PET线无菌验证方案(WORD版)

PET包装

生产线

无菌验证方案

批准：审核：编制：

1.目的及要求

1.1本方案规定了PET设备无菌验证的必备程序。

1.2本方案用于以下几种情况：

1.2.1新安装PET线无菌验证时；

1.2.2PET线大修后无菌验证时；

1.2.3PET线与无菌环境相关联部位进行改造、更换时；

1.2.4PET线出现严重质量问题需要重新验证时。

1.3本方案包括S1－S7过程，只有在新PET线安装后无菌验证时需要全部完成，其余情况适用时可根据设备维修情况减少过程。

1.4所有过程及结果必须记录，报告品控经理，并存档备查。

2.实验前准备

2.1无菌验证执行之前，需制定验证流程及时间进度表，并告知所有相关方。必要时需与外方工程师确认合同中规定的验证内容。验证前需对以下情况进行确认：

2.1.1了解机器安装进度

a.确认微生物方面内容

b.微生物实验室内部确认

c.微生物仪器确认（液体取样器，气体取样器，超净台，移液枪，振荡器等）

2.1.2确认水处理参数，保证供水质量稳定（主要为硬度，微生物，电导率，pH等）

2.1.3设备安装、大修完毕后,关注CIP/SIP/COP/SOP的运作，主要为化学品浓度（CIP，COP，SOP实验，连续三次化学品浓度稳定在范围之内），SIP温度参数确认，取样时间，顺序以及取样

点要与生产、设备部门、外方共同确认。

3.实验程序

S1着色测试（如设备存在自动COP系统功能时）

目的：验证灌装机内部清洗是否无死角

共18页第2页

进行着色测试前，运行COP/SOP，记录下喷头类型以及位置。

a.对比以往SOP喷头与现时喷头位置

b.通过图纸对比，来确认可能喷不到的点，以及关键区域的点，加以关注

c.准备染色溶液，进行着色实验，并且准备电筒，纸巾，对可能着色不到的地方进行确认。

染色溶液准备：52g可溶性淀粉（可用其它增稠剂替代），2g胭脂红（可用其它色素替代，数量

可调整，以清晰着色为准），2L纯净水溶解，煮沸后待用。

对微生物实验室中的杀菌锅，灌注系统，UHT系统（如有）的SIP温度，以及UHT保持管末端温度使用温度测试条进行验证。

实验过程：用背负式喷雾器将灌装机内装有自动COP喷头的所有区域进行均匀喷雾着色，操作不

方便的部位采用喷壶手动喷雾，确保所有区域均匀着色。之后启动设备自动COP过程，待设备自

动COP结束后观察有颜色残留的地方。检查喷头位置，调整到最佳状态，再次进行着色试验。新

线无菌验收时，请外方工程师将喷头调整到无着色残留为止。大修时，有颜色残留点作为手动泡

沫清洗之重点，并以文件形式规定这些重点，专人验证。

以上任务完成后，确认钢片位置，钢片位置必须包括着色残留点。

S2贴片测试（当设备具备SOP功能设定时）

目的：检验灌装机SOP效果

事先准备材料：移液枪（如图一）（1ml，0.1ml，0.01ml，推荐另配一把1-9ml）以及枪头各100

个，细菌悬浊液（除特殊说明，本方案中所提到的细菌悬浊液全部使用枯草芽孢杆菌），钢片50

片（如图二），钢片可以购买也可以自制，自制规格为长×宽×厚＝50×20×(1~2)mm，一端带

孔，孔径为6mm。100ml塑料圆盒(洗脱液盒)50个，不锈钢托盘3个，锡箔纸5卷，平皿（塑料

/玻璃均可），TSA培养基（胰酪胨大豆琼脂，枯草芽孢杆菌检测专用琼脂），3M胶带，扎带，

针筒（1ml，10ml各一个），振荡器（如图三）（可选），摇床（可选），三角瓶以制备培养基

以及无菌水，以及其他微生物实验室仪器耗材等。

接种环境：

确定一间远离生产区域和实验室的房间作为接种室，内部有恒温设施，温度计，湿度计，生

石灰（作为干燥剂），桌、椅各一张。出入此房间人员必须严格控制。钢片接种、空瓶、空盖接

共18页第3页

种全部要求在接种室进行。

污染控制:凡是使接触或可能接触过菌种的地方都要进行消毒，尤其是生产车间内的灌装间，凡是接触过菌种的设备，工具，仪器表面必须进行高温灭菌或者相对应的处理。

验证衣着：S2-S5验证都应当穿着无菌服，手套，进行全身杀菌的条件下进行。

转移：

移入生产车间前，样品需要事先用消毒过的铝箔或塑料袋密封保存，不能污染其他生产区域。

试验相关要求：

将样品按照验证程序要求，进行相应的处理，完毕后采用无菌取样的方式移出，进行微生物检验。操作前，按照要求进行洗手、更衣、消毒等人员卫生程序。不相关的人员严禁进入净化间，避免人为污染的存在。所用工具事先完成消毒处理。操作过程中产生的废弃包装物、废弃样品和防护用品等物品及时销毁，并对相关操作区域和接触过的区域进行彻底消毒处理。

图一、移液枪图二、钢片

图三、振荡器

共18页第4页

钢片接种：将菌种原液稀释进行梯度稀释（假设菌种浓度已给定，为 1*10 菌悬液），首先用无菌 针筒，取 1ml 菌液，至 9ml 无菌水试管中，用振荡器混匀（ 此时菌种浓度为 1*10 ），成 为 稀 释 液 A ，

然后取稀释液A 0.1ml 至灭菌钢片上（此时菌种浓度为 1*10） ，具体数量参照验证协议，室温干

燥 6-10 小时（可以事先备好生石灰做干燥剂），（此时钢片上的菌种估计为 1*10 ，干燥期间细菌

材料处理：钢片用锡纸包裹，与培养基，无菌瓶一起杀菌，待用。接种前，先用振荡器，把菌种 的悬浊液混匀。用无菌水制成规定浓度的细菌溶液备用。接种完毕之后， 用不锈钢托盘，垫一层 锡箔纸，把钢片接种面向上，整齐排列在锡箔纸覆盖的托盘之上，放置完毕之后，再用一层锡箔

纸覆盖在托盘之上。

9

8

7

6

数量可能减少一个数量级，请依照预实验情况，以及接种环境条件进行接种）。接种钢片 50 个，

预留 10 片作对照，不放入灌装机，用于初始接菌量的检验。 干燥后，用不锈钢托盘，用铝箔纸托底，将钢片接种面向上放置。

钢片安置（如图四）：菌液干燥后，就可进行 S2。接种后钢片使用塑料扎带或者双面胶，悬挂或

黏贴在之前通过着色实验确认的点上，贴片点 30－40 个。安置钢片时，可由三人进行操作，一 人在无菌环境内安置，其余两人则协助钢片安置，比如为其用酒精消毒，穿戴鞋套，递送工具等。

钢片安置完毕之后，关闭灌装机各个密封门，并且确认。之后进行 SOP ，期间由相关人员对灌装 间 SOP 的实际时间进行确认。关于 SOP 参数，需事先取得，依照此数据试验。

图四、1、贴片点：灌装机进甁星轮

2、贴片点：旋盖头表面

共 18 页第 5 页