常用抗凝剂的配制和使用
常用抗凝剂的配制及用法
常用抗凝剂的配制及用法 Prepared on 22 November 2020在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。
对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。
一、肝素（1）肝素抗凝作用原理肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。
（2）配制和用量纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U，10~20U能抗1 ml血液计)。
但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。
一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0．1毫升于试管内，100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。
也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。
在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2．5～3．0mg/200～300g体质量，兔10mg ／kg体质量，狗5～10mg／kg体质量。
肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。
市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。
二、草酸盐合剂（1）原理草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3：2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。
此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。
（2）配制方法及用量草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂0．1ml(即相当草酸铵1．2mg，草酸钾0．8mg)。
根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。
如取0．5ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。
（3）注意事项草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。
用时注意加的量应适中，不能过多，以免妨碍去蛋白质血滤液的制取。
常用抗凝剂的原理及其实际运用
草酸盐溶解后解离的草酸根离子与血液中
的钙离子形成草酸钙沉淀，使钙离子失去
凝血功能，阻止凝血过程。常用的草酸盐
抗凝剂有草酸钠，草酸钾和草酸铵。
配制方法及用量
草酸盐合剂：草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔 马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐 合剂0．1ml (即相当草酸铵1．2mg，草酸钾 0．8mg)。根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入 玻璃容器内烤干备用。如取0．5ml于试管，烘干 后每管可使5ml血不凝固。 草酸钾：取草酸钾10g，加蒸馏水少许使溶解，再 加蒸馏水至100ml。配制成10％水溶液，如每管加 0.1ml则可使5~10ml血不凝。
血功能测定。测定血沉用3.8%枸橼酸钠抗
凝，抗凝剂与血液比例为1：4，凝血试验
需用3.2%枸橼酸钠抗凝，比例为1：9。
2.另外，因为枸橼酸盐作为抗凝剂的细胞毒
性小，常作为血液保养液的成分之一。
缺点
枸橼酸钠6mg才能抗凝1ml血液，碱性强，
不适用于血液化验和生化测验。
氟化钠的抗凝原理
氟化钠中的氟离子可与钙结合形成螯合物 而发挥抗凝作用，但其抗凝能力较其他抗 凝剂弱， 氟离子可抑制糖酵解中的烯醇化 酶，防止糖酵解，若未加氟化钠，血标本 中的葡萄糖含量将以每小时6%的速度下降， 而在有氟化钠存在 的条件下，血糖浓度在 25摄氏度的条件下可以稳定24h，4摄氏度 可以稳定48h。
常用抗凝剂的原理及运用
主要内容
. 抗凝剂的概念
. 临床上常用的抗凝剂
. 问题
概念：
抗凝：应用物理或化学的方法除去或抑制血液中 的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。 抗凝剂：阻止血液凝固的化学试剂就称为抗凝剂。 对抗凝剂的一般要求是用量少、溶解度大、不影 响测定。生化检验常用的抗凝剂有以下几种：
常用抗凝剂及其配置法
常用抗凝剂的配制及用法在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。
对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。
一、肝素（1）肝素抗凝作用原理肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。
（2）配制和用量纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U，10~20U能抗1 ml 血液计)。
但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。
一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0．1毫升于试管内，100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。
也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。
在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2．5～3．0mg/200～300g体质量，兔10mg／kg体质量，狗5～10mg／kg体质量。
肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。
市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。
（3）注意事项做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制剂！二、草酸盐合剂（1）原理草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3：2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。
此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。
（2）配制方法及用量草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂0．1ml(即相当草酸铵1．2mg，草酸钾0．8mg)。
根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。
如取0．5ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。
（3）注意事项草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。
EDTA抗凝剂简易配制法
EDTA抗凝剂简易配制法【关键词】饱和;抗凝;溶解度常用EDTA-Na 2 抗凝剂的浓度是15g/L,每0.4ml干燥后可抗凝5ml血液 [1] 。
EDTA-Na 2 的溶解度较大,22℃时可达11.1克,其有效抗凝浓度为1~2mg/ml,通过计算得知100ul(约两滴)饱和溶液可抗凝5~10ml血液,由于EDTA-Na 2 的溶解度受Nac1影响不大,为防止溶血在实践中我们用500毫升生理盐水加56克EDTA-Na 2 配制成饱和溶液,每份标本滴加3~5滴直接使用,取得了令人满意的效果。
1.材料和方法1.1对象:1999年~2007年潍坊市无偿献血者。
1.2试剂:ELISA试剂盒HBsAg购自厦门新创和上海科华公司,抗-HCV购自厦门新创和上海科华公司,抗-HIV购自北京吉比艾和北京万泰公司,TP-ELISA购自北京中生和吉比艾公司,ALT活性试剂盒购自北京中生和浙江东瓯公司。
1.3仪器:TECAN全自动酶免加样器,FAME全自动酶免分析系统。
1.4方法:配制方法将EDTA-Na 2 粉末直接加入到生理盐水瓶内边加边摇匀直到瓶子底部有少许晶体不能再溶解为止,静置稳定片刻后即为EDTA-Na 2 饱和溶液。
本溶液用普通塑料滴管滴加2~3滴即可,当血液沿试管内壁下流时由于冲击作用自动与抗凝剂混合均匀勿需再人为摇匀。
每人留取两份标本,一份用本法抗凝,一份非抗凝,两份标本用同一种试剂和方法检验,阳性者均做双孔复试。
抗-HIV阳性标本是向同一个人的两份等量标本中加入等量抗-HIV阳性对照物制得。
将得到的结果对比分析。
所有操作均按试剂盒说明书和仪器操作规程严格进行。
2.结果(见表1)表1抗凝和非抗凝标本的检验结果比较注:各组阳性标本中均包含10例弱阳性标本。
3.讨论3.1由(上表可看出)抗凝标本和非抗凝标本检验结果完全相符,二者之间无差异。
3.2乙二胺四乙酸盐对血细胞和血小板形态影响很小,适用于一般血液学检查,稍微过量不影响检验结果。
常用抗凝剂的配制及用法_常用抗凝剂的配制及用法
常用抗凝剂的配制及用法专业相关2010-08-08 14:48:34 阅读458 评论0 字号：大中小订阅在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。
对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。
一、肝素（1）肝素抗凝作用原理肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。
注意事项：做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制剂！（2）配制和用量纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U，10~20U能抗1 ml血液计)。
但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。
一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0．1毫升于试管内，100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。
也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。
在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2．5～3．0mg/200～300g体质量，兔10mg／kg体质量，狗5～10mg／kg体质量。
肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。
市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。
二、草酸盐合剂（1）原理草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3：2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。
此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。
（2）配制方法及用量草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂0．1ml(即相当草酸铵1．2mg，草酸钾0．8mg)。
根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。
如取0．5ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。
常用的抗凝剂肝素
常用的抗凝剂肝素、草酸盐合剂、枸橼酸钠和草本钾的配制方法肝素（Heparin）肝素的抗凝血作用很强，常用来作为全身抗凝剂，特别是在进行微循环方面动物实验时的肝素应用更有重要意义。
纯的肝素10mg能抗凝100ml血液（按1mg等于100个国际单位，10个国际单位能抗凝1ml 血液计）。
如果肝素的纯度不高，或过期，所用的剂量应增大2～3倍。
用于试管内抗凝时，一般可配成1%肝素生理盐水溶液，取0.1m l加入试管内，加热80℃烘干，每管能使5～10ml血液不凝固。
作全身抗凝时，一般剂量为：大鼠2.5～3mg·(200～300g体重)-1，兔或猫10mg·kg-1，狗5～10mg·kg-1。
如果肝素的纯度不高，或过期，所用的剂量应增大2～3倍。
草酸盐合剂配方：草酸铵 1.2g草酸钾 0.8g福尔马林 1.0ml蒸馏水加至 100ml配成2%溶液，每1ml血加草酸盐2mg（相当于草酸铵1.2m g，草酸钾0.8mg）。
用前根据取血量将计算好的量加入玻璃容器内烤干备用。
如取0.5ml于试管中，烘干后每管可使5ml血不凝固。
此抗凝剂量适于作红细胞比容测定。
能使血凝过程中所必须的钙离子沉淀达到抗凝的目的。
枸橼酸钠常配成3%～8%水溶液，也可直接用粉剂。
枸橼酸钠可使钙失去活性，故能防止血凝。
但其抗凝作用较差，其碱性较强,不适作化学检验之用。
一般用1：9（即1份溶液，9份血）用于红细胞沉降和动物急性血压实验（用于连接血压计时的抗凝）。
不同动物，其浓度也不同：狗为6%，猫为2%+硫酸钠25%，兔为5%。
草酸钾每1ml血需加1-2mg草酸钾。
如配制10%水溶液，每管加0.1ml则可使5-10ml血液不凝固。
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抗凝剂
抗凝剂种类很多，性质各异，必须根据检验止的适当选择，才能获得预期的结果。
现将实验常用抗凝剂及其使用方法简述如下：1、乙二胺四乙酸（EDTA）盐EDTA有二钠、二钾和三钾盐。
均可与钙离子结全成螯合物，从而阻止血液凝固。
EDTA盐经1000C烘干，抗凝作用不变，通常配成15g/L水溶液，每瓶0.4ml，干燥后可抗凝5ml血液。
EDTA 盐对红、白细胞形态影响很小，根据国际血液学标准公委员会（Internationalcommittee standard of hematology ,ICSH）1993年文件建议，血细胞计数用EDTA二钾作抗凝剂，用量为EDTA-K2。
2H2O1.5-2.2MG （4.45±0.85μmol）/ml血液。
EDTA-NA与EDTA-K2对血细胞计数影响均较小，但二钠溶解度明显低于二钾，有时影响抗凝效果，其他抗凝剂不适合于血细胞计数。
表1-1是几种抗凝剂对白细胞计数的影响，EDTA影响小板聚集，不适合于作凝血象检查和血小板功能试验。
2.枸椽酸钠（trisodium citrate）枸椽酸盐可与血中钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固。
枸椽钠对凝血因子有较好的保护作用，使其活性减低缓，故常用于凝血象的检查，也用于红细胞沉降率的测定。
因毒性小，是输积压保养中的成分之一。
由于枸椽酸钠溶液是按体积肥比例加入血液内达到抗凝目的的，而抗凝剂主要是作用于积压浆成分，通常所谓的1：9比例抗凝的概念是提1份体积的抗凝剂作用9份红细胞比积正常血液内的血浆成分而言。
所以台果对贫血或红细胞增多症患者的血液仍按1：9的比例加入抗凝剂时，就会发生抗凝剂足或相对过多，这将明显地影响凝象检查结果。
为了避免这种现象，有文献报道应根据抗凝剂用量（ml）=0.00185×血量×（100—病人红细胞比积%）这一公式，来计算抗凝剂的用量。
3．草酸钠（sodium oxalate）草酸盐可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。
抗凝剂
4.枸椽酸钠（trisodium citrate）枸椽酸盐可与血中钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固。
枸椽酸钠有2Na3C6H5O7。和2Na3C6H5。11H2O等多种晶体。通常用前者配成109mmol/l(32g/l)水溶液（也有用106mmol/l浓度），与血液按1：9或1：4比例使用。枸椽钠对凝血V因子有较好的保护作用，使其活性减低缓，故常用于凝血象的检查，也用于红细胞沉降率的测定。因毒性小，是输积压保养中的成分之一。
枸橼酸钠可使钙失去活性，故能防止血凝。但其抗凝作用较差，其碱性较强，不适作化学检验之用。可用于红细胞沉降速度测定。急性血压实验中所用的枸橼酸钠为5％～6％溶液。
（四）草酸钾
每毫升血需加1～2mg草酸钾。如配制10％水溶液，每管加0.1m1则可使5～10ml血不凝固。
（2）配制和用量
纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U，10~20U能抗1 ml血液计)。但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0．1毫升于试管内，100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2．5～3．0mg/200～300g体质量，兔10mg／kg体质量，狗5～10mg／kg体质量。肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。
（3）注意事项
草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。用时注意加的量应适中，不能过多，以免妨碍去蛋白质血滤液的制取。不适用于血液内钙或钾的测定，也不能用于血液非蛋白氮测定。
抗凝剂ACD的配置
葡萄糖：1.47%（M/V）
一般20ML新鲜血液中加入3.5ML ACD抗凝剂。比例依次类推！！
血液可以在0度条件下保存数天，或者是零下70度条件下无限期保存！
注意事项：做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制剂！
从全血中制备基因组DNA，ACD做为抗凝剂要优于EDTA，因为他更加能保存高分子质量的DNA，然而，血样常常被收集于用定量EDTA作为抗凝剂的小管中。
在大多数美国的医院中，收集血样的小管均用颜色标明是否含有抗凝剂，紫色顶管盖的小管一般含有抗凝剂，通常是EDTA的干粉。黄色顶盖的小管不含抗凝剂。
在分子克隆实验中，前者一般用于收集血样用于制备基因组的DNA，后者用于收集血样作为用EB病毒的永生化淋巴细胞的来源。这些永生化的细胞可以作为可更新的来源来制备大量的DNA以备后用.48g、柠檬酸钠1.32g、葡萄糖1.47g，溶解于100ml双蒸水(ddH20)中，
高压灭菌备用(血液：ACD=6：1)
（高压灭菌条件为：115"C，15 min 0.075～O.08 M Pa。)
博客文章：
2009年10月29日 星期四
如果是提取全血中的DNA的话，应用酸性的柠檬酸葡萄糖（ACD）效果最好！若条件不便可以应用EDTA替代！
抗凝剂ACD的配制方法：
1 （酸性）柠檬酸葡萄糖溶液B（ACD）（用于新鲜抽提或者是冻存的血样品）
柠檬酸钠：1.32%（M/V）
柠檬酸：0.48%（M/V）
临床检验基础考点常用抗凝剂和使用方法
临床检验基础考点常用抗凝剂和使用方法常用抗凝剂和使用方法：
（1）乙二胺四乙酸（EDTA）盐：常用有钠盐或钾盐，能与血液中钙离子结合成螯合物，使Ca2＋失去凝血作用，阻止血液凝固。
EDTA盐对血细胞形态、血小板计数影响很小，适用于血液学检查，尤其是血小板计数。
根据国际血液学标准化委员会（ICSH）建议，CBC抗凝剂用EDTA-K2•2H2O，量为1.5～2.2 mg/ml血液。
不适于凝血检查、血小板功能试验。
（2）草酸盐：常用有草酸钠、草酸钾、草酸铵，溶解后解离的草酸根离子能与样本中钙离子形成草酸钙沉淀，使Ca2＋失去凝血作用，阻止血液凝固。
草酸盐不适于凝血检查。
双草酸盐抗凝剂：草酸钾可使红细胞体积缩小，草酸铵则可使红细胞胀大，两者按适当比例混合，恰好不影响红细胞形态和体积，可用于血细胞比容、CBC、网织红细胞计数等项目检查。
双草酸盐抗凝剂可使血小板聚集、影响白细胞形态，不适于血小板计数、白细胞分类计数。
（3）肝素：加强抗凝血酶（AT）灭活丝氨酸蛋白酶作用，阻止凝血酶的形成，并阻止血小板聚集等作用，从而阻止血液凝固。
肝素是红细胞渗透脆性试验的理想抗凝剂。
但肝素可引起白细胞聚集，瑞氏染色后产生蓝色背景，不适于CBC、细胞形态学检查。
（4）枸橼酸盐：常用有枸橼酸钠，能与血液中钙离子结合形成螯合物，阻止血液凝固。
枸橼酸钠与血液的抗凝比例为1:9或1:4。
适用于红细胞沉降率、凝血检查，是输血保养液的成分。
常用抗凝剂的配制及用法
在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。
对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。
一、肝素（1）肝素抗凝作用原理肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。
（2）配制和用量纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U，10~20U能抗1 ml血液计)。
但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。
一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0．1毫升于试管内，100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。
也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。
在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2．5～3．0mg/200～300g体质量，兔10mg／kg体质量，狗5～10mg／kg体质量。
肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。
市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。
二、草酸盐合剂（1）原理草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3：2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。
此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。
（2）配制方法及用量草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂0．1ml(即相当草酸铵1．2mg，草酸钾0．8mg)。
根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。
如取0．5m l于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。
（3）注意事项草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。
用时注意加的量应适中，不能过多，以免妨碍去蛋白质血滤液的制取。
不适用于血液内钙或钾的测定，也不能用于血液非蛋白氮测定。
血液透析抗凝剂的配置和应用
血液透析抗凝剂的配置和应用
抗凝剂配置流程
一、普通肝素配置方法
肝素规格：2ml/支，100mg/支，12500iu/支
1毫升=5mg配制方法：
NS18ml+肝素2ml（1支）
计算方法为：加入NS中肝素的总mg÷（NS+加入肝素的总ml）=每毫升盐水所含肝素量二、低分子肝素的配置方法
低分子肝素目前多是预充式注射器，或粉剂，规格不同，医嘱给药量也不同，为保证给药量的准确性，低分子肝素应盐水稀释后在给患者推注。
1、低分子肝素规格如为5000iu/支，应配制完成后为每毫升1000iu/ml
配置方法：NS4ml+低分子肝素一支（1ml），则每毫升为1000iu。
计算方法：低分子肝素总单位剂量÷（NS量+低分子肝素总毫升量）=每毫升所含低分子量。
2、低分子肝素为粉剂每支5000iu时，应配制完成后为每毫升1000iu/ml
配置方法：用生理盐水5ml稀释后，则配置后的肝素为每毫升1000iu/ml
总部建议：配置低分子时最好使用10ml注射器进行稀释药液，配置完成后每2ml含有低分子肝素1000iu。
（原因是如使用5ml注射器配置，透析用穿刺针管腔容积为2.5ml，如果患者应用1-3千单位的低分子肝素量，在推注1-3ml后，药液只能停留在穿刺针管腔内，未做到提前全身肝素化要求）。
抗凝剂的配制实训报告
一、实训目的本次实训旨在通过实际操作，掌握常用抗凝剂的配制方法及其在医学实验中的应用。
通过实训，提高学生对抗凝剂的理解和操作技能，为后续实验研究打下坚实基础。
二、实训时间2023年X月X日三、实训地点XX医学院实验室四、实训器材与试剂1. 器材：试管、移液器、烧杯、烘箱、天平、注射器、生理盐水等。
2. 试剂：肝素、草酸盐合剂、EDTA钠盐、枸橼酸钠、草酸钾等。
五、实训内容1. 肝素抗凝剂的配制（1）原理：肝素是一种强效抗凝剂，通过抑制凝血酶活性、阻止血小板聚集等作用，使血液不凝固。
（2）配制方法：①称取肝素10mg，加入适量生理盐水溶解；②配制成1%肝素生理盐水溶液；③将配制好的肝素溶液滴入试管内壁，均匀涂布；④将试管放入80~100℃烘箱烤干，每管可抗凝5~10ml血液。
2. 草酸盐合剂抗凝剂的配制（1）原理：草酸盐能与血液中的钙离子形成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。
（2）配制方法：①称取草酸铵3g、草酸钾2g，加入适量生理盐水溶解；②配制成草酸盐合剂；③将配制好的草酸盐合剂滴入试管内壁，均匀涂布；④将试管放入80℃以下烘箱烤干，每管可抗凝3~5ml血液。
3. EDTA钠盐抗凝剂的配制（1）原理：EDTA钠盐能与血液中的钙离子形成螯合物，从而阻止血液凝固。
（2）配制方法：①称取EDTA钠盐2g，加入适量生理盐水溶解；②配制成2%EDTA钠盐溶液；③将配制好的EDTA钠盐溶液滴入试管内壁，均匀涂布；④将试管放入80℃以下烘箱烤干，每管可抗凝5~10ml血液。
4. 枸橼酸钠抗凝剂的配制（1）原理：枸橼酸钠能与血液中的钙离子形成螯合物，从而阻止血液凝固。
（2）配制方法：①称取枸橼酸钠3.8g，加入适量生理盐水溶解；②配制成3.8%枸橼酸钠溶液；③将配制好的枸橼酸钠溶液滴入试管内壁，均匀涂布；④将试管放入80℃以下烘箱烤干，每管可抗凝9ml血液。
六、实训结果与分析本次实训成功配制了肝素、草酸盐合剂、EDTA钠盐、枸橼酸钠等抗凝剂。
常用抗凝剂及血液凝固的原理
抗凝---—应用化学或物理学的方法，抑制或除去血液中的某些凝血因子以阻止血液凝固的方法。
抗凝剂---—能阻止血液凝固的化学试剂.
一、枸橼酸钠
【原理】枸橼酸钠(柠檬酸钠）是枸橼酸钠的三钠盐.它能与血液中的钙离子形成可溶性的螯合物，使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。
【应用范围】血沉、凝血象、血小板功能检查及血液保养液.
【用量】凝血象：109mmol/L水溶液，与血液之比为1：9; 血沉：106mmol/L水溶液，与血液之比为1：4.
二、乙二胺四乙酸盐
【原理】乙二胺四乙酸（EDTA)盐可与血液中的钙离子结合形成配位化合物,从而阻止血凝。
【应用范围】一般血液学检查和血液粘度测定。
不适于凝血象及血小板功能检查。
【用量】其有效抗凝浓度为1～2mg/ml血液. 血细胞分析仪用EDTA-K2作抗凝剂，用量为EDTA—K2•2H2O 1.5～2.2mg/ml血液。
三、肝素
【原理】通过与抗凝血酶Ⅲ结合，增强抗凝血酶的作用，灭活丝氨酸蛋白酶，从而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集，阻止血液凝固。
【应用范围】血细胞比容测定、血液粘度测定和多种生化分析。
用量通常用肝素的钠盐或钾盐粉剂配成1g/L肝素水溶液。
取0.5ml置小瓶中，37～50℃烘干后，能抗凝5ml血液。
四、草酸盐
草酸盐也是常用的抗凝剂,优点是溶解度大，作用原理是溶解后解离的草酸根与标本中的Ca2+形成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血功能，凝血过程被阻断.。
第二节 常用抗凝剂的种类、浓度与配置方法
第二节常用抗凝剂的种类、浓度与配制方法在机能学实验研究中，常用的抗凝剂有3.8%枸橼酸钠、2%草甲酸、2%草酸钠、1%乙二胺四乙酸钠和肝素等。
一、枸橼酸钠它与血液中Ca2+结合形成络合物，去除血Ca2+而防止血液凝固，且枸橼酸盐类对动物机体无毒，故一般若需抗凝血回注动物体内时，宜用枸橼酸钠抗凝。
二、草甲酸其溶解度大，抗凝作用强，是机能学实验和生化实验常用抗凝剂。
能与血液中Ca2+结合生成不溶解的草酸钙，使血液不凝固。
2mg草酸钾可抗凝1mL血，常用于全血抗凝，但不宜用于钾、钙等离子测定。
此外草酸钾对乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶及淀粉酶有抑制作用。
2%草酸钾溶液。
取准备取血用的试管数支，每支试管加0.5ml 2%草酸钾溶液，置80℃烤箱内烤干备用，每管可抗凝5mL血。
三、乙二胺四乙酸（EDTA）可与钙形成螯合物，而使血液不凝固。
常用EDTA-Na，1～2mg可抗凝1mL血液。
特别2适用血液学检查，不宜用于含氮化合物和钠的测定。
四、肝素肝素能阻止凝血酶原转变为凝血酶，从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白，达到抗凝效果。
是机能实验研究中最常用的抗凝剂，最合适电解质、血气与pH值的测定。
肝素浓度表示法有体积-质量百分比和国际单位计量法，两者的等量关系是1mg相当于100U。
其使用浓度因使用目的、方法与对象而定。
①实验动物全身体内抗凝，一般用量为：大白鼠2.5～3mg/200～300g；家兔10mg/kg；狗50～100mg/kg。
②实验动物局部抗凝，如记录实验动物动脉血压时，需在动脉插管和血压换能器等血压传输管道系统内充满0.1%(100U/mL)为例，是取12500U/2mL肝素一支，加水至125mL即成。
肝素应避光低温保存。
检测血气前采血及抗凝要求
检测血气前采血及抗凝要求一、抗凝剂：1250单位/ml的肝素钠（或肝素锂），配制方法：50ml生理盐水或注射用水加1支12500单位的肝素钠原液，混匀后无菌保存备用。
二、采集标本要求：1、良好的抗凝：选用肝素钠或锂作为抗凝剂，确保全血中肝素最终浓度约为25 U/ml2、采集工具：若使用一次性针筒，需抽取稀释过的肝素溶液1 ml后，在一次推完抽取量的基础上，将针头朝下连续快速来回推2-3次后排空，进行标本采集，采血量至少1ml（建议使用2ML注射器采血）。
3、针刺深度：血液最好是自然流出，要保证血液以最快速度进入针筒，尽量减少血液与空气的接触时间。
4、排出气泡：血标本内是否混有空气或气泡,排出气泡。
5、密封：堵住针头，隔绝空气。
6、混匀：要求采血完成与检测前，均需将采血针手搓与反复颠倒混匀3~5来回，保证标本与抗凝剂混合充分。
7、立即测定：在采集标本后注明采集时间立即送检，如时间过长，则要求将标本置于冰水中运送。
8、在上机检测前弃去前两滴血。
三、血气分析前的质量控制1、标本最好是动脉或动脉化毛细管标本：只有动脉血能真实反映血液中的氧合作用和酸碱状态，评价器官的氧和作用。
2、病人采血时的状态：pH、pCO2、pO2、SO2%都是不稳定参数，它们易受病人的状态变化而改变，下列状态是必须限制的：（1）病人的忧虑：要在心理上解决病人的忧虑，避免使用“动脉穿刺”，用各种方法使病人感到舒适，避免产生忧虑。
由于害怕取样，有些病人呼吸急促，使pO2、pH增加pCO2减少；另一些病人瞬间憋气，引起pO2、pH减少，pCO2增加。
（2）病人的体位：在采血时病人必须处于稳定状态，以不卧床病人为例，取样前至少应躺3-5分钟。
3、调整呼吸机参数30分钟后进行血气分析。
四、抗凝血凝固有以下几个原因：1、血流不畅，造成未和抗凝剂混匀就已凝固。
2、抗凝剂量不够或失效。
3、血样和抗凝剂没有完全混合好4、压脉带使用时间过长，加速凝血反应，不易发现的微凝集会导致不正常五、结果偏差的几个原因：1、抗凝不当导致的血液凝固或出现小凝块。
抗凝剂的使用
几种常用抗凝剂的合理使用应用物理或化学方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。
能够阻止血液凝固的化学试剂或物质，称为抗凝剂或抗凝物质。
抗凝剂的种类很多，性质各异。
因此，必须根据检验目的恰当选择，才能获得预期效果。
现将我院临床检验常用抗凝剂的种类及使用方法简介如下。
一、枸橼酸钠：枸橼酸钠可与血液中钙离子形成可溶性螯合物从而阻止血液凝固。
常用于临床检验中凝血象的检查，其使用浓度为109mmol/l，例如我实验室APTT、PT的检查，抗凝剂与血液比例为1：9。
也用于血沉的测定，抗凝剂与血液比例为1：4。
二、乙二胺四乙酸盐（EDTA）：EDTA的二钠、二钾和三钾盐，均可与血中钙离子形成螯合物，从而阻止血液凝固。
通常配成15g/l水溶液，用于实验室使用。
EDTA盐对血小板形态和血细胞形态影响很小，因此适用于血液常规检查，特别是血小板计数，但影响血小板聚集和白细胞吞噬功能，故不适于做凝血象检查和血小板功能试验。
此外，此抗凝剂特别适用于红细胞比积测定，室温放置48小时红细胞体积不变。
因此，我实验室EDTA—K2抗凝的全血用于血常规检查。
三、肝素：肝素与抗凝血酶Ⅱ一起，低浓度时抑制凝血因子IXa5、PF3之间的作用，加强抗凝血酶Ⅲ（AT—Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用。
因此，肝素具有抗凝能力强，不影响血细胞体积，不易溶血等优点，是一种较好的抗凝剂。
可用于红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞比积测定和多种生化分析，也是抗血栓药物之一。
但过量肝素可引起白细胞聚集和血小板减少，故不适用于白细胞分类和血小板计数，更不能用于凝血象检查。
由于肝素抗凝时间短，久置易失效，价格昂贵，所以凡能使用普通抗凝剂者，一般不用肝素。
如用肝素抗凝的血液，就应在短时间内完成检测。
我实验室血流变检测和血气分析用肝素作为抗凝剂。
四、草酸钠：草酸钠可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。
常用抗凝剂的配置、用法和选择
常用抗凝剂的配置、用法和选择常用抗凝剂大致分为三类，一类为化学药品。
其作用为消除钙离子作用。
使血液中的钙转变成可溶性的，但不离子化的络合物，药物如枸橼酸钠，草盐酸和二乙胺四乙酸二钠等。
另一类为生物制剂，如肝素，其作用是阻止凝血酶的生成，从而抗凝。
第三类为离子交换剂，系采用物理性方法防治血液凝固。
1.枸橼酸钠（Sodium citrate）：溶于水，不溶于醇。
可直接用本品粉末，每ml血液加3~5mg，用于红细胞沉降率测定。
按30mg/ml的枸橼酸钠溶液1份，血液9份比例混合剂可使血液不凝固。
因本贫碱性较强，可用枸橼酸调节pH接近7.0，所含成份为枸橼酸钠56mg/ml，枸橼酸5mg/ml和葡萄糖29mg/ml，成为复方枸橼酸钠抗凝剂，常用于各种动物连接血压计时的抗凝。
现用的枸橼酸钠有两种：（1）枸橼酸三钠（Trisodium citrare）：有两种结晶水含量不同的成品,一种是2Na3C6H5O7·11H2O,其与血浆成等渗浓度为 3.8%;另一种是Na3C6H5O9·2H2O与血浆成等渗浓度为3.2%（2.5%~4.0%），均为碱性，枸橼酸或其盐与钙作用生成可溶性络合物，当制成2.5%溶液时，Ph为7.5。
最低的抗凝浓度为0.2%，一般在血液中的最终浓度应为0.4%~0.6%，是长久以来国际上最通用的抗凝剂。
（2）枸橼酸二钠（Disodium citrare）:因其中含有大量的枸橼酸离子，属于酸性的枸橼酸。
3.5%溶液的pH为4.5，其优点是：简化了配置保存液的处方及其配制手续；防止高压消毒时葡萄糖的焦化现象，但大量输血时，枸橼酸钠可能产生毒性反应。
2.草酸钾（Potassium oxalate）和草酸钠（Sodium oxalate）:草酸溶于水，微溶于醇，具有溶解度大，抗凝作用强的特点。
体外抗凝时1ml 血液用草酸钾1~2ml,微量检验用血较少时，可配成20mg/ml溶液。
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常用抗凝剂的配制及用法
在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。
对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。
一、肝素
（1）肝素抗凝作用原理
肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。
注意事项：做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制剂！
（2）配制和用量
纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U，10~20U能抗1 ml血液计)。
但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。
一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0．1毫升于试管内，100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。
也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。
在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2．5～3．0mg/200～300g体质量，兔10mg／kg体质量，狗5～10mg／kg体质量。
肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。
市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。
二、草酸盐合剂
（1）原理
草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3：2比例配臵，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。
此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。
（2）配制方法及用量
草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂0．1ml(即相当草酸铵1．2mg，草酸钾0．8mg)。
根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。
如取0．5ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。
（3）注意事项
草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。
用时注意加的量应适中，不能过多，以免妨碍去蛋白质血滤液的制取。
不适用于血液内钙或钾的测定，也不能用于血液非蛋白氮测定。
三、枸櫞酸钠
常配成3～5%水溶液。
也可直接加粉剂，每毫升血加3～5mg，即可达到抗凝目的。
枸櫞酸钠可使钙失去活性，防止凝血。
但其抗凝作用较差，碱性较强，不宜作化学检验之用。
仅可用于红细胞沉降速度测定。
急性血压测定实验所用枸櫞酸钠为5～6％溶液。
四、草酸钾
（一）原理和注意事项
草酸钾为最常用的抗凝剂。
其与血液混合后可迅速与血液中的钙离子结合，形成不溶解的草酸钙，使血液不凝固。
常用于非蛋白氮测定，但不适用于测定钾和钙。
草酸盐能抑制乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性，故应注意。
（二）配制及使用方法
取草酸钾10g，加蒸馏水少许使溶解，再加蒸馏水至100ml。
配制成10％水溶液，如每管加0.1ml则可使5~10ml血不凝。
一般如作微量检验，用血量较少，可配制成2％溶液，如每管加0．1ml可使1~2ml血液不凝。
五、乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA）
EDTA对血液中钙离子有很大的亲和力，能与钙离子络合而使血液抗凝。
每0.8mg可抗凝1ml 血液。
除不能用于血浆中钙、钠及含氮物质之测定外，适用于多种抗凝。
六、（酸性）柠檬酸葡萄糖溶液B（ACD）（用于新鲜抽提或者是冻存的血样品，实验室常用）
柠檬酸钠：1.32%（M/V）
柠檬酸：0.48%（M/V）
葡萄糖：1.47%（M/V）
ACD抗凝剂为：柠檬酸0.48g、柠檬酸钠1.32g、葡萄糖1.47g，加水至100ml，灭菌后备用
一般20ML新鲜血液中加入3.5ML ACD抗凝剂。
比例依次类推！！
血液可以在0度条件下保存数天，或者是零下70度条件下无限期保存！
注意事项：做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制剂！
从全血中制备基因组DNA，ACD做为抗凝剂要优于EDTA，因为他更加能保存高分子质量的DNA，然而，血样常常被收集于用定量EDTA作为抗凝剂的小管中。
在大多数美国的医院中，收集血样的小管均用颜色标明是否含有抗凝剂，紫色顶管盖的小管一般含有抗凝剂，通常是EDTA的干粉。
黄色顶盖的小管不含抗凝剂。
在分子克隆实验中，前者一般用于收集血样用于制备基因组的DNA，后者用于收集血样作为用EB病毒的永生化淋巴细胞的来源。
这些永生化的细胞可以作为可更新的来源来制备大量的DNA 以备后用，如进行遗传学的研究等等！。