泻心汤在急性炎症动物模型上的抗炎效应
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中国药理学通报 Ch inese Pha rm acolog ica l B u lletin 2006 Nov; 22 (11) : 1393～8
◇复方药物药理学 ◇
·1393·
泻心汤在急性炎症动物模型上的抗炎效应
马越鸣 ,闫晶超 ,王天明 ,石 荣 ,焦亚斌
(上海中医药大学中药药代动力学实验室 ,上海 201203)
by itraconazole. The results suggest that viam inate
m ight be partially metabolized via CYP3A4, and the dose of viam inate should be noted in clinics when it co2 adm inistrates w ith itraconazole. Key words: viam inate; itraconazole; pharm acokinet2 ics; CYP3A4
关键词 :泻心汤 ;药效学 ;抗炎作用 ;机制
泻心汤 ( Xiexin decoction, XXD )由大黄 、黄连 、 黄芩组成 ,为出自《金匮要略 》的清热经典名方 ,具 有泻火解毒 、燥湿泻热之功效 ,为治疗热盛吐衄证要 方 。目前 ,该方在临床广泛应用于急性肺炎 、老年性 肺炎 、急性扁桃腺炎 、高血压 、脑血栓 、预防脑卒中 、 急性结膜炎 、表层巩膜炎 、急性虹膜睫状体炎 、肺炎 、 心肌炎 、咽喉炎等 [ 1 ]疾病的治疗 。 现代药理学研究表明 ,泻心汤具有抗病原微生 物 、抗炎 、抗凝 、改善高血压 、高脂血症 、保护胃粘膜 等药理功效 [ 2 ] 。但与泻心汤“泻火解毒 ,燥湿泻热 ” 功效密切相关的抗炎作用未见系统研究的报道 ,对 该方抗炎作用与体内有效成分的关系不清楚 。本文 采用实验性急性炎症动物模型 ,观察泻心汤抗炎效 果 ,并探索其可能的抗炎机制 ,为其临床应用提供参 考 ,并为该方的进一步药效学 - 药动学联合研究提 供依据 。 1 材料 1. 1 动物 昆明种小鼠 , 18 ～22 g♂,合格证号 : SCXK (沪 ) 2002 - 0002; SD 大鼠 , 130 ～150 g♂,合
中国 图 书 分 类 号 : R2332; R 28915; R 3632332; R 36415; R 97111 文献标识码 : A 文章编号 : 100121978 (2006) 11 - 1393 - 06 摘要 :目的 研究泻心汤的抗炎效应及抗炎作用的机制 。方 法 采用 4种急性炎症模型 ,包括大鼠角叉菜胶及蛋清足 肿胀 、2%冰醋酸小鼠腹腔渗出和小鼠内毒素急性肺损伤模 型 ,观察泻心汤对动物实验性急性炎症模型的影响 ;并观察 小鼠内毒素急性肺损伤模型中 ,泻心汤对血浆一氧化氮合成 酶 、一氧化氮 、肿瘤坏死因子 2α及自由基产物丙二醛的影 响 。结果 泻心汤 ig给药后对上述 4种炎症模型都具有良 好的抗炎效果 ;并可以抑制内毒素炎症过程中诱生型一氧化 氮合成酶的活性 ,抑制一氧化氮 、肿瘤坏死因子 2α等炎症因 子的产生 ,减少自由基产物丙二醛生成 。结论 泻心汤具有 良好的抗炎效应 ,且可以通过多途径产生抗炎作用 。
2. 2. 1 泻心汤对角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀模 型的影响 [ 3, 4 ] 30 只大鼠随机分成模型组 (等容量 生理盐水 ) 、阳性对照组 (地塞米松 112 mg·kg- 1 ) 、 泻心汤组 (12 g·kg- 1 ) ,各组大鼠在灌胃给药 015 h 右后跖皮下注射 1%角叉菜胶 ,于给药前及给药后 015, 1, 2, 3, 4, 6 h采用体积排阻法测量足部体积 ,与 给药前体积比较 ,计算肿胀率 ,并计算各组的最大肿 胀率 ( Smax )和肿胀率曲线下面积 (AUC) 。 2. 2. 2 泻心汤对蛋清诱导的大鼠足跖肿胀模型的 影响 [ 3 ] 实验分组 、给药 、足容积测定 、肿胀率和肿
mean peak time [ (2138 ±0135) h vs ( 2113 ±0135) h, P > 0105 ]. Additionally, the mean elim ination half life was p rolonged [ ( 2171 ±0138 ) h vs ( 4143 ± 0193) h, P < 0101 ] , the m ean area under the p lasma concentration2tim e curve from 0 to infinity was in2 creased [ (137132 ±80116) h·μg·L - 1 vs ( 215119 ±113101) h ·μg·L - 1 , P < 0101 ] , and the mean residence time was p rolonged [ ( 4142 ±0122 ) h vs (6181 ±0175 ) h, P < 0101 ]. Conclusion The pharmacokinetics of viam inate was obviously affected
收稿日期 : 2006 - 05 - 12,修回日期 : 2006 - 08 - 09 基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (No 90409008) ;上海Baidu Nhomakorabea科委
基金资助项目 (No 04DZ19844) ; 上海市重点学科建设资 助项目 (No T0301) 作者简介 :马越鸣 (1959 - ) ,女 ,教授 ,研究方向 :药物代谢动力学和 中药 药 理 学 , Tel: 021251322386, Fax: 021251322386, E2 mail: mayuem ing_117@126. com
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中国药理学通报 Ch inese Pha rm acolog ica l B u lletin 2006 Nov; 22 (11)
格证号 : SCXK (沪 ) 2003 - 0002,由上海中医药大学 实验动物中心提供 。 1. 2 实验药物 大黄 (批号 : 030721 ) 、黄芩 (批 号 : 030625) 、黄连 (批号 : 030729 )购自上海康桥中 药饮片有限公司 ,生药经本校生药学教研室赵志礼 教授鉴定 ,按 2005年药典方法进行含量测定 ,符合 药典规定要求 。取大黄 、黄芩 、黄连 ,按 2 ∶1 ∶1比 例 ,传统方法煎煮 ,制成泻心汤提取物细粉 ,由上海 中医药大学科技实验中心中药制药室制备 。小檗 碱 、巴马汀 、黄芩苷 、汉黄芩苷 、黄芩素 、汉黄芩素 、芦 荟大黄素 、大黄酸 、大黄素 、大黄酚 、大黄素甲醚标准 对照品购自国家药品生物制品签定所 。 1. 3 试剂 角叉菜胶 、内毒素 (大肠杆菌脂多糖 O55 : B5 , LPS)购自 Sigm a 公司 ; TN F2α (肿瘤坏死因 子 )检测试剂盒 ( ELASA Kit)购自晶美生物工程有 限公司 ; 蛋 白 定 量 (考 马 斯 亮 蓝 法 ) 、NO (一 氧 化 氮 ) 、NOS (一氧化氮合成酶 ) 、MDA (丙二醛 )试剂盒 购自南京建成生物研究所 ;甲醇和乙腈为色谱纯 ;冰 醋酸 、盐酸为分析纯 。 1. 4 仪器 Agilent HP1100 高效液相色谱系统 , Agilent 8453 型 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 , SPECTRA MAX190 酶标仪 (Molecular Devices USA ) , PHS23B 微机型酸度计 (上海理达仪器厂 ) , FA /JA 型电子天 平 (上海精密科学仪器有限公司 ) , XW 280A 旋涡混 合器 (上海医科大学仪器厂 ) 、DKZ21型电热恒温振 荡水槽 (上海精宏实验设备有限公司 ) , TGL 216G2A 型高速冷冻离心机 (上海安亭科技有限公司 ) 。 2 方法 2. 1 泻心汤成分分析 2. 1. 1 黄酮类及黄连生物碱成分 高效液相色谱 条件 : SUPELCO discover C18柱 ( 416 mm ×250 mm , 5 μm ) 色谱柱 ;流动相 :甲醇 - 2%甲酸水溶液 ( 011% 三乙胺 ) ;梯度洗脱 : 0 m in甲醇 20% →20 m in甲醇 30% →30 m in 甲醇 30% →40 m in 甲醇 55% →55 m in甲醇 80% ;流速 : 110 m l·m in- 1 ;柱温 : 40℃;进 样体积 : 30μl;紫外检测波长 : 346 nm。并进行方法 学考察 。用上述方法测定 5 批泻心汤 50%甲醇提 取液中的黄酮类及黄连生物碱成分 。 2. 1. 2 蒽醌类成分 高效液相色谱条件 : Agilent Hypersil ODS色谱柱 ( 416 mm ×250 mm , 5 μm ) ;流 动相 :甲醇 - 011%磷酸 ( 75 ∶25, V ∶V ) ; 流速 : 110 m l·m in- 1 ;柱温 : 30℃;检测波长 : 440 nm ,进样量为 50μl。并进行方法学考察 。用上述方法测定 5 批 泻心汤经酸化后的氯仿提取液中的蒽醌类成分 。 2. 2 泻心汤对实验性急性动物炎症模型的影响
胀率曲线下面积计算同 2. 2. 1,大鼠右后跖皮下注 射 10%鸡蛋清 。 2. 2. 3 泻心汤对冰醋酸诱导的小鼠腹腔渗出性炎 症模型的影响 [ 3 ] 40 只小鼠随机分成正常组 (等容 量生理盐水 ) 、模型组 (等容量生理盐水 ) 、泻心汤组 ( 18 g·kg- 1 ) 、阳性组 (地塞米松 118 m g·kg- 1 ) , 除正常组外其余各组在灌胃给药后 015 h,腹腔注射 2%冰醋酸 , 8 h后脱颈椎处死 ,用 50 kU ·L - 1肝素 生理盐水 5 m l做腹腔灌洗 ,取 4 m l灌洗液 ,按蛋白 定量 (考马斯亮蓝法 )试剂盒说明 ,用紫外分光光度 计测定蛋白含量 。
stand the m etabolism pathway of viam inate in healthy hum ans, as well as guide the reasonable medication for viam inate and itraconazole coadm inistration. M ethods The study was conducted in a double2blind random2 ized and crossover m anner w ith two phases of treatm ent w ith p lacebo2viam inate or itraconazole2viam inate. Eight healthy m ale subjects received an oral dose of 200 mg itraconazole (QD ) or matched p lacebo for five consec2 utive days, and took an oral 100 m g dose of viam inate on day 4 after each treatment phase. The liquid chro2 matography2m ass spectrom etry ( LC2M S ) was estab2 lished to measure the blood drug concentration of viam2 inate. Results Our results showed that the mean peak concentration of viam inate was increased w ith itracon2 azole [ ( 21121 ±11165 ) μg · L - 1 vs ( 27112 ± 13183) μg·L - 1 , P < 0101 ] , but no change in the
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泻心汤在急性炎症动物模型上的抗炎效应
马越鸣 ,闫晶超 ,王天明 ,石 荣 ,焦亚斌
(上海中医药大学中药药代动力学实验室 ,上海 201203)
by itraconazole. The results suggest that viam inate
m ight be partially metabolized via CYP3A4, and the dose of viam inate should be noted in clinics when it co2 adm inistrates w ith itraconazole. Key words: viam inate; itraconazole; pharm acokinet2 ics; CYP3A4
关键词 :泻心汤 ;药效学 ;抗炎作用 ;机制
泻心汤 ( Xiexin decoction, XXD )由大黄 、黄连 、 黄芩组成 ,为出自《金匮要略 》的清热经典名方 ,具 有泻火解毒 、燥湿泻热之功效 ,为治疗热盛吐衄证要 方 。目前 ,该方在临床广泛应用于急性肺炎 、老年性 肺炎 、急性扁桃腺炎 、高血压 、脑血栓 、预防脑卒中 、 急性结膜炎 、表层巩膜炎 、急性虹膜睫状体炎 、肺炎 、 心肌炎 、咽喉炎等 [ 1 ]疾病的治疗 。 现代药理学研究表明 ,泻心汤具有抗病原微生 物 、抗炎 、抗凝 、改善高血压 、高脂血症 、保护胃粘膜 等药理功效 [ 2 ] 。但与泻心汤“泻火解毒 ,燥湿泻热 ” 功效密切相关的抗炎作用未见系统研究的报道 ,对 该方抗炎作用与体内有效成分的关系不清楚 。本文 采用实验性急性炎症动物模型 ,观察泻心汤抗炎效 果 ,并探索其可能的抗炎机制 ,为其临床应用提供参 考 ,并为该方的进一步药效学 - 药动学联合研究提 供依据 。 1 材料 1. 1 动物 昆明种小鼠 , 18 ～22 g♂,合格证号 : SCXK (沪 ) 2002 - 0002; SD 大鼠 , 130 ～150 g♂,合
中国 图 书 分 类 号 : R2332; R 28915; R 3632332; R 36415; R 97111 文献标识码 : A 文章编号 : 100121978 (2006) 11 - 1393 - 06 摘要 :目的 研究泻心汤的抗炎效应及抗炎作用的机制 。方 法 采用 4种急性炎症模型 ,包括大鼠角叉菜胶及蛋清足 肿胀 、2%冰醋酸小鼠腹腔渗出和小鼠内毒素急性肺损伤模 型 ,观察泻心汤对动物实验性急性炎症模型的影响 ;并观察 小鼠内毒素急性肺损伤模型中 ,泻心汤对血浆一氧化氮合成 酶 、一氧化氮 、肿瘤坏死因子 2α及自由基产物丙二醛的影 响 。结果 泻心汤 ig给药后对上述 4种炎症模型都具有良 好的抗炎效果 ;并可以抑制内毒素炎症过程中诱生型一氧化 氮合成酶的活性 ,抑制一氧化氮 、肿瘤坏死因子 2α等炎症因 子的产生 ,减少自由基产物丙二醛生成 。结论 泻心汤具有 良好的抗炎效应 ,且可以通过多途径产生抗炎作用 。
2. 2. 1 泻心汤对角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀模 型的影响 [ 3, 4 ] 30 只大鼠随机分成模型组 (等容量 生理盐水 ) 、阳性对照组 (地塞米松 112 mg·kg- 1 ) 、 泻心汤组 (12 g·kg- 1 ) ,各组大鼠在灌胃给药 015 h 右后跖皮下注射 1%角叉菜胶 ,于给药前及给药后 015, 1, 2, 3, 4, 6 h采用体积排阻法测量足部体积 ,与 给药前体积比较 ,计算肿胀率 ,并计算各组的最大肿 胀率 ( Smax )和肿胀率曲线下面积 (AUC) 。 2. 2. 2 泻心汤对蛋清诱导的大鼠足跖肿胀模型的 影响 [ 3 ] 实验分组 、给药 、足容积测定 、肿胀率和肿
mean peak time [ (2138 ±0135) h vs ( 2113 ±0135) h, P > 0105 ]. Additionally, the mean elim ination half life was p rolonged [ ( 2171 ±0138 ) h vs ( 4143 ± 0193) h, P < 0101 ] , the m ean area under the p lasma concentration2tim e curve from 0 to infinity was in2 creased [ (137132 ±80116) h·μg·L - 1 vs ( 215119 ±113101) h ·μg·L - 1 , P < 0101 ] , and the mean residence time was p rolonged [ ( 4142 ±0122 ) h vs (6181 ±0175 ) h, P < 0101 ]. Conclusion The pharmacokinetics of viam inate was obviously affected
收稿日期 : 2006 - 05 - 12,修回日期 : 2006 - 08 - 09 基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (No 90409008) ;上海Baidu Nhomakorabea科委
基金资助项目 (No 04DZ19844) ; 上海市重点学科建设资 助项目 (No T0301) 作者简介 :马越鸣 (1959 - ) ,女 ,教授 ,研究方向 :药物代谢动力学和 中药 药 理 学 , Tel: 021251322386, Fax: 021251322386, E2 mail: mayuem ing_117@126. com
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中国药理学通报 Ch inese Pha rm acolog ica l B u lletin 2006 Nov; 22 (11)
格证号 : SCXK (沪 ) 2003 - 0002,由上海中医药大学 实验动物中心提供 。 1. 2 实验药物 大黄 (批号 : 030721 ) 、黄芩 (批 号 : 030625) 、黄连 (批号 : 030729 )购自上海康桥中 药饮片有限公司 ,生药经本校生药学教研室赵志礼 教授鉴定 ,按 2005年药典方法进行含量测定 ,符合 药典规定要求 。取大黄 、黄芩 、黄连 ,按 2 ∶1 ∶1比 例 ,传统方法煎煮 ,制成泻心汤提取物细粉 ,由上海 中医药大学科技实验中心中药制药室制备 。小檗 碱 、巴马汀 、黄芩苷 、汉黄芩苷 、黄芩素 、汉黄芩素 、芦 荟大黄素 、大黄酸 、大黄素 、大黄酚 、大黄素甲醚标准 对照品购自国家药品生物制品签定所 。 1. 3 试剂 角叉菜胶 、内毒素 (大肠杆菌脂多糖 O55 : B5 , LPS)购自 Sigm a 公司 ; TN F2α (肿瘤坏死因 子 )检测试剂盒 ( ELASA Kit)购自晶美生物工程有 限公司 ; 蛋 白 定 量 (考 马 斯 亮 蓝 法 ) 、NO (一 氧 化 氮 ) 、NOS (一氧化氮合成酶 ) 、MDA (丙二醛 )试剂盒 购自南京建成生物研究所 ;甲醇和乙腈为色谱纯 ;冰 醋酸 、盐酸为分析纯 。 1. 4 仪器 Agilent HP1100 高效液相色谱系统 , Agilent 8453 型 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 , SPECTRA MAX190 酶标仪 (Molecular Devices USA ) , PHS23B 微机型酸度计 (上海理达仪器厂 ) , FA /JA 型电子天 平 (上海精密科学仪器有限公司 ) , XW 280A 旋涡混 合器 (上海医科大学仪器厂 ) 、DKZ21型电热恒温振 荡水槽 (上海精宏实验设备有限公司 ) , TGL 216G2A 型高速冷冻离心机 (上海安亭科技有限公司 ) 。 2 方法 2. 1 泻心汤成分分析 2. 1. 1 黄酮类及黄连生物碱成分 高效液相色谱 条件 : SUPELCO discover C18柱 ( 416 mm ×250 mm , 5 μm ) 色谱柱 ;流动相 :甲醇 - 2%甲酸水溶液 ( 011% 三乙胺 ) ;梯度洗脱 : 0 m in甲醇 20% →20 m in甲醇 30% →30 m in 甲醇 30% →40 m in 甲醇 55% →55 m in甲醇 80% ;流速 : 110 m l·m in- 1 ;柱温 : 40℃;进 样体积 : 30μl;紫外检测波长 : 346 nm。并进行方法 学考察 。用上述方法测定 5 批泻心汤 50%甲醇提 取液中的黄酮类及黄连生物碱成分 。 2. 1. 2 蒽醌类成分 高效液相色谱条件 : Agilent Hypersil ODS色谱柱 ( 416 mm ×250 mm , 5 μm ) ;流 动相 :甲醇 - 011%磷酸 ( 75 ∶25, V ∶V ) ; 流速 : 110 m l·m in- 1 ;柱温 : 30℃;检测波长 : 440 nm ,进样量为 50μl。并进行方法学考察 。用上述方法测定 5 批 泻心汤经酸化后的氯仿提取液中的蒽醌类成分 。 2. 2 泻心汤对实验性急性动物炎症模型的影响
胀率曲线下面积计算同 2. 2. 1,大鼠右后跖皮下注 射 10%鸡蛋清 。 2. 2. 3 泻心汤对冰醋酸诱导的小鼠腹腔渗出性炎 症模型的影响 [ 3 ] 40 只小鼠随机分成正常组 (等容 量生理盐水 ) 、模型组 (等容量生理盐水 ) 、泻心汤组 ( 18 g·kg- 1 ) 、阳性组 (地塞米松 118 m g·kg- 1 ) , 除正常组外其余各组在灌胃给药后 015 h,腹腔注射 2%冰醋酸 , 8 h后脱颈椎处死 ,用 50 kU ·L - 1肝素 生理盐水 5 m l做腹腔灌洗 ,取 4 m l灌洗液 ,按蛋白 定量 (考马斯亮蓝法 )试剂盒说明 ,用紫外分光光度 计测定蛋白含量 。
stand the m etabolism pathway of viam inate in healthy hum ans, as well as guide the reasonable medication for viam inate and itraconazole coadm inistration. M ethods The study was conducted in a double2blind random2 ized and crossover m anner w ith two phases of treatm ent w ith p lacebo2viam inate or itraconazole2viam inate. Eight healthy m ale subjects received an oral dose of 200 mg itraconazole (QD ) or matched p lacebo for five consec2 utive days, and took an oral 100 m g dose of viam inate on day 4 after each treatment phase. The liquid chro2 matography2m ass spectrom etry ( LC2M S ) was estab2 lished to measure the blood drug concentration of viam2 inate. Results Our results showed that the mean peak concentration of viam inate was increased w ith itracon2 azole [ ( 21121 ±11165 ) μg · L - 1 vs ( 27112 ± 13183) μg·L - 1 , P < 0101 ] , but no change in the