维真生物-稳转株的制备
HEK-293T ACE2 细胞稳转株使用说明书
派真生物HEK-293T/ACE2 细胞稳转株使用说明书HEK-293T/ACE2 细胞稳转株HEK-293T/ACE2 细胞稳转株ACE2即血管紧张素转化酶II（Angiotensin-converting enzyme2）是一种Ⅰ型膜蛋白,其包括一个N端肽酶结构域( peptidasedomain,PD)和一个C端 Collectrin样结构域（Collectrin-ikedomain,CLD）。
ACE2的PD为冠状病毒的S蛋白提供了直接结合位点。
冠状病毒因其病毒脂质层外由棘突蛋白） spike protein,S蛋白）构成的冠状突起而得名。
冠状病毒通过S蛋白与靶细胞表面特定受体结合,然后进入细胞复制并引起宿主感染。
冠状病毒的S蛋白包含S1及S2两个亚单位,其中S1包含受体结合域（RBD）,RBD直接与血管紧张素转换酶2（ACE2）结合,S2负责与宿主细胞膜融合。
当S1与宿主受体ACE2结合时,S2上的裂解位点暴露并被宿主蛋白酶切断,此过程对于病毒感染十分重要。
本细胞系是将ACE2过表达慢病毒感染293T细胞并筛选得到的稳定株。
HEK-293T/ACE2 细胞稳转株产品描述产品名称：中文名称：包装规格：特性蛋白：HEK-293T/ACE2过表达人源 ACE2 的人肾上皮细胞2管（细胞数1E+7个/管）过表达人的血管紧张素转化酶 2 蛋白（ACE2）建议第一次 1:2 传代。
2 天换液10%DMSO +90%完全培养基Puro 嘌呤抗性传代方法: 传代情况：冻存条件：备 注：检测报告：提供感染滴度数据、293T /hACE2感染图片或荧光素酶表达量结果派真生物复苏细胞：将含有2mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 5mL 培养基混合均匀。
在 1000rpm 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀。
然后将所有细胞悬液加入 10cm 皿中培养过夜，培养过夜。
维真生物-如何阅读基因载体图谱
如何阅读基因载体图谱1、按属性分类：病毒载体和非病毒载体病毒载体是一种常见的分子生物学工具，可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入目的细胞，进行感染的分子机制。
可发生于完整活体或是细胞培养中。
可应用于基础研究、基因疗法或疫苗。
用于基因治疗和疫苗的病毒载体应具备以下基本条件：（1）携带外源基因并能包装成病毒颗粒；（2）介导外源基因的转移和表达；（3）对人体不致病；（4）在环境中不会引起增殖和传播。
非病毒载体一般是指质粒DNA。
2、按进入受体细胞的类型分类：原核载体、真核载体、穿梭载体（含原核和真核2个复制子，能在原核和真核细胞中复制，并可以在真核细胞中有效表达）。
3、按功能分类：克隆载体、表达载体克隆载体：具有克隆载体的基本元件（Ori，Ampr，MCS等），可以携带DNA片段或外源基因进入受体细胞并克隆和大量扩增DNA片段（外源基因）的载体。
表达载体：克隆载体中加入一些与表达调控（具有转录/翻译所必需的DNA顺序）有关的元件即成为表达载体。
1、复制起始位点Ori：即控制复制起始的位点。
Ori的箭头指复制方向，其他元件标注的箭头多指转录方向（正向）。
2、抗生素抗性基因：可以便于加以检测，如Amp+ ，Kan+（1）Ampr：水解β-内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr ：可以阻止四环素进入细胞。
（3）camr：生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
（4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸转移酶，使G418（卡那霉素衍生物）失活。
（5）hygr：使潮霉素β失活。
3、多克隆位点：MCS克隆携带外源基因片段，它具有多个限制酶的单一切点，便于外源基因的插入。
如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，便于筛选。
决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
还要再看外源DNA插入片段大小。
质粒一般只能容纳小于10kb的外源DNA片段。
一般来说，外源DNA片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。
Vigene-稳转株构建流程
Vigene-稳转株构建流程
本文将介绍 Vigene Biosciences 公司提供的稳转株构建流程。
该流程适用于将
外源基因稳定地整合到目标细胞株中，并实现其高效表达。
以下是详细的步骤及操作细节。
1. 提供模板质粒和目标细胞
在开始构建稳转株前，需准备两种重要的生物材料：模板质粒和目标细胞。
其中，模板质粒包括外源基因和表达载体，可通过基因合成或克隆技术获得；目标细胞则根据不同的研究目的选择，如 HEK 293、CHO、及其他细胞株。
2. 质粒转染和筛选
将待转染的目标细胞株接种在培养皿或板上并培养至适当的密度。
使用细胞转
染试剂将模板质粒导入细胞内，使其整合到宿主基因组中。
经过一段时间（如48
小时）后，加入必要的筛选物质（如抗生素、抗代谢毒素等），淘汰未转染成功的细胞。
剩余的细胞则继续进行培养和筛选，直至筛选出稳定的转染株。
3. 稳定株的筛选和鉴定
使用 Western blot、荧光定量等多种技术手段，对稳定株进行鉴定和筛选。
只
有表达效果和稳定性良好的稳转株才能继续进行后续实验。
4. 大规模细胞培养和基因组验证
经过以上步骤的筛选和鉴定，获得的稳定转染株可进行大规模细胞培养。
同时，建议采用PCR、Southern blot等技术验证外源基因和宿主基因组的连接情况，并
进一步评估稳定转染株的表达特性和稳定性。
5. 结论
Vigene Biosciences 公司提供的稳转株构建流程是一套高效且经济实用的技术路线，能帮助研究者在较短的时间内获得稳定的转染株。
本文介绍了该流程的基本步骤及操作要点，供读者参考。
miRNA腺病毒操作手册-推荐下载
miRNA腺病毒操作手册miRNA简介MicroRNAs（miRNAs）是一类长度为18-24个核苷酸的非编码RNA分子。
MiRNA通过与靶基因mRNA上的互补序列结合，降解mRNA或抑制mRNA的翻译。
MiRNAs在细胞分化、增殖、凋亡和癌细胞发生中发挥重要的调控作用。
MiRNAs 来源于具有60-80 个核苷酸茎环结构的microRNA 前体（premir）和序列更长一些的microRNA初级转录产物（primir）。
MiRNA在核内由RNA聚合酶II（polII）转录生成，最初产物primir具有帽子结构和多聚腺苷酸尾巴。
ViGene生物的mirAD-腺病毒microRNA前体表达系统包括三个相关产品：microRNA前体穿梭载体、microRNA前体腺病毒载体和预制microRNA前体腺病毒。
microRNA前体腺病毒简介重组腺病毒是进行基因转移和表达的工具，功能强大且易于操作。
腺病毒独特的生物学特征使它成为“载体的首选”，被科研工作者广泛应用。
首先，它能够感染包括分裂、非分裂细胞和干细胞在内的多种细胞。
第二，病毒滴度高。
第三，高滴度的病毒可获得高感染效率和高表达量。
第四，病毒进入细胞后，病毒基因组不整合到细胞染色体上，因此瞬时表达外源基因的重组腺病毒不会诱导宿主细胞中染色体的变化。
ViGene生物选用的是应用最广泛的复制缺陷型的人类血清5型腺病毒，该腺病毒载体缺失E1和E3基因。
E1 基因在组装感染性病毒颗粒时必不可少，可在HEK293T细胞病毒包装过程中得到补充，而E3基因可有可无。
由于E1和E3基因的缺失，腺病毒载体可插入高达7.5kb的外源基因。
pMir-microRNA precursor 是基于microRNA 前体表达系统的质粒。
microRNA前体天然的茎环结构被克隆到质粒的SgfI和MluI双酶切位点。
为了保持推测的发卡结构和诱导正确的内源性反应，miRNA茎环结构的两侧具有它的150-200bp的天然序列。
贝伐珠单抗生产工艺
贝伐珠单抗生产工艺贝伐珠单抗（Bevacizumab）是一种抗血管内皮生长因子（VEGF）的人源化单克隆抗体。
它被广泛应用于多种癌症的治疗，特别是结直肠癌、肺癌和乳腺癌等实体肿瘤的治疗中。
本文将介绍贝伐珠单抗的生产工艺。
贝伐珠单抗的生产工艺主要包括以下几个步骤：细胞株的建立、发酵过程、纯化过程和灭活处理。
第一步，细胞株的建立。
贝伐珠单抗的生产需要建立一个稳定的细胞株，用于大规模生产抗体。
一般选择哺乳动物细胞，如CHO（中国仓鼠卵巢）细胞或NS0（鼠骨髓瘤）细胞作为生产细胞株。
细胞株的选用需要考虑细胞的生长特性、表达能力和稳定性等因素。
第二步，发酵过程。
在发酵过程中，选用经过基因工程改造的细胞株，通过培养基中添加适当的营养物质和生长因子，使细胞进行大规模培养和繁殖。
随着细胞的生长，它们会分泌出贝伐珠单抗。
发酵过程中需要控制培养基的温度、pH值、溶氧量等参数，以促进细胞生长和抗体的产生。
第三步，纯化过程。
在纯化过程中，首先对培养液进行初步的固液分离，去除细胞碎片和大分子杂质。
然后使用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等技术，对贝伐珠单抗进行进一步的纯化。
最后，使用高效液相色谱技术对纯化后的贝伐珠单抗进行最终的纯度检验。
第四步，灭活处理。
贝伐珠单抗属于生物制剂，具有一定的活性。
为了确保其安全性和稳定性，需要进行灭活处理。
常用的方法是使用化学试剂或高温等方式对贝伐珠单抗进行灭活，以杀死残留的活性细胞和病毒等。
贝伐珠单抗的生产工艺需要严格控制各个环节的条件和参数，以确保产品的质量和效力。
在生产过程中，需要进行多次的质量控制和检验，包括细胞株的鉴定、培养液的分析、抗体的纯度和活性的检测等。
同时，需要遵守相关的药品生产规范和质量管理体系，确保产品的安全性和可靠性。
贝伐珠单抗的生产工艺在不断地优化和改进中，旨在提高产量和纯度，降低成本和污染物的生成。
随着生物技术的不断发展和成熟，相信贝伐珠单抗的生产工艺将会进一步完善，为更多患者提供有效的治疗选择。
(完整word版)Vigene稳转株构建流程
Vigene 稳转株构建流程稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。
慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛应用的稳转株构建方法，具有高效整合、目标细胞广泛等特点。
一．准备及预实验1.确定细胞系相关信息，需包括如下内容注:为避免慢病毒感染后细胞死亡，务必保证细胞无支原体污染！2.预实验确定MOI值（1）查阅文献确定慢病毒在目标细胞系中的MOI；（2）参考查阅得到的数据，设计梯度实验,摸索最适MOI。
3.预实验确定筛选药物用量:（1）查阅Puromycin/Blastincidin等在目标细胞系中稳转株筛选的致死用量信息；（2）参考查阅得到的数据，确定3个药物浓度梯度（如没有相关信息，则需将药物浓度梯度范围增大，数量增多至6个）；（3）Day0将细胞铺于6孔板中，使Day1细胞融合度约90%；（4）Day1按(2）中设置的药物梯度，加入药物；（5）Day4换液，并重新加入药物；（6）Day7观察，找到致死率100％的孔，该孔使用的药物浓度，即为药物筛选浓度。
附1：经验筛选药物用量二．稳转株筛选及构建注:以下实验参数，按1株稳转株为例描述，实验需考虑有无对照稳转株！4.细胞铺板：将细胞接种于6孔板中（4个孔），使次日细胞融合度约70％5.病毒感染：根据预实验确定的MOI值,计算慢病毒体积,添加慢病毒(每孔添加ADV-HR 2μL）; 6.换液：慢病毒感染次日，将细胞进行换液处理；7.观察感染效率：感染后72小时，观察感染效率,效率最低不应低于40%。
8.筛选:（1）多克隆稳转株:从感染72小时后开始于6孔板中加筛选药物，每隔2天,重新换液加入药物.药物筛选需至少持续14天，直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%。
注：第一次加入药物时在上午进行，4—6小时后观察细胞状态，如细胞死亡过多，需更换新鲜不含药物的培养基。
附2：多克隆稳转株多克隆稳转株的荧光通常强弱夹杂。
曲妥珠单抗生产工艺
曲妥珠单抗生产工艺
曲妥珠单抗是一种用于治疗乳腺癌和胃癌等恶性肿瘤的药物，其生产工艺包括以下步骤：
1. 培养细胞：首先，选取一种特定的生物工程细胞株（如
CHO细胞），并将其培养在合适的培养基中，提供充足的养
分和适宜的环境条件，以促进细胞生长和增殖。
2. 培养基优化：通过对培养基成分和条件的调整，优化细胞生长和抗体产量，包括提供合适的营养物质、调节pH值和温度、维持充足的氧气和二氧化碳供应等。
3. 表达向量构建：将含有曲妥珠单抗基因的表达向量构建入细胞株中，使其能够稳定产生和分泌曲妥珠单抗。
4. 细胞培养和扩增：将含表达曲妥珠单抗基因的细胞株进行大规模培养和扩增，以获得足够数量的细胞数量以及相应的曲妥珠单抗产量。
5. 收获和纯化：当细胞达到最佳生长状态并产生足够的曲妥珠单抗时，通过离心分离细胞和培养基，获得细胞上清液中的曲妥珠单抗。
6. 纯化和浓缩：对细胞上清液进行一系列的过滤、纯化和浓缩步骤，去除杂质并提高曲妥珠单抗的纯度和浓度。
7. 检测和分析：对纯化后的曲妥珠单抗进行质量控制和分析，
包括抗体浓度、纯度、活性等的检测，以确保产品符合质量标准。
8. 灭菌和填充：将符合质量要求的曲妥珠单抗进行灭菌处理，然后进行产品容器的填充和封闭，确保产品的无菌和长久的保存。
9. 包装和标签：对灭菌和填充后的曲妥珠单抗产品进行包装和标签，以便于使用和追溯。
以上是曲妥珠单抗的生产工艺的一般步骤，实际生产中可能还涉及其他的工艺细节和检测要求，供应商会根据具体情况进行调整和优化。
CHO稳定细胞株开发步骤有哪些？稳定细胞株筛选原理详解
CHO稳定细胞株开发步骤有哪些？稳定细胞株筛选原理详解CHO（中国仓鼠卵巢）细胞株是目前最常用的哺乳动物细胞株之一，被广泛应用于生物制药、生物技术、疫苗制备等领域。
稳定细胞株是指在细胞培养中，将外源基因集成到细胞染色体中并稳定表达的细胞群体。
稳定细胞株具有表达稳定、重现性好等优点，可用于大规模蛋白质生产。
CHO稳定细胞株开发的主要步骤如下：克隆：选择具有高表达能力的基因，将其克隆到合适的表达载体中，如pcDNA3.1、pCDM8等。
转染：将表达载体导入CHO细胞中，使其表达外源基因。
转染方式有多种，如电穿孔、钙磷共沉淀、透析等。
筛选：利用筛选标记（如耐药基因或荧光标记）对转染细胞进行筛选，筛选出高表达的克隆细胞。
扩增：将选出的细胞进行扩增，直至获得足够量的细胞。
稳定化：将稳定的克隆细胞继续培养，保持其稳定表达目标基因。
鉴定：通过Western blot、ELISA等方法对细胞株进行鉴定，验证其表达目标基因的能力和稳定性。
在CHO稳定细胞株开发过程中，还需要注意培养条件的优化，包括培养基配方、温度、CO2浓度、氧气含量等。
此外，对于不同的目标蛋白，还需要针对性地优化表达条件和纯化方法。
稳定细胞株筛选原理及方法：稳定细胞株筛选是指通过对转染后的细胞群体进行筛选，筛选出稳定集成了外源基因并稳定表达的细胞株。
其基本原理是依赖于转染细胞后外源基因的选择性筛选和纯化。
常用的稳定细胞株筛选方法有两种：抗生素筛选法：将外源基因构建在带有特定抗生素耐受基因的质粒上，转染细胞后在培养基中加入相应抗生素，使只有带有外源基因的细胞能够在抗生素的选择压下存活，其他未集成外源基因的细胞则被杀死。
选择性标记物筛选法：外源基因构建在带有选择性标记物（如荧光蛋白、酶标记等）的质粒上，转染细胞后通过标记物筛选，筛选出带有外源基因的细胞群体。
选择性标记物可以使用光学显微镜、流式细胞仪等设备进行检测和纯化。
两种筛选方法各有优缺点，抗生素筛选法虽然常用但存在一些问题，如转染细胞的抗生素耐受性存在差异，有可能导致筛选结果的不确定性；而选择性标记物筛选法可以减少抗生素对细胞的影响，但其纯化效率较低，需要更复杂的实验设备和技术。
细胞稳转株构建方法
细胞稳转株构建方法细胞稳转株构建，这可是个超级有趣又超级重要的事情啊！就好像盖房子，得先有牢固的地基一样。
细胞稳转株的构建就是为后续的各种研究和应用打下坚实的基础呢。
首先来说说什么是细胞稳转株。
简单来讲，就是让外源基因能够稳定地在细胞里表达。
这可不是一件容易的事儿哦！就好比要让一个外来的“客人”在一个新家里舒舒服服地住下来，还得长期住下去。
那怎么做到呢？这就需要一系列精巧的操作啦！第一步，得选好合适的载体。
这载体就像是给外源基因准备的“交通工具”，得合适才行。
它要能把基因安全、高效地运送到细胞里。
然后呢，就是把外源基因整合到载体上，就像给交通工具装上货物。
接下来，把这个带着外源基因的载体导入细胞里，这可是个关键步骤，就好像把客人送到新家里一样。
这时候就有人会问啦，那怎么知道基因有没有成功导入呢？嘿嘿，这就需要一些检测手段啦！比如通过一些特定的标记来看看基因是不是真的在细胞里安家了。
这就好比要看看客人是不是真的在新家里住下了，还过得好不好。
构建细胞稳转株的过程中，每一个环节都不能马虎啊！就像一场精心编排的舞蹈，每一个动作都要恰到好处。
要是有一个环节出了错，那可就前功尽弃啦！这可不是开玩笑的呀！而且，不同的细胞类型可能需要不同的方法和策略呢。
这就像是不同性格的人，得用不同的方式去对待。
这多有意思呀！在这个过程中，科学家们就像一群智慧的魔法师，用他们的双手和智慧创造出一个个神奇的细胞稳转株。
他们不断尝试，不断探索，不放弃任何一个可能的机会。
这不正是科学的魅力所在吗？细胞稳转株构建成功后，能带来很多好处呢！可以用于各种研究，比如疾病机制的研究、药物筛选等等。
这就像是打开了一扇通往新知识的大门，让我们能更深入地了解生命的奥秘。
总之，细胞稳转株构建是一项充满挑战和机遇的工作。
它需要我们的耐心、细心和智慧。
让我们一起为这个神奇的领域加油吧！。
耐药胞株构建
稳定/耐药细胞株构建一、服务介绍稳定表达细胞株（稳转细胞株）指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。
稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长期稳定表达该基因。
本公司可提供普通脂质体转染后单克隆法筛选,以及病毒感染后筛选稳定株和耐药株二、技术原理稳定表达细胞株（稳转细胞株）指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。
稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长期稳定表达该基因。
用转染质粒或病毒侵染的方法将构建好的含靶基因的载体导入细胞，根据不同的基因载体中所含的抗性标志选用相应的药物进行筛选混合阳性克隆。
在阳性混合克隆的基础上，得到单细胞长出的阳性单克隆，继而得到稳定转染细胞株。
常用的真核表达载体的抗性标志物有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）三、操作流程1、载体构建：将外源基因构建到合适的载体上，如需病毒转染，则包装病毒。
2、筛选浓度测定：以14 天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。
3、细胞接种：转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定4、细胞转染：用构建好的载体（或包装好的病毒）转染目的细胞。
5、抗生素筛选。
6、鉴定筛选结果四、客户提供1.外源基因及相关基础数据；2.生长状态良好的靶细胞系,特殊细胞需提供培养基3.与该技术相关其它信息五、实验结果提供形式1、构建完成的稳定/耐药细胞株以及对照细胞株2、稳转/耐药细胞株标准实验报告及相关的外源基因表达分析结果3、实验流程及报告电子版本一份六、实验服务周期约5-8周左右，具体时间根据细胞生长,药物诱导情况而定。
七、质量承诺及舜百优势a.稳定：舜百生物保证20代以内稳定转染细胞稳定表达。
b.迅速：一般控制在1.5个月以内完成构建。
c.经济：价格实惠，性价比高。
d.质量保证：对外源基因进行严格鉴定。
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稳转株的制备
实验原理：
利用哺乳动物系统生产蛋白的方式有两种：瞬时转染和稳转株筛选。
通过稳定细胞系构建筛选稳定表达细胞株。
针对瞬时转染，外源基因在短时间转录翻译得到的蛋白量较少，能够满足小量蛋白制备，大量生产成本很高。
相对于此，稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上，随着细胞的生长分裂外源基因可以稳定转染表达，同时经过抗生素加压筛选，最终得到能够稳定转染表达蛋白的细胞株，稳转株生产蛋白稳定性更好，批次差异性更小。
稳定转染的应用
影响稳定转染的因素
1、外源基因整合的几率
决定了稳转株筛选的简易程度，有利于稳定转染细胞的获得；
2、插入外源基因片段的拷贝数
一般情况下，低拷贝或者单拷贝可以降低人为因素的干扰；
3、整合位点转录活跃度
整合位点转录活跃度决定了稳转株筛选细胞后稳转株中外源基因片段的表达质量；
4、外源基因片段整合到细胞后的稳定性
不同的整合位点决定了外源片段在染色体中的稳定性，有些区域易发生重组或者丢失，从而使稳转株筛选后出现丢失的现象。
制备稳转株的实验步骤
一．准备及预实验
1、确定细胞系相关信息：需包括如下内容
注：务必保证细胞无支原体污染，方可进行稳转株构建！
2、查阅慢病毒感染该细胞的MOI值
3、预实验确定筛选药物用量：
（1）查阅Puromycin/Blastincidin在目的细胞中稳转株筛选的致死用量信息；参考查阅得到的数据，确定3个药物浓度梯度（如没有相关信息，则需将药物浓度梯度范围增大，数量增多至6个）；
（2）D0将细胞铺于6孔板中，使D1细胞融合度约90%；D1按（1）中设置的药物梯度，加入药物；
（3）D4换液，并重新加入药物；
（4）D7观察，找到致死率100%的孔，该孔使用的药物浓度，即为药物筛选浓度。
二．稳转株筛选及构建
注：以下实验参数，按1株稳转株为例描述，实验需考虑有无对照稳转株！
1、细胞铺板：D0将细胞接种于6孔板中（4个孔），使D1细胞融合度约70%
病毒感染：
2、慢病毒上清：分别弃去6孔板中3个孔的0.5毫升培养基、1毫升培养基、2毫升培养基和，分别加入2毫升慢病毒上清、1.5毫升慢病毒上清和0.5毫升慢病毒上清；
3、纯化慢病毒：选3个孔，并可按推荐MOI、大于此MOI及小于此MOI，共三个MOI值，添加慢病毒；
4、观察感染效率：感染后72小时，观察感染效率，效率高于80%最佳，最低不应低于40%，选择1-2个感染效率较好的孔。
5、筛选：
(1)多克隆稳转株：从感染72小时后开始于6孔板中加筛选药物，每隔2天，重新换液加入药物。
药物筛选需至少持续14天，直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%。
注：第一次加入药物时在上午进行，4-6小时后观察细胞状态，如细胞死亡过多，需更换新鲜不含药物的培养基。
(2)单克隆稳转株：建立在获得多克隆稳转株基础上。
A、有限稀释法：
a.取24个1.5毫升EP管，每管中加入800毫升完全培养基；
b.用胰酶将多克隆稳转株消化（90%融合度，10毫升培养基终止消化），取80微升至第一个EP管中，混合均匀；
注：应使用1000微升枪尖，混合时不要过度吸打，以免破坏细胞。
c.从第一个EP管中取80微升至第二个EP管中，混合均匀，以此类推。
d.将EP管中的细胞悬液，以每孔100微升，接种于96孔板中；
e.过夜培养后，观察第12-24列，寻找只含有1个细胞的孔，并做好标记；
f.培养3-4周，待标记孔中细胞扩增后，消化传代扩增，即为单克隆稳转株细胞。
注：培养的第一周不要换液，接下来每3-4天换液。
B、平板挑取法
a.计数100个多克隆稳转株细胞，接种于一个10cm培养盘中；
注：尽量吹打均匀，防止细胞聚团。
b.过夜培养后，观察并寻找单个细胞的位置，并在盘底做标记；
c.培养2周；
注：培养的第一周不要换液，接下来每3-4天换液。
d.待标记处的细胞扩增为肉眼可见的白点，使用10微升移液器，调至最大量程，在尖端吸取一点胰酶（约5微升，且尖端为空气），缓慢滴至白点处，保持枪尖静置在白点上，且不让胰酶留出白点所在范围，1min后，迅速吹打，将消化下的细胞转移至96孔板中，传代扩增，即为单克隆稳转株细胞。
约需2-3周。
注：每盘选取20个为宜，在消化时，需按照先消化边缘的，再消化中心的原则，防止克隆之前的相互污染。
培养的第一周不要换液，接下来每3-4天换液。
备注：维真生物公司致力于为广大科研工作者提供优质的病毒包装服务，服务项目包括：科研级和临床级腺病毒、慢病毒、腺相关病毒（AAV）的包装、质粒载体构建、TALEN 基因敲除、基因突变等。
目前为止公司已经拥有人源现货质粒库（18 000个）、腺病毒现货库（12 000个）、腺相关病毒（AAV）现货库，公司还拥有丰富的定制服务项目。
真诚欢迎您咨询与选购！。