱时，要确保室内的通风良好。
•废液可以通过蒸发或回收的方式处理，但这些过程需要在合适的条件下进行，以免造成环境或人身伤害。
3. 保养规程3.1 定期检查设备为了确保设备的安全和正常使用，需要定期进行设备的检查和维护：•检查液氮深冷箱的密封性能，确保设备处于正常的运行状态。
•清洁液氮深冷箱的内部和外部，避免灰尘、杂质等对设备造成影响。
•检查液氮深冷箱的连接管路是否松动或老化，及时更换。
3.2 液氮的储存和管理液氮作为一种易燃易爆的物质，储存和管理需要特别注意以下事项：•液氮需存放在通风良好的地方，远离火源和明火。
•储存液氮的容器应具备耐压和密封性能，并定期进行检查。
•液氮容器应远离人员活动区域，并做好标识和防护措施。
实验室菌种的保藏方法
实验室菌种的保藏方法一、甘油悬液保藏法此法是将菌种悬浮在甘油蒸馏水中，置于低温下保藏，本法较简便，但需置备低温冰箱。
保藏温度若采用-20℃，保藏期约为0.5～1年，而采用-70℃，保藏期可达10年。
将拟保藏菌种对数期的培养液直接与经121℃蒸汽灭菌20min的甘油混合，并使甘油的终浓度在10％～15％，再分装于小离心管中，置低温冰箱中保藏。
基因工程菌常采用本法保藏。
二、冷冻真空干燥保藏法冷冻真空干燥保藏法又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。
它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。
并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。
常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。
由于此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件，因此保藏期长，一般达5～15年，存活率高，变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。
除不产孢子的丝状真菌不宜用此法外，其他大多数微生物如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等均可采用这种保藏方法。
但该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。
保藏菌种需用时，可在无菌环境下开启安瓿管，将无菌的培养基注入安瓿管中，固体菌块溶解后，摇匀复水，然后将其接种于适宜该菌种生长的斜面上适温培养即可。
三、液氮超低温保藏法液氮超低温保藏法简称液氮保藏法或液氮法。
它是以甘油、二甲基亚砜等作为保护剂，在液氮超低温（-196℃）下保藏的方法。
其主要原理是菌种细胞从常温过渡到低温，并在降到低温之前，使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来，以免膜内因自由水凝结成冰晶而使细胞损伤。
美国ATCC菌种保藏中心采用该法时，把菌悬液或带菌丝的琼脂块经控制致冷速度，以每分钟下降1℃/min的速度从0℃直降到-35℃，然后保藏在-150℃～-196℃液氮冷箱中。
液氮使用管理制度
液氮使用管理制度一、总则为规范液氮的使用与管理，保障员工的安全与健康，特制定本管理制度。
二、液氮的性质与用途1. 液氮是一种无色、无味、无臭、无毒的液态氮气。
其沸点为-196°C，是一种极低温的液体。
2. 液氮主要用于以下方面：（1）科研实验室中的冷却、冷冻实验；（2）制造业中的冷却加工和热处理；（3）医疗行业中的低温保存和冷冻治疗；（4）食品行业中的快速冷冻和保存。
三、液氮的存储与运输1. 存储要求（1）液氮应该存放在干燥、通风良好的地方，远离明火、高温和阳光直射的地方。
（2）液氮存放区域应有清晰的标识，并配备专业人员进行日常监管和巡视。
（3）存放区域开启和关闭时，应当保持谨慎，避免液氮泄漏。
2. 运输要求（1）液氮运输容器应当经过负责人员的检查合格后方可使用，并遵循标准的安全操作程序。
（2）在运输过程中，液氮容器应固定牢固，避免碰撞和颠簸。
（3）运输过程中，应避免长时间暴露在阳光下或高温环境中。
四、液氮的使用1. 使用许可（1）只有具备相应资格和培训的员工，才能获得液氮的使用许可。
（2）所有准备使用液氮的员工必须接受相关的安全操作培训，并通过考试合格后才能取得许可。
2. 安全操作程序（1）在使用液氮时，必须戴着合适的防护手套、护目镜和护腿，以防止对皮肤或眼睛的损伤。
（2）在液氮的操作过程中，应遵守与液氮有关的安全规程，并确保设备与容器的完好无损。
（3）严格禁止使用液氮进行玩笑或不当操作，以免造成伤害。
3. 液氮的排放与处理（1）液氮的排放应遵守相关的规定，并在安全通风的地方进行。
（2）在液氮使用结束后，必须将容器及时关闭，避免液氮泄漏。
（3）若液氮泄漏，应立即采取应急措施，将周围人员疏散并通知相关部门进行处置。
五、液氮设备的维护与检修1. 周期性检查（1）液氮设备应定期检查和维护，保证其安全可靠运行。
（2）设备每日使用完毕后，必须进行设备清洁与检查，记录并上报存在的问题。
2. 设备维护（1）设备维护过程中，必须由经过培训的专业人员进行，禁止未经授权的人员私自动工。
真空管道液氮冷冻技术规范
真空管道液氮冷冻技术规范
低温液体真空管道为多层缠绕绝热双层管，内管和外管均为304不锈钢材料。
主要用于输送液氧、液氮、液氩、液体二氧化碳、液化天然气等低温液体。
产品结构紧凑，现场连接方便，真空保温性能好，使用寿命长。
低温液体真空管道：
由内管和外管组成（材料均为304）不锈钢，
内管和外管之间的夹层用绝热材料包扎几十层后抽真空，
管道输送介质：
液氧，液氮，液化天然气，液氩。
使用须知
1、特别注意：
在设备使用期间时，应确保管道上面的安全阀为开启状态，气体通过阀处于开启状态。
2、设备操作人员熟悉《高真空多层绝热低温液体管道规程》中的相关规定。
3、次使用时，液氮管道上的放空阀开启放空一定时间，
等到管道内达到低温了放空口放出了液氮时关放空阀，管道正式投入使用。
4、液氮管道投入正常使用时，应确保管道上面的安全阀为关闭状态，
气体通过阀处于安全状态，防止外界空气进入管道内，防止管道内结冰和霜。
液氮超低温速冻机工艺
液氮超低温速冻机工艺液氮超低温速冻技术是一种先进的、绿色的冷却技术，特别适合于可靠性要求高、时间要求短、储存需求大的产品，如水果、蔬菜、肉类等制品。
液氮超低温速冻技术有利于在短时间内实现产品的超低温速冻，保持产品的品质和保鲜，是食品加工、保存和运输过程中必不可少的技术。
液氮超低温速冻技术的工作原理：借助运用液氮的超低温，采用速冻的技术，以缩短水分子的变性过程，将产品中的水分子冻结而成固体。
在这个过程中，可以达到超低温，并保持产品的新鲜度与品质，从而达到防止产品腐烂、质量变质的效果，延长产品的保质期。
液氮超低温速冻技术可以大大减少质量问题，可以有效改善产品的整体品质，以节省费用和提高效率。
通过液氮超低温速冻技术可以实现产品的大规模、充分冷却，从而使产品的溶解率、香料的挥发度以及其他物理和化学特性均匀分布，使其质量提高。
液氮超低温速冻技术可以有效地防止细菌滋生，延长产品的保质期，减少损耗，提高运输效率。
它还可以使产品的口感、色泽保持原样，节省了加工时间，使货物准时到达终端，从而满足顾客对便捷取货的需求。
与传统冷冻技术相比，液氮超低温速冻技术可以确保食品的新鲜度，保持更长的保质期，减少运输过程中的损失，节省时间和成本，满足越来越多消费者对鲜度和安全的要求，保持更高的可靠性和可控性。
总的来说，液氮超低温速冻技术对食品的保质期和保鲜有重要的作用。
它不仅可以有效地抑制细菌的滋生，防止食品腐败，而且可以保持食品的新鲜度，延长保质期，大大提高了食品生产加工的效率，节省时间和成本。
但是，液氮超低温速冻技术也有一定的危险性，因此工艺要求严格，操作者需要掌握相关的安全操作技术。
鉴于液氮超低温速冻技术的重要性和危险性，不仅要针对液氮超低温速冻设备进行功能调试和技术指导，而且需要对操作者进行安全培训。
做到质量可靠，技术可控，操作安全、改进效率，提高食品生产和加工的质量，满足消费者对新鲜和安全的要求。
液氮使用和临时存放管理办法
液氮使用和临时存放管理办法第一章总则第一条为进一步规范液氮使用和临时存放的安全管理，保护液氮使用人员和其他人员的人身安全，依据《氮气和液氮安全应用准则》（GJB 2253A—2008)，结合中心实际，制定本办法.第二条本办法适用于所有使用液氮的生产车间、外委单位及外来临时服务单位。
第二章组织与职责第三条使用单位主要负责人为液氮使用和临时存放安全管理第一责任人，对本单位的液氮使用和和临时存放的安全管理全面负责.第三章液氮的危险特性及现场应急措施第四条液氮危险性简介（一)低温！沸点：-196℃；（二)若遇热，容器内压增大，有开裂和爆炸的危险；（三）皮肤接触液氮可致冻伤；（四）如在常压下汽化产生的氮气过量,可使空气中氧分压下降，引起缺氧窒息；（五）吸入氮气浓度不太高时，患者最初感胸闷、气短、疲软无力；继而有烦躁不安、极度兴奋、乱跑、叫喊、神情恍惚、步态不稳，称之为“氮酩酊”，可进入昏睡或昏迷状态。
吸入高浓度,患者可迅速昏迷、因呼吸和心跳停止而死亡。
第五条现场应急措施（一)如有皮肤接触，抓紧就医治疗；（二）如现场人员窒息应立即移至空气新鲜处并施以人工呼吸;（三）遇液氮冻伤应立即撤离现场，并用大量温水(42摄氏度左右）浸泡受冻伤部位，并送医院治疗。
（四)液氮容器附近发生火灾，应及时消防灭火,并将储存容器撤离至安全区域，对不能撤离的储存容器可使用冷却水喷射到容器外壳上进行降温。
（五）如有液氮容器发生泄露，现场人员应立即撤到上风处，现场做好警戒，用排风机将泄漏气体吹到空旷处.第四章液氮使用安全管理规定第六条液氮使用场所应保持通风良好,以防液氮挥发造成使用场所氧浓度降低，对现场人员身体造成损害。
第七条液氮使用单位应制定液氮安全使用操作规程，并对液氮使用人员进行安全教育培训，经考核合格后,方可上岗。
第八条液氮使用人员应熟练掌握液氮安全使用操作规程，应熟悉氮气和液氮的特性及其危险性，掌握防护方法和急救措施.第九条液氮使用人员在使用前检查罐顶和罐体是否有水珠或结霜，罐体有无变形.如有，说明液氮罐本身有问题，禁止使用.第十条液氮使用人员在使用液氮或移动液氮罐前,必须佩带防寒手套、防砸靴等安全防护用品。
最新液氮保存菌种技术
怎么样利用液氮保藏菌种？
液超低温保藏法是把菌种装在含有冷冻保护剂的安瓶瓶内，将该安瓶瓶放人液氮（-196℃）中保藏。
由于菌丝体处于-196℃，其代谢降低到完全停止的状态。
所以不需定期移植。
液氮超低温保藏法是菌种长期保藏的最有效最可靠的方法。
具体操作如下。
（1）菌种制备菌种在PDA培养基平板上于22-24℃下培养10-15天，菌丝体充分生长后，用打孔器（直径2-4毫米）切割琼脂块，或用手术刀片把菌丝培养物切成2毫米X4毫米长方形小块。
（2）安瓶管制备安瓶管的玻璃，要能经受温度突变而不破裂，容易用火焰熔封管口，恢复培养时容易打开。
一般采用硼硅玻璃，管的大小根据需要而定，通常是75毫米X 10毫米或能容1.2毫升液体的安瓶瓶比较合适。
选好安瓶管后，用印油书写欲保藏的食用菌菌种的菌号于管壁上，160℃干热灭菌，使印记牢固地固定在管壁上。
(3)保护剂每管加进0.8毫升高压灭菌的10％的甘油水溶液或10％二甲亚讽水溶液可作为冷冻保护剂。
用无菌镊子将这种带有菌丝体的琼脂块移人加有保护剂的安瓶管中。
用火焰将安瓶管上部熔封，浸在水中检查有无漏气。
(4)液氮保藏把已做好的安瓶菌种管放人具有孔洞的小塑料瓶中（在塑料瓶的底部放一块铁片，使塑料瓶连同安瓶管能一起沉人
液氮罐中），盖好瓶盖，在瓶盖上连接一条细绳并作记号，以便提出所需的菌种。
把装有安瓶管的塑料瓶吊在液氮罐口上，使安瓶管缓慢地降温，大约30分钟后，把安瓶管浸人液氮中进行长期保存。
启用液氮罐中保存的菌种时，应先将安瓶瓶置于35-40℃的温水中，使瓶内的冰块迅速融解，然后在无菌条件下开启安瓶瓶，用接。
液氮保藏法
液氮保藏法液氮保藏法是目前保存微生物菌种最可靠的方法，多数国家级菌种保藏单位都采用此法。
1准备安培管用于液氮保藏的安培管，要求能耐受温度突然变化而不致破裂，因此，需要采用硼硅酸盐玻璃制造的安培管。
安培管的大小通常使用75×10mm的安培瓶。
2加保护剂与灭菌保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的细胞时，则将空安培管塞上棉塞，在压力0.11MPa，温度121℃条件下灭菌15min；若保存霉菌菌丝体则需在安培管内预先加入保护剂，如10%的甘油蒸馏水溶液或10%二甲亚砜蒸馏水溶液，加入量以能浸没以后加入的菌种块为限，而后再进行高压灭菌。
3接入菌种将菌种用10%的甘油蒸馏水溶液制成菌悬液，装入已灭菌的安培管；霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器，从平板内切取菌落圆块，放入含有保护剂的安培管内，然后用火焰熔封。
浸入水中检查有无漏洞。
4冻结再将已封口的安培管以每分钟下降1℃的慢速冻结至－30℃。
若细胞急剧冷冻，则在细胞内会形成冰的结晶，因而降低存活率。
5保藏经冻结至－30℃的安培管立即放入液氮冷冻保藏器的小圆筒内，然后再将小圆筒放入液氮保藏器内。
液氮保藏器内的气相为－150℃，液态氮为－196℃。
6恢复培养保藏的菌种需要用时，将安培管取出，立即放入38～40℃的水浴中进行急剧解冻，直到全部融化为止。
再打开安培管，将内容物移到适宜的培养基上培养。
此法除了适宜于一般微生物的保藏外，对于一些用冷冻干燥法都难以保藏的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞都可长期保藏，而且不易发生变异。
缺点是需要特殊设备。
关于液氮复苏样品的方法及建议：方法一：准备吸水纸两张，干净毛巾一条。
1.在地面或是桌面上铺两层干净吸水纸。
2.迅速从液氮罐中取出冻存管后，放在吸水纸上（注意一定要将冻存管放到，不要直立起来，因为直立起来的冻存管内液氮很难在短时间内挥发出来，而放平以后，液氮会快速从管缝隙中渗漏出来）3.用干净毛巾罩住冻存管样品（还是为了防止爆炸造成伤害），大约3-5min即可进行后续试验。
液氮的存放管理要求
液氮的存放管理要求液氮作为一种低温液体，在各个领域都有广泛的应用。
为了确保液氮的安全存放和管理，有一些重要的要求需要被遵守和执行。
本文将从以下几个方面详细介绍液氮的存放管理要求。
1. 存放场所选择：液氮的存放场所应选择在通风良好、干燥、无火源的地方。
应远离易燃易爆物品，并保持良好的通风条件，以防止液氮泄露后积聚到危险浓度。
2. 容器选择：液氮应存放在专用的容器中，如液氮罐。
液氮罐应具备良好的保温性能，以减少液氮的蒸发损失，并能够承受内部压力。
液氮罐应定期进行检查和维护，确保其安全可靠。
3. 容器标识：液氮容器应进行明确的标识，包括容器内液氮的种类、容量、压力等信息。
标识应清晰可见，并且容器上不得粘贴其他无关的标签或贴纸。
4. 液氮泄漏处理：一旦发现液氮泄漏，应立即采取应急措施。
首先，应迅速将泄漏源隔离，避免火源接近，并通知相关人员。
同时，应使用适当的防护装备，如防护手套、护目镜等，进行泄漏物的清理和处理。
5. 存放温度控制：液氮应存放在低温环境中，通常为零下196摄氏度。
因此，液氮存放场所的温度应严格控制在此范围内，以确保液氮的稳定性和安全性。
6. 存放数量控制：液氮的存放数量应根据实际需求和容器的承载能力进行合理控制。
不得超过容器的额定容量，并且应定期检查容器内液氮的剩余量，及时补充或处理。
7. 存放记录和管理：液氮的存放应有详细的记录和管理。
包括液氮的进货记录、使用记录、补充记录等。
同时，应建立专门的液氮管理制度，明确责任人和相应的管理流程。
8. 员工培训和安全意识：液氮的存放管理要求员工必须经过专门的培训，并具备相关的操作技能和安全意识。
员工应了解液氮的性质、危险性和应急处理措施，遵守相关的操作规程和安全操作规范。
9. 废弃物处理：液氮容器使用完毕或出现问题后，应按照相关规定进行废弃物处理。
液氮容器应进行有效清洗和处理，避免对环境造成污染。
10. 定期检查和维护：液氮存放设施和容器应定期进行检查和维护，确保其正常运行和安全使用。
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液氮超低温冻结保藏技术规范
1. 目的
规范液氮超低温冻结方法保存各类微生物菌种的操作，保证菌种长期保藏的质量和安全。
2. 范围
本规程适用于各类微生物菌种的液氮超低温冻结保存。
3. 基本原则和要求
针对接收的不同类群的微生物菌种资源，保藏中心应根据工作经验和微生物菌种提供人的建议，选择合适的冻结速度和保护剂系统，进行微生物菌种的液氮超低温冻结保存，以保证这些微生物菌种在长期保藏过程中的活性和稳定性。
4. 规程
4.1 准备冻存管
4.1.1 用蒸馏水浸泡、冲洗干净耐低温（聚丙烯）塑料冻存管，干燥后备用。
4.1.2 保藏中心应为保存菌种的每一支冻存管标注明确的标识，标签内容应至少包括菌种的保藏编号和制备批号（日期），可将保藏编号排在第一行，制备批号用连续的年月日（八位数字）表示，排在第二行，并根据冻存管的容积将标签裁成合适的大小。
保藏中心应根据标签的放置位置选择符合要求的标签材质，以确保在长期的保藏过程中，标签不会发生自然或人为的脱落、污损。
4.1.2 将准备好的标签放置于冻存管规定的位置，加入或不加入合适体积的保护剂，拧上冻存管帽，装入塑料冻存盒中，1 公斤压力蒸汽灭菌30 分钟，备用。
4.2 准备保护剂
根据需要保藏的微生物类别选择适宜的保护剂种类，按照配方配制、分装、灭菌备用。
用于保存厌氧微生物的保护剂，应除去保护剂中的溶解氧。
4.3 菌种保藏
4.3.1 无菌操作将符合质量要求的、需要保藏的菌种接种在规定的培养基上，并尽量涂满整个斜面，置最适宜的条件下培养，单细胞微生物菌种培养至对数生长期后期（静止期初期），对于放线菌和产孢丝状真菌应培养至形成成熟的孢子。
对于生物量较低的菌种，应多准备几只斜面菌种。
对于不产孢子的丝状真菌，无菌操作将需要保藏的菌种接种在规定的平板培养基上，培养时间根据菌种的生长速度确定。
4.3.2 用无菌滴管将一定体积的灭菌保护剂无菌操作注入培养好的斜面菌种试管中，并将菌苔（或孢子）轻轻刮下，吹打数次，制成细胞或孢子悬浮液。
需要液体培养的菌种，离心收集菌体后，制备菌悬液。
4.3.3 核对菌种试管上标注的菌种编号与事先准备好的冻存管标签上标注的菌种编号的一致性。
用无菌滴管将菌悬液分装进冻存管中，拧紧管帽，放入冻存盒中。
4.3.4 对于不产孢子的丝状真菌，用无菌麦管或打孔器将培养好的菌种打成直径约5mm 大小的菌片（也可用无菌解剖刀将培养好的菌种切割成小菌片），用接种针将切割好的菌片分装入准备好的冻存管中（沿菌落半径挑取菌片，每管3-5 片），拧紧管盖。
4.3.5 将装有冻存管的冻存盒放入专门的提篮架中，直接（或经过慢速/梯度降温处理后）放置进指定的液氮生物储罐（液氮冰箱）中，并记录存放位置。
4.4 质量检测
对于保藏的微生物菌种，尤其是新类型的微生物，可在保存24 小时以后，随机取出一只冻存管，按照规定程序，进行恢复培养，检查保藏菌种的存活性、存活率和纯度，记录检查结果。
保藏5 年后，可再随机取出一只冻存管检测存活及存活率，记录检查结果。
4.5 保藏菌种的恢复培养
4.5.1 根据微生物菌种的类别，准备不同温度的水浴，解冻融化保藏的菌种。
细菌、古菌，38℃水浴；真菌（包括酵母菌）：30 水浴℃；对高温敏感的真菌（如Oomycota）选择25℃水浴。
4.5.2 从液氮冰箱中取出菌种时应注意安全防护。
取出菌种之前，应带好防护手套避免人体皮肤触及液氮或超低温箱体；面部应带好防护面罩，以防安瓿管取出后，可能发生的安瓿管内液氮极速气化导致的安瓿管爆炸伤及面部。
4.5.3 从液氮冰箱中取出菌种冻存管后，应立刻放入准备好的水浴中，轻轻摇动，使冻结安瓿管在最短的时间内快速、完全融化。
4.5.4 用70%乙醇脱脂棉球消毒安瓿管外壁。
开启安瓿管，用无菌吸管吸取全部菌悬液（或用接种针移植安瓿管中的菌块），移植于适当的培养基试管（或培养皿）中，在规定的条件下培养。
污染等。