BCA蛋白浓度测定试剂盒完整
BCA蛋白浓度测定试剂盒
BCA蛋白浓度测定试剂盒产品编号产品名称包装价格P0012 BCA蛋白浓度测定试剂盒500次258.00 元O 碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。
O 灵敏度高，检测浓度下限达到25微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1-20微升。
O 在50-2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
O BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20, 60, 80。
但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于1mM。
不适用BCA法时建议使用碧云天Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
O BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质详细的兼容性表，参见BCA蛋白浓度测定兼容性表。
O 每个试剂盒可以检测500个样品。
包装清单：BCA试剂A 100 mlBCA试剂B 3 ml蛋白标准（5mg/ml BSA） 1 ml说明书 1 份保存条件：BCA试剂A和B室温保存，蛋白标准请-20℃冻存。
本试剂盒自订购之日起一年注意事项：O 需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。
需96孔板。
如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但是测定蛋白浓度时，需根据测定吸光度的杯子的体积，按比例调整A液,B液和样品的体积。
使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
O 如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
O 为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。
O EDTA浓度必需小于10mM，不兼容EGTA。
不适用BCA法时，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明书
在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。
4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。
包装及保存
BCA试剂A70ml室温保存
BCA试剂
B1.4ml室温保存
蛋白标准
C0.5ml-20C保存(5mg/1ml BSA)
本试剂盒自订购xx一年内有效。
大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂
SDS TritonX-100,Tween不影响检测结果，但受螯合剂（EDTA EGTA）还原剂
（DTT巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背 景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。该产品不受此影响，因此与 之配合使用，可免除您实验中的许多烦恼。
大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂SDS，TritonX-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂（EDTA，EGTA、）还原剂 （DTT巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背 景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。该产品不受此影响，因此与 之配合使用，可免除您实验中的许多烦恼。
使用说明
1.配制工作液:
根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B
(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。
2.稀释标准品：
取10微升标准品用PBS稀释至100微升(标准品一般可用PBS稀释)，使 终浓度为
0.5mg/ml。将标准品按0, 1,2, 4, 8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白标准 品孔中，力口PBS补足到20微升。
碧云天 BCA蛋白浓度测定试剂盒
BCA蛋白浓度测定试剂盒产品编号产品名称包装P0012 BCA蛋白浓度测定试剂盒 500次产品简介：¾BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。
¾灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。
¾在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
¾BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。
但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于0.01%。
不适用BCA法时建议试用碧云天生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(P0006)。
¾BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质的详细的兼容性，请参见碧云天如下网页:/Compatibility Chart For BCA Kit.pdf¾每个试剂盒可以检测500个样品。
包装清单：产品编号产品名称包装P0012-1 BCA试剂 A 100mlP0012-2 BCA试剂 B 3mlP0012-3 蛋白标准(5mg/ml BSA) 1ml—说明书1份保存条件：BCA试剂A和B室温保存，蛋白标准请-20℃冻存。
本试剂盒自订购之日起一年内有效。
注意事项：¾需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。
需96孔板。
如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液的用量使不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。
P0012S BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书
使用说明：
1. 取0.8ml蛋白标准配制液加入到一管蛋白标准(20mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白标准溶液。配制后可立即 使用，也可以-20℃长期保存。
2. 取适量25mg/ml蛋白标准，稀释至终浓度为0.5mg/ml。例如取20l 25mg/ml蛋白标准，加入980l稀释液即可配制成 0.5mg/ml蛋白标准。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS 稀释标准品。稀释后的0.5mg/ml蛋白标准也可以-20℃长期保存。
15. Zong-Chun Yi, Hong Wang, Guang-Yao Zhang, Bing Xia. Downregulation of connexin 43 in nasopharyngeal carcinoma cells is related to promoter methylation. Oral Oncol. 2007 Feb 14;
注: 也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反 应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。 7. 测定A562，540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
常见问题：
1. 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。 可能的原因是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质，详细的BCA法的兼容性列表请参考碧云天如下网页: /Compatibility Chart For BCA Kit.pdf
9. Le-Feng Zhang, Shuang-Qing Peng, Sheng Wang. Influence of lead (Pb2+) on the reactions of in vitro cultured rat aorta to 5-hydroxytryptamine. Toxicology Letters 159 (2005) 71–82.
BCA试剂盒说明书
BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书
二. 分光光度计法
如没有酶标仪，可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。
步骤如下：
1.配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工
作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。
BCA工作液室温24小时内稳定。
2.稀释标准品：取100微升BSA标准品用PBS稀释至1ml（样品一般可用PBS稀释），使终浓
度为0.5mg/ml。
3.取八支（或者更多）5ml离心管，标让号，按下表加入试剂。
4.37℃放置15-30分钟。
用分光光度计测562nm处吸光值，根据标准曲线计算出蛋白浓度。
BCA蛋白定量
BCA蛋白定量试剂盒配制及内部操作SOP一、BCA试剂盒配制流程1、标准品配制：配制2mg/ml的BSA标准品，以50ml为例，各成分加入量如下表：原料浓度加入量（mg）厂家货号牛血清白蛋白（BSA）0.2%100北京（二楼生产部提供）YSCW2500氯化钠（NaCl）0.9%450国药集团化学试剂有限公司10019308叠氮化钠0.05%25成都金山化学试剂有限公司/注意：为了确保检测的准确性，应用微量天平精准称量100mg，然后定容至50ml，1ml/管分装，4℃保存。
2、工作液配制由于A液和B液加入比例为50:1，因此配制工作液时A液各成分加入量按照1000ml配制量加入，B液成分按照25ml配制量加入。
原料浓度加入量（g）厂家货号A液（1000ml）二喹啉甲酸（BCA）1％10aladdin B107658无水碳酸钠2％20天津博迪化工股份有限公司/碳酸氢钠0.95%9.5国药集团化学试剂有限公司10018960酒石酸钠0.16% 1.6国药集团化学试剂有限公司30169818氢氧化钠0.4％4国药集团化学试剂有限公司10019762B液（25ml）硫酸铜4％1国药集团化学试剂有限公司81005261备注：A液各成分混合之后，调节PH至11.25。
二、BCA法蛋白定量操作SOP1、标准品稀释按照下表制备一组蛋白质标准品。
将一安瓿的牛血清白蛋白标准品（BSA）稀释到几个干净的小瓶中，最好使用与待测样品相同的缓冲液。
每一个1mL安瓿的2mg/mL牛血清白蛋白标准品足够用于制备下表中所列出的任意一组稀释范围的标准品；每个稀释浓度的标准品的体积足够用于3次重复检测。
用于标准方案的稀释方法（检测范围=20-2,000ug/mL）如下：标准液编号稀释液体积（ul）标准品体积（ul）标准液终浓度（ug/ml）A03002000B125375ul的A1500C325325ul的A1000D175175ul的B750E325325ul的C500F325325ul的E250G325325ul的F125H400100ul的G25I40000用于试管增强方案的稀释方法如下（检测范围=5–250ug/mL）：标准液编号稀释液体积（ul）标准品体积（ul）标准液终浓度（ug/ml）A700100250B400400ul的A125C450300ul的B50D400400ul的C25E400100ul的D5F400002.样品稀释：根据需要，将样品用用PBS或者与待测样品缓冲液相同的溶液稀释至线性范围内（所用稀释液与标准品稀释液应保持一致）。
BCA蛋白浓度测定-酶标仪法
BCA法测定蛋白浓度-酶标仪一、药品1.BCA蛋白浓度测定试剂盒（P0012，500次酶标仪，碧云天），含以下成分：a)BCA试剂A（P0012-1，100ml，碧云天），室温保存b)BCA试剂B（P0012-2，3ml，碧云天），室温保存c)蛋白标准（5mg/ml BSA）（P0012-3，1ml，碧云天），-20度保存二、仪器和试剂1.酶标仪（测定波长为540-595nm之间，562nm最佳），水浴锅2.96孔单条可拆酶标板（平底）3.15 ml 离心管1个（准备BCA工作液用）4. 1.5 ml 离心管1个（准备蛋白标准品工作液用）5.单道移液器和枪头，8道移液器（排枪）和枪头6.PBS三、操作步骤1.水浴锅调至37℃。
2.蛋白标准品工作液（1 mg/ml）的配制：将蛋白标准品（5mg/ml）从-20℃冰箱中取出，完全溶解并混匀。
取60μl 蛋白标准品（5mg/ml），加入240μl PBS，即稀释5倍，即配成蛋白标准品工作液（1 mg/ml）。
3.计算BCA工作液总量= 0.2 ml×（样本数+8）×2×1.1（标准品和样本均需测复孔）。
BCA工作量按50体积的BCA试剂A加上1体积的BCA试剂B配制（即50:1），需充分混匀。
BCA 工作液室温24小时内稳定。
4.按下表配制8个蛋白标准液（S0~S7），充分摇匀。
5.将96孔酶标板的A1孔放在左上角，按下表加入蛋白样本和标准品。
（1）先在第3~4条酶标板的蛋白样本孔（N 1~N8）中加入待测蛋白样本各2μl，再用排枪在蛋白样本孔中追加PBS液各18μl，使总量达到20μl。
（此时蛋白样本的稀释比为10，适用于预计蛋白浓度为2~8mg/ml时。
如预计蛋白浓度太高或太低，可适当调整稀释比例）（2）再在第1~2条酶标板的蛋白标准品孔（S0~S7）中加入上面配制的8个蛋白标准液各20μl。
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12A S0 S0 N1 N1B S1 S1 N2 N2C S2 S2 N3 N3D S3 S3 N4 N4E S4 S4 N5 N5F S5 S5 N6 N6G S6 S6 N7 N7H S7 S7 N8 N86.用排枪在各孔中加入200μl BCA工作液，轻轻摇匀，37℃放置30分钟或室温放置2小时。
BCA蛋白浓度测定试剂盒完整版
BCA蛋白浓度测定试剂盒说明23225蛋白质化验试剂盒：为500试管或5000微孔板的检测提供充足的试剂23227蛋白质化验试剂盒：为250试管或2500微孔板的检测提供充足的试剂试剂盒组分：BCA 试剂A，1000 mL (No. 23225产品中) 或500mL ( No. 23227产品中)，碳酸钠，碳酸氢钠，二喹啉甲酸，酒石酸钠溶于0.1 M氢氧化钠中。
BCA 试剂B , 25 mL, 包括4%硫酸铜一次性标准白蛋白, 2mg/ mL, 10 × 1 mL 安瓿, 包含2 mg/ mL牛血清白蛋白(BSA) 存在于0.9% 盐和0.05%叠氮化钠中。
储存：以上试剂保持在室温下储存和装运注意：如果试剂A 或试剂B 在低温下运输或长期储存时出现沉淀现象，可以通过缓慢加温或轻轻搅拌溶液使沉淀物溶解。
当试剂变色或确定微生物污染时请丢球试剂盒。
目录介绍 (1)准备标准试剂和工作试剂 (2)准备试管 (3)准备微型版 (3)故障检修 (4)有关美国热电其他产品 (5)附加信息 (5)参考文献 (6)介绍美国热电（Thermo）公司的BCA蛋白浓度测定试剂盒是基于二喹啉甲酸(BCA)通过比色检测和定量测定总蛋白的洗涤剂兼容配方。
该方法通过碱性介质中的一种蛋白结合了Cu2使其显著减少转变为Cu1 （缩二脲反应）。
用一种含二奎琳甲酸的试剂选择性的比色法高敏感的比色杯中的Cu1. 这种测定方法的紫色色反应产物是通过BCA的两个分子和亚铜离子螯合作用形成的。
这种水溶性复合物在562nm 处有强吸收峰。
在大的活性范围内(20-2000µg / mL）几乎同蛋白浓度增加呈线性关系。
BCA 法不是真正的终点的方法；也就是说，最终颜色继续发展。
孵化之后, 继续的颜色发展速度是足够慢以允许一起进行测定大量样本。
大分子结构的蛋白质,肽键的数量和存在的四个特定氨基酸(半胱氨酸,胱氨酸，色氨酸和酪氨酸)据说是与BCA形成颜色产物的原因。
BCA测蛋白浓度
BCA蛋白浓度测定
一.原理BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCAProteinAssayKit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。
检测浓度下限达到25微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1～20微升。
二.试剂盒组份组份Cat:KGPBCA（250assay酶标板/50assay1mL比色杯）蛋白标准溶液
（0.5μg/μL）5mLBCA试剂A25mL×2BCA试剂B1mL
）
工作液，
积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。
四.注意事项
1.配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。
2.加入BCA工作液后，也可以在室温放置2小时，或60℃放置30分钟。
BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。
并且显色反应会因温度升高而加快。
如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。
3.待测样品浓度在50～2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
4.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的TritonX-100，5%的Tween20,60,80。
但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于1mM.不适用BCA法时建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
5.操作时要带手套。
五、储存
BCA试剂A和BCA试剂B室温保存，蛋白标准液-20℃冻存。
BCA蛋白浓度测定-酶标仪法
.酶标仪BCA法测定蛋白浓度-一、药品500次酶标仪，碧云天），含以下成分：BCA蛋白浓度测定试剂盒（P0012，1. 100ml，碧云天），室温保存试剂A（P0012-1，a)BCA ，碧云天），室温保存P0012-2试剂B（，3mlb)BCA 度保存P0012-3，1ml，碧云天），-20c)蛋白标准（5mg/ml BSA）（二、仪器和试剂最佳），水浴锅酶标仪（测定波长为540-595nm之间，562nm1. 孔单条可拆酶标板（平底）2.96 1个（准备BCA工作液用）3.15 ml 离心管个（准备蛋白标准品工作液用） 1.5 ml 离心管14. 道移液器（排枪）和枪头5.单道移液器和枪头，8PBS 6. 三、操作步骤℃。
1.水浴锅调至37℃冰箱中取出，）的配制：将蛋白标准品（5mg/ml）从-202.蛋白标准品工作液（1 mg/ml倍，即配μl PBS，即稀释5完全溶解并混匀。
取60μl 蛋白标准品（5mg/ml），加入240 成蛋白标准品工作液（1 mg/ml）。
BCA。
2×1.1（标准品和样本均需测复孔）BCA计算工作液总量= 0.2 ml×（样本数+8）×3.BCA需充分混匀。
50:1），体积的BCA试剂B配制（即试剂工作量按50体积的BCAA加上1 24工作液室温小时内稳定。
S0~S7），充分摇匀。
4.按下表配制8个蛋白标准液（0.2 20 D 80S30.3 S4 7030E0.4 S5 F 40 600.5 G 50 50S61.00S7100H5.将96孔酶标板的A1孔放在左上角，按下表加入蛋白样本和标准品。
（1）先在第3~4条酶标板的蛋白样本孔（N 1~N8）中加入待测蛋白样本各2μl，再用排枪在蛋白样本孔中追加PBS液各18μl，使总量达到20μl。
（此时蛋白样本的稀释比1 / 2.时。
如预计蛋白浓度太高或太低，可适当10，适用于预计蛋白浓度为2~8mg/ml为调整稀释比例）个蛋白标准液S0~S7）中加入上面配制的8）（2再在第1~2条酶标板的蛋白标准品孔（。
BCA蛋白浓度测定试剂盒
BCA蛋白浓度测定试剂盒产品编号产品名称包装价格P0012 BCA蛋白浓度测定试剂盒500次258.00 元O 碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。
O 灵敏度高，检测浓度下限达到25微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1-20微升。
O 在50-2000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
O BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20, 60, 80。
但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于1mM。
不适用BCA法时建议使用碧云天Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
O BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质详细的兼容性表，参见BCA蛋白浓度测定兼容性表。
O 每个试剂盒可以检测500个样品。
包装清单：BCA试剂A 100 mlBCA试剂B 3 ml蛋白标准（5mg/ml BSA） 1 ml说明书 1 份保存条件：BCA试剂A和B室温保存，蛋白标准请-20℃冻存。
本试剂盒自订购之日起一年注意事项：O 需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。
需96孔板。
如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但是测定蛋白浓度时，需根据测定吸光度的杯子的体积，按比例调整A液,B液和样品的体积。
使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
O 如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
O 为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。
O EDTA浓度必需小于10mM，不兼容EGTA。
不适用BCA法时，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)使用指南
BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)使用指南BCA蛋白定量试剂盒(Thermo)使用指南1.简介BCA蛋白定量试剂盒是一种用于测定蛋白质浓度的试剂盒。
该试剂盒采用双硫键还原法，可以通过比色法快速、准确地测定样品中的蛋白质浓度。
本使用指南将详细介绍BCA蛋白定量试剂盒的使用方法和相关注意事项。
2.实验前准备2.1 试剂准备根据试剂盒的说明书，准备好所需的试剂物品，包括BCA试剂、标准品、还原缓冲液、洗涤缓冲液等。
2.2 样品准备将需要测定的样品进行处理和提取，并根据实验要求进行稀释。
确保样品无杂质和干扰物，以免影响测定结果。
3.样品处理3.1 样品加标准曲线制备将已知浓度的标准品按照一定比例加入到已处理好的样品中，制备出一系列浓度梯度的样品。
3.2 样品处理步骤按照试剂盒说明书的要求，逐步进行样品处理，包括样品还原、洗涤等步骤。
确保每个步骤的操作正确，以获得准确的测定结果。
4.比色测定4.1 样品吸光度测定使用紫外-可见分光光度计测定各个标准品和待测样品的吸光度值。
记录吸光度值，以备后续计算使用。
4.2 绘制标准曲线将各个标准品的浓度与吸光度值进行统计和计算，绘制出标准曲线。
通过标准曲线，可以计算出待测样品的蛋白质浓度。
5.结果分析根据标准曲线计算出待测样品的蛋白质浓度，并进行结果统计和分析。
6.结论根据实验结果得出结论，并对实验过程中出现的问题进行总结和改进。
附件：1.BCA蛋白定量试剂盒说明书2.实验记录表格法律名词及注释：1.BCA蛋白定量试剂盒：BCA全称为Bicinchoninic Acid，是一种常用于蛋白质浓度测定的试剂盒。
2.双硫键还原法：一种用于将蛋白质中的二硫键还原为巯基的方法，常用于蛋白质结构研究和蛋白质定量实验中。
3.比色法：一种通过物质吸收或散射光线的特性，根据吸光度或透过率的变化来测定物质浓度的方法。
全文结束 \。
BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明书
产品简介
蛋白质定量是蛋白质研究的基础工作之一。博奥森开发的BCA蛋白质检测试剂(bicinchonic acid)是理想的蛋白质定量方法;是当前比Lowry法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。该方法以快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小而倍受专业人士的青睐。BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂SDS，TritonX-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。该产品不受此影响，因此与之配合使用，可免除您实验中的许多烦恼。
基本原理
碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
主要特点
1.准确xx,线性xx:
BCA试剂的蛋白质测定范围是10－2000ug/ml；
2.快速：45分钟内完成测定，比经典的Lowry法;还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
主要特点
1.准确xx,线性xx:
BCA试剂的蛋白质测定范围是10－2000ug/ml；
2.快速：45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。
3.经济实用：
在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。
4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。
BCA蛋白定量试剂盒使用说明书
BCA蛋白定量试剂盒使用说明书一、产品简介BCA 蛋白定量试剂盒是一种常用的、准确且灵敏的蛋白质定量方法。
它基于双缩脲反应，并在碱性条件下，蛋白质将 Cu²⁺还原为 Cu⁺，Cu⁺与 BCA 试剂形成紫色络合物，在 562nm 处有最大光吸收值。
该试剂盒具有操作简便、稳定性好、灵敏度高、线性范围宽等优点，适用于各种蛋白质样品的定量测定。
二、试剂盒组成1、 BCA 工作液 A：＿____2、 BCA 工作液 B：＿____3、蛋白标准品（浓度为_____）：＿____4、 96 孔板：＿____三、所需设备及试剂1、分光光度计或酶标仪（能够测定 562nm 波长）2、移液器（量程包括20μL、200μL、1000μL）3、涡旋振荡器4、离心机5、去离子水或超纯水四、操作步骤1、标准曲线的绘制（1）将蛋白标准品用去离子水或超纯水稀释成一系列不同浓度的标准溶液（如0μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL、1000μg/mL）。
（2）在 96 孔板中，分别加入25μL 不同浓度的标准溶液。
（3）向每个孔中加入200μL BCA 工作液（A 液与 B 液按照_____的比例混合），轻轻振荡混匀。
（4）将 96 孔板在 37℃下孵育 30 分钟。
（5）使用分光光度计或酶标仪在 562nm 处测定各孔的吸光度值。
（6）以蛋白浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品测定（1）将待测蛋白样品用去离子水或超纯水适当稀释。
（2）取25μL 稀释后的样品加入 96 孔板中。
（3）按照与标准曲线绘制相同的步骤，加入 BCA 工作液，孵育并测定吸光度值。
五、计算样品蛋白浓度根据所测样品的吸光度值，在标准曲线上查出对应的蛋白浓度。
然后乘以样品的稀释倍数，即可得到样品的原始蛋白浓度。
六、注意事项1、实验过程中应避免使用含有 Triton X-100、SDS 等去污剂的溶液，因为这些物质会干扰 BCA 反应。
BCA法蛋白含量测定试剂盒说明书
货号：MS3202 规格：100管/96样BCA法蛋白含量测定试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定，测定意义：样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。
此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
测定原理：碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将Cu2+还原成Cu+；2分子的BCA与Cu+结合，生成紫色络合物，在540-595nm有吸收峰，562nm处吸收峰最强。
自备实验用品及仪器：台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂A：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂B：液体0.4mL×1支，4℃保存。
标准品：液体2mL×1支，4℃保存。
工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.2mL），将试剂A和B按照50：1 的比例混合，盖紧后充分混匀。
样品中可溶性蛋白质提取：1.液体样品：澄清液体样品可以直接测定。
2.组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水）冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。
3. 细菌、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定操作：1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到562 nm，蒸馏水调零。
第1页，共2页计算公式：Cpr (mg/mL)= C标准品×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）=0.5×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）Cpr (mg/g 鲜重)= C标准品×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）÷ W =0.5×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）÷ WW: 样本质量，g注意事项：BCA法蛋白含量测定试剂盒，适用于测定蛋白浓度在20-5000μg/ml样品。
P0010 BCA蛋白浓度测定试剂盒_增强型_
使用本产品的部分文献：
1. Liu MJ, Wang Z, Li HX, Wu RC, Liu YZ, Wu QY. Mitochondrial dysfunction as an early event in the process of apoptosis induced by woodfordin I in human leukemia K562 cells. Toxicol Appl Pharmacol. 2004 Jan 15;194(2):141-55.
9. Le-Feng Zhang, Shuang-Qing Peng, Sheng Wang. Influence of lead (Pb2+) on the reactions of in vitro cultured rat aorta to 5hydroxytryptamine. Toxicology Letters 159 (2005) 71–82.
12. Huang YY, Deng JY, Gu J, Zhang ZP, Maxwell A, Bi LJ, Chen YY, Zhou YF, Yu ZN, Zhang XE. The key DNA-binding residues in the C-terminal domain of Mycobacterium tuberculosis DNA gyrase A subunit (GyrA). Nucleic Acids Res. 2006;34(19):5650-9.
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)
应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。 7. 测定A562，540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
常见问题：
1. 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。 可能的原因是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质，详细的BCA法的兼容性列表请参考碧云天如下网页: /Compatibility Chart For BCA Kit.pdf
5. 刘军 丁劲 薛采芳 李英辉 宫卫东 赵亚 黄豫晓。 带有蛋白转导域的靶向核糖核酸酶对乙型肝炎病毒复制的影响。 中华肝脏病杂志2004年第6期第377页。
6. Zhong-shu Liang , Kan Yang and Ben-mei Chen. Cholesterol in U937 foam cells assayed in liquid chromatographic-mass spectrometry. Chin J Mod Med; 2004, 14(20): 51-56.
2. Wu RC, Chen DF, Liu MJ, Wang Z. Dual effects of cycloheximide on U937 apoptosis induced by its combination with VP-16. Biol Pharm Bull. 2004 Jul;27(7):1075-80.
8. Liu MJ, Wang Z, Ju Y, Wong RN, Wu QY. Diosgenin induces cell cycle arrest and apoptosis in human leukemia K562 cells with the disruption of Ca2+ homeostasis. Cancer Chemother Pharmacol. 2005 Jan;55(1):79-90.
BCA蛋白浓度测定(整理版)
BCA蛋白浓度测定Pierce? BCA Protein Assay Kit(试剂盒室温保存)1. 准备BSA标准品按Table 1配制一系列的蛋白标准品.原液(stock):取出一个ample(内含2mg/mL的白蛋白标准品 (此量足够3个replication)2.准备BCA工作液(Working Reagent,WR)(1)用公式计算总工作液量(标准品数+待测样品数)*(复制数)*(每个工作液的量)=总的需要的工作液的量例子:3个待测样品,每个样品2个复制所需的工作液量(9个标准品+3个待测样品)*(2个复制数)*(2ml)=48ml工作液Note:试管法:每个试管需2ml工作液微孔板:每个孔需200ul工作液(例子中需共4.8ml)(2)BCA试剂A:B=50:1配制适量BCA工作液，充分混匀。
对于上面的例子,试管法需要50ml BCA A液+1ml BCA B液,微孔板法需5ml A液和1mlB液.B液加到A液中时,迅速浑浊,但是通过混匀立即变成清澈绿色的工作液.工作液在密闭室温下可以保存数天.3.微孔板步骤(样品与工作液比例=1:8)(1).标准液和样品各25ul加入微孔板中Note:若样品有限,可各加10ul(样品与工作液比例=1:20)(2).每孔加200ul的工作液并且充分震荡30s。
(3).在37度孵育样品30min，或室温2h。
(4).冷却至室温。
(5).在酶标仪中测量562nm时的吸光值(6).绘制标准曲线，再用标准曲线判断出样品的蛋白浓度。
Note:540-590nm的波长均可Figure 1: Typical color response curves for BSA and BGG using the Standard Test Tube Protocol (37°C/30-minute incubation).仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。
For personal use only in study and research; not for commercial use.Nur für den persönlichen für Studien, Forschung, zu kommerziellen Zwecken verwendet werden.Pour l 'étude et la recherche uniquement à des fins personnelles; pas à des fins commerciales.толькодля людей, которые используются для обучения, исследований и не должны использоваться в коммерческих целях.以下无正文。
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BCA蛋白浓度测定试剂盒说明23225蛋白质化验试剂盒：为500试管或5000微孔板的检测提供充足的试剂23227蛋白质化验试剂盒：为250试管或2500微孔板的检测提供充足的试剂试剂盒组分：BCA 试剂 A, 1000 mL (No. 23225 产品中)或 500mL ( No. 23227 产品中)，碳酸钠，碳酸氢钠，二座咻甲酸，酒石酸钠溶于0.1 21氢氧化钠中。
BCA试剂B , 25 mL.包括4%硫酸铜一次性标准白蛋白,2mg/ mL. 10 x 1 mL安甑，包含2 mg/mL牛血淸白蛋白(BSA)存在于0.9%盐和0.05%叠氮化钠中。
储存：以上试剂保持在室温下储存和装运注意：如果试剂A或试剂B在低温下运输或长期储存时岀现沉淀现象，可以通过缓慢加温或轻轻搅拌溶液使沉淀物溶解。
当试剂变色或确定微生物污染时请丢球试剂盒。
目录介绍 (1)准备标准试剂和工作试剂 (2)准备试管 (3)准备微型版 (3)故障检修 (4)有关美国热电其他产品 (5)附加信息 (5)参考文献 (6)介绍美国热电(Thermo)公司的BCA蛋白浓度测左试剂盒是基于二嚨咻甲酸(BCA)通过比色检测和赵疑测定总蛋白的洗涤剂兼容配方。
该方法通过碱性介质中的一种蛋白结合了 Cu2使其显著减少转变为Cui (缩二腺反应)。
用一种含二奎琳甲酸的试剂选择性的比色法高敏感的比色杯中的Cui.这种测左方法的紫色色反应产物是通过BCA的两个分子和亚铜离子螯合作用形成的。
这种水溶性复合物在562nm处有强吸收＞1金。
在大的活性范囤内(20-2000感/mL)几乎同蛋白浓度增加呈线性关系。
BCA法不是真正的终点的方法：也就是说，最终颜色继续发展。
孵化之后，继续的颜色发展速度是足够慢以允许一起进行测泄大虽:样本。
大分子结构的蛋白质，肽键的数量和存在的四个特定氨基酸(半胱氨酸，胱氨酸，色氨酸和酪氨酸)拯说是与BCA形成颜色产物的原因。
因此，蛋白浓度的测量通常要参照标准的一个常见的蛋白质如牛血淸白蛋白。
一系列已知浓度的蛋白质稀释液是为与之相近的未知蛋白质浓度测定准备的。
因为每一个未知浓度的测左都需要基于标准曲线。
如果需要将一个未知蛋白精确定量，选择一个与未知蛋白特性相似的标准蛋白是可取的。
例如，当测左免疫球蛋白时牛血淸丙种球蛋白可以被当做标准蛋白。
以下给出了两种检测过程：其中，试管程序需要一个较大的体积(0.1 升)的蛋白质样品。
然而,因为它使用了一个样品比例为1:20的工作试剂(v/v),所以将干扰物质的影响降到最小。
在酶处理程序提供了一样品处理酶，需要体积较小(10-25pL)的蛋白质样品。
然而，由于使用了样品比例为1:8的工作试剂(v/v),所以在克服干扰物质浓度时灵活性降低，从而获得的检测水平较低。
标准试剂和工作试剂的准备（实验程序需要的两个）A.准备稀释的BSA标准液表1为导向，准备一套蛋白质标准。
稀释标准的内容为，将一个盛在安飯管中的标准BSA稀释到几个洁净的瓶子中，最好使用和样本（s）相同量的稀释剂。
根据表1的建议:每1亳升的安甑管中加入2毫克/亳升的BSA标准液对于准备一系列的标准稀释液是足够的。
每个稀释标准重复三次也是足够量的。
表一：准备稀释的BSA标准液1.总共需要的WR的体积可以通过以下公式计算出来：（标准液+未知液）X （平行数目）X （每个样品中加入的WR体积）=总共所需的WR体积例如：标准的试管程序有三个未知液，每个样品做两组重复：（标准液9mL+未知液3mL） X （平行数目2） x （2mL）=总共所需的WR体积48mL注意：试管程序中每个样品管加2.0mlWR微型版程序中每个样品中只需要加200ul WR2、WR的制备：（BCA试剂A:B=50:1）,对上述样品，将50mL试剂A与1mL试剂B混合。
注意：当试剂B加入到试剂A的开始，浊度观察表明：混合后迅速消失变成澄淸的绿色的WR O准备充足的WR是基于所测样品数量上的。
如果将WR储存在处于室温（RT）的密闭容器中，那么几天之内WR是稳泄的。
简要步骤（试管程序，标准方案）试管程序（样品：VVR=l:20）1、用移液管移取每个标准品和所测样品的重复0.1 ml到有标签的对应试管中。
2、在每个管中加2.0ml的WR,混匀。
3、封口，然后温冇试管（选择时间和温度）1）标准方案：37°C 30min（working range=20-2000ug/ml）2） RT 方案：RT 2h（working range=20-2000ug/ml）3） Enhanced Protocol（加强方案）：60°C 30min（working range=5-250ug/ml）注意：每个实验中都增加培育时间和温度，增加5 6 2 nm的净吸光度，降低试剂的最低检测水平和方案的工作范围；使用水浴加热管要么是标准（37° C培养）或是增强（60° C培养）协议。
使用强制的培养可能会因为热传递不均匀使其在颜色变化上引进明显的误差。
4、使所有管子冷却至室温5、分光光度讣设龙在562nm,当比色皿中装的是水时给仪器校零。
随后，确保在10min 内测完所有样品的吸光度。
注意：因为BCA测定不是真正的终点，即使冷却到室温颜色还会继续变化。
然而，由于在室温下颜色变化速度比较慢，所以如果在10min内测完所有试管的吸光度就不会引进明显的误差。
6、所有的单个标准品与所测的样品重复在562nm测得的吸光度都要减去在562nm测得的所有空白标准品的吸光度平均值。
微型板程序（样品：WR=1:8）1、用移液管移取25ul的WR到每一个标准品与未知样品所在的微型板中（working range=20-2000ug/ml）注意：如果样品大小被限制为：每个未知样品和标准品只能使用10ul （sample toWR ratio=1:20）撚而，被测虽:的working range任这种情况下将被限制为125-2000ug/mL2、每个孔中加200ul的WR,用plate shaker混30s,使其彻底混匀3、封口，温育37°C 30min4、冷却到室温5、用酶标仪测量在562nm或接近562nm的读数注意：1）这种方法中波长540-590nm的范囤内都能被成功的测量2）因为读板器使用的光线长度比分光光度讣的比色皿要短，所以微型板程序需要使用样品比例比较大的工作试剂去获得与标准试管程序相同的灵敏度。
如果需要高于562nm 的测量，要将培养时间增加到2h.3）增加培养时间或样品工作试剂的体积比率，增加每个well在562nm的净测量值, 降低实际的最低测量水平和测量的working range u只要每个标准样与未知样都彼同等对待, 这样的修改也是有益的。
6、所有的单个标准品与所测的样品重复在562nm测得的吸光度都要减去在562nm测得的所有空白标准品的吸光度平均值。
7、准备一个标准曲线通过绘制每一个标准BSA任562nm测量的相对于空白对照的吸光度平均值。
它ug/ml的浓度。
使用标曲去测量每一个未知样品的蛋白质浓度。
注意：如果联系微型板读数器使用拟合的曲线算法，一个有四个参数的或最合适的曲线将提供比纯线性状态更精确的结果。
如果用手绘制这个结果，一个点-分曲线将比线性更加适合标准点。
故障检修A：干扰物质某些物质干扰BCA检测是已知的，包括潜在的还原剂，螯合剂，强酸或强碱。
因为他们可以干扰估算蛋白质每分钟浓度，作为样品缓冲液的组份应避免下列物质：抗坏血酸EGTA铁不纯的蔗糖儿茶酚胺不纯的甘油脂质色氨酸肌酸肝过氧化氢蜜二糖酪氨酸半胱氨酸酰脏类苯酚磺酥尿酸其他物质对BCA法检测蛋白量有较少程度的干扰。
并且这些在原来的样本中低于一泄浓度只有很小的影响（可以容忍）。
许多物质的最大兼容的浓度在标准测试管协议中被列岀。
表2（见说明的最后一页）。
物质是兼容与标准测试管协议中指立的浓度，如果蛋白浓度的估计的误差是由物质的存在所造成将会小于或等于10 %。
在每一个实验之前，这些物质都会用现配的WR进行测试。
空白校正的宰562nm的吸光度测量值（1000ug/mL白蛋白标准品+物质）将会同0.9%生理盐水中精确配制的标准品在562nm出的净吸光度进行比较。
样品：WR为1 ：8 （v/v）的微孔板过程中最大兼容浓度将比较低。
B .消除或减少干扰物质影响的，策略BCA蛋白含量测立中干扰物的影响可以用以下几个方法消除或克服。
•通过透析或凝胶过滤去除干扰物质。
•稀释样品，直到不再有干扰。
这种策略只在起始蛋白质浓度足够多余稀释后仍在检测活性范围之内是有效的。
•用丙酮酸或三氯乙酸仃C A）沉淀样品中蛋白质。
液体包含干扰物质将被丢弃，蛋白沉淀很容易在超纯水中溶解或直接用碱性BCA WR溶解。
这一方案的详细流程可从我们网站获得。
另外.23215号产品将被使用（见相关Pierce产品）。
•适当的增加WR中铜的量（准备WR试剂A：B为50：2或50:3、）,这将减少铜螯合剂的干扰注意:为了最大限度的精确度，蛋白质标准品必须和样品（s）同样处理。
有关美国热电其他产品1504196 孔板 100/pkg15075 试剂水库 200/pkg.15036 96孔板密封带100/pkg.23209标准白蛋白安gR2mg/mL10Xi亳升安甑，包含牛血淸白蛋白23208预稀释的蛋白质检测标准品：牛血淸白蛋白集合，7 x 3.5mL23212牛伽玛球蛋白标准品2 mg/mL, 10 x 1 mL安甑23235微型BCA蛋白检测试剂盒工作范囤为0.5-20yg / mL23236考马斯亮蓝检测试剂盒，工作范国的1 - 1500pg/mL23215 Compat- Able ^蛋白检测试剂组23250 BCA蛋白检测试剂盒-兼容还原剂附加信息A.请访问我们的网站了解更多的信息，包括下列事项：常见问答技术指导：消除样品中干扰物质对蛋白质检测的影响B .替代总蛋白检测试剂如果不能克服样品中还原物或金属螯合物的干扰。
由一个减少物质或metal-chelating物质包含在，试试美国热电公司的23236号考马斯亮蓝检测试剂盒，它对这些物质较不敏感。
C.玻璃器皿的清洁和垂利用小心谨慎使用玻璃器皿。
所有的玻璃器皿必须淸洗和最后的超纯水冲洗。
D、不同的蛋白质的反应特征常用的总蛋白含虽测定方法某种程度上显示了不同蛋白的不同反应。
这些差异源于氨基酸序列的不同、等电点、结构和某些侧链或辅基的存在都可以大大改变了蛋白质的颜色反应。
大多数蛋白质含呈:测定方法使用牛血淸白蛋白或免疫球蛋白(IgG)作为标准品确龙样品中的蛋白浓度(图1)o但是，如果要求很髙的精度，需要准备目标蛋白纯样本的标准曲线。