三细菌的简单染色与形态观察
实验三细菌的简单染色和革兰氏染色
四、实验步骤
1、简单染色： （1）涂片：注意取菌不要太多； （2）干燥：室温自然干燥； （3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，
通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）； （4）染色：涂片加草酸铵结晶紫染液或齐氏石炭酸复 红染液 1min； （5）水洗：自来水冲洗，直至流下的无色； （6）干燥：自然晾干或用电吹风吹干； （7）镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的 视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏 油，油镜观察细菌的形态。
3. 选用幼龄的细菌。若菌龄太老，由于菌体死亡或自
溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。
六、实验报告
1、结果
给出枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡 萄球菌形态图，并注明其革兰氏染色反应。
2、思考题
（1）简单染色法中各步骤的注意事项是什么？
（7）混合涂片法：按上述方法，在同一载玻片上，以大肠 杆菌和枯草芽孢杆菌或大肠杆菌和金黄色葡 萄球菌作混合涂片、染色、镜检进行比较。
G+ 干燥、固定 结晶紫染色
G-
碘液媒染 乙醇脱色 蕃红复染
Figure Mixed culture of large Gram positive rod and small Gram negative rods.
菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质而且肽菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质而且肽聚糖层较薄交联度低故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类聚糖层较薄交联度低故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质增加了细胞壁的通透性使刜染的结晶紫和碘的复脂质增加了细胞壁的通透性使刜染的结晶紫和碘的复合物易于渗出结果细菌就被脱色再经番红复染后就成合物易于渗出结果细菌就被脱色再经番红复染后就成红色
实验三
细菌的简单染色和革兰氏染色
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告实验三细菌的简单染色和革兰氏染色实验三细菌的简单染色和革兰氏染色一、目的与要求1、掌握细菌涂片标本的制备2、掌握革兰氏染色法的步骤和关键点3、识别细菌革兰氏染色结果二、实验原理：细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。
为什么要对细菌染色？细菌的细胞小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。
用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。
简单染色法可用以观察微生物的形状、大小及细胞排列状态，是微生物技术中应用广泛，操作简便的染色法。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G?)和革兰氏阴性菌(G-)两大类，是细菌学上最常用的鉴别性染色法。
其原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同。
革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞壁内使细胞呈蓝紫色，而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联少，且类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，再经番红复染后细胞呈红色。
三、实验器材1、菌种牛肉膏琼脂斜面28℃培养24h的大肠杆菌(Escherichia coli)斜面菌种，牛肉膏琼脂斜面28℃培养16h的枯草杆菌(Bacillus subtilis)斜面菌种；2、仪器显微镜；3、材料载玻片，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等。
4、染料草酸铵结晶紫染色液，路哥氏(Lugol)碘液，95%乙醇，0.5%番红染色液；细菌的简单染色步骤：细菌的革兰氏染色步骤：涂片,干燥,固定,结晶紫染色,水洗,碘液媒染,水洗,乙醇脱色,水洗,番红复染,水洗,干燥,镜检.五、实验关键步骤和注意点：1、玻片要洁净无油，否则菌液涂不开。
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌是微生物中最常见的一类生物，它们广泛存在于自然界的各个角落，包括土壤、水体、空气等。
为了更好地了解细菌的形态和结构，科学家们开展了许多实验，其中包括细菌的简单染色和革兰氏染色。
一、细菌的简单染色实验细菌的简单染色是一种常用的染色方法，通过给细菌染色，可以使其在显微镜下更加清晰可见。
这种染色方法主要使用了一种叫做甲基蓝的染料。
在实验中，首先需要制备好细菌的涂片。
将一根无菌的钢丝棒蘸取一小滴细菌悬液，然后将其均匀地涂抹在玻璃片上。
待涂片干燥后，将其固定在火焰上加热的玻璃柱上，以使细菌附着在玻璃片上。
接下来，将制备好的涂片放入染色盒中，加入适量的甲基蓝染料，浸泡片刻。
然后，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。
最后，用纸巾轻轻吸干涂片上的水分，将其放入显微镜下观察。
在显微镜下观察，我们可以清楚地看到细菌的形态和结构。
不同种类的细菌可能会呈现出不同的形状，例如球状、杆状、螺旋状等。
通过简单染色，我们可以更好地观察和研究细菌的特征。
二、革兰氏染色实验革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，它可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
这种染色方法主要使用了紫晶染料和碘酒。
在实验中，首先需要制备好细菌的涂片，方法与简单染色相同。
然后，将涂片放入染色盒中，加入适量的紫晶染料，浸泡片刻。
接着，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。
接下来，将碘酒滴在涂片上，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
随后，滴入乙醇或酒精醛溶液，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
最后，滴入蓝色染料，浸泡片刻后用蒸馏水冲洗涂片。
在显微镜下观察，我们可以看到细菌的染色效果。
革兰氏阳性菌会呈现紫色或蓝色，而革兰氏阴性菌则呈现红色或粉色。
这是因为革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的胆固醇，可以吸附紫晶染料和碘酒，而革兰氏阴性菌的细胞壁则较薄，无法吸附这些染料。
实验三 细菌的简单染色与形态观察
实验三细菌的简单染色与形态观察实验三细菌的简单染色与形态观察实验三细菌的简单染色和形态学观察一、目的要求：1.了解并掌握简单细菌染色的机理和技术；2.学会用油镜观察细菌细胞的形态。
2、实验材料：1株：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌aureus等培养好的细菌斜面；2.染料：结晶紫3.其他：显微镜、玻片、接种环、酒精灯、无菌水、雪松油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。
3、基本原则：染色是细菌学上一个重要而基本的操作技术。
因细菌细胞小而且透明，当把细菌悬浮于水滴内，用光学显微镜时，由于菌体和背景没有显著的明暗差，因而难以看清它们的形态，更不易识别其结构，所以，用普通光学显微镜观察细菌时，往往要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，可以更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。
用于微生物染色的染料是苯环上带有显色基团和辅助基团的有机化合物。
显色基团决定了化合物的颜色特征，助色基团决定了化合物的成盐性。
染料通常是盐，分为酸性染料和碱性染料。
在微生物染色中，碱性染料更常用，如亚甲基蓝、结晶紫、碱性红、砂黄、孔雀绿等。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
此法操作简便，适于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性和弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料电离后带有正电荷，很容易与菌体结合使细菌着色。
通过本实验，我们可以学习和掌握细菌染色技术，了解细菌细胞的形态，巩固课堂知识，增加感性知识。
四、方法与步骤：（一）制片1.涂片：在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水，用接种环以无菌操作从枯草芽孢杆菌从斜面上取少量真菌苔藓，放入水滴中，搅拌均匀，涂膜，涂膜面积约1~1.5cm2。
2.干燥：室温下自然干燥3.固定：手执载玻片一端，使涂菌一面向上，通过火焰2~3次。
此操作也称热固定，其目其主要目的是使细胞质凝固，以固定细胞形状，并使其牢固地附着在载玻片上。
4.染色：将涂片放在水平位置，滴下结晶紫染色液（最好只覆盖涂片），染色1分钟左右。
细菌的简单染色实验报告
细菌的简单染色实验报告
《细菌的简单染色实验报告》
在生物学实验室中，我们进行了一项关于细菌的简单染色实验。
通过这个实验，我们希望能够观察和了解细菌的形态特征，为进一步的研究和分析奠定基础。
首先，我们准备了一份细菌样本，并将其涂抹在玻片上。
接着，我们使用了一
种叫做墨汁的染色剂，将其滴在细菌样本上。
墨汁中的颜料分子能够与细菌细
胞壁中的化学物质发生作用，使细菌在显微镜下更加清晰可见。
在染色完成后，我们将玻片放置在显微镜下进行观察。
通过放大镜头，我们可
以清晰地看到细菌的形态和结构。
有些细菌呈现出圆形或椭圆形，而有些则呈
现出长条状或弯曲形态。
这些观察结果为我们提供了宝贵的信息，帮助我们更
好地了解细菌的特征和分类。
通过这个简单的染色实验，我们不仅能够观察到细菌的形态特征，还能够为后
续的细菌研究提供重要的参考。
细菌在自然界中起着重要的作用，它们不仅存
在于我们周围的环境中，还对人类健康和生态平衡产生着重要影响。
因此，对
细菌的研究和了解具有重要意义，而这个简单的染色实验为我们提供了一个很
好的起点。
通过这次实验，我们不仅增加了对细菌的认识，还学会了使用染色技术来观察
微生物。
这将为我们今后的学习和研究打下坚实的基础，也让我们更加深入地
了解微生物世界的奥秘。
希望通过我们的努力，能够为细菌研究领域的发展做
出一些贡献。
实验三、细菌简单染色和运动性观察-精选文档
载玻片无油迹；滴蒸馏水不要太多；涂片要涂抹均匀
❖ 2.干燥 室温自然干燥
❖ 3.固定 涂面朝上，通过火焰2-3次，热固定温度不宜过高，以免 改变或破坏细胞形态。
❖ 4.染色 滴加石炭酸复红染液于涂片上，染色约1-2分钟
❖ 5.水洗 用自来水冲洗，直至涂片上流下的水为无色为止。
不要直接冲洗涂面，使水从载玻片的一端流下。水流不宜过大， 以免涂片薄膜脱落
❖ 6.干燥 自然干燥或用吸水纸吸干
❖ 7.镜检 涂片必须完全干燥后才能用油镜观察
结果要画出形态图
（二）细菌运动性的观察
压滴法
❖ （1）制片 加水——挑菌液——加一滴0.01%的美蓝水溶液——加盖玻片
❖ （2）镜检 先用低倍镜找标本，再用高倍镜观察。 也可用油镜观察。 观察时要用略暗光线。
二、器材
1.菌种 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus) 苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis）
2ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ染色剂：石炭酸复红染液
3.仪器及其他用具 显微镜 酒精灯 载玻片 接种环 双层瓶 擦镜纸 蒸馏水
三、操作步骤
（一）细菌的简单染色
❖ 1.涂片 取两块载玻片，各滴一小滴蒸馏水于玻片中央，用接种
实验细菌的革兰氏染色
• 革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。
• 它是1884年由丹麦医师Gram创立的。
• 革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌 的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色 反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示； 染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性 细菌，用G-表示。 • 细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细 胞壁的成分和结构不同而造成的。
（二）细菌细胞的革兰氏染色
1．涂片：将培养24小时的枯草芽孢杆
球菌、大肠杆菌和未知菌分别作涂片
（注意涂片切不可过于浓），干燥、
固定。固定时通过火焰1～2次即可，
不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2．染色
（1）初染加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟， 水洗。 （2）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分 钟，水洗。 （3）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白 背景，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不 出现紫色时为止，约20～30秒钟，立即用 水冲净酒精。 （4）复染用番红液染1～2分钟，水洗。
4、染色：放标本于水平位置，分别滴加染色 液于涂片薄膜上，染色时间长短随不同染 色液而定。结晶紫染色液染2—3分钟，石 炭酸复红染色液约染1—2分钟。
5、水洗： 染色时间到后，用自来水冲洗， 直至冲下之水无色时为止。注意冲洗水流 不宜过急，过大，水由玻片上端流下，避 免直接冲在涂片处。冲洗后，将标本晾干 或用吹风机吹干，待完全干燥后才可置油 镜下观察。
三、实验器材
• 1、菌种：大肠杆菌，枯草芽孢杆 菌,未知菌； • 2、试剂：草酸铵结晶紫，番红水 溶液，碘液，95%乙醇， • 3、仪器：显微镜，载玻片等。
四、实验步骤
（一）细菌细胞的简单染色 1、涂片 ：取两块干净的载玻片，各滴一小滴生理 盐水于载玻片中央，用无菌操作挑取大肠杆菌和 枯草芽孢杆菌于载玻片的水滴中，调匀并涂成薄 膜。注意滴生理盐水时不宜过多，涂片必须均匀。 2、干燥 ： 室温中自然干燥。 3、固定： 涂片面向上，于火焰上通过2—3次，使 细胞质凝固，以固定细菌的形态，并使其不易脱 落。但不能在火焰上烤，否则细菌形态将毁坏。
实验三细菌的革兰氏染色及芽孢染色法
（三）实验器材
1、活材料：
革兰氏染色：培养12h-16h枯草杆菌（Bacillus subtilis）和培养24h大肠杆菌（Escherichia coli）
芽孢染色：培养36 小时 的苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis）或者枯草杆菌（Bacillus subtilis）
（1）革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱 色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌； 如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰 氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇 用量多少等因素的影响，难以严格规定。
（2）染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后， 应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响 染色效果。
①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净，a. 先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.用擦 镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次。c.再 用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。注意擦 镜头时向一个方向擦拭。
②看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净。
（五）实验报告
1、给出Bacillus thuringiensis和Escherichia coli的形态图，并注明两菌的革兰氏染色的反应 性。
2、染色液和试剂：
革兰氏染色染色液：结晶紫、卢哥氏碘液、95%酒精、 蕃红；
芽孢染色液：5%孔雀绿水溶液、0.5%蕃红水溶液 ； 二甲苯、香柏油 。
3、器材：
载玻片、接种杯、木夹子、酒精灯、擦镜纸、 显微镜。
（四）实验步骤
1、革兰氏染色： （1）涂片：涂片方法与简单染色涂片相同。 （2）干燥：与简单染色法相同 （3）固定，与简单染色法相同 （4）初染：加适量（以盖满细菌涂面）结
2. 当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样 能确证你的染色技术操作正确，结果可靠？
细菌的简单染色和革兰染色
实验三细菌的简单染色和革兰染色一．实验目的1．学习并熟练局部无菌操作2. 学习细菌涂片的制法，掌握细菌简单染色和革兰氏染色的方法3. 进一步熟悉显微镜的使用。
二．实验原理细菌生长时常带负电，所以常用带正电的碱性染料染色。
简单染色就是用一种染料染色的方法。
革兰氏染色可把细菌根据细胞壁成分和结构分为阳性和阴性，阳性菌细胞壁中脂类物质多，染色为紫色；阴性菌细胞壁中脂类物质少，染色为红色。
三．实验材料、仪器与试剂1.菌种：金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌，大肠杆菌、未知菌，酵母。
2.仪器用品：显微镜、载玻片，盖玻片，擦镜纸，接种环，酒精灯，火柴，镊子，擦镜液，吸水纸，牙签3.试剂：简单染液：草酸铵甲紫染液，蕃红染液革兰氏染液：1) 草酸铵甲紫染液；2) 革氏碘液；3) 脱色液；4) 蕃红染液实验前准备（助教完成）将菌种培育24h。
四．实验步骤（一）简单染色1.取载玻片用纱布擦干，在涂菌面反面画直径2mm左右的小圈，把涂菌部位在火焰上烤一下，除去油脂。
2.涂片：左手持菌液试管，右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从EP管中沾取菌液一滴，在洁净无脂的载玻片上涂涂膜。
取菌过程要在酒精灯附近的无菌环境中进行。
3.晾干：让涂片自然晾干。
4.固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。
5.染色：将固定过的涂片放吸水纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。
6.水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液7.镜检。
（二）革兰染色。
1.制片：取菌液制成涂片：干燥，固定。
2.初染：滴加1滴结晶紫色染液，1min，水洗。
3.媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。
4.脱色：吸去残留水，滴加脱色液至流出液无紫色，立即水洗。
5.复染：滴加蕃红复染3min，水洗。
6.镜检：用吸水纸吸干，盖上盖玻片，从低倍镜到油镜依次观察。
注意细菌形态、大小、排列、颜色。
7.拍照。
（三）选做实验往干净的载波片上滴加半滴水，用无菌牙签取一点牙垢，涂抹在水滴上，制成涂片，革兰染色。
实验一 细菌的简单染色和细菌形态的观察
实验一 细菌的简单染色和细菌形态的观察一、实验原理简单染色采用一种染料对菌体进行染色，常用结晶紫、美蓝、碳酸复红等碱性染料。
染色后，菌体与背景形成鲜明对比，在显微镜下很容易被识别。
通过简单染色方法可以观察细菌的菌体形态特征和菌体的排列方式。
观察菌体形态 简单染色（只用一种染料） 观察菌体排列方式染色方法 革兰氏染色鉴别鉴别染色 抗酸性染色（利用两种染料） 芽孢染色观察特殊结构 荚膜染色鞭毛染色二、实验步骤：涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检三、思考题1、制备细菌染色标本时，应该注意哪些环节？答；（1）涂片：开始所加无菌水液滴不要太大，否则不易干燥；取菌量要适宜且要涂抹均匀，避免过大造成堆积，而难以看清细胞个体形态同时也应避免取菌量太少而难以在显微镜视野中找到细胞。
（2）无菌操作取菌：一定要等接种换冷却后再取菌，以免高温使菌体变形；（3）干燥固定：干燥后加热固定，可避免加热时间过长，否则细胞会破裂或变形；（4）固定：菌膜一面朝上，通过酒精灯微火三次。
注意温度不宜过高，时间不宜太长，否则菌体形态则会发生改变。
（5）水洗：倾去染色液后，用水沿着菌膜四周冲洗，注意勿使水流直接冲洗菌膜部位，水流不宜过急，过大，至流出水无色为止；2、为什么要求制片完全干燥才能用油镜观察？答：使用油镜时，物镜与标本间的介质为香柏油（N=1.515），不仅增加了透明度，而且会提高了分辨率。
若制片不完全干燥后，就用油镜观察，则N 会减小，分辨率D 也会变小。
而且还会造成油水两相不互溶，所以制片要求完全干燥后才能用油镜观察。
3、如果涂片未经加热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高，时间太长，又会怎样呢？答：加热固定的作用是使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上，这种加热处理还可以杀死大多数细菌而且不破坏细胞形态，而且还可增加细胞对染料亲和力。
（1）如果图涂片未经加热固定，则细胞无法固定在载玻片上，在染色水洗后会被水流冲走。
（2）如果加热温度过高，时间太长，则会使细菌形态发生变化甚至破裂。
细菌的简单染色实验报告
细菌的简单染色实验报告细菌的简单染色实验报告细菌是一类微小的生物体，常常存在于我们周围的环境中。
为了更好地研究和了解细菌的结构和特性，科学家们发展了各种实验方法。
其中，染色实验是一种常用的技术，可以通过染色剂使细菌在显微镜下更加清晰可见。
本文将介绍一种简单的染色实验方法，并分享实验结果。
实验目的：通过染色实验，观察并分析细菌的形态、结构和数量。
实验材料：1. 细菌培养物：我们选择了一种常见的大肠杆菌作为实验对象。
2. 染色剂：我们使用了靛洁液作为染色剂。
实验步骤：1. 准备培养基：将适量的培养基倒入培养皿中，确保培养基的均匀分布。
2. 接种细菌：用无菌的匀菌棒，从细菌培养物中取出一小部分，均匀地划过培养基表面。
3. 培养：将接种好的培养皿放入恒温培养箱中，在适当的温度和湿度条件下培养细菌，一般为37摄氏度。
4. 准备染色液：将适量的靛洁液加入一定体积的蒸馏水中，混合均匀。
5. 染色：将培养好的细菌样本取出，滴加染色液，静置片刻，然后用酒精洗去多余的染色液。
6. 水洗：用蒸馏水轻轻冲洗细菌样本，去除残留的染色剂。
7. 干燥：将洗净的细菌样本晾干，避免在显微镜下观察时出现水珠。
实验结果：在显微镜下观察，我们可以看到细菌样本呈现出不同的形态和结构。
大肠杆菌是一种革兰氏阴性菌，染色后呈现出粉红色或红色的颜色。
通过放大镜头，我们可以看到大肠杆菌呈现出长条状的形态，有些细菌还具有鞭毛或纤毛结构。
此外，我们还观察到细菌的数量较多，呈现出集群或链状排列的特点。
讨论与分析：通过染色实验，我们可以更加清晰地观察和研究细菌的形态和结构。
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，对人类健康具有重要意义。
通过染色实验，我们可以更好地了解大肠杆菌的特征和数量，为进一步研究其生物学功能提供基础数据。
然而，需要注意的是，染色实验只是细菌研究的初步手段之一。
在实际研究中，还需要结合其他技术和方法，如电镜观察、分子生物学技术等，来进一步深入了解细菌的结构和功能。
实验三 细菌形态观察和革兰氏染色技术
⑥ 复染：
已经脱色处理的细胞或其结构常以复染液作复染 以便于观察。 复染液与初染液的颜色不同而成鲜明对比，所以 复染也称为对比染色。 复染液不宜太强，以免掩盖初染的颜色而失去对 比作用。
用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫。 媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和力或附着力，
即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落。
不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不
能，脱色剂常用95％的酒精。
复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染 的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未 被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，常用的复染液是番红。
三、结果:
② 固定：
染色前必须先行固定。其目的在于凝固细胞质和 其它细胞结构成分而杀死细菌；使菌体粘附于玻 片上以及改变细菌对染料的通透性（因活菌通常 不易使染料透入细胞内）。
固定的方法一般采用火焰加热法，在特殊目的时 也可用冷冻干燥法或化学法如醇、酸、氯化高汞 、重金属盐或氧化剂等进行固定。
③ 媒染：
① 涂片制备：
随标本的种类而略有不同。
• 若为液体培养液，亦可直接涂于载玻片上；
• 若为固体培养基上的细菌，则先取一接种环生理盐水于载玻片中 央，然后从培养基上取菌少许，在盐水中研磨均匀，使呈轻度乳 浊，以接种环扩成1cm2或2份硬币大小的涂面。
在室温下自然干燥或放在火焰上方的热空气中慢 慢烘干。但切忌紧靠火焰烤干。
⑤ 脱色：
脱色：是使被染物脱去已染上的颜色。脱色的目 的是观察细菌与染料结合的稳定程度，故可作为 鉴别染色之用。
凡具有脱色作用的化学试剂称脱色剂。脱色剂或 呈溶媒作用，如醇类、丙酮等；或能影响蛋白质 的电离程度，改变其电荷性质或数量，因而影响 细菌与染料的结合程度，如酸类能减少细菌的负 电荷，故可作碱性染料的脱色剂。
实验3细菌的简单染色和革兰氏染色_基础生物学实验(安徽大学研究生复试用,生物 生命科学)
实验三细菌的简单染色和革兰氏染色一、实验目的1.学习微生物的涂片、染色和基本操作技术。
2.掌握微生物的简单染色、革兰氏染色的基本原理和方法。
3.初步认识细菌的形态特征。
二、实验原理染色是细菌学中的一项重要的基本操作技术。
由于微生物与各种性质的染料具有一定的亲和力，从而使微生物着色，着色后的菌体折光性弱，色差明显。
在显微镜下容易观察细胞的内部结构及其内含物，因此，微生物染色是进行微生物形态观察的重要方法之一。
染色分为单染（简单染色），复染（革兰氏染色）。
单染较简单，以同一种染料让菌体着色，以显示微生物的形态。
革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇（或丙酮）脱色，最后用复染剂（如沙黄）复染。
经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色（红色），该菌属于革兰氏阴性菌。
1884年由丹麦病理学家C. Gram创立了革兰氏染色法，后来一些学者在此基础上作了某些改进。
革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。
实际上，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。
碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫-碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。
当用脱色剂(乙醇)处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成、壁厚、含脂量低，用乙醇（或丙酮）脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫——碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。
革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、含脂量高，当用脱色剂(乙醇)处理后，类脂质被乙醇（或丙酮）溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。
微生物形态和结构观察
第二部分微生物形态和结构观察个体形态和细胞结构是微生物的重要特征，也是识别和鉴定微生物的主要依据之一。
微生物个体微小，要研究它们的形态和结构，通常需要显微镜；在许多情况下，还需要对标本进行染色。
学习和掌握形态学观察技术，对于研究、开发和利用微生物具有重要意义。
实验1 细菌染色和形态结构观察细菌的基本形态主要有球状、杆状和螺旋状。
在适宜的生长条件下，细菌细胞一般在幼龄阶段呈现特定形态。
但若培养条件发生变化或培养物老龄化，菌体形态会出现异常。
细菌个体微小且无色透明，对光线的吸收和反射与水溶液差别不大，直接在显微镜下观察，不易看清它们的真实面目。
对菌体进行染色，可以增加反差，显现细菌的一般结构和特殊结构。
染色技术是微生物形态学研究的重要手段，它可分为简单染色、鉴别染色和特殊染色三种类型。
一、简单染色法（一）目的要求1、学习细菌涂片的基本技术。
2、掌握细菌简单染色法。
3、熟练显微镜油镜的使用技术。
（二）基本原理简单染色是采用一种染料使细菌着色的染色方法。
微生物细胞含有蛋白质、核酸等两性电解质，在酸性溶液中离解出碱性基团而带正电荷，在碱性溶液中离解出酸性基团而带负电荷。
细菌的等电点为pH2～5。
在中性（pH7）、碱性（pH>7）或偏酸性（pH6～7）溶液中，细胞的等电点低于溶液的pH值，因此菌体一般带负电荷。
因为电离后碱性染料带正电荷，可与菌体内的负电荷结合，所以在细菌学研究中大多采用碱性染料进行染色。
常用的碱性染料有碱性复红、蕃红、结晶紫、孔雀绿、美蓝等。
（三）实验器材1、菌种：牙垢细菌。
2、染色液(1瓶/组)：石炭酸复红染色液。
3、仪器及相关用品(1套/组)：显微镜，香柏油，二甲苯，擦镜纸。
4、其它用品(1套/组)：蒸馏水，载玻片，盖玻片，吸水纸，酒精灯，火柴，接种环，镊子，无菌牙签。
（四）实验程序简单染色的操作过程如图4-1所示。
图4-1 细菌的简单染色与显微镜观察1、涂片：取一片洁净无油污的载玻片（通常保存于盛有酒精的广口瓶内，用镊子取出载玻片，在酒精灯上引燃载玻片表面的酒精，冷却后即可使用），在中央滴一小滴蒸馏水，用无菌牙签取少许牙垢，与水滴混匀，涂成薄层（直径约为10mm）。
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实验三细菌的简单染色与形态观察
一、目的要求：
1.了解并掌握细菌简单染色的机理及技术；
2.学会用油镜观察细菌细胞的形态。
二、实验材料：
1.菌种：枯草杆菌Bacillus subtilis、大肠杆菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌StapHyloccus
aureus等培养好的细菌斜面；
2.染料：结晶紫
3.其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌水、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。
三、基本原理：
染色是细菌学上一个重要而基本的操作技术。
因细菌细胞小而且透明，当把细菌悬浮于水滴内，用光学显微镜时，由于菌体和背景没有显著的明暗差，因而难以看清它们的形态，更不易识别其结构，所以，用普通光学显微镜观察细菌时，往往要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，可以更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。
用于微生物染色的染料是一类苯环上带有发色基团和助色基团的有机化合物。
发色基团赋予化合物的颜色特征，助色基团则给予化合物能够成盐的性质。
染料通常都是盐，分酸性染料和碱性染料两大类。
在微生物染色中，碱性染料较常用，如常用的美蓝、结晶紫、碱性复红、沙黄、孔雀绿等都属于碱性染料。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
此法操作简便，适于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性和弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料电离后带有正电荷，很容易与菌体结合使细菌着色。
通过本实验，学习和掌握细菌的染色技术，了解细菌细胞的形态，巩固课堂知识，增加感性认识。
四、方法与步骤：
（一）制片
1.涂片：在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水，用接种环以无菌操作从枯草芽孢杆菌
斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜，涂布面积约1~1.5cm2。
2.干燥：室温自然干燥
3.固定：手执载玻片一端，使涂菌一面向上，通过火焰2~3次。
此操作也称热固定，其目
的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在玻片上。
4.染色：将涂片置于水平位置，滴加结晶紫染色液（以刚好覆盖涂片薄膜为宜），染色1min
左右。
5.水洗：倾去染液，斜置载片，用自来水的细水流由载片上端流下，不得直接冲洗在涂菌
处，直至载片上流下的水无色为止。
6.干燥：自然干燥，或用电吹风吹干，也可用滤纸吸干，注意不要檫掉菌体。
7.镜检：待标本片完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，将典型部位移至视野中央，再
用油镜观察。
图4-1细菌染色标本制作及染色过程
1.取接种环
2.灼烧接种环
3.摇匀菌液
4.灼烧管口
5.从菌液或斜面取菌
6.取菌毕，灼烧管口、加塞
7.a将菌液直接涂片(或7b混匀涂片) 8.烧去接种环上的残菌9.固定10.染色11.水洗12.吸干
五、实验内容
1.对所给的菌种分别进行简单染色；
2.镜检：对于球菌主要观察球菌的大小、排列方式。
对于杆菌，主要观察长/宽比、杆菌
两端形状、两端是否等宽、排列方式、是否产芽孢等。
六、实验报告
1.绘出枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的形态图，注明放大倍数、及观察到的
颜色。
2.使用油镜时，应特别注意哪些问题？
3.对同一微生物制片，用油镜观察比用低倍镜观察有何优、缺点？
4.涂片在染色前为什么要先进行固定？固定时应注意什么问题？。