直接Coombs试验ppt课件
抗人球试验
直接抗人球蛋白试验1. 原理抗人球蛋白试验，又称Coombs’试验，是诊断自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的重要依据。
用人球蛋白免疫动物使其产生抗体即抗人球蛋白。
抗人球蛋白试剂可凝集被人球蛋白致敏的红细胞。
抗人球蛋白试剂可以喝致敏在红细胞上人球蛋白反应，通过桥梁作用使致敏红细胞出现凝集，呈现阳性反应。
2. 试剂组成抗IgG，C3d（多特异性）10ml/支，1支/盒抗IgG 5ml/支，1支/盒抗C3d 5ml/支，1支/盒3. 试剂保存2-8℃保存，勿反复冻融，储存条件下有效期为24个月。
4. 样本要求应用EDTA抗凝标本，可反应体内红细胞被补体致敏的真实情况，弱怀疑冷抗体引起的直接抗球蛋白试剂阳性，其血液标本凝固应保持在37℃，直到血清被分离出来为止。
5. 操作步骤5.1 直接抗球蛋白试验5.1.1将1滴受检者3%红细胞悬液加入干净的小试管中,用盐水洗涤3次以2400转/分，离心1分钟，每次洗涤后，将上清液全部倒出。
5.1.2加入2滴抗IgG，C3d（多特异性）或者抗IgG或抗C3d，以2400转/分，离心15分钟，用肉眼或借助显微镜管凝集，并按程度记录结果。
5.1.3判断结果必须一定角度轻轻地摇动试管直到松动所有的细胞，然后反复倾斜试管，直到均匀的细胞悬液（阴性）或者凝集物（阳性）为止。
5.1.4如阴性结果，在室温中放置5-10分钟，再离心一次，重读结果。
这样做，阴性反应有时会变成阳性。
注意：仅对C3D和IgA致敏的红细胞有增强作用，IgG致敏红细胞反而会变弱（见注意事项）。
5.2 阳性对照（IgG抗D致敏细胞）5.2.1每批新世纪，或在4℃保存时间过长，需做阳性对照，只要每月一次，1滴阳性对照细胞加2滴直接抗人球蛋白试剂，离心判定结果。
5.2.2在试验中，于判断为阴性的试管内加入1滴阳性对照细胞，再离心，然后重悬液，判定结果。
如果最初洗涤能充分除去所有未结合的球蛋白，结果为阳性。
这是一个重要的对照，因为这是检测细胞是否洗涤充分的唯一方法。
抗人球蛋白实验
抗人球蛋白实验
概述
抗人球蛋白实验（AGT）又称Coombs试 验，是不完全抗体的一种很好方法。抗人 球蛋白是用人血清免疫家兔，产生的抗人 球蛋白抗体，即抗人球蛋白血清。可检测 体内致敏的RBC(直接抗人球蛋白实验)和 体外致敏的RBC(间接抗人球蛋白试验)。
实验原理
直接抗人球蛋白试验是用抗球蛋白试剂直接和待 检RBC进行反应，目的是检测RBC上是否存在 免疫球蛋白，该试验是免疫血液学最长用的试验 之一。大多免疫抗体为IgG类，分子量小,与RBC 相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见 的凝集反应，称为不完全抗体。但在抗-IgG（抗 人球蛋白抗体）参与下，通过抗人球蛋白的桥连 作用，可使RBC与相应抗体（IgG）反应出现肉 眼可见的凝集。
仪器及用具：小试管、吸管、离心机、 37℃水浴箱、显微镜、冰箱等。
试剂
（1）抗球蛋白试剂。 抗球蛋白试剂通常有三种：多特异性抗球 蛋白试剂（简称：多抗，在直抗试验中常 常作为初筛试剂使用）、单特异性抗-IgG 试剂（简称：抗-IgG）和单特异性抗-C3 试剂（简称：抗- C3）。多抗包括了抗IgG和抗- C3两种成分，在直抗试验中一 旦出现阳性结果，通常需要单抗-IgG和抗C3进一步分析。
（2）以1000rpm离心试管，轻轻混合， 观察结果。
结果判定
如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检 RBC凝集者直接抗球蛋白试验为阳性，不 凝集者为阴性。
质量控制
（1）未洗涤的RBC或悬浮血浆中细胞及 用酶处理过的RBC不能用于检测。 （2）所有结果应在检测结束时立即判断， 并熟练掌握其判断标准，结果观察过迟、 重悬浮过度均可产生假阴性。 （3）离心时间和速度应根据阳性对照反 应程度适当调整，不适的离心和温育都会 产生假阴性。
coombs原理
coombs原理
Coombs原理是一种用于检测和诊断血液或体液中存在的抗体
和抗原反应的实验方法。
由英国免疫学家Robin Coombs于1945年提出。
Coombs试验可以用于血型鉴定、自身免疫性溶血性贫血、新
生儿溶血病等疾病的诊断。
该实验方法基于抗体与抗原之间的特异性反应，通过检测抗体与红细胞表面的抗原结合来确定是否存在抗体的结合，进而判断是否存在某种疾病。
Coombs试验主要包括两种类型：直接抗人球蛋白测试和间接
抗人球蛋白测试。
直接抗人球蛋白测试是通过将待测样品（如患者血液）与抗人球蛋白抗体结合后与红细胞悬液进行反应，观察是否发生凝集、沉降等现象来判断是否存在抗体的结合。
间接抗人球蛋白测试是通过将待测样品（如患者血清）加入到已知含有抗人球蛋白抗体的红细胞悬液中，观察是否发生凝集、沉降等现象来判断待测样品中是否存在抗原。
Coombs原理的应用可以帮助医生进行血型鉴定和自身免疫性
疾病的确诊，为疾病的治疗和预防提供重要依据。
抗人球蛋白试验
抗人球蛋白试验（coombs实验）
直接试验：实验原理：本实验是检查不完全抗体试验，包括直接试验和间接试验。
直接试验和间接试验阳性为红细胞表面不完
全抗体存在及血清中游离的不完全抗体存在，判定结果凝
集为阳性。
试剂：
1、受检者红细胞：取患者全血脱纤维蛋白或抗凝，离
心除上清液，用大量生理盐水洗涤红细胞3—5次，
然后制成10%的红细胞悬液。
2、受检血清
3、正常0型混合红细胞：取数名正常0型抗凝血，离
心除血浆，用大量生理盐水洗涤红细胞3—5次，然
后制成10%的红细胞悬液。
4、抗人球蛋白血清
5、抗D血清
6、AB血清
7、0.85%生理盐水
操作方法：
取试管3支
1 2 3
反应物（低）
受检者阳性对照阴性对照
受检者压积红细胞 2 ——
对照同型压积红细胞— 2 2
抗D血清— 4 —
AB血清—— 4
将2 3 管置37℃水浴中1小时，然后3支试管均用大量生理盐水洗涤两次，每管再以生理盐水配成10%的红细胞悬液。
直接试验：
取小试管4支
反应物（滴）
受检者盐水对照阳性对照阴性对照
抗人球蛋白血清 2 — 2 2。
coombs试验操作规程
Coombs试验操作规程1. 引言Coombs试验是一种常用的血液学实验，用于检测抗体与红细胞表面抗原的反应。
本文档旨在详细描述Coombs试验的操作步骤，以确保实验结果的准确性和可靠性。
2. 实验材料•新鲜抗凝血集•血型试剂：抗人免疫球蛋白•0.9% 生理盐水•试管•离心机•显微镜•废弃品容器•实验记录表格3. 实验步骤步骤1：标本准备1.收集新鲜的全血标本，使用抗凝血集进行采样。
2.将采集的血液标本放置在室温下15分钟，使其凝集。
3.将血液标本离心10分钟，以分离血浆和红细胞。
步骤2：准备试剂1.取出适量的抗人免疫球蛋白试剂，放置于室温下30分钟，使其达到室温。
步骤3：搅拌红细胞1.使用0.9%生理盐水稀释红细胞，以获得合适的浓度。
2.将红细胞和0.9%生理盐水混合在试管中，用轻柔的手法搅拌均匀。
步骤4：加入试剂1.取出搅拌均匀的红细胞悬液，加入试管中。
2.加入相应量的抗人免疫球蛋白试剂，与红细胞充分混合。
步骤5：反应孵育1.将试管置于37摄氏度恒温箱中，孵育30分钟。
2.每5分钟轻轻地摇晃试管，以确保反应充分。
步骤6：离心沉淀1.将试管放入离心机中，以1000 rpm的速度离心10分钟。
2.小心地倒出上清液，保留红细胞沉淀。
步骤7：显微镜检查1.使用显微镜观察红细胞沉淀，检查是否出现凝聚或凝集现象。
2.记录观察结果，并与实验记录表格进行比对。
4. 实验结果分析根据显微镜观察到的红细胞沉淀形态，可得出以下结论：•阳性结果：红细胞出现凝聚或凝集现象，说明抗体与红细胞表面抗原发生反应。
•阴性结果：红细胞保持分散状态，没有出现凝聚或凝集现象，说明抗体与红细胞表面抗原没有发生反应。
5. 注意事项•实验过程中需要严格遵守操作规程，避免出现污染或交叉感染的情况。
•在操作过程中要注意用具的消毒和防护，以确保实验安全。
•实验前后需要进行必要的质量控制检查，以确保实验结果的准确性。
6. 结论通过本文档所描述的Coombs试验操作规程，可以进行准确可靠的血液抗体与抗原反应检测。
coombs试验原理
coombs试验原理Coombs试验原理Coombs试验是一种免疫学实验方法，用于检测抗体与红细胞表面抗原的结合。
它是由英国免疫学家Robin Coombs于1945年发明的，被广泛应用于临床诊断和研究领域。
Coombs试验的原理是通过检测抗体与红细胞表面抗原的结合情况来判断是否存在自身免疫性溶血贫血等疾病。
在正常情况下，人体的免疫系统会产生抗体来对抗外来物质，但有些情况下，免疫系统会错误地产生抗体攻击自身的红细胞。
这些抗体与红细胞表面抗原结合后，会导致红细胞破裂，从而引起溶血反应。
Coombs试验主要分为直接抗人球蛋白试验（Direct Antiglobulin Test，简称DAT）和间接抗人球蛋白试验（Indirect Antiglobulin Test，简称IAT）两种。
直接抗人球蛋白试验通过将患者的红细胞与抗人球蛋白抗体结合，然后观察是否发生凝集反应，来判断是否存在抗体与红细胞表面抗原的结合。
这种试验通常用于检测自身免疫性溶血贫血、新生儿溶血病等疾病。
间接抗人球蛋白试验则是通过将患者的血清与已知具有特定抗原的红细胞结合，再加入抗人球蛋白抗体，观察是否发生凝集反应。
这种试验常用于血型鉴定、输血前的抗体筛查、妊娠期的抗体检测等。
Coombs试验的操作步骤较为繁琐，需要严格控制实验条件，避免假阳性或假阴性结果的出现。
首先，需要收集患者的血液样本，并离心分离红细胞。
然后，将红细胞与抗人球蛋白抗体或抗人免疫球蛋白抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
最后，通过观察是否发生凝集反应来判断试验结果。
Coombs试验的结果分为阳性和阴性两种。
阳性结果表示抗体与红细胞表面抗原结合，存在溶血现象。
阴性结果则表示未能检测到抗体与红细胞表面抗原的结合，不存在溶血现象。
Coombs试验在临床诊断和研究中具有重要意义。
它可以帮助医生确定溶血性疾病的诊断和治疗方案，指导输血前的血型鉴定和抗体筛查工作，确保输血安全。
此外，它还可以用于研究免疫学和血液学领域，深入了解免疫反应的机制和异常情况。
抗人球蛋白试验PPT课件
.
15
8.在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴 瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒 、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等， 病人直接反应亦可阳性
抗人球蛋白
自身抗体
直接Coombs试验
.
7
4.结果解释
阳性：待检标本RBC已致敏IgG不完全抗体 或补体；
阴性：待检标本RBC未致敏不完全IgG抗体 。
.
8
间接抗人球蛋白试验
间接抗人球蛋白试验原理：
用已知抗原的红细胞检测受检者血清中相应的不 完全抗体；或用已知的不完全抗体检测红细胞上 相应的抗原。
9.阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中，急性 发作后用抗补体血清做试验直接反应常为 阳性。
.
16
我们科室Coombs试验已开展，报告方法： 1、接收标本； 2、完成试验； 3、免疫组中免疫手工中报告结果。
.
17谢谢.18 Nhomakorabea抗人球蛋白试验
马强虎
.
1
1945年，英国免疫学家库姆斯（Coombs） 等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验
，即抗人球蛋白试验。别名： Coombs‘试验(库姆 斯试验) 。 Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作为 第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗
体，使红细胞凝集。
.
2
抗人球法是检测不完全抗体的经典方法， 分为直接试验(直接反应)和间接试验(间 接反应)。
2.新生儿同种免疫溶血病：因Rh血型不合所致溶血 病，直接及间接反应均强阳性，持续数周、换血 输血后数天内可变为阴性，由于“ABO”血型不合 引起 的溶血病，直接常为阴性或弱阳性，间接反 应为阳性.
Coombs试验解读
天然抗体与免疫血型抗体比较
天然抗体 免疫血型抗体
性质 Ig 抗原刺激 免疫发生的时间
完全抗体 IgM 没有可察觉的抗原刺激 早期
不完全抗体 IgG 经抗原刺激后才产生 晚期
分子量
分子长度 沉淀系数 电泳分析 对HDN的意义＊ 通过胎盘能力＊ 反应温度＊ 对血型物质＊
90万
950 19S IgM球蛋白 小 不能 4℃比37℃强（冷抗体） 能被血型物质中和
IgG抗体
• IgG是体液免疫应答产生的主要抗体，在血 清中含量最高。约占免疫球蛋白的75%。 • IgG是唯一的能通过胎盘进入胎儿体内的免 疫球蛋白，同种IgG血型抗体通过胎盘，可 引起新生儿溶血病。 • 最常见的是ABO与Rh血型系统。
IgG凝集红细胞示意图
IgG 在盐水介质中一般不产生凝集
柱凝集卡式法操作
1、取出柱凝集Coombs卡、室温平衡并做好 标记（患者、阳性、阴性）。 2、在患者孔中加入被检血清和1%已知抗原 红悬液各50ul（或加入已知抗体血清和1% 待检抗原红悬液各50ul） 3、在阳性、阴性孔中加入相应1%红悬液 50ul 4、同时放入专用孵育器孵育 5、取出用专用离心机离心。 6、实验结果同手工法
抗人球蛋白试验
（ Coombs试验 ）
• Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作为第二抗 体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体， 使红细胞凝集。 • 抗人球法是检测不完全抗体的经典方法，其方 法有两类。 • 直接Coombs试验：是检查被检红细胞上有无 不完全抗体。 • 间接Coombs试验：是检查血清中游离的不完 全抗体
抗球蛋白试验
抗球蛋白
试剂及器材
1、多特异性抗球蛋白试剂（lgG、C3d）； 2、柱凝集抗人球卡； 3、阳性对照细胞（取3份正常人O型Rh（D）阳性红细胞等 量混匀，经生理盐水洗涤后取少量压积红细胞，加抗D血 清，置37℃水浴致敏1小时，取出后用生理盐水洗涤3次， 配成5%红细胞悬液）； 4、阴性对照细胞（取3份正常人O型红细胞等量混匀，经生 理盐水洗涤后，配成5%红细胞悬液；或直接取Rh（D）阴 性红细胞）； 5、受检者5%（1%）红细胞悬液； 6、0.9%生理盐水； 7、柱凝集卡式配血系统 8、滴管（加样枪）、蜡笔或记号笔、试管、显微镜、37℃ 水浴箱、细胞洗涤离心机等。
凝集反应(免疫学检验课件)
【材料】 (1)TRUST抗原悬液 （牛心提取的类脂质） (2)被检血清。 (3)阳性对照血清；阴性对照血清 (4)试验专用卡片；专用滴管及针头
【意义】 RPR是定性试验，用于梅毒的筛选和疗效的判定。
阳性标本如有需要，也可将血清作1:2—1:32稀释后，按 上述方法做半定量试验。
注意：
1.一期梅毒：70%； 二期梅毒：100%
TPPA （梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验）
U型板（微量反应板）
TPPA是梅毒确诊试验。 TPPA在梅毒治愈后它还 是阳性的，而RPR可以 转阴或者滴度效价很低
RF因子检测（正向间接凝集）
❖ 【原理】
类风湿因子(rheumatic factor，RF)是一种 发生于类风湿病人血清中的抗人变性 IgG抗体 (IgM为主)，此种抗体可与IgG的Fc段呈特异反 应。将变性IgG致敏胶乳颗粒，与病人血清中的 RF相遇时，即可发生凝集现象。
3、O与H抗体在诊断上的意义
OHAB
诊 断 意 义（可能）
伤寒及副伤寒感染早期/交叉反应
伤寒及副伤寒感染晚期/预防接种/非特异性回忆反应
伤寒
甲型副伤寒
乙型副伤寒 接种伤寒及副伤寒三联疫苗 非肠热症/早期用抗生素/免疫功能低下
H与O抗体的性质及其消长意义
抗体 类型
O IgM 抗 体
H IgG 抗 体
❖ 【操作方法】
(1)试剂使用前，预置达室温。 (2)轻轻摇匀胶乳试剂 (3)反应板上滴加一滴未稀释血清滴(20ul) (4)然后滴加一滴胶乳试剂，并立即旋转摇动 使两者充分混匀。
(5)每次实验均应设阳性与阴性对照。 【结果观察与报告】
2分钟内出现明显而均匀的凝集颗粒者为阳 性，不凝集者为阴性。（凝集RF >20IU/mL)
15.超敏反应
Ⅰ型超敏反应 Ⅱ型超敏反应
过敏反应（速发型） 细胞溶解型或细胞毒型
Ⅲ型超敏反应 Ⅳ型超敏反应
免疫复合物型或血管炎型 迟发型超敏反应
一、Ⅰ型超敏反应
Type I Hypersensitivity：
(一) Ⅰ型超敏反应的特征 又称速发型超敏反应或过敏反应。 1、发生快，消退也快。 2、主要由特异性IgE介导。 3、通常引起机体生理功能紊乱。 4、具有明显的个体差异和遗传背景。
单选题
I型超敏反应目前最好的诊断方法()
A 皮肤试验 B 特异性IgE测定 C 血清总IgE测定 D 吸入物变应原过筛试验 E 皮内试验+特异性IgE测定
提交
单选题
支气管激发试验中常用的非特异性吸入物()
A 组胺或花粉 B 甲基胆碱或花粉 C 花粉或屋尘 D 组胺或甲基胆碱 E 动物皮屑或花粉
提交
口腔激发试验
将超敏原直接与口腔黏膜接触，当口腔 黏膜出现肿胀和充血时，判断为阳性。
结膜激发试验 将超敏原滴于一眼，阳性反应为结膜充 血、水肿、分泌增加、搔痒，眼睑红肿。
鼻黏膜激发试验
将抗原吸入/滴入鼻腔，出现鼻黏膜水 肿、苍白、鼻痒、流涕、喷嚏为阳性。
2、血清总IgE的检测
测定方法
ELISA 双抗体夹心法，操作简便， 敏感性很高，是测定血清IgE最常 用的方法
Ⅱ型超敏反应免疫学检测
1.Rh抗体的检测：盐水凝集法和酶介质法。 2.抗球蛋白检测（Coombs试验）
(1)直接Coombs试验 (2)间接Coombs试验
抗球蛋白试验：又称Coombs试验，是指用 抗球蛋白抗体来检测血液中球蛋白（如红 细胞表面IgG或C3片段）的一种实验方法。
IgG IgM
coombs试验原理
coombs试验原理Coombs试验原理Coombs试验是一种常用的免疫学实验方法，用于检测抗体与红细胞表面抗原的结合反应。
它的原理是通过加入抗人球蛋白血清和适当的试验物质，观察红细胞凝集或补体沉淀的形成，从而确定抗体的存在。
Coombs试验的原理主要包括直接抗人球蛋白试验(Direct Coombs Test，DCT)和间接抗人球蛋白试验(Indirect Coombs Test，ICT)。
直接抗人球蛋白试验(DCT)是一种检测已经与红细胞表面抗原结合的抗体的方法。
它的步骤包括将抗人球蛋白血清与待测红细胞混合，然后观察是否发生红细胞凝集或补体沉淀的现象。
如果出现凝集或沉淀，则说明红细胞表面存在与抗人球蛋白血清中的抗体结合的抗原。
间接抗人球蛋白试验(ICT)是一种检测体内游离抗体的方法。
它的步骤包括将待测血清与已知含有特定抗原的红细胞混合，然后加入抗人球蛋白血清，观察是否发生红细胞凝集或补体沉淀的现象。
如果出现凝集或沉淀，则说明待测血清中存在与抗人球蛋白血清中的抗体结合的抗原。
Coombs试验的原理基于抗体与抗原的特异性结合反应。
抗体是一种由免疫系统产生的蛋白质，能够识别和结合抗原，从而引发免疫反应。
在Coombs试验中，抗体与红细胞表面抗原结合后，会导致红细胞发生凝集或补体沉淀的现象。
这种反应是免疫系统中重要的一环，对于诊断各种免疫相关疾病具有重要意义。
Coombs试验的应用范围非常广泛。
它可以用于检测溶血性贫血、自身免疫性溶血性贫血、新生儿溶血病等疾病。
在溶血性贫血的诊断中，Coombs试验可以帮助确定溶血的机制，判断是由于免疫反应引起的还是其他原因导致的。
此外，Coombs试验还可以用于配型和交叉配血，以确保输血过程中不会发生免疫反应。
Coombs试验是一种常用的免疫学实验方法，通过观察红细胞凝集或补体沉淀的形成，来确定抗体与红细胞表面抗原的结合反应。
它在溶血性贫血等疾病的诊断和输血配型中起着重要的作用。
免疫凝集试验
一、间接免疫凝集试验的类型
（一）正向间接免疫凝集试验：测抗体
间接免疫凝集试验的类型
（二）反向间接免疫凝集试验：测抗原
间接免疫凝集试验的类型
（三）间接免疫凝集抑制试验：可测抗原，也可测抗体
一、直接Coombs试验
用于检测结合于红细胞表面的不完全抗体。
二、间接Coombs试验
用于检测游离在血清中的不完全抗体。
自身红细胞免疫凝集试验原理
抗人O型红细胞的单克隆抗体。 将之与另一种特异性抗体连接成双功能抗体，可用于 检测标本中相应抗原。
注：待检标本采用受检者的全血
自身红细胞免疫凝集试验原理
抗人O型红细胞的单克隆抗体。 将之与特异性抗原连接，可用于检测标本中的相应抗 体。
注：待检标本采用受检者的全血
变态反应ppt课件
（TSH-R, 甲状腺细胞表面） 分泌甲状腺素T3、T4。 甲亢：抗TSH-R抗体(IgG类) 与TSH-R结合
分泌甲状腺素(过量) 刺激靶细胞功能亢进。
II 型超敏反应发生的机制
抗体与抗原靶细胞结合刺激细胞分泌功能亢进（刺激型 ）
脑垂体
Graves’ 病
C5a ★与C3a、C5a受体(肥大细胞或嗜碱性粒细 胞)结合 炎性介质 毛细血管通透 性增加、渗出和水肿。
★吸引中性粒细胞至免疫复合物沉积部位。
2.中性粒细胞的作用 中性粒细胞 吞噬免疫复合物 释放溶酶体
酶(包括蛋白水解酶、胶原酶和弹力纤维酶) 水解 损伤周围组织。
3.血小板的作用 肥大细胞及嗜碱性粒细胞活化 释放血小板活
TSH：甲状 腺刺激素
甲状腺素
正
机体产生针对甲状 腺细胞上TSH受体 的抗体（LAST）
甲 状 腺 功 能 亢 进
Ⅱ型超敏反应免疫学检测
（一）抗血细胞抗体的检测
1.Rh抗体的检测 2.抗球蛋白检测（Coombs试验） (1)直接Coombs试验 (2)间接Coombs试验
(二)临床意义
抗球蛋白试验
3.抗原抗体的比例 抗原或抗体过剩 形成免疫复合物(小)； 抗原和抗体比例适当 形成免疫复合物(大)； 抗原略多于抗体（抗原决定簇有剩余） 形成
免疫复合物(中)。 4.组织的解剖学及血流动力学 免疫复合物易沉积于静脉压较高的毛细血管迂回
处，如肾小球基底膜及关节滑膜、肝、脾、血管等部 位。
(三) 免疫复合物引起组织损伤机制 1.补体的作用 免疫复合物 激活补体经典途径 C3a、
② 激肽原酶（kininogenase） 激肽原(血浆) 激肽原酶 缓激肽(9个氨基酸) 作用：a.平滑肌收缩； b.血管扩张,通透性增加。
coombs的原理和应用
Coombs的原理和应用引言Coombs试验是一种血清学技术，用于检测人体的免疫反应。
它以戴奥尼修斯·巴尼斯·Coombs命名，他于1945年首次描述了这种技术。
Coombs试验被广泛应用于血液型鉴定和自身免疫性贫血等自身免疫疾病的诊断。
本文将介绍Coombs的原理以及其在医学诊断中的应用。
Coombs试验的原理Coombs试验是通过检测抗体与红细胞表面抗原的结合来间接检测抗体的存在。
具体而言，Coombs试验分为直接抗人球蛋白试验（direct antiglobulin test，DAT）和间接抗人球蛋白试验（indirect antiglobulin test，IAT）两种方法。
直接抗人球蛋白试验（DAT）DAT是通过将已经与红细胞结合的抗人免疫球蛋白（IgG或C3b）与反人球蛋白抗体结合，然后观察结果，以检测抗体的存在。
如果观察到红细胞上存在特定的颗粒沉积，则说明红细胞表面存在抗原抗体复合物。
间接抗人球蛋白试验（IAT）IAT是通过将待检血清与已知抗体特异性的人工红细胞结合，然后观察结果，以检测抗体的存在。
如果观察到红细胞上存在特定的颗粒沉积，则说明待检血清中存在抗体。
Coombs试验在血液型鉴定中的应用Coombs试验在血液型鉴定中起到关键作用。
通过该试验，可以确定受试者血液中是否存在与给定抗体反应的抗原。
这对于输血前的配型和RH抗原鉴定非常重要。
在正常情况下，人体的免疫系统会识别和排斥自身抗原，即自身免疫反应。
然而，某些情况下，人体的自身免疫系统出现异常，会错误地将自身组织或细胞识别为外来物质并产生抗体。
这种情况下，Coombs试验可以帮助医生诊断自身免疫疾病，如自身免疫性贫血。
Coombs试验在自身免疫性贫血中的应用自身免疫性贫血是一种由于自身抗体攻击红细胞而导致溶血的疾病。
Coombs试验可以帮助医生诊断自身免疫性贫血。
在这种试验中，待检血清与未经处理的新鲜红细胞混合，然后经过洗涤，利用Coombs试剂检测是否有抗体存在。
直接Coombs试验
Coombs试验概述 直接Coombs试验原理及方法 直接Coombs试临床意义
一.Coombs试验概述
• 1945年，英国免疫学家Coombs等人发明的一种能检 测红细胞表面抗体的新试验，故称之Coombs试验， 亦称抗人球蛋白试验。
• 抗人球蛋白试验是抗人球蛋白参与的一种间接血凝
间接Coombs试验：检查血清中有无游离的不完全抗体。
二.直接Coombs试验
（一）直接Coombs试验基本原理
若红细胞在体内被不完全抗体吸附，由于不
完全抗体分子量小，体积小，不能起到桥联作用，
仅使红细胞处于致敏状态，在一般条件下不出现
可见反应。加入抗球蛋白试剂，与红细胞上吸咐
的不完全抗体结合，在致敏红细胞之间搭桥，出
现肉眼可见的凝集。
待检红细 胞
不完全抗体
抗人球蛋白
直接coombs试验原理示意图
（二）直接Coombs试验方法 1.洗涤红细胞：取50μ L受检者全血，以0.9%生理盐水洗涤3次 （1500r/min离心1min）； 2.配制3%-5%红细胞盐水悬液； 3.编号：分别取三个试管，标记为IgG、C3d、IgG/C3d；
三.直接Coombs试验临床意义
• 自身免疫性溶血性贫血 • 新生儿溶血症 • 溶血性输血反应
• 药物诱发的免疫性溶血性贫血
试验，利用抗人球蛋白抗体作为第二抗体起到桥梁
的作用，连接与红细胞表面抗原结合的不完全抗体，
使红细胞凝集。
•不完全抗体 能够与相应的抗原牢固结合,但因其分子量较小,体积 小,不能起到桥联作用,在一般条件下不出现可见反应。 •Coombs试验用于检测不完全抗体 直接Coombs试验：检查红细胞上有无不完全抗体。
溶血coombs' test
56℃ 10min 离心
致敏红细胞
游离红细胞
抗体释放试验
• 直接试验是检查被检红细胞上有无不完 全抗体吸附的情况，即是检查体内致敏 红细胞的一种方法，在临床上有重要意 义。
• 如新生儿溶血、溶血性输血反应及自身 免疫性溶血性贫血（患者红细胞被自身 抗体致敏）等情况下均可出现阳性反应 。
间接试验：用以检测患者血清中有无游
假阴性的原因
① 抗人球蛋白血清应包括抗Y 一球蛋白（主要 由单核巨噬细胞合成）和抗非Y一球蛋白抗体 ，否则某些不完全抗体不易检出；② 容器或 试剂中混入人血清球蛋白，中和了抗人球蛋白 抗体；③ 补体问题。因y 一球蛋白抗体是补体 结合抗体，无补体存在时，不能呈现抗球蛋白 阳性反应。因此，使用保存血清样品作为补体 的来源。另外有抗补体因子时亦可能出现假阴 性；④ 试剂不合格；⑤ 不完全抗体脱落，如 红细胞积压过紧、洗涤过程中。
离的不完全抗体或补体，以间接估计体 内抗红细胞抗体或补体的数量，判断预 后；临床上也用以鉴定自身抗体性质。 诊断价值不如直接试验。验阴性有时并不能排除新生儿溶 血症。
假阳性的原因
① 有冷抗体，可用草酸盐或肝素抗凝， 所得血清中的冷抗体不能固定在红细胞 上② 高球蛋白血症，如风湿热、系统性 红斑狼疮、结节病、白血病、淋巴瘤及 肿瘤等；③ 溃疡性结肠炎、梅毒；④ 药 物，如甲基多巴、头孢霉素、青霉素、 奎宁 等，损伤红细胞表面或吸附于红细 胞上；⑤ 脐带血中的胶样物质混人血清 中，可引起红细胞凝集；⑥ 玻璃容器的 游离硅酸可引起红细胞凝集；⑦ 其他如 脂溶剂的蒸气污染，细菌污染与试剂不 纯等。
抗人球蛋白试验
coombs' test
张碧辉
抗人球蛋白试验：又称Coombs’试验
Coombs试验
（1）直接coombs试验 用于检测已粘附在红细胞表面的不完全抗体。即将受检红细胞充分洗涤后，将抗球蛋白试剂加入已结合有抗体的受检红细胞悬液中，即可见细胞凝集。可用玻片法做定性试验，也可用试管法或微量法做半定量测定。用于检测新生儿溶血症、自身免疫性贫血和医源性溶血性疾病等。
项目相关
[项目名称] 抗人球蛋白试验 此项化验分直接试验和间接试验，主要用于自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的筛选和分型。
[别名] Coombs’试验(库姆试验) [英文缩写] Coombs
[试验原理] 抗球蛋白试验是抗球蛋白参与的一种间接血凝试验，1945年由Coombs建立。用于检测抗红细胞不完全抗体。 不完全抗体多半是7S的IgG类抗体，是一类单价抗体，体积短小，因此虽能与相应抗原牢固结合，但在一般条件下不出现可见反应。 抗人球蛋白试验利用抗球蛋白抗体作为第二抗体起到桥梁的作用，连接与红细胞表面抗原结合的特异性抗体，是红细胞凝集，故又称桥梁凝集反应。
(3)Coombs’试验阴性有时并不能排除AIHA。
[要求]用肝素或EDTA抗凝血做直接Coom须新鲜；洗涤后的红细胞和器材都不能残留有血浆蛋白，以免出现假阴性。
Coombs试验
百科名片
Coombs试验即抗人球蛋白试验，是检测血液中温反应性抗体的一种方法，也是诊断自身免疫性溶血性贫血的重要指标。温抗体中50％以上由IgG介导，其次为IgM，IgA和C3d等，因此本试验应分选各种单克隆抗体同时测定。Coombs试验分为直接试验(直接反应)和间接试验(间接反应)：直接试验的目的是检查红细胞表面的不完全抗体；间接试验的目的是检查血清中存在游离的不完全抗体。
[参考值] 直接和间接Coombs’试验均为阴性
[临床意义]
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Coombs试验概述 直接Coombs试验原理及方法 直接Coombs试验临床意义
一.Coombs试验概述
• 1945年，英国免疫学家Coombs等人发明的一种能检 测红细胞表面抗体的新试验，故称之Coombs试验， 亦称抗人球蛋白试验。
• 抗人球蛋白试验是抗人球蛋白参与的一种间接血凝
三.直接Coombs试验临床意义
• 自身免疫性溶血性贫血 • 新生儿溶血症 • 溶血性输血反应
• 药物诱发的免疫性溶血性贫血
4.三管中分别加入50μ L3%-5%红细胞盐水悬液，加入两滴相应的抗 人球蛋白试剂（抗IgG、C3d、IgG/C3d）；
5.轻轻混匀后3000r/min离心15s，轻轻摇动试管，观察结果。
（三）直接Coombs试验结果判读 阳性结果-出现红细胞凝集，表示红细胞上有 相应抗体存在； 阴性反应-红细胞不凝集，表示红细胞上没有 相应抗体存在。
出现肉眼可见的凝集。
待检红接coombs试验原理示意图
（二）直接Coombs试验方法 1.洗涤红细胞：取50μ L受检者全血，以0.9%生理盐水洗涤3次 （1500r/min离心1min）； 2.配制3%-5%红细胞盐水悬液； 3.编号：分别取三个试管，标记为IgG、C3d、IgG/C3d；
间接Coombs试验：检查血清中有无游离的不完全抗体。
二.直接Coombs试验
（一）直接Coombs试验基本原理
若红细胞在体内被不完全抗体吸附，由于不
完全抗体分子量小，体积小，不能起到桥联作用
，仅使红细胞处于致敏状态，在一般条件下不出
现可见反应。加入抗球蛋白试剂，与红细胞上吸
咐的不完全抗体结合，在致敏红细胞之间搭桥，
（四）注意事项 1.标本采集后应立即进行试验，延迟试验可使抗体 从细胞上丢失； 2.受检红细胞一定要洗涤充分，否则红细胞悬液中 混杂的血清蛋白会中和抗人球蛋白； 3.直接抗人球蛋白试验在初读结果后，放在室温中 5-10分钟，再次离心观察。这样孵育之后，若红 细胞被C3d致敏时，重新离心观察结果可使阴性结 果转变为阳性结果，而IgG致敏的红细胞在孵育后 反应更弱。
试验，利用抗人球蛋白抗体作为第二抗体起到桥梁
的作用，连接与红细胞表面抗原结合的不完全抗体，
使红细胞凝集。
•不完全抗体 能够与相应的抗原牢固结合,但因其分子量较小,体积 小,不能起到桥联作用,在一般条件下不出现可见反应。 •Coombs试验用于检测不完全抗体 直接Coombs试验：检查红细胞上有无不完全抗体。