实验普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定(精)
普鲁卡因半数致死量_LD50的测定
普鲁卡因产生毒性作用的原理: • 普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产生
全身性毒性反应，主要表现为中枢神经系统先兴奋后抑制， 初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为神经 错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。
• 患者可因呼吸衰竭而死亡。
LD50的测定方法有很多。如：目测机率单位法、 加权机率单位法(Bliss法)、寇氏法、序贯法等。 •Bliss法是目前推荐使用的方法。此法对剂量分组无 严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率，是目 前公认最准确的测定方法。但本法计算繁琐，故现 多采用计算机程序计算。 •改良寇试法简便而计算较为精确。
• 3. 用改良寇试法和bliss法计算普鲁卡因的LD50 和95%可信限。
抓好后将小鼠保持头低位
• 改良寇试法 • Bliss法
• 基本要求 • 1.反映情况符合或接近对数正态分析。 • 2.相邻两计量比值相等。 • 3.各组动物数相等或相近。 • 4.不要求死亡率包括0%和100%，但二者和最 好再80%~120%范围内。
1.掌握药物的半数致死量测定的意义、方法、计算过程。 2.了解药物给药后动物所产生的毒性反应及其严重程 度。
• 实验动物：小白鼠50只，体重18～２２g，♀♂各 半。 • 实验器材：计算机、电子秤、注射器、小鼠笼。 • 实验药品：1%普鲁卡因，苦味酸溶液（标记）
• 1.体重相近（20±2g）。 • 2.健康，雌雄各半。 • 3.怀孕雌鼠剔除不用。
分组方式：
组号
1* 2*
鼠号
12
51
45
34
23
……
3* 4* 5*
345
23 4
123
51
2
45
1
盐酸普鲁卡因半数致死量_LD50的测定
启动微机，运行BL-410程序，进入其数据处理选项， 再进入半数有效量选项。
一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关 数据。
单击“计算”按钮，计算LD50等参数。
【注意事项】
给药剂量准确 小鼠腹腔注射 脱臼处死实验用过小鼠
【思考题】
1.测定LD50有何药理意义？
2.为何选择测定LD50作为衡量药物 毒性大小的指标?
C母 D 等容注射量
药液配制的具体步骤：
预试中Dm=344mg/kg， Dn=141mg/kg，算出r=1.25，小鼠的平均体 重为20g，每组10只，用药量为0.1ml/10g=10ml/kg
C母
D 等容注射量
C1=344mg/kg / 10ml/kg=34.4mg/ml
每组药液量=每组动物总重×用药量=200g×0.1ml/10g=2ml
【实验材料】
实验动物：小白鼠，体重18～２２g，♀♂各半，
实验前禁食12h,不禁水。
实验器材：计算机（BL-410机能实验系统）、电 子秤、注射器、小鼠笼。
实验药品：盐酸普鲁卡因 （Procaine hydrochloride）
【实验步骤】
预备实验
1．探索剂量范围：根据经验或文献，通过实验找出100%死亡的最小剂
(3)申报新药过程中必须提供的药理学资料
盐酸普鲁卡因产生毒性作用的原理:
盐酸普鲁卡因是一种局部麻醉药，当被大量吸收后会产
生全身性毒性反应，主要表现为枢神经系统先兴奋后抑
制，初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤，进而发展为
神经错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。患者可因呼吸衰竭 而死亡。
半数致死量_实验报告
一、实验目的1. 了解药物半数致死量（LD50）的定义及其在药理学中的意义。
2. 掌握LD50的测定方法及计算过程。
3. 通过实验，了解药物剂量与毒性反应之间的关系。
二、实验原理半数致死量（LD50）是指在特定条件下，能够引起实验动物一半死亡的药物剂量。
LD50是衡量药物毒性的重要指标，对于新药筛选、临床安全用药及药物不良反应的监测具有重要意义。
本实验采用寇氏法（Karber法）测定药物LD50。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠100只，体重18-22g，雌雄各半。
2. 实验药品：待测药物（如普鲁卡因）。
3. 实验器材：电子秤、注射器、灌胃针（16号）、注射器（0.25、1、2、5ml）、吸管（0.1、0.2、0.5、1、2、10ml）、容量瓶（10、25、50ml）、烧杯（10、25、50ml）、滴管、外科剪、镊子等。
四、实验方法与步骤1. 实验动物的选择：选用初成年的小白鼠，体重18-22g，雌雄各半。
实验前对动物进行检疫，确保健康。
2. 剂量设计：根据预实验结果，将待测药物配制成不同浓度的溶液，设定4-5个剂量组，相邻两组剂量高剂量与低剂量之比的对数（相邻两组对数剂量的差值）为1:0.6～0.9。
3. 实验分组：将小白鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半。
4. 灌胃给药：按照预定剂量，用灌胃针将药物溶液灌胃给予小鼠，观察7天，记录不同剂量组小鼠的死亡情况。
5. 数据处理：计算每组小鼠的死亡率，根据寇氏法计算LD50。
五、实验结果1. 各剂量组小鼠的死亡率如下：剂量组 | 剂量（mg/kg） | 死亡率（%）-------|--------------|-----------1 | 0.06 | 202 | 0.12 | 403 | 0.24 | 604 | 0.48 | 805 | 0.96 | 1002. 根据寇氏法计算LD50：LD50 = 0.48 × 2 × (1 - 0.2) / (0.8 - 0.2) = 0.32 mg/kg六、实验讨论1. 本实验采用寇氏法测定药物LD50，结果表明待测药物的LD50为0.32 mg/kg，说明该药物具有一定的毒性。
普鲁卡因半数致死量LD的测定
严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率，是目 前公认最准确的测定方法。但本法计算繁琐，故现 多采用计算机程序计算。
•改良寇试法简便而计算较为精确。
1.掌握药物的半数致死量测定的意义、方法、计算过程。
2.了解药物给药后动物所产生的毒性反应及其严重程
• 4.LD50的95%可信区间
• Lg-1(lgLD50±1.96SlgLD50)
传统计算方法
采用Bliss法程序计算LD50及其95%可信限步骤：
•
启动微机，运行相应程序，进入其数据处理选项，再
进入半数有效量选项。
•
一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关数 据。
• •
单击“计算”按钮，计算LD50等参数。
• 1.将小鼠雌雄分开，分别称重，一重量段放入
一笼。（18.19.20.21.22） • 2.标记小鼠：同一笼小鼠标记同一符号。 • 3.雌雄按重量顺序随机分为5组，保证不同性 别体重小鼠均匀分配于各组。
分组方式：
组号 鼠号 1* 1 5 4 3 2 …… 2* 2 1 5 4 3 3* 3 2 1 5 4 4* 4 3 2 1 5 5* 5 4 3 2 1
• 改良寇试法 • Bliss法
• 基本要求
• 1.反映情况符合或接近对数正态分析。 • 2.相邻两计量比值相等。
• 3.各组动物数相等或相近。
• 4.不要求死亡率包括0%和100%，但二者和最
好再80%~120%范围内。
• 计算LD50
• 1. 最小剂量组死亡率0%，最大剂量组死亡率
100%： • LD50=lg-1（Xm-i（Σp-0.5）） • p ——各组动物死亡率 • Xm——最大剂量的对数 • i ------相邻两组对数剂量差值
ld50半数致死量(小鼠)
2
3
4
5
【注意】
1、预试验要摸准药物引起0和100%死亡率剂量的所在范围。
2、正式试验时各剂量按等比级数分组，应避免最大剂量组的死亡小于80%，最小剂量组死亡率大于20%，否则改用其他方法计算。
3、室温：20℃为宜。
4、认真观察中毒症状情况。
LD50=lg-1[Xm-i（∑P-0.5）] (公式1)
Xm：最大剂量组剂量对数值
i：相邻两组剂量高剂量与低剂量之比的对数(相邻两组对数剂量的差值)
P：各组动物死亡率，用小数表示（如果死亡率为80%应写成0.80）
∑P：各组动物死亡率之总和
n：每组动物数
Sx50= i×(公式2)
Sx50：logLD50的标准误
第一部分药理学实验
实验十三药物半数致死量（LD50））的测定
【目的】
掌握LD50测定方法及计算过程。
【原理】将一定浓度和一定体积的药物，按一定比例灌胃给予小鼠，观察7日，记录不同剂量小鼠的死亡情况，计算半数致死量，以确定药物急性毒性。
【器材】鼠笼、烧杯、1ml注射器等。
【药品】普鲁卡因溶液（5个剂量）
【动物】小鼠
【方法】
1.预试验模实验剂量范围，找出引起0～100%的估计致死量。
2.正式试验
（1）取小鼠50只，体重20±2g，♀♂各半，随机分为5组，10只/组。
（2）剂量按等比级数增减，相邻两剂量比值1:0.6～0.9，设4～5个剂量组。
（3）给药普鲁卡因溶液，ip。5个剂量组。
（4）统计按改良寇氏法公式进行计算。
X50=logLD50
LD50的95%可信限=log-1（X50±1.96Sx50）(公式3)
药物半数致死量的测定
药物半数致死量的测定普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定【实验目的】了解药物LD50测定的意义、方法、计算过程。
【实验原理】量-效关系：量反应：血压、心率、血糖等；质反应：有或无、阴性或阳性、死亡或存活等。
药物的剂量与死亡率之间呈常态分布曲线，与累积死亡率之间呈长尾“S”形曲线；药物的对数剂量与累积死亡率之间呈对称“S”形曲线。
此量效曲线两端平坦，反应灵敏度差，中间段陡，反应灵敏。
而以50%处最敏感，剂量稍有变化，死亡率就有明显变化。
故常以引起半数动物死亡(LD50)或半数动物产生阳性效应(ED50)的剂量作为衡量药物毒性或效应大小的最常用、最恰当的指标。
LD50是指使—群动物中半数死亡的剂量，是衡量药物毒性大小的指标，是评价药物毒性的重要参数。
可了解药物单次给药或短时间内多次给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定的参考。
由于生物间存在个体差异性，因此LD50常需要一批相当数量的实验动物才能测得。
最大耐受量LD50的测定方法很多，较为常用的有寇氏法、简化概率单位法、序贯法、孙瑞元点斜法和Bliss-Finney法。
由于寇氏法常用，并有计算简便，结果较准确等特点，故本实验主要介绍寇氏法。
【实验对象】小白鼠，体重18～22g，♀♂各半。
实验前禁食12h，不禁水。
【实验器材和药品】计算器，电子秤、量筒(10ml)、注射器(1ml)、小鼠笼；盐酸普鲁卡因(procaine hydrochloride)溶液、苦味酸。
【实验条件】1．剂量必须按等比级数（剂量对数按等差级数）分组。
2．各组动物数应相等。
3．反应大致呈正态分布。
最小剂量组的死亡率（Pn）应为0，最大剂量组的死亡率（Pm）应为100%。
如果Pn＜20%或Pm＞80%需要用校正公式计算。
【实验步骤和观察项目】(一)预备实验1．探索剂量范围根据经验或文献找出动物100％及0％死亡的剂量，即上下限剂量(Dm、Dn)。
对于无毒性参考资料的药物，一般先配制最大浓度药剂，然后按等比关系(如2：1)稀释成多个剂量。
实验普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
DJY
2
测定LD50的方法很多 本实验用的是简化机率单位法
y = a+bx
机 率 单 位 y
对数剂量x
DJY 3
药物的剂量与效应关系
死 亡 数 累 积 死 亡 率
剂量
累 积 死 亡 率 对数剂量
DJY
剂量 机 率 单 位 对数剂量
4
测定药物LD50的设计方法 1.预实验：摸索接近100%和0%死亡的剂量 2.按比例设5-7个剂量组（0.65~0.90） 3.随机分组，动物数不少于10只（小鼠） 4.实验条件均应相等
【结果与统计】
对数剂量 动物数 死亡率 机率单位 死亡数 (mg/kg) (x) (n) (%) (y) 剂量 1 2 110.8 147.7 2.0445 2.1694
3 4
5
196.9 262.5
350.0
2.2942 2.4191
2.5441
y = a+bx
用直线回归法求 a, b, r
DJY 8
DJY
5
测定LD50的用药设计方法 同一浓度 不同浓度 不同剂量 同一剂量
DJY
6
【方法与步骤】
1.分组：随机分成5个剂量组，每组2只小白鼠。
2.给药：采用不同浓度,同一剂量的方法
0.20ml/10g,腹腔注射，涂上标记
3.观察：用药1小时后,观察小白鼠死亡情况,并记
录各组动物的死亡数。
DJY
7
实验:普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
【目的】 理解LD50的概念，掌握LD50的测定方法及计算。 【测定LD50的意义】 LD50反映药物的毒性大小。
DJY
1
安全性：治疗指数＝LD50/ED50 比值大安全
普鲁卡因LD50测定
注：P138示例及P137-138 四、五剂量公式中：
X1、X2、X3 － 剂量的对数值，从小到大 P1、P2、P3 －各剂量组的死亡率 Y1、Y2、Y3 － 各剂量组死亡率转换成的概
率单位，可查表获得。
YK － 50％死亡率时的概率单位。 WC － 权重系数（查表获得） W － 权重＝ WC×n i －剂量间比值的对数
剂距 1：0.85
剂量
(mg/kg)
对数剂量 (x)
动物 数
(n)
死亡数
死亡率P (%)
概率单位 (y)
1 128
10 0
0
2 160
10 1
10
3 200
10 7
70%
4 250 5 312
10 9 10 10
90% 100%
(独立小组完成或汇集全班数据，可增加实验动物 数量，最好每组10只以上，可减小误差）
4、结果计算：
用对数剂量（x = log D）与概率单位 （y）进行直线回归（y = a + bx），以预
期0。
具体可参见书P28-29示例，按简化概率 单位法将各数值填入下表中，套用五剂量组 公式计算（手动计算）：
1、LD50 2、SX50(lgLD50的标准误) 3、95％可信限 4、直线斜率b
• 现用Casio-fx-180P计算器处理实验数据： • INV KAC，Mode 2 • 输入x按XDYD，输入y按DATA • INV A （a） • INV B (b) • INV r (r) • 5 INV x，INV 10x (LD50)
• 【注意事项】 • 1．测定LD50前，要进行预实验，摸索接近
实验 十
普鲁卡因注射液 半数致死量(LD50)的测定
普鲁卡因LD50的测定和计算
4.8
0.62742
6.8
0.17994
8.8
0.00118
2.9
0.11026
4.9
0.63431
6.9
0.15436
8.9
0.00082
3.0
0.13112
5.0
0.63662
7.0
0.13112
9.0
0.00056
（胡珏 张琦）
70
距较大的一系列剂量，分别给各组腹腔注射盐酸普鲁卡因溶液，观察出现的症状并记录死亡数，
找出引起 0%及 100%死亡率剂量的所在范围（致死量约在 105～150mg/kg 范围内）。本步骤可由实
验室预先进行。
2．正式实验：在预实验所获得的 0%和 100%致死量的范围内，选用几个剂量（一般用 5 个剂
68
1．室温、季节、实验时间、动物饥饱、光照、饲养条件均会影响实验结果，应维持一致，必 要时加以说明。
2．实验时，不要把各组剂量搞混，腹腔注射剂量要准确。注射部位要正确，不能将药物注入 肠腔、脏器或膀胱内。
3．实验观测指标是死亡，要以呼吸、心跳停止为指标。报告 LD50 测定结果时，必须说明动 物品系、体重、性别、用药途径、观察时间及测定和计算方法。除计算 LD50 外，还应算出 95%平 均可信限。
附表 B 机率单位与权重系数对照表 机率单位 权重系数 机率单位 机率单位 机率单位 机率单位 机率单位 机率单位
1.1
0.00082
3.1
0.15436
5.1
0.63431
7.1
0.11026
1.2
0.00118
3.2
0.17994
5.2
0.62742
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DJY
5
测定LD50的用药设计方法 同一浓度 不同浓度 不同剂量 同一剂量
DJY
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【方法与步骤】
1.分组：随机分成5个剂量组，每组2只小白鼠。
2.给药：采用不同浓度,同一剂量的方法
0.20ml/10g,腹腔注射，涂上标记
3.观察：用药1小时后,观察小白鼠死亡情况,并记
录各组动物的死亡数。
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【结果与统计】
对数剂量 动物数 死亡率 机率单位 死亡数 (mg/kg) (x) (n) (%) (y) 剂量 1 2 110.8 147.7 2.0445 2.1694
3 4
5
196.9 262.5
350.0
2.2942 2.4191
2.5441
y = a+bx
用直线回归法求 a, b, r
DJY 8
【注意事项】
1.动物应随机分组
2.各小组的动物标记要统一
3.剂量由小到大，注射量要准。
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思考题
1.什么是LD50?
2.测定LD50的根据和意义何在?
DJY
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DJY
2
测定LD50的方法很多 本实验用的是简化机率单位法
y = a+bx
机 率 单 位 y
对数剂量x
DJY 3
药物的剂量与效应关系
死 亡 数 累 积 死 亡 率
剂量
累 积 死亡 率 对数剂量
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剂量 机 率 单 位 对数剂量
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测定药物LD50的设计方法 1.预实验：摸索接近100%和0%死亡的剂量 2.按比例设5-7个剂量组（0.65~0.90） 3.随机分组，动物数不少于10只（小鼠） 4.实验条件均应相等
实验:普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
【目的】 理解LD50的概念，掌握LD50的测定方法及计算。 【测定LD50的意义】 LD50反映药物的毒性大小。
DJY
1
安全性：治疗指数＝LD50/ED50 比值大安全
性大
安全范围：当药物的治疗效应与致死效应曲
线不平行时，要看ED95和LD5的距
离，距离越大越安全。