兽药残留样品前处理技术
汇总｜兽药残留检测前处理类型
汇总｜兽药残留检测前处理类型由于兽药残留种类繁多、在样品中残留水平低、基质复杂、干扰物质多等，使样品前处理技术，即分离纯化技术成为兽药残留分析的重点和难点。
目前，兽药残留的样品前处理方法主要有液液萃取、固相萃取、固相微萃取、免疫亲和色谱、分子印迹、超临界流体萃取、基质固相分散技术、微波辅助萃取、凝胶渗透色谱和超声波辅助提取等。
液液萃取液液萃取(liquid-liquid extraction， LLE)是利用待测物在两种互不相溶(或微溶)的溶剂中分配系数的不同而达到分离纯化的目的，是兽药残留分析中一种常用的前处理技术。
有国外学者将肉类样品用乙腈除蛋白，正己烷脱脂后，加乙酸乙脂液液萃取，利用超高效液相色谱串联质谱技术对肉中的24 种磺胺类药物残留进行了测定。
也有学者等运用液液萃取结合低温纯化技术作为前处理技术，测定了牛奶中大环内酯类抗生素，得到了良好的回收率。
液液萃取对实验条件和仪器要求不高，但操作繁琐、有机溶剂消耗大，污染严重，逐渐被一些新的前处理方法所取代。
固相萃取固相萃取(solid phase extraction， SPE)是目前兽药残留检测中最为常用的一种样品前处理技术。
它是利用固体吸附剂将样品中目标化合物吸附，使其与样品基质及干扰化合物分离，再用洗脱液洗脱下来从而达到分离和富集的目的。
固相萃取技术由于具有操作简单快速、消耗有机溶剂少、样品回收率高、易于自动化等优点，在样品前处理中得到广泛应用。
目前，固相萃取技术已可用在磺胺类、四环素类、阿维菌素类、氯霉素类、喹诺酮类、激素类、β -受体激动剂等多类兽药残留的定量分析中。
有学者采用固相萃取结合液相色谱方法测定了鸡肉组织中的喹诺酮类药物。
对比了Oasis HLB，Oasis MAX， SDB-RPS 三种不同填料固相萃取柱的萃取效率，最终得出SDB-RPS 填料的固相萃取柱的萃取效果最好。
固相微萃取固相微萃取(solid phase microextraction， SPME)技术是20 世纪90 年代兴起的一项新颖的样品净化富集技术，属于非溶剂型选择性萃取法。
鸡蛋中兽药多残留ELISA检测统一前处理技术优化及应用
分析检测鸡蛋中兽药多残留ELISA检测统一前处理技术优化及应用伍宏凯1，贾晶莹2，姜传黎3，贾良曦2*（1.广东省农产品质量安全中心，广东广州 510230；2.北京维德维康生物技术有限公司，北京 100095；3.湖北跃莱生物科技有限公司，湖北武汉 430100）摘 要：目的：建立一种适用于鸡蛋中莫能菌素、大观霉素、利巴韦林和多西环素快速检测的统一前处理技术。
方法：基于药物的回收率与基质效应，优化筛选样品统一前处理过程中乙腈体积、磷酸浓度及PBS浓度和pH值，确定鸡蛋样本兽药多残留统一前处理方法，并评价统一前处理条件下兽药多残留检测的准确度和精密度，比较优化前处理方法与试剂盒前处理方法检测结果。
结果：优化后前处理组合条件为采用6 mL乙腈、100 μL 15%磷酸进行药物提取，pH值7.0的0.05 mol·L-1 PBS作为样品稀释液，鸡蛋中药物残留回收率为82.18%～114.79%，批内RSD低于10%，批间RSD低于15%。
与试剂盒前处理方法相比，最终检测结果无显著性差异（P＞0.05）。
结论：本研究优化的前处理方法具有操作简单、检测时间短、结果可靠性高等优点，为鸡蛋中多种兽药残留的快速检测提供了可靠的前处理方法。
关键词：鸡蛋；兽药多残留；前处理Optimisation and Application of a Unified Pre-Treatment Technique for Elisa of Multi-Residues of Veterinary Drugs in Eggs WU Hongkai1, JIA Jingying2, JIANG Chuanli3, JIA Liangxi2*(1.Guangdong Agricultural Products Quality and Safety Centre, Guangzhou 510230, China; 2.Beijing WDWK Biotechnology Co., Ltd., Beijing 100095, China; 3.Hubei Yuelai Biotechnology Co., Ltd., Wuhan 430100, China) Abstract: Objective: To establish a unified pre-treatment technique suitable for the rapid detection of monensin, spectinomycin, ribavirin and doxycycline in eggs. Method: Based on the recovery and matrix effect of each drug, the volume of acetonitrile, the concentration of phosphoric acid and the concentration and pH of PBS during the unified pre-treatment of screening samples were optimized to determine the unified pre-treatment method for multi-residues of veterinary drugs in egg samples. The accuracy and precision of the multi-residue assay of veterinary drugs under unified pre-treatment conditions were evaluated, and the optimised pre-treatment method was compared with the kit pre-treatment method. Result: The optimized pre-treatment combination conditions were: 6 mL of acetonitrile, 100 μL of 15% phosphoric acid were used for drug extraction, and 0.05 mol·L-1 PBS at pH 7.0 was used as the sample diluent solution, the recoveries of the drug residues in eggs ranged from 82.18% to 114.79% with intra-batch relative standard deviation (RSD) lower than 10% and inter-batch RSD lower than 15%. Compared with the pre-treatment method of the kits, there was no significant difference in the final assay results (P＞0.05). Conclusion: The unified multi-residues pre-treatment method established in this study has the advantages of simple operation, short detection time and high reliability of results, which provides a reliable pre-treatment method for the rapid detection of multiple veterinary drug residues in eggs.Keywords: egg; multi-residue veterinary drugs; pre-treatment我国禽产品产量连续20年位居世界第一，蛋品生产量占全世界总量的43%，但出口量却远远低于作者简介：伍宏凯（1980—），男，广东湛江人，本科，兽医师。
兽药残留测定样品的预处理(精)
二、取样
准确称取3份粉碎成肉糜的牛肉样品2±0.05g于50mL具塞离心管中，记录数据；举手示意，由裁判在样品中统一加入混合抗生素标准溶液。
三、提取
准确移取20.0mL磷酸盐缓冲液在每份已称量好的牛肉样品中；将离心管置于漩涡振荡器上，中速振荡5min；用空离心管和纯化水在托盘天平上进行配平，然后高速离心（10000r，5min）；将上清液倒入25mL烧杯中，以备过柱用。
《畜产品检测技术》单项技能实训指导书
实训项目名称
实训目的
1.熟练掌握固相萃取装置萃取样品
2..熟练规范操作移液管，并会使用涡旋器涡旋样品
一、样品前处理
样品前处理是指样品的制备和对样品中的待测组分进行提取、净化和浓缩的过程。样品前处理的目的是消除基质干扰，保护仪器，提高检测方法的灵敏度、选择性、准确度、精密度。
四、净化
将固相萃取柱在固相萃取仪上安装好，用5mL的刻度吸管分两次、每次吸取3.0mL共6.0mL的甲醇活化，再用5mL的刻度吸管分两次、每次吸取3.0mL共6.0mL的水进一步活化；取离心所得上清液5.0mL过柱；用水2.0mL清洗，挤干；用流动相2.0mL洗脱；并用5mL试管收集洗脱液；用2mL的一次性注射器吸取洗脱液，并将收集的洗脱液过0.22μm有机系膜，直接装在样品瓶中，做好标记，供色谱测定。
动物源性食品中兽药多残留快速检测技术及精确质量数据库的建立
动物源性食品中兽药多残留快速检测技术及精确质量数据库的建立一、本文概述随着畜牧业的快速发展，兽药在动物源性食品生产中的应用日益广泛，兽药残留问题逐渐凸显，对食品安全和人体健康构成了潜在威胁。
建立一种快速、准确的兽药多残留检测技术，并构建精确的质量数据库，对于保障动物源性食品的安全性和提升兽药监管水平具有重要意义。
本文旨在探讨动物源性食品中兽药多残留快速检测技术的研究进展，并阐述精确质量数据库的建立方法与应用价值。
文章首先综述了目前国内外兽药多残留检测技术的现状和发展趋势，包括免疫分析法、色谱法、质谱法等多种检测方法的优缺点和适用范围。
在此基础上，文章重点介绍了几种新型的快速检测技术，如基于纳米材料的检测技术、生物传感器技术等，这些技术具有快速、灵敏、高通量等优点，为兽药多残留检测提供了新的思路和方法。
本文还详细阐述了精确质量数据库的建立过程，包括数据采集、数据处理、数据存储和数据挖掘等方面。
通过整合各种兽药残留数据，建立全面、准确、可靠的兽药残留数据库，为兽药监管和食品安全风险评估提供有力支持。
文章对兽药多残留快速检测技术和精确质量数据库的建立进行了展望，认为未来应加强技术创新和跨学科合作，推动兽药残留检测技术的进一步发展和完善，为保障动物源性食品的安全性和促进畜牧业的可持续发展做出更大贡献。
二、动物源性食品中兽药多残留问题的现状与挑战随着养殖业的快速发展，动物源性食品中兽药多残留问题逐渐凸显，成为全球性的食品安全难题。
兽药多残留不仅会对动物和人类健康产生直接危害，还会影响生态环境安全。
建立快速、准确、灵敏的兽药多残留检测技术及精确质量数据库至关重要。
目前，动物源性食品中兽药多残留问题的现状严峻。
一方面，养殖过程中为预防和治疗动物疾病，大量使用抗生素、激素等兽药，导致兽药残留问题日益严重。
另一方面，一些不法养殖者为了追求经济利益，滥用兽药，甚至使用违禁药物，进一步加剧了兽药多残留问题。
由于兽药种类繁多，不同药物之间的残留代谢规律复杂，也给兽药多残留检测带来了巨大挑战。
兽药残留分析中样品前处理方法综述
兽药残留分析中样品前处理方法综述张俊升*，谭梅，杨建鸣，王琼，李良（云南省兽药饲料检测所，云南昆明650021）摘要：样品前处理方法是兽药残留分析的保障，文章介绍了八种目前国内常用的前处理方法：超声波辅助提取、超临界流体萃取、固相萃取、固相微萃取、微波辅助萃取、基质固相分散、加速溶剂萃取、免疫亲和色谱。
现代兽药残留分析方法通常包括样品前处理和测定方法两部分，测定技术是核心，而样品前处理方法是保障。
样品前处理的好坏直接影响到分析的各项指标、成本和效率，占用了将近70％的分析工作量。
兽药残留分析样品的前处理包括提取与净化。
提取是将样品中的目标物溶解分离出来的操作步骤，根据兽药的性质、样品种类、实验条件，可选用的常规提取方法有振荡法、索氏抽提法等。
由于某些样品组成复杂，提取后往往还需经过净化步骤以达到待测物与干扰杂质分离，净化的基本原理主要为液-液作用、液-固作用、液-气作用及化学反应。
柱层析法是最常用的净化方法之一，层析柱填料一般为弗罗里硅土、氧化铝以及活性炭。
经典的样品前处理方法不仅操作繁琐、费时，提取与净化效率低，容易引入误差，且需要使用大量有毒溶剂，另外由于对被测目标物质的最低检出限要求越来越低，其目标物质的稳定性也在随时间发生变化，这给分析测试带来了一定困难，因此亟需发展简单、快速、有效的样品前处理方法。
目前，为适应多种类大批量样品的快速分析，样品前处理的手段在不断更新，并且也逐渐向仪器化、自动化方向发展。
近年来发展较快的方法主要有超声波辅助提取(Sonication-assisted Extraction,SAE)法、超临界流体萃取(Supercritical Fluid Extraction,SFE)法、微波辅助萃取(Microwave Aided Extraction,MAE、固相萃取(Solid Phase Extraction,SPE)、固相微萃取(Sol-id-Phase M icroextraction,SPM E)等方法。
兽残分析中样品的采集、保存、制备与前处理技术及方法建立步骤
生鲜样品取样后应在0℃～4℃条件下24小时内 送达检测单位。
运输工具应保持清洁无污染。 防止贮存地点和装卸地点可造成的污染。
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1.4 样品制备
又称为样品预处理，主要指采样后至化 学分析前试样的准备工作。不属于化学 分析过程，仅是采样工作的继续。
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1.4.2 制样程序
领取样品:从相关部门领取需要制备的样品，观察样品 是否完好，如有腐败、变质、破损等非正常情况，应 及时向发样部门反映，并停止制样，保存样品。如样 品完好，则可开始制备样品。
制备样品:根据样品性质、状态，选择适当的制备方法 制备样品。
填写制样单:样品制备完毕后，应认真填写制样单，记 录制样过程，制样单的内容包括：样品名称、样品状 态、制样时间、制样间温度等。
动物数量（样本数，只）抽样数（个）
1000
1
10015000
3
500110000
5
10000
8
15
1.1.8 蜂蜜加工厂（场）取样
批量（件） ＜50 50－100 101－500 ＞501
最低取样数（件） 5 10 每增加100，增取5 每增加100，增取2
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1.1.9 市场样品采集
鲜肉 若成堆产品，则在堆放空间的四角 和中间设采样点，每点从上、中、下三 层取若干小块混为一份样品；若零散产 品，则随机从3～5片胴体上取若干小块 混为一份样品。每份500～1500克。
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填写采样单的注意事项
采样单填写的内容应真实、详实； 应采用黑色钢笔或签字笔填写，字迹清
楚，不潦草，不得涂改； 采样单应填写完整，在采样人一栏至少
兽药残留检测技术
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3、激素与其他生长促进剂
(1)性激素
动物生产中使用的性激素,包括雌性激素(如:雌二醇、己 烯雌酚(己烷雌酚、甲地孕酮、雌烯酮等)和雄性激素(如: 甲基睾丸酮、丙酸睾酮、氯睾酮)。
(2)生长激素
是由动物脑垂体分泌的天然蛋白质激素,主要通过促进蛋 白质合成和脂肪分解来促进动物生长,增加瘦肉率,提高 饲料转化率。目前在畜牧业生产中使用的主要有牛生长 激素(BST)和猪生长激素(PST)。
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残留毒理学意义较大的兽药按其用途分类主要包括: 抗生素类、合成抗菌素类、抗寄生虫类药、生长促进剂
和杀虫剂等。 抗生素和抗菌素统称抗微生物药物,是最主要的兽药添加
剂和兽药残留,约占药物添加剂的60%。
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(4)影响食品动物组织中药物残留的因素
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(8)多烯类：两性霉素、制霉菌素等。 (9)磺胺类及抗菌增效剂： 磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、
磺胺异唑、磺胺甲基异唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲 氧嘧啶等。 (10)硝基呋喃类：呋喃西林、呋喃他酮、呋喃要因、呋 喃唑酮等。 (11)喹诺酮类：萘啶酸、吡哌酸、嗯喹酸、诺氟沙星、 环丙沙星、奥比沙星、沙拉沙星、马波沙星等。
我国已开始重视动物性食品中的兽药残留问题,制订了各 种兽药残留的法律和法规,修订了《动物性食品中兽药残 留最高限量标准》,并开始建立了全国范围的兽药残留监 控体系。
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第六章 兽药残留检测技术
第二节 样品前处理
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样品前处理是指样品的制备和对样品中的待测组分进行 提取、净化、浓缩的过程。
水样、土样、植物样品、奶样及肉类样品的常规农药残留前处理技术
1.水样、土样、植物样品、奶样及肉类样品的常规农药残留前处理技术包括那些步骤，指出不同样品前处理技术的差异性？答：水样、土样、植物样品、奶样及肉类样品的常规农药残留前处理技术包括以下步骤：(1)提取技术：水样可直接用溶剂提取或用吸附剂吸附后提取。
土样、作物及动物组织的提取方法：振荡浸取法：将样品切碎后加入适当溶剂，在振荡器中通过一定时间的振荡浸泡，而将农药残留提取出来的方法；组织捣碎法：将样品放入捣碎机中，加入适当的提取剂后高速捣碎，使溶剂与细微试样反复紧密接触的提取方法；消化法：主要用于动物组织样品，用消化试剂将样品组织破坏分解后，再用溶剂提取检测成份的方法；索式提取器提取：将样品放入提取器中，用适当的提取溶剂连续提取检测成分的方法；超声波提取法：快速、且操作简便；提取仅需数十秒至几分钟的时间；酸消化法：高氯酸和冰醋酸混合液（1：1）；碱消化法：乙醇钾（10%氢氧化钾乙醇溶液）；消化试剂的用量为样品量的2-3倍。
酸消化的控制温度为80-90度，碱消化要求比酸消化调节严格，消化温度在65度，消化时间控制在30分钟；消化法：只适用于动物性组织样品的处理，不适合于含淀粉较多样品的残留分析。
(2)浓缩技术常用的浓缩方法：自然蒸发法；通气（空气或氮气）吹出法；仪器浓缩法。
前两种只适用于体积小、易挥发的样品。
K-D浓缩器：特点：目前最广泛使用的一种方法；省去了定溶这一步；使用比较方便。
使用中要注意的问题：提取液仅能加到K-D瓶的1/3高度，不能过高；水浴温度一般不超过80℃旋转蒸发器：使用注意事项：样品不能浓缩干；操作步骤一定要小心。
如关机时，首先关闭旋转开关，然后握住圆底烧瓶的颈，再打开真空开关。
否则容易损害仪器。
(3) 净化技术净化概念：从待测样品提取液中将农药与杂质分离开并除去杂质的步骤。
杂质：脂肪、蜡质、色素、有机酸和糖等。
净化方法：液-液分配法、柱层析法、吹蒸法、磺化法、薄层色谱法等。
施用于作物上的农药，其中一部分附着于作物上，一部分散落在土壤、大气和水等环境中，环境残存的农药中的一部分又会被植物吸收。
动物源性食品中兽药多残留分析的前处理技术
兽药 多 残 留 分 析 是 以一 次 分 析 过 程 同时 获 得 多 种 （ 类） 物
ｔ ｉ ｒ ｅ 、 Ｒ ｕ ｇ ｇ ｅ ｄ 、 Ｓ ａ ｆ ｅ ） ｄ — Ｓ Ｐ Ｅ 与 ＭＳ Ｐ Ｄ 的 区 别 是 吸 附 剂分 散 于样 品 提 取 液 而不 是 样 品 基 质 中进 量 信 息 尽 管 多 残 留分 析 在 效 率 和成 本 方 面
分 析 需 要 发 展 高 效 的 样 品 前 处 理 方 法 和 高 通 量 性 的检 测 技 术 。 由 于 色谱 一质 谱 联 用技 术在 多残 留的 定 性 、 定 量 分析 中 ， 样 品 前 处 理 过 程 是 整 个 分析 环 节 最重 要 的 部 分 ．前 处 理 的 过 程 合 理 是
样 品 中 的 目标 化 合 物 与 干 扰化 合 物 分 离 ，达 到 分 离 和 富 集 目标 化 合 物 的 目的 。兽 药残 留 的 国标 方 法 中 ， 很 大 一 部 分 方 法 均选 择 使用Ｓ Ｐ Ｅ方 法对 样 品进 行 前 处 理 ．用 Ｓ Ｐ Ｅ处 理过 的样 品 可 满足 液 相 色 谱 ．质 谱 方 法 的 要 求 ．是 使 用 频 率 最 高 的 前 处 理 方 法 之
选择性 吸附、 选 择 性 洗 脱 的方 式 对 样 品 进 行 富 集 、 分离、 纯化， 是
一
种 包 括 液 相 和 固相 的物 理 萃 取过 程 ．利用 固体 吸 附 剂 将 液 体
大比例 ， 在分析 通量、 成本 、 准 确 性 和 适 用 性 方 面 显 示 了 突 出优 势 动 物 源 性 样 品 基 质 复 杂 、 兽 药 残 留浓 度 很 低 ， 以 多残 留 方 式
十 分有 吸 引 力 ． 但 是需 要 解 决 不 同 理 化 性 质 物 质 的 同时 提 取 、 净
水产品兽药残留检测技术
水产品兽药残留检测样品前处理技术
2、提取方法 均浆提取法；震荡法；索氏提取法（考虑热 稳定性，适合水分少如饲料样品，水产品组 织要和海砂或无水硫酸钠一起研磨成干粉）； 超声波提取（SAE，空化作用，增加溶解， 时间不能长，发热）；超临界流体萃取 （SFE），强化溶剂萃取（ASE）和微波辅 助萃取（MAE）
1、提取溶剂的选择
乙腈，甲醇，丙酮与样品容易结合，溶剂化作用和 渗透能力强，粘度小，提取速度快，能使结合态的 药物释放，提取的同时脱蛋白脱脂，PH值可调，待 测物分布均匀。但提取的杂质较多，进一步萃取乳 化严重，效果相似，甲醇提取液的杂质最高。“万 能溶剂”DMSO沸点高极少用。 在酯溶性的残留物中，采用非水溶性极性溶剂，乙 酸乙酯，氯仿，二氯甲烷，乙醚。 加无水硫酸钠，盐析提高回收率。干样（含水小 10%）加水增强提取。
内标工作方式：
在每个样品、标准和空白中加入 测定到每个样品中内标的响应 根据实际测定内标响应值与预期内标响应值的比值 来校正其他化合物的信号 用分析信号和内标的比作标准曲线或乘校正因子或 除内标回收率 计算未知样品的分析信号和内标的比值并从标准曲 线中读出信号
建立液质定量分析方法 3、内标选择
水产品兽药残留检测样品前处理技术 3、净化方法
固相萃取（SPE）
采用固相萃取小柱作为分离媒介，小柱中添加了不 同填料的固定相，以键合硅胶为基质的C18、NH2、 COOH、PSA、SAX等，是硅胶的表面活性大为降 低，最大程度的降低了极性化合物的不可吸附和拖 尾，使样品回收率和重现性得到保障；以高分子聚 合物为基质的如PEP、HXN、PAX、PCX等，具 有高纯度、高比表面的特点；以吸附型填料为固定 相的如硅酸镁、氧化铝等，主要通过表面的极性吸 附达到分离的目的。因此，固相萃取法适用于各种 极性的化合物
兽药残留检测样品前处理技术概要
三、分子印迹技术( MIT )
MIT在兽药残留分析领域已开始起步, 已成为该领域的一个新发展方向。 分子印迹聚合物( MIP) 对印迹分子具有高度选择性。研究者以氯霉素为模
板分子, 甲基丙烯酰胺为功能单体, 乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂, 采
用分子印迹技术, 通过光引发聚合制备了氯霉素分子印迹聚合物。结果表 明, 印迹聚合物较相应的非印迹聚合物对氯霉素的吸附速度更快, 吸附富 集性能更高, 光聚合较热聚合更好, 该分子印迹聚合物有望开发为新型固 相萃取材料, 可用于复杂生物样品中残留氯霉素的选择性富集净化过程。
免乳化现象并可实现自动动物性产品兽药残留样本处理过程大为简化, 自动化SPE 的使用真正实现了 样本残留的在线分析。随着SPE 技术逐步成熟, 其在动物性产品兽药残留检测 样本处理技术中将处于主要地位。
二、免疫亲和色谱(IAC)
IAC是利用连接有特异性抗体的基质做填料的一种固相萃取技术。 IAC的高选择性和高效性无疑使样本前处理大大简化，通常一次层析 即可使待测物得到高度净化和富集，并提供了待测物的定性信息； IAC可以与高效液相色谱法、气相色谱法等联合应用，使得更为高效、 灵敏和准确。
样本分离纯化技术
样品纯化是将待测物与提取液中的样本干扰杂质分离。前处理中纯
化的工作量最大, 但一个具有强大分离效能或高选择性检测能力的测定
体系可大大提高纯化的能力。兽药残留分析中常用的净化方法除经典的 液-液分配外, 还有固相萃取、免疫亲和色谱技术和分子印迹技术。
一、固相萃取( SPE)
SPE为近年发展起来的一种微量样品处理技术，主要用于复杂样品中微量或 痕量目标化合物的分离、纯化和浓缩。与传统的液-液萃取相比，它能显著减少 溶剂用量，减少样品预处理过程，加快样品处理速度, 消除某些干扰杂质，避
兽药残留检测技术
兽药残留检测技术
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二、食物中兽药残留
(1)兽药残留
兽药残留是指动物产品任何食用个别所含 兽药母体化合物及其代谢物，以及与兽药 相关杂质残留。
兽药残留检测技术
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(2)兽药残留起源
在食品动物体内或动物性食品中发觉违章残留, 大都是由用药错误造成,其原因主要有:
①不正确地应用药品,如用药剂量、给药路径、用 药部位和用药动物种类等不符适用药指示,这些 原因有可能延长药品残留在体内时间,从而需要 增加休药天数;
⑧任意以抗生素药渣喂猪或其它食品动物等滥用 抗生素,是出现抗生素残留主要原因。
兽药残留检测技术
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(3)兽药残留种类(形式)
第一类是以游离或结合形式存在原药及其主要代谢物 (除高亲脂性化合物外),因代谢和排泄快速,不会在动物体 内蓄积。但这些物质可能含有毒性作用,而且被人摄入后 在体内可生成高度活化中间产物(亲电子基团、自由基 等),因而对消费者含有潜在危害性。
肌浆蛋白(肌红蛋白、糖解酶)可溶于水,肌原蛋白(肌球蛋 白、肌动蛋白)溶于浓盐水,胶原蛋白和弹性蛋白(结缔组织) 在上述溶剂中均不溶。
兽药残留检测技术
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不一样种类动物食物组成和肌肉成份,如家禽和牛肌红蛋 白和脂肪含量存在差异,这些改变会影响分析方法回收率 或干扰检测,所以一个动物组织残留分析方法对其它动物 组织样品不一定适用。
兽药残留检测技术
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兽药危害
引发过敏、致畸、致突变及致癌等不良反 应。
兽药残留检测技术
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立法
为预防动物性食品中可能出现药品残留损害人体健 康,1984年在CAC提倡下由联合国粮农组织(FAO)和世界 卫生组织(WHO)联合发起组织了食品中兽药残留立法委 员会(CCRVDF)。
兽药残留检测样品前处理技术概要
兽药残留检测技术
兽药残留检测
概Байду номын сангаас
述
兽药残留分析是复杂混合物中痕量组分的分析技术，无论筛选性分
析或确证性分析, 残留分析都需要精细的微量操作手段和高灵敏的痕
量检测技术。目前在兽药残留分析领域所取得的重要进展或发展趋势 主要有：样品分离纯化技术的简单化、微型化和自动化, 提高了提取 或净化效率及自动化水平；在定量分析上的新技术如毛细管电泳、免 疫分析技术、生物传感器、各种联用技术等。
免乳化现象并可实现自动化，很有取代传统液-液萃取的趋势。SPE技术的出现
使动物性产品兽药残留样本处理过程大为简化, 自动化SPE 的使用真正实现了 样本残留的在线分析。随着SPE 技术逐步成熟, 其在动物性产品兽药残留检测 样本处理技术中将处于主要地位。
二、免疫亲和色谱(IAC)
IAC是利用连接有特异性抗体的基质做填料的一种固相萃取技术。 IAC的高选择性和高效性无疑使样本前处理大大简化，通常一次层析 即可使待测物得到高度净化和富集，并提供了待测物的定性信息； IAC可以与高效液相色谱法、气相色谱法等联合应用，使得更为高效、 灵敏和准确。
样本分离纯化技术
样品纯化是将待测物与提取液中的样本干扰杂质分离。前处理中纯
化的工作量最大, 但一个具有强大分离效能或高选择性检测能力的测定
体系可大大提高纯化的能力。兽药残留分析中常用的净化方法除经典的 液-液分配外, 还有固相萃取、免疫亲和色谱技术和分子印迹技术。
一、固相萃取( SPE)
SPE为近年发展起来的一种微量样品处理技术，主要用于复杂样品中微量或 痕量目标化合物的分离、纯化和浓缩。与传统的液-液萃取相比，它能显著减少 溶剂用量，减少样品预处理过程，加快样品处理速度, 消除某些干扰杂质，避
农残检测的样品采集和前处理方法
个对顶角的三角形； 5、任取其中两个三角形为样本； 6、将剩下的样本再混合均匀，再按以上方法 反复分取；直至最后剩下的两个对顶角三角 的样品接近所需试样重量为止。
二、样品处理原则
样品处理原则
① 小的或轻的样品 → 用四分法缩分成
1、样品的缩分 ②水和其他液体样品；过滤去除漂浮物、沉淀物和 泥土。一般最后预处理的液体样品体积为1000ml。 ③土壤 土壤样品先出去其中石块、动植 物残体等 杂物。超过5%，应该记录杂物质量。采用四分法缩分、 粉碎、过20目筛，最后预处理的样品重量为250-500g。
三、检测样品的采集和预处理
（二）、萃取装置
索氏萃取装置和K-D浓缩器
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3、残留农药的提取
1、索氏提取器 2、捣碎法：组织捣碎机；匀浆器 3、振荡法 4、超声波法 5、消化法
四、不同样品中残留农药的提取
1、水样 2、气体样品 3、植物和动物样品 4、土壤样品
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3、残留农药的浓缩技术
1、旋转蒸发法
（2）、采集量及采样部位
① 按照表2-2确定采样部位及采样量 ② 土壤样品采集0-15cm耕作层，每小 区设5-10个采样点，采样量不少于1kg。 ③ 水样多点取样约5000ml混匀后取 1000-2000ml
二、商品检验样品的采集
（1）、抽样 商品检测样品抽样必须按照国际或相关国家 规定。
① 认定抽样的总体，从总体中选择并取 出正确的总样品，将每一总样本减少到能能 满足分析技术要求的最低值。 （2）、采集
水相和絮状物
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（三）、液-液萃取步骤（3）
有机相
兽药残留的检测方法
兽药残留的检测方法
兽药残留的检测方法包括：
1. 高效液相色谱法：将样品中的兽药残留物通过柱子分离，然后使用UV或荧光检测器检测。
2. 质谱法：使用质谱仪检测样品中的兽药残留物，可检测出更低浓度的残留物。
3. 酶联免疫吸附试验法：利用特定的抗体对兽药残留物进行检测，可以进行多重残留的检测。
4. 光谱学方法：使用紫外光谱、红外光谱、拉曼光谱等方法对样品中的兽药残留物进行检测。
5. 火焰原子吸收光谱法：对样品进行预处理后，使用火焰原子吸收光谱仪进行检测。
6. 电化学法：利用电化学传感器对兽药残留物进行检测，具有灵敏度高、实时性好等优点。
兽残分析中样品的采集、保存、制备与前处理技术及方法建立步骤
1.1.11 抽样单填写
样品编号：格式为[动物品种代码]/[样 品种类代码]/[抽样日期]。 例：2001年7月10日抽取的牛肝样品第一 份，其编号为：B/L/010710-1。
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23
代码
动物 牛 品种 代码 B 羊 O 猪 P 鸡 C 肾 K 兔 R 鱼 F 蜂蜜 Be
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2 样品前处理
2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 概述 提取方法 净化方法 浓缩与富集 化学衍生化技术
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32
2.1 样品处理-概述
目的:将待测组分从样品基质中分离出来，并 达到仪器能够检测的状态。 主要作用包括:将药物从样品中释放出来、除 去样品中的干扰杂质、将待测组分转换为可检 测的形式、达到可检测的浓度范围和溶于可进 行分析的介质。 主要包括四项基本内容：提取、净化、浓缩、 衍生化。 分离或组分转移是贯穿整个样品处理过程的基 本问题：液-液萃取、固相萃取
200-500克 (取6只鸡全肝) 400-500克 (取5只兔全肝)
双肾各取1/2 （纵切）
6只鸡全肾 5只兔全肾
200克
50-100克 (6只鸡脂肪) 5只兔脂肪
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9
1.1.6 养殖场抽样数量
猪、羊（尿样、血液） 动物数量（样本数） 50 51100 抽样数（个） 5 8
1.3 样品保存运输
为确保被分析物的稳定性和样品的完整性，采 集的样品应由专人妥善保存，并在规定的时间 内送达检测单位。 取样后冻肉样应在冷冻状态下保存，蜂蜜： 10℃，禽蛋：0～4℃，牛奶：2～6℃条件下储 存。 生鲜样品取样后应在0℃～4℃条件下24小时内 送达检测单位。 运输工具应保持清洁无污染。 防止贮存地点和装卸地点可造成的污染。
兽残分析中样品的采集、保存、制备与前处理技术及方法建立步骤
8
1.1.5 一个组织样品的组成
动物 牛 羊 猪 鸡 兔
肌肉 300-500克 300-500克 300-500克 300-500克 300-500克
3
1.1.1 抽样的基本原则
严格按照规定的程序和方法执行，确保 抽样工作的公正性和样品的代表性、真 实性。
4
1.1.2 人员
抽样人员不少于2人 抽样人员应经过专门的培训，具备相应
资质。 抽样人员应携带身份证、工作证、单位
介绍信、抽样单等文件。
5
1.1.3 工具
肉类：不锈钢刀具、自带封口的食品卫生塑料 包装袋、低温样品保存箱（盒）、一次性手套、 标签、盛放微生物检验用样品的灭菌容器等。
17
鸡蛋
按批次分别在货件不同部位随机抽样 在50件以内者，抽检2件； 50至100件者，抽检4件； 101至500件者，每增加50件增抽1件（所
增不足50件者，按50件计）； 500件以上者，每增加100件增抽1件（所
增不足100件者，按100件计算）。
18
1.1.9 市场样品采集
液体乳品 一般可采用虹吸法，或者用简 单的玻璃管按不同深度分层取样。对于 黏稠或含有固体悬浮或非均匀乳品应充 分搅匀，然后再进行取样。总量应不少 于500克。
蜂蜜 心 Hb H
鸡 兔 鱼 蜂蜜
C R F Be 肾 血液 尿液 蛋
KB 肺脑
UE 皮肤 毛发
Lu C S Ha
采样单填写
样品名称：所取样品的种类及部位。例：血样，全肝，背脊肉等。 动物品种：所取样品动物的名称。 年 龄：牛、羊按年计，猪按月计，兔、鸡按日计。 抽样基数：抽样当天的出栏率（养殖场）、屠宰量（屠宰厂）、
兽药残留分析前处理技术
于 处 理 样 品 且 可 实现 样 品净 化 和 富 集 自动 化 。 弱 点 ： １ 易 将 共 存 干 （）
扰 物萃 取 出来 ， 其 富集 倍数 有 限 ； 但 （ ）部 分 Ｓ Ｅ技 术 可 使 待 测 组 分 通 ２ Ｐ
用 多种 分 离 方 法 进 行 设 计 ，其 基 本 过 柱 后 被 净化 但 不能 富 集 待 测组 分 ，
中 微 量 或 痕 量 目标 化 合 物 的 分 离 、 纯 化 和 浓 缩 ，其 目的在 于 降 低 样 品
基 质 干 扰 ， 提 高 检 测 灵 敏 度 。Ｓ Ｅ Ｐ
体 固相 萃 取 材 料 与样 品 一 起 研 磨 所 得 到 的 半 干 状 态 的混 合物 作 为 填 料
装 柱 ， 后 采 用 类 似 Ｓ Ｅ的 方 法 ， 然 Ｐ
缺 点 ：由于 填 料 物 质 是 Ｃ ８ 这 使 １，
该技 术 的应用 受到 限制 。 （ ）固 相 微 萃 取 固 相 微 萃 取 三 （Ｐ ） Ｓ ＭＥ 的原 理是 利 用 待测 物 在基 体
、
样 品 的前 处 理
样 品 的 前 处 理 包 括 提 取 和 净 化 干 扰 组分 和 回收 待测 组 分 四个 部 分 ，
相 涂 层 ，待 吸 附 平 衡 后 ，再 与 气 相 色谱 （Ｃ 或高效 液相色谱 （ Ｌ ） Ｇ ） ＨＰ Ｃ
联 用 以分 离 和 测 定 待 测 组 分 ，该 技 术 排 除 了 Ｓ Ｅ需 要 使 用柱 填 充物 和 Ｐ 使 用 有 机 溶 剂 进 行 洗 脱 的 缺 点 ，它
兽药残留分析前处理技木
余华 ’ ，叶腱强 ，严 玉宝 ’ ，谢晶 ，胡娟 ’ ，廖党金 ，周岷江 ’ ，崔鹏 博 ’ （ １四川出入境 检验疫局 ，四川成都 ６１ ０ １； ． Ｉ ０ ４ Ｉ Ｊ 省畜牧科学研 究院，四川成都 ６ ０ ６ ） ２ＮＩ １ ０ ６
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克仑特罗 莱克多巴胺 沙丁胺醇 特布他林
R1
R2
R3
R4
-Cl -H -CH2OH -OH
尿样
尿液的主要成分是水、尿素及盐类。 在所有体液样品中，尿样最容易获得，
并且样品最多，内含药物（母体药物
及代谢物）浓度高；正常尿液中仅含 微量蛋白质，不需要去蛋白处理。 尿中药物大多呈结合状态，主要以 葡萄苷酸和硫酸酯结合物存在，因 此无论直接测定或萃取分离之前， 都必须将结合态的药物水解，使药 物游离处理。
胞裂解、提取、净化等过程，不需要进行组织匀浆、沉淀、离心、pH调节和 样品转移等操作步骤，避免了样品的损失。
超临界流体萃取
超临界流体具有类似气体的较强穿透力和类似于液体的较大密度和溶 解度，具有良好的溶剂特性，可作为溶剂进行萃取、分离单体。
固相微萃取
固 相 微 萃 取 （ SPME ）
与固相萃取原理相似，其基 本原则也是“相似相溶原
酶水解
β- 葡糖苷酸酶可专门水解药物的葡萄糖醛酸苷， 芳基硫酸酯酶和磷酸酯酶分别水解药物的硫酸酯 和磷酸酯。也可用几种酶的混合物，将生物样品 中药物的葡萄糖醛酸酐及硫酸酯同时水解。
除蛋白质
蛋白质
生物样品如肝脏、肾脏、血浆等含 有大量的蛋白质，它们能结合药物， 因此对于某些药物检测，必须先将
与蛋白质结合的药物游离之后再作
基质固相分散技术
基质分散固相萃取（MSPD，matrix solid-phase dispersion），其原 理是将涂渍有C18等多种聚合物的担体固相萃取材料与样品一起研磨，得到半 干状态的混合物并将其作为填料装柱，然后用不同的溶剂淋洗柱子，将各种
待测物洗脱下来。其优点是浓缩了传统的样品前处理中的样品匀化、组织细
酸水解通常使用无机酸（盐酸），至于加入 盐酸的浓度、酸化时间以及是否需要加热等， 随药物性质而异，但最终应通过实验确定。
酸水解
有的药物的结合物则必须采取较剧烈的条件，如 加入 3 mol/L 盐酸溶液后还必须煮沸 1h ，水解后 的样品呈强酸性，必要时可用碱液调整 pH后再进 行萃取。
酶水解是专属性很强的水解结合物的方法。 通常使用的水解酶是β-葡糖苷酸酶、芳基硫 酸酯酶、磷酸酯酶等。
进一步处理。
去蛋白原理
除蛋白过程是将蛋白质变性处理后， 把与蛋白质结合的药物解离出来，离 心分离出去蛋白。通常除蛋白的方法 是在含蛋白样品中加入适当的沉淀剂 或变性剂，使蛋白质脱水而沉淀（如 有机溶剂、中性盐），有的是由于和 蛋白质形成不溶性盐而析出（如一些 酸类：三氯乙酸、高氯酸、磷酸、苦 味酸）
洗脱
3mL（乙酸乙酯/甲醇/5mL氨 水， 50:45:5 ）洗脱
浓缩
洗脱液在45℃下氮气吹干，加入1mL0.1%甲酸溶液溶解残 渣，样液过0.22μ m滤膜后，上机。
HPLC-MS/MS测定
02
样品预处理
Sample Pretreatment
结合物水解
Lorem ipsum dolor sit amet consectetur adipisicing elit
常用的结合物水解的方法有酸水 解和酶水解
药物在体内经第二相代谢反应之 后，常形成葡萄糖苷酸、硫酸酯 及磷酸酯等结合物。以结合状态 存在的药物多存在于尿中，但也 存在于肝脏、肌肉及血液中。
有机溶剂沉淀剂
甲醇与蛋白形成絮状沉淀易于离心分离，得到澄清的上清液；乙腈与蛋白形成致密沉 淀，易离心除去，沉淀效率较甲醇高。使用时应加入足量的沉淀剂，通常加入量为样
品体积的1.5～2倍。
酸沉淀剂
常用的酸性沉淀剂有三氯乙酸和高氯酸，其 它还有钨酸、钼酸、磷钨酸、磷钼酸和苦味 酸等。酸性沉淀剂能同蛋白质的阳离子形成 不溶性盐而沉淀，必要的条件是溶液的pH要
基体复杂
各目标化合物 性质差异大
01
02
残留浓度低
03
04
检测限越 来越严格
样品类型
SAMPLE TYPES
兽药残留分析中，最常用的生物样品是组织样品和禽蛋，其
次是奶、血液和尿液样品。
动物组织
肌肉中水分约占75%，蛋白
质（肌浆蛋白、肌原蛋白、胶原 蛋白和弹性蛋白）占 19% ，脂肪
（中性脂肪、脂肪酸和磷脂）占
理”，主要依据分析物质的
分子量（挥发性）与极性。 纤维头上的薄膜由极性的聚 丙烯酸酯、聚乙二醇，或非 极性的聚二甲硅氧烷组成。
04
实例分析
Analysis of Example
SN/T 1924-2011
进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴 胺、沙丁胺醇和特布他林残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法
免疫亲和色谱
液-液萃取
01
可一次进行多个样品的萃取
通过萃取可将被测组分自大量内源性物
质中分离出来，减少杂质对测定的干扰
04
可将萃取液蒸发，使组分富集
经典
02
操作简单快速、经济实用
03
液-液萃取常用的有机溶剂有甲醇、乙腈、丙酮、氯仿、二氯甲烷、四 氯化碳、乙醚、叔丁基甲醚、乙酸乙酯、苯、甲苯、正己烷。
与蛋清相比较，蛋黄基本上为疏水性环境， 低极性药物的残留较多。如果需要分别测 定蛋黄和蛋清中的残留，最好将刚产出后 的蛋分离蛋黄和蛋清，避免药物由蛋黄向
蛋清扩散。
奶样
牛奶的含水量约 87% ，蛋白质（以酪蛋白为主）为 3.3% ，脂肪（甘油三酯）为 3.7%，糖类（乳糖）为4.7%，以及一些无机盐、维生素和酶类（过氧化物酶、脂肪酶 等）。 奶中还含有大量由酪蛋白或脂蛋白构 成的束胶体系，当酸化或加热时，束胶结 构解体，蛋白质沉淀析出。非解离性的或 极性较低的药物易由血浆向奶中扩散，导 致奶中残留。与血浆样品类似，奶中的药 物可与蛋白结合。
8000r/min离心5min，收 集上清液，加入20mL正己 烷，振荡脱脂
12000r/min离心5min，下 层水相过滤，待净化
净化
活化
依次用3 mL甲醇、3mL水和 3mL 0.1mol/L盐酸水溶液活化 依次用3mL 0.1mol/L盐酸水溶
洗涤
液、3mL水、3mL50%甲醇水 溶液和3mL正己烷洗涤
对络合物脂溶性越高。
阴离子药物配对的离子对试剂主要为烷基季铵类化合物，
阴离子药物
可用通式R4N+·X-表示，X-可为酸根或氢氧根，R为烷基。
烷基碳链长度常用 C4~C12 ，甚至可选用 C20，碳链越长， 则生成的离子对络合物的脂溶性越高。
固相萃取（SPE）
吸附目标物
吸附杂质
Ⅰ
Ⅱ
固相萃取是一种基于色谱分离的样品前处理方法。固相萃取包括固相（具 有一定官能团的固体吸附剂）和液相（样品及溶剂）。液体样品在正压、 负压或重力的作用下通过装有固体吸附剂的固相萃取装置。由于固体吸附 剂具有不同的官能团，能将特定的化合物吸附并保留在SPE柱上。
-NH2 -OH -OH -H
-Cl -H -H -OH
-C(CH3)3 -C(CH3)3 -C(CH3)3
提取
称取5g试样，添加50μ L内 标工作液，加入20mL乙酸 铵缓冲溶液（pH5.2），均
01
加入40μ Lβ-葡萄糖醛苷酶/
质1min
02 03 04
芳基硫酸酯酶，混匀，37℃ 酶解16h。
1
2
3
4
溶剂的极性
溶剂的沸点
溶剂的毒性
与水的互溶性
根据相似相溶原理， 极性组分易溶于极性 溶剂，反之亦然，应 根据被测组分的极性 选择相似极性的溶剂
萃取分离后的有机相 通常需要旋蒸至干， 因此萃取溶剂的沸点 就不应接近或高于水 的沸点，否则挥发困 难
使用对人体有害的萃 取溶剂时，应在通风 橱内进行
有的溶剂如乙醚，萃 取后可混入大约 1.2% 的水分，因此伴随带 入一些水溶性杂质
一些酸性或碱性较强的有机药物在体液中呈离解状态，成为亲水性较强的带电离子， 即使控制pH也不能抑制它们的电离，不能用有机溶剂将其自体液中提取出来。
阳离子药物配对的离子对试剂则为阴离子，其中以烷基
阳离子药物
磺酸类（RSO3H）为最常用，实际起配对作用的是其阴 离子（ RSO3- ）， R 为烷基，其碳链越长，生成的离子
2.5% ，糖类占 1.2% ，以及一些 无机盐、维生素和酶类。肌浆蛋
白（肌红蛋白、糖解酶）可溶于
水，肌原蛋白（肌球蛋白、肌动 蛋白）溶于浓盐水，胶原蛋白和
弹性蛋白（结缔组织）在上述溶
剂中均不溶。
禽蛋
禽蛋包括蛋黄和蛋清。蛋黄的含水量约 50% 、 蛋 白 质 16.5% 、 脂 肪 33% 、 糖 类 0.2% ， 以 及 一 些 无 机 盐 、 维 生 素 和 酶 类 （淀粉酶、脂肪酶、磷酸酶、肽酶和过氧 化 氢 酶 ） 。 蛋 清 含 水 量 达 88% ， 蛋 白 质 10.5%和极少量的碳水化合物和脂肪。
目录
01 02 03 04
概述 样品预处理
提取与净化
实例分析
01
Introduction
概述
概述
提取
01
净化
02
浓缩
03
样品前处理是指样品的制备和对样品中的待测组分进行提取、净化和浓 缩的过程。样品前处理的目的是消除基质干扰，保护仪器，提高检测方 法的灵敏度、选择性、准确度、精密度。
残留分析特点
低于蛋白的等电点。
盐沉淀剂
一些无机盐如硫酸铵、硫酸钠 和氯化钠等，能使蛋白质胶体 脱水并中和其电荷，使蛋白质
LOREM IPSUM
失去胶体性而沉淀下来。无机
盐中以硫酸铵最常用。
03