细菌染色技术(优选资料)
细菌的常用染色技术
细菌的常用染色技术简单染色法：利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
例如番红。
1．涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜。
2．干燥：可自然晾干，或将涂片置于火焰高处微热烘干，但不能直接在火焰上烘烤。
3．固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过迅速通过火焰2-3次（用手指触涂片反面，以不烫手为宜）。
4．染色：加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液)，染l～2min。
5．水洗：用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止。
6．干燥7．镜检复染色：利用用两种以上染料对细菌进行染色。
例如革兰氏染色法。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，需要碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）。
碱性染料初染液的象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）。
媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine ）是常用的媒染剂。
脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95%的酒精（ethanol）。
复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，而且将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液为番红。
1.载玻片固定。
在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。
2.草酸铵结晶紫染1分钟。
3.自来水冲洗，去掉浮色。
4.用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。
5.用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。
细菌染色技术实验报告
细菌染色技术实验报告一、实验目的本实验旨在通过不同染色方法，对细菌进行染色，观察不同染色方法对细菌形态、结构的影响，掌握常用的细菌染色技术。
二、实验原理1.革兰氏染色：根据细胞壁结构的差异，将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
革兰氏阳性菌壁厚，含有大量的多糖和肽聚糖，易被紫晶染液染色；而革兰氏阴性菌壁薄，含有较少的多糖和肽聚糖，难以被紫晶染液染色。
因此，在进行革兰氏染色时，先用紫晶染液将细胞全部着紫色（1分钟），再用碘酒固定着色（1分钟），用酒精洗去过量的紫晶染液（10秒钟），最后用苏木精或伊红精着红色（30秒钟）。
2.抗酸杆菌染色：抗酸杆菌是一类特殊的革兰阴性菌，其细胞壁含有高度抵抗酸性染料的脂质物质——酸快染色素。
因此，抗酸杆菌染色需要使用专门的染色剂——浓硫酸和甲基绿。
3.荧光染色：荧光染色是一种常用于检测活细胞、细胞分布和数量的方法。
通过将荧光素标记到特定的细胞结构上，可以在荧光显微镜下直接观察到细胞形态、结构等信息。
三、实验步骤1.革兰氏染色（1）取一片无菌玻片，在上面滴一滴水。
（2）用无菌棒取少量培养液，均匀涂抹于玻片上。
（3）将玻片放置在火焰中加热至干燥。
（4）滴上紫晶染液，静置1分钟。
（5）用水冲洗干净，滴上碘酒固定着色，静置1分钟。
（6）用95%乙醇洗去过量的紫晶染液，持续10秒钟左右。
（7）再次用水冲洗干净，滴上苏木精或伊红精，静置30秒钟。
（8）用纸巾轻轻吸干水分，放置晾干后进行观察。
2.抗酸杆菌染色（1）取一片无菌玻片，在上面滴一滴水。
（2）用无菌棒取少量抗酸杆菌培养液，均匀涂抹于玻片上。
（3）将玻片放置在火焰中加热至干燥。
（4）滴上浓硫酸，静置1分钟。
（5）用水冲洗掉浓硫酸，滴上甲基绿染液，静置1分钟。
（6）再次用水冲洗干净，放置晾干后进行观察。
3.荧光染色（1）取一片无菌玻片，在上面滴一滴水。
（2）用无菌棒取少量荧光素标记的细胞培养液，均匀涂抹于玻片上。
（3）将玻片放置在火焰中加热至干燥。
细菌常用染色方法
细菌常用染色方法
细菌常用的染色方法包括：
1. 革兰氏染色法：根据细菌细胞壁的不同组成，将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
该方法使用革兰氏紫染料染色，然后使用碘酒处理和洗涤，最后用洋红染色，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
2. 厌氧杆菌染色法：用甲基蓝和碘溶液混合物染色，可以区分厌氧杆菌和其他菌种。
3. 浓缩染色法：用詹氏菲洛染料染色，然后用酒精淋洗和乙醚蒸发，最后用洋红染色。
这种方法可以观察到细菌的形态、结构等细节。
4. 封闭染色法：将细菌培养在带有染色剂的琼脂上，细菌会吸收染料并形成深色颗粒。
5. 微胞溶解染色法：将细菌培养在含有亚甲蓝的琼脂平板上，细菌会吸收染料并产生颜色。
6. 阴离子染色法：使用负电染料如酸性染料贾氏深蓝染色或卡尔巴查染色，细菌细胞呈现颜色。
这些染色方法可以帮助鉴定细菌的形态、结构和组成，辅助进行细菌分类和鉴定。
实训三 细菌染色法
③细胞内核糖核酸镁盐含量不同。
G＋菌的多，染料结合牢固，难脱色
G 菌的少，易脱色 － 2020/11/28
8
革兰染色意义:鉴别；致病性；药物选择
G （紫）×1000 +
2020/11/28
G— （红）×1000 9
革兰染色影响因素：
菌 龄—培养18-24小时的幼龄菌
涂片厚度—宜薄不宜厚
各试剂作用时间
涂片干燥Βιβλιοθήκη 固定水洗水洗
水洗 水洗
干燥
结晶紫 碘液 2020/11/28
1min
1min
95％乙醇 蕃红
镜检7
30s
2-3min
革兰染色原理：
①壁结构、成分差异。（主）
G＋菌壁厚、密,脂类少,乙醇不易渗入脱色 G－菌壁薄、疏,脂类多,乙醇易渗入脱色
②等电点不同。
G＋菌的低，结合阳性染料多 G－菌的高，结合阳性染料少
实训三 细菌染色法
2020/11/28
1
单染色法
正染色
革兰染色法
1. 死菌 细 菌
抗酸染色法 复染色法
芽孢染色法
姬姆萨染色法
染
负染色：荚膜染色法
色 法 活菌：用美蓝或TTC等作活菌染色
2020/11/28
2
2.染色原理：小、色差 染色法：简单、革兰染色
常用染料
碱性染料：带正电荷，如美蓝、结 晶紫、碱性复红等
11
5.思考题：1和2 6.实训总结：（实训结束后完成） 分析实训过程的收获、存在的问题和 解决的方法
2020/11/28
12
酸性染料：带负电荷，如伊红、酸 性复红或刚果红等酸性染料染色
中性染料：又称复合染料，如伊红
细菌染色技术
.
革兰氏阳性葡萄球菌例子 (金黄 色葡萄球菌 x 1000)
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革兰氏阳性链球菌例子
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革兰氏阴性杆菌例子 (大肠杆菌 x 1000)
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革兰氏阴性弧菌例子
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革兰氏阳性产芽孢杆菌例子
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革兰氏阳性短杆菌例子 (李斯特 菌 x 1000)
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革兰氏阴性弯曲菌例子
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革兰氏阳性棒状杆菌例子
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抗酸染色法
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特殊染色
鞭毛染色
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质量控制
每批或每天染色时应同步进行质控，质控方法如下：
染色方法
质控菌株
阳性
革兰染色 抗酸染色 荧光染色
Sau ATCC25923 Eco ATCC25922
H37RV Eco ATCC25922
H37RV Eco ATCC25922
紫色 红色 橘黄色荧光
阴性
红色 蓝色 无荧光
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细菌染色技术
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细菌染色方法
燃料与细胞 结合而染色
细菌染色
活菌染色
死菌染色
正染色
负染色
细胞不染色 而背景染色
普通染色
特殊染色
简单染色法 复杂染色法 芽孢染色法 荚膜染色法 细胞壁染色法
抗酸染色 革兰氏染色
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常用的染色方法
革兰染色：最经典常用；革兰阳性、阴性菌；初步
识别特殊形态
抗酸染色：抗酸性、非抗酸性细菌；用于结核病、
响染色效果。
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2.染液
染液用完后应及时盖上盖子，以免挥发影响染色效果
3.细菌因素
➢ 被检菌的培养条件、培养基成分、菌龄的不同等原因会 影响染色结果，如培养时间过长革兰阳性菌可能染成阴性， 所以被检菌的菌龄一般最好在18~24h之内。
实验一二三细菌染色
实验一二三细菌染色实验一、细菌简单染色一、实验目的与要求1 .学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色方法2 .掌握油镜的使用方法和无菌操作技术二、原理1 .简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
2 .常用碱性染料进行简单染色，因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。
经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
常用作简单染料有：美蓝、结晶紫碱性石炭酸复红等。
三、器材1.菌种金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis）2.染色剂：石炭酸复红染液3.仪器及其他用具显微镜酒精灯载玻片接种环双层瓶擦镜纸蒸馏水四、操作步骤1.涂片取两块载玻片，各滴一小滴蒸馏水于玻片中央，用接种环以无菌操作分别从金黄色葡萄球菌和苏云金芽胞杆菌平板上挑取少许菌苔于水滴中，混匀成薄膜。
注意：载玻片无油迹；滴蒸馏水不要太多；涂片要涂抹均匀2.干燥室温自然干燥3.固定涂面朝上，通过火焰2-3次，热固定温度不宜过高，以免改变或破坏细胞形态。
滴加石炭酸复红染液于涂片上，染色约1-2分钟5.水洗用自来水冲洗，直至涂片上流下的水为无色为止。
注意：不要直接冲洗涂面，使水从载玻片的一端流下。
水流不宜过大，以免涂片薄膜脱落6.干燥自然干燥或用吸水纸吸干7.镜检涂片必须完全干燥后才能用油镜观察五、实验报告根据观察结果，绘出两种细菌的形态图。
实验二、革兰氏染色法一、目的要求1.学习并掌握革兰氏染色法、荚膜染色法2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性二、基本原理1.革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C. Gram 氏创立的，是细菌学中最重要的鉴别染色法。
）2.革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。
实训三细菌染色法
2024/6/21
6
革兰染色步骤:金黄色葡萄球菌或大肠埃希菌
涂片
干燥
固定
水洗
水洗
水洗
1min
1min
95％乙醇 蕃红
镜检7
30s
2-3min
革兰染色原理：
①壁结构、成分差异。（主）
G＋菌壁厚、密,脂类少,乙醇不易渗入脱色 G－菌壁薄、疏,脂类多,乙醇易渗入脱色
②等电点不同。
G＋菌的低，结合阳性染料多 G－菌的高，结合阳性染料少
③细胞内核糖核酸镁盐含量不同。
G＋菌的多，染料结合牢固，难脱色
G 菌的少，易脱色 － 2024/6/21
8
革兰染色意义:鉴别；致病性；药物选择
G （紫）×1000 +
2024/6/21
G— （红）×1000 9
革兰染色影响因素：
无菌操作 两环菌液 直径约1cm
晾干 烘干 等全干
过外焰3次 目的
涂片
干燥
不烫 染液不干
水洗
结晶紫 2024/6/21
1min
干燥 镜检
固定
全干再看 用油镜
记录结果 教师评分
5
（2）经典染色法 －－革兰染色法
由丹麦医生革兰于 1884年创立。
革兰阳性菌 G+（紫色） 革兰染色法 革兰阴性菌 G-（红色）
③是否最佳目标
④目标是否清晰
⑤光线是否适宜 2024/6/21
11
5.思考题：1和2 6.实训总结：（实训结束后完成） 分析实训过程的收获、存在的问题和 解决的方法
2024/6/21
12
实训三 细菌染色法
2024/6/21
1
单染色法
常用细菌染色技术
三、结果:
阳性菌——紫色
阴性菌——红色
固定 初染
媒染 脱色 复染 革兰氏阳性菌，用符号“G+”或“GP” （Gram’s Positive）表示。 革兰氏阴性菌，用符号“G¯”或“GN” （Gram’s Negative）表示。
四、影响因素
1.操作：
涂片的厚薄，不宜过厚 染色时间的把握，尤其是脱色时间，脱色不宜过度 固定过程不可用酒精灯直接加热，避免过热使菌体变性而影
抗酸染色的意义： 用以鉴别抗酸菌（如结核杆菌和麻风 杆菌）和非抗酸菌。
荧光染色法
一、原理
抗酸杆菌用荧光燃料Auramine O(金胺O)染色后，用
含有紫外光源的荧光显微镜检查，将会发出闪亮的橘黄色。
标本涂布不能过厚，影响染色效果。 体液标本应浓缩集菌后取沉渣涂片。
普通染色法
革兰染色法（Gram Stain）
是最常用的鉴别染色法之一。此染色法是由丹麦细菌学 家 Christian Gram氏于1882～1884年发明的，至今已逾百 年，仍在广泛使用，是细菌学中最为经典的染色方法。
一、原理
体液标本：取标本10ml，3000rpm,离心30min，取沉渣涂片。 大小、厚度同痰涂片。
脑脊液：将脑脊液离心或甩片集菌后涂片备用。 大便：取粘液便或者血便少量均匀涂布玻片，不可过厚。
标本处理注意事项
标本应以打圈的方式反复涂抹均匀，避免标本涂布不均影响结果判读， 或使染色不均造成阴阳不定。
细菌经结晶紫初染染成蓝色。G+菌细胞壁肽聚糖层数多，且肽 聚糖为空间网状结构，再经乙醇脱水，网状结构更为致密，染料 复合物不易从细胞内漏出，仍为蓝色。而G-菌细胞壁脂类含量多， 肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层结构，易被乙醇溶解，使细 胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色为无 色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。
细菌的染色方法范文
细菌的染色方法范文细菌染色是一种常见的实验方法，用于从复杂的细菌群体中提取有关其结构、形态和一些特定性质的信息。
它是微生物学研究中不可或缺的工具。
本文将介绍常见的细菌染色方法，包括简单染色、差异染色和特殊染色。
1.简单染色简单染色是最基本的细菌染色方法，使用一种染色剂将细菌细胞全部染色。
最常用的染色剂是碘蓝和甲基蓝。
染色方法如下：(1)将细菌涂片固定在玻片上，可以使用热固定法或化学固定法。
(2)在涂片上滴加碘蓝或甲基蓝溶液，让其渗透细菌细胞。
(3)用水冲洗玻片以去除多余的染色剂。
(4)用纸巾将玻片上的水分吸干。
(5)在显微镜下观察染色的细菌。
2.差异染色差异染色是通过使用多种染色剂及/或特定条件，使不同种类或部分细菌以不同颜色呈现。
主要的差异染色方法有革兰氏染色和酸性忍受染色。
(1)革兰氏染色革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，主要用于将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
染色方法如下：-将细菌涂片固定在玻片上。
-滴加革兰氏紫素，让其渗透细菌细胞。
-用碘液固定染色，形成染色颗粒。
-用乙醚或酒精去除多余的染色剂。
-滴加脱色剂，使革兰氏阴性细菌脱色，而革兰氏阳性细菌保持染色。
-用水冲洗玻片以去除脱色剂。
-在显微镜下观察染色的细菌。
(2)酸性忍受染色酸性忍受染色是一种特殊的染色方法，适用于具有特殊的抗酸性结构的细菌，如结核菌和其他抗酸杆菌。
染色方法如下：-将细菌涂片固定在玻片上。
-滴加浓硫酸，让其固定和脱水细菌。
-滴加酸性忍受染色液，让其渗透细菌细胞。
-冲洗玻片以去除多余的染色液。
-在显微镜下观察染色的细菌。
3.特殊染色特殊染色方法主要用于染色细菌的特定部分或结构，以使其更清晰可见。
一些常见的特殊染色包括荧光染色、胞外多糖染色和内孢子染色。
(1)荧光染色荧光染色是一种利用荧光染料如荧光素和荧光素同系物染色细菌的方法。
这种染色方法可以给细菌标记上特定的荧光标记物，以在显微镜下观察细菌。
荧光染色是现代生物学和医学研究中常用的方法之一(2)胞外多糖染色胞外多糖染色是一种常见的细菌染色方法，用于染色细菌细胞表面的胞外多糖。
细菌染色技术
细菌染色技术一、细菌的革兰染色法革兰染色法(Gram stain)是细菌学上最经典的、使用最广泛的一种染色方法.由丹麦细菌学家革兰(Christian Gram)于1883年创立.细菌染色后,不仅可以观看其形态,而且可依据染色结果将细菌分为两大类,即革兰阳性菌(G+菌)和革兰阴性菌(G-菌).1、原理：(1)G+菌细胞壁结构致密(肽聚糖层厚),且脂质含量少,乙醇不易渗入脱色；G-菌细胞壁结构疏松(肽聚糖层薄),且脂质含量多,乙醇溶解脂质后易渗入细胞而脱色.(2)G+菌菌体含有大量核糖核酸镁盐,可与碘、结晶紫坚固结合,使已着色的细菌不被乙醇脱色.G-菌菌体内核糖核酸镁盐含量小,易被乙醇脱色.(3)G+菌等电点比G-菌低,在同一pH条件下阳性菌比阴性菌所带阴电荷要多,故与带正电荷的碱性染料(结晶紫)结合坚固,不易被乙醇脱色.2、应用革兰染色法的实际应用意义有三：(1)根据革兰染色法可把细菌分为G+和G-两大类；(2)G+菌和G-菌的致病性不同,所致疾病各异；(3)对G+和G-菌,选择不同抗菌物治疗.3、材料(1)葡萄球菌和大肠埃希菌培育18～24h后的混合菌液.(2)兰染色液：结晶紫染液、碘液、95%酒精、稀释复红或沙黄染液.(3)载玻片、接种环、酒精灯、吸水纸、显微镜等.4、方法标本片制备(1)载玻片预备：取一张清洁载玻片,用蜡笔在其背面画出二个有肯定间隔、直径约1～2cm的涂抹范围,用数字或符号做好标记. (2)涂片：将接种环在火焰上烧灼灭菌,冷却后取菌液直接涂布在标记的涂抹范围内.接种环在火焰上烧灼灭菌.(3)干燥：涂片最好在室温下自然干燥,或将标本面对上,置于离酒精灯火焰约半尺高处缓慢烘干,切不行放在火焰上烧干.(4)固定：将干燥后的涂片用片夹夹住,使涂抹面对上缓慢通过火焰3次,然后自然冷却.固定即可杀死细菌,并使细菌固着于玻片上,以免染色时脱落；又可使细菌蛋白凝固,而易着色.革兰染色法：(1)初染：在固定好并冷却了的涂片上滴加结晶紫染液1～2滴,作用1min后,用细水流从玻片的一端把游离的染液洗去.(2)媒染：滴加卢戈(Lugol)碘液数滴,作用1min后水洗.碘液是媒染剂,使结晶紫染液与细菌结合更坚固.(3)脱色：滴加95%酒精数滴,轻轻晃动玻片,使玻片上流下的酒精液无紫色为止(约需0.5～1min),流水冲洗.(4)复染：滴加稀释复红(或沙黄)染液数滴,作用1min后流水冲洗.最终用吸水纸印干标本片或自然干燥后,玻片上滴加香柏油,用油镜观看.5、结果G+菌染成紫色；G-菌染成红色.6、影响因素⑴操作因素：涂片太厚或太薄,菌体分散不匀称,可影响染色结果.固定时避开菌体过份受热.脱色时间要依据涂片厚薄敏捷把握.⑵细菌因素：不同时间培育物,革兰染色结果有差异,如葡萄球菌幼龄菌染成紫色.而老龄菌被染成红色.细菌染色时最好用18～24h的细菌培育物.⑶染液因素：全部染色液应防止水分蒸发而影响浓度,特殊是卢戈碘液久存或受光作用后易失去媒染作用.脱色酒精以95%浓度为宜,若瓶密封不良或涂片上积水过多,可使酒精浓度下降而减弱其脱色力量.二、细菌荚膜染色法(Hiss法)1、原理与应用细菌荚膜是细菌细胞壁外面的一层粘液性物质.其对染料的亲和力弱,不易着色,通常采纳负染色法染色,即使菌体和背景着色而荚膜不着色.因此在菌体四周呈一透亮圈.由于荚膜含水量在90%以上,染色时一般不用热固定,以防荚膜皱缩变形.荚膜染色法用于有荚膜细菌如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、炭疽芽胞杆菌及产气荚膜梭菌的鉴定.2、材料⑴荚膜菌液⑵结晶紫酒精饱和液5ml,加蒸馏水95ml 混合液.200g/L⑶硫酸铜水溶液.3、方法将荚膜菌涂片,在空气中自然干燥,不需加热固定.滴加结晶紫染色液,在火焰上微微加热,使玻片上染液冒蒸汽为止,不要水洗,再用200g/L 硫酸铜水溶液冲洗染液,切勿用流水冲洗.用吸水纸吸干后油镜观看.4、结果细菌菌体呈紫色,荚膜呈淡紫色或无色.三、细菌鞭毛染色法1、原理与应用细菌鞭毛为细菌的运动器官.其形态瘦长,直径约10～20nm,需用电子显微镜才能观看到.若用特别染色使鞭毛增粗并着色,则在一般光学显微镜下也可观看到.鞭毛染色方法许多,但原理基本类似,即在染色前先经媒染剂处理,使鞭毛增粗,然后再进行染色.2、材料(1)变形杆菌6～8h血琼脂平板培育物.(2)染色液.A液：200g/L钾明矾液(加温溶解)20ml,50g/L石炭酸液50ml,200g/L鞣酸液(加温溶解)20ml.B液：复红酒精饱和液.取A液9份和B液1份混合后马上过滤.滤液放置6h后,使用最佳. （3）蒸馏水管3、方法(1)细菌标本制备：取变形杆菌血琼脂平板培育物,认真从菌膜伸展最远处挑取菌少许,轻轻放入蒸馏水管中,经数min使其自行分散,再3725℃～30min.(2)涂片：取上述菌液一接种环,轻轻滴于载玻片上,使成薄膜.涂抹时接种环随水滴移动,切勿与玻片相磨,以免鞭毛脱落.(3)染色：涂片自然干燥(勿用火焰固定)后,加染色液作用1～2min ,水洗、吸干、镜检.4、结果鞭毛呈淡红色,菌体呈红色.四、细菌芽胞染色法1、原理与应用芽胞具有高度的折光性,外膜致密,渗透性低,故一般染色法不易使其着色,芽胞染色法是依据芽胞既难以着色,而一旦着色又难以脱色的特点设计的.全部芽胞染色法都基于同一个原则：采纳着色力强的染料,并加热以促进标本着色,然后使菌体脱色,而芽胞上的染料仍保留,经复染后,菌体和芽胞呈现不同的颜色.2、材料(1)破伤风梭菌48～72h培育物(2)石炭酸复红液、碱性美兰液、95%酒精3、方法(1)将破伤风梭菌培育物涂片,自然干燥,火焰固定,滴加石炭酸复红液,并加温至产生蒸汽(不行煮沸)约5min,防止染液干枯,随时补充,待载玻片冷却后,水洗.(2)用95%酒精脱色2min,水洗.(3)滴加美兰染液复染30sec,水洗,待干,镜检.4、结果芽胞呈红色,菌体呈蓝色.五、抗酸染色法1、原理与应用结核分枝杆菌对苯胺染料一般不易着色,若加温或延长染色时间使其着色后,再用3%盐酸酒精处理也不易脱色,经此染色后,结核分枝杆菌及其他分枝杆菌呈红色,而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色.2、材料(1)结核病人痰(2)抗酸染色液(3)玻片、片夹、滤纸片、竹签、空平皿、污物盆.3、方法(1)取干净的竹签沾取痰中血丝或脓性痰,在清洁无油脂玻片上涂开.涂抹区约拇指盖大.用过的竹签放到空平皿内待高压灭菌.(2)涂片自然干燥后,用片夹挟住玻片一端,通过火焰固定.(3)涂抹面用滤纸片盖上,然后往滤纸片上滴加石炭酸复红染液,使滤纸片完全被染液浸湿,持玻片在小火上加温片刻然后离开火焰,此时可见到玻片上冒出蒸气.待蒸气消逝后再加温,如此反复3～4次,约5min,加温时随时添加染液勿使纸片干枯.(4)玻片冷却后,用接种环挑去滤纸扔到污物盆内,流水冲洗玻片.(5)滴加3%盐酸酒精脱色,至涂抹匀称部位基本没有红色再脱下为止,水洗.(6)滴加吕氏美蓝染液30sec,水洗.(7)吸干、镜检.4、溶液配制萋－尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液(1)石炭酸复红液：硷性复红4g,溶于95%酒精100ml,作成饱和溶液,再取该饱和液10ml与5%石炭酸溶液90ml混匀即成.(2)3%盐酸酒精液.浓盐酸3ml加入95%酒精97ml中即成.(3)吕(Loeffer)氏美蓝染色液美蓝2g,溶于95%酒精100ml中,作成饱和液.再取该饱和液30ml与0.01%氢氧化钾水溶液100ml混合匀称即可.六、奈瑟染色法1、材料(1)染液甲第一液：美兰1g,95%酒精30ml,冰醋酸50ml,蒸馏水100ml.其次液：结晶紫1g, 95%酒精10ml, 蒸馏水300ml.以上第一液二份,与其次液一份混合之.(2)染液乙,黄叱精1或2g,热蒸馏水300ml,待溶解后过滤.2、染色法(1)涂片按常规法固定后,滴加奈瑟染液甲液数滴于涂片上,15～30 Sec,水洗.(2)用奈瑟染液乙液复染10～30秒钟.(3)快速用水洗,吸干、镜检.3、结果菌体呈鲜亮黄色、异染颗粒呈深紫兰色.。
细菌的常用染色技术
细菌的常用染色技术简单染色法：利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
例如番红。
1．涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜。
2．干燥：可自然晾干，或将涂片置于火焰高处微热烘干，但不能直接在火焰上烘烤。
3．固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过迅速通过火焰2-3次（用手指触涂片反面，以不烫手为宜）。
4．染色：加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液)，染l～2min。
5．水洗：用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止。
6．干燥7．镜检复染色：利用用两种以上染料对细菌进行染色。
例如革兰氏染色法。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，需要碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）。
碱性染料初染液的象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）。
媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine ）是常用的媒染剂。
脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95%的酒精（ethanol）。
复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，而且将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液为番红。
1.载玻片固定。
在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。
2.草酸铵结晶紫染1分钟。
3.自来水冲洗，去掉浮色。
4.用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。
5.用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。
细菌的染色方法
细菌的染色方法细菌的染色方法主要有革兰氏染色,抗酸色法和特别染色法(包括英膜染色法,芽抱染色法,鞭毛染色法)1.革兰氏染色法：1)器材:金黄色葡萄球菌，大肠杆菌,结晶紫染液，革兰氏碘液，0.4 %复红乙醇液,接种环，泗精灯，载玻片等。
2)方法:先制片，接着染色。
(1 )结晶紫染液染色1分钟，水冲洗；(2 )革兰氏碘液色1分钟；水冲洗；(3 ) 0.4 %复红乙醇液染色3秒钟,水冲洗，吸纸吸干后镜检。
2.抗酸染色法：1)器材:卡介苗与大肠杆菌和葡萄球菌的混合菌液，石炭酸复红,3 %的盐酸酒精，碱性美兰染液，接种环,酒精灯，载玻片等。
2)先制片一，接着染色。
(1 )石炭酸复红染液先沸水浴1 0分钟，滴加2 一3滴掩盖菌膜染色5分钟，水冲洗；(2 ) 3 %的盐酸酒精脱色3 0秒钟，水冲洗；(3 )碱性美兰复染3。
秒钟，水冲洗，吸水纸吸干后镜检.3.芽抱染色法：1)器材:破伤风杆菌厌氧培育物,5 %孔雀绿水溶液,0.5 %沙黄水溶液,载玻片，酒精灯等。
2)先制片，接着染色。
(1 )加孔雀绿染液2 — 3滴于小试管中，并使其与菌液混合匀称，然后将试竹放厂沸水浴的烧杯中，加热染色15分钟：(2 )涂片、固定：(3 )水冲洗，至到流出的水无绿色为止；(4)用0.5 %沙黄液复染2分钟，弃去多余的染液，吸水纸吸干镜检(此步骤不用水冲洗)。
4荚膜染色法：1)器材:肺炎球菌(小鼠腹腔液)，石炭酸复红,9 5 %的乙醇,2 0 %鞅酸水溶液,0.8 %孔雀绿水溶液。
2)方法:(1 )石炭酸复红染色1分钟，水冲洗：(2)95 %乙醇短暂脱色(几秒钟为宜)，水冲洗(3 ) 2 0 %糅酸溶液染色1 0分钟,水冲洗；(4 ) 0.8 %孔雀绿溶液染色1分钟，水冲洗，吸水纸吸干后镜检。
5.鞭毛染色法(镀银染色法)1)器材:变形杆菌新奇菌液，镀银染色法1液(糅酸5克，5 0%氯化铁2. 0ml, 1.5 %甲醛2. 0 ml, 1 %氢氧化钠1. 0 ml,蒸储水100 nd),糅银染色法2液(2 %硝酸银溶液,少量氨水)2)方法：(1 )糅银染色1液染色5分钟，水冲洗；(2 )糅银染色法2液染色1分钟，水冲洗，吸纸吸干后镜检。
常用细菌染色方法
常用细菌染色方法常用的细菌染色方法主要包括革兰氏染色法、培养基染色法、酸碱快速染色法和特殊染色法等。
下面将对这些方法进行详细阐述。
1. 革兰氏染色法：革兰氏染色法是最常用的细菌染色方法之一。
革兰氏染色分为四个步骤：固定、染色、洗涤和显色。
首先，用热炙或炉火将菌液固定在载片上。
然后，将菌液投入到革兰染色液中，革兰染色液包括紫罗兰晶体染液和碘溶液。
之后，用乙醇洗涤，去除多余的染色液。
最后，用苏木精染液进行显色，细菌会变成紫色，而波尔多红会成为背景颜色。
通过这种染色方法，我们可以根据细菌的染色结果将其分为革兰阳性和革兰阴性。
革兰阳性菌会显色为紫色，革兰阴性菌则在淡粉红色或红色。
2. 培养基染色法：培养基染色法是一种将细菌培养在含有染料的培养基上的染色方法。
这种方法的优点是可以通过直接观察培养基的颜色来判断细菌的类型，而不需要进行染色操作。
通常会根据菌落形状、大小和颜色等特征来判断不同菌种。
例如，大肠杆菌产生灰绿色的金属光泽菌落，金黄色葡萄球菌产生金黄色菌落等。
这种方法简便易行，通常用于常规实验室工作中。
3. 酸碱快速染色法：酸碱快速染色法又称为朗斯快速染色法，是一种通过酸碱反应来进行细菌分类的染色方法。
根据细菌细胞壁的化学成分，结合酸碱染色原理，可以将细菌分为两类，即酸染菌和碱染菌。
酸染菌在酸性条件下显色，呈现出红色或粉红色，碱染菌在碱性条件下显色，呈现出蓝色、紫色或黑色。
这种方法被广泛应用于快速分类细菌，特别是在細菌在临床应用方面有重要意义。
4. 特殊染色法：特殊染色法包括Ziehl-Neelsen染色、抗酸杆菌染色、吉姆萨染色、印度墨染色等。
这些染色方法主要用于检测一些特殊类型的细菌，如结核杆菌、抗酸杆菌等。
其中，Ziehl-Neelsen染色是一种用来检测酸快杆菌的染色方法，通过使用染色剂将细菌显色为红色，而其他细菌则显色为蓝色。
这种方法可以帮助医生诊断和治疗结核病。
细菌染色方法的选择取决于实验目的和需要。
细菌特殊的染色方法
细菌特殊的染色方法摘要：一、细菌染色的基本原理二、常规细菌染色方法1.单染色法2.复染色法三、特殊细菌染色方法1.荧光染色法2.免疫染色法3.金属离子染色法四、染色过程中的注意事项五、染色结果的判定与分析正文：细菌特殊的染色方法细菌染色是微生物学实验中的一项基本技术，通过染色可以清晰地观察到细菌的形态、结构和数量，为细菌的分类、鉴定和研究提供重要依据。
本文将对细菌特殊的染色方法进行介绍，以期为大家在实际工作中提供参考。
一、细菌染色的基本原理细菌染色是基于细胞成分的化学性质和物理性质差异，使染料选择性地吸附于细菌细胞表面，从而使细菌着色。
染色过程中，染料与细菌的结合力强弱决定了染色效果。
染料可分为碱性、中性、酸性染料，可根据实验需求选择合适染料。
二、常规细菌染色方法1.单染色法：使用一种染料对细菌进行染色，如革兰氏染色、奈瑟染色等。
染色过程中，染料与细菌结合，使细菌呈现出特定的颜色。
2.复染色法：使用两种或多种染料对细菌进行染色，如瑞氏染色、姬姆萨染色等。
复染色法可以使细菌呈现出多种颜色，有利于观察细菌的形态和结构。
三、特殊细菌染色方法1.荧光染色法：利用荧光染料对细菌进行染色，通过荧光显微镜观察细菌的形态和分布。
荧光染色法具有高灵敏度、高分辨率、无损性等优点，适用于活细胞染色。
2.免疫染色法：利用特异性抗体与细菌表面抗原结合，再通过荧光标记的二抗或金属离子标记的抗体进行染色。
免疫染色法可用于细菌的分类和鉴定，具有高度的特异性和准确性。
3.金属离子染色法：利用金属离子与细菌细胞内特定成分的结合，使细菌呈现出特定的颜色。
金属离子染色法适用于研究细菌的生理功能和代谢活性。
四、染色过程中的注意事项1.严格遵循染色操作规程，避免实验误差。
2.选择合适的染料和染色时间，根据实验需求进行调整。
3.染色过程中避免剧烈振荡和长时间暴露于高温环境，以免影响染色效果。
4.保持实验器材和试剂的干净，防止污染。
五、染色结果的判定与分析1.观察细菌的形态和颜色，判断染色效果。
微生物细菌染色技术
微生物细菌染色技术一：细菌细菌是一种具有细胞壁的单细胞原核型微生物，在一定环境条件下，细菌有相对稳定的形态和结构。
细菌个体微小，通常以微米（um）作为测量单位，基本形态有球形，杆形和螺形三种，基本结构有细胞壁，细胞膜，细胞质和核质等。
二：细菌形态学检查细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类与鉴定的基础，并可为进一步作生化反应，血清学鉴定等提供参考依据。
1，显微镜细菌个体微小，必须借助显微镜的放大才能观察，常用显微镜有普通光学显微镜，暗视野显微镜，相差显微镜，荧光显微镜，电子显微镜。
2，不染色标本检查不染色标本一般用于观察细菌动力及运动情况。
常用方法有压滴法，悬滴法，毛细管法。
3，染色标本检查细菌标本染色后，与周围环境在颜色上形成鲜明对比，可在普通光学显微镜下清除看到细菌的形态和结构。
A,用于细菌染色染料大部分是人工合成的含苯环有机物或苯的衍生物，在其苯环上带有色基与助色基，常用染料有碱性染料，酸性染料，复合染料，单纯染料。
B，细菌染色基本程序：涂片（干燥）——固定——染色（媒染）——（脱色）——（复染）。
三：常用的细菌染色方法1.单染色法：用一种染料将细菌和周围物体染成同一种颜色。
细菌经单染色法处理后，可观察其形态、排列、大小及简单的结构，但不能显示各种细菌染色性的差异。
2.复染色法：用两种或两种以上的染料染色的方法，称为复染色法或鉴别染色法。
常用的有革兰染色法和抗酸染色法。
（1）革兰染色：本法是细菌学中最经典、最常用的染色方法。
除粪便、血液等极少数标本外，绝大多数标本在分离培养之前都要进行革兰染色、镜检。
意义：①鉴别细菌：通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G-菌两大类，可初步识别细菌，缩小范围，有助于进一步鉴定。
甚至有时结合细菌特殊形态结构及排列方式，对病原菌可进行初步鉴定。
②选择药物参考：G+菌与G-菌对一些抗生素表现出不同的敏感性。
③与致病性有关：大多G+菌的致病物质是外毒素，而G-菌大多能产生内毒素，两种致病作用不同。
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大小、厚度同痰涂片。
体液标本：取标本10ml，3000rpm,离心30min，取沉渣涂片。
大小、厚度同痰涂片。
脑脊液：将脑脊液离心或甩片集菌后涂片备用。
大便：取粘液便或者血便少量均匀涂布玻片，不可过厚。
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8
标本处理注意事项
标本应以打圈的方式反复涂抹均匀，避免标本涂布不 均影响结果判读，或使染色不均造成阴阳不定。
麻风病等
荧光染色：敏感性强、效率高、易观察；用于结核
分枝杆菌等
其它：鞭毛染色鞭毛有无、位置、数量； 异染颗粒染色白喉棒状杆菌； 荚膜染色
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3
常用燃料
碱性染料 带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。常用的染
料有碱性复红、结晶紫、亚甲蓝等。
酸性染料:显色离子带负电荷，易与带正电荷的被染物结合。
通常用来染细胞质，而很少用于细菌的染色。常用的染料有伊红、 刚果红等。
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13
二、步骤
标本处理
涂片固定
结晶紫初染
碘液媒染
乙醇脱色
复红复染
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14
用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫(crystal violet)。 媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和力或附着力， 即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落。 不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不 能，脱色剂常用95％的酒精(ethanol)。 复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的 目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色 的细胞仍然保持初染的颜色，常用的复染液是番红。
复合染料（中性染料）：是碱性染料和酸性染料的复
合物，如瑞氏染料（伊红亚甲蓝）、姬姆萨染料(伊红天青)等；
荧光染料：如荧光标记的抗体，荧光素常用异硫氢基荧光素。
用于某些特殊的染色技术。
脂溶性染料 如Sudan black。
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4
染色方法的分类
1.单染法:采用一种染料染色 如用美兰或稀释石炭酸复红等，使各种细菌均染成同
响染色效果。
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2.染液
染液用完后应及时盖上盖子，以免挥发影响染色效果
3.细菌因素
被检菌的培养条件、培养基成分、菌龄的不同等原因会 影响染色结果，如培养时间过长革兰阳性菌可能染成阴性， 所以被检菌的菌龄一般最好在18~24h之内。
某些细菌存在染色困难、不易脱色等情况，可能会出现 染色不均，阴阳不定的现象。
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三、结果:
阳性菌——紫色 阴性菌——红色
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固定
初染 媒染 脱色 复染 革兰氏阳性菌，用符号“G+”或“GP”
（Gram’s Positive）表示。 革兰氏阴性菌，用符号“G¯”或“GN”
（Gram’s Negative）表示。
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四、影响因素
1.操作：
涂片的厚薄，不宜过厚 染色时间的把握，尤其是脱色时间，脱色不宜过度 固定过程不可用酒精灯直接加热，避免过热使菌体变性而影
细菌染色技术
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1
细菌染色方法
燃料与细胞 结合而染色
细菌染色
活菌染色
死菌染色
正染色
负染色
细胞不染色 而背景染色
普通染色
特殊染色
简单染色法 复杂染色法 芽孢染色法 荚膜染色法 细胞壁染色法
抗酸染色 革兰氏染色
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2
常用的染色方法
革兰染色：最经典常用；革兰阳性、阴性菌；初步
识别特殊形态
抗酸染色：抗酸性、非抗酸性细菌；用于结核病、
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革兰氏阴性弯曲菌例子
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革兰氏阳性棒状杆菌例子
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29
抗酸染色法
一、原理
结核菌、麻疯杆菌、耻垢菌等抗酸性菌，因其菌体表面 有一层类脂或脂质之皮膜不易着色，但一经着色后酸或乙醇的 作用亦是不容易把它脱色。利用这特性并以增强的染色液予染 色，然后再以酸及乙醇加以处理，使其脱色后再对比染色，此 时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色（红色），也就易于鉴 别。
标本涂布不能过厚，影响染色效果。 体液标本应浓缩集菌后取沉渣涂片。
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医疗参考~
10
普通染色法
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11
革兰染色法（Gram Stain）
是最常用的鉴别染色法之一。此染色法是由丹麦细 菌学家 Christian Gram氏于1882～1884年发明的，至今 已逾百年，仍在广泛使用，是细菌学中最为经典的染色方 法。
球菌 杆菌 弧菌
特殊结构
芽孢：枯草杆菌、破伤风梭菌 荚膜：肺炎链球菌 鞭毛：变形杆菌
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标本处理
痰液：用无菌棉签挑取干酪样或脓性痰部分0.05-0.1ml，
涂于载物玻片右2/3 处，均匀涂抹成卵圆形痰膜（约2cm 长),每张玻片只涂一份标本。
脓液： 同痰涂片法。
一种单一的颜色。故此法只能显示细菌的形态及大小，对 细菌的鉴别价值不大。
2.复染法（鉴别染色）:
采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使 不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的 颜色，以便鉴别细菌。
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5
染色过程
涂片
干燥
固定
水洗、吸干
镜检
染色
医疗参考~
6
细菌基本形态结构
基本形态
医疗参考~
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医疗参考~
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革兰氏阳性葡萄球菌例子 (金黄 色葡萄球菌 x 1000)
医疗参考~
22
革兰氏阳性链球菌例子
医疗参考~
23
革兰氏阴性杆菌例子 (大肠杆菌
x 100兰氏阴性弧菌例子
医疗参考~
25
革兰氏阳性产芽孢杆菌例子
医疗参考~
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革兰氏阳性短杆菌例子 (李斯特 菌 x 1000)
医疗参考~
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一、原理
细菌经结晶紫初染染成蓝色。G+菌细胞壁肽聚糖层数多， 且肽聚糖为空间网状结构，再经乙醇脱水，网状结构更为致密， 染料复合物不易从细胞内漏出，仍为蓝色。而G-菌细胞壁脂类含 量多，肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层结构，易被乙醇溶解， 使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色 为无色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。
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五、临床意义
鉴别细菌：
用革兰氏染色法可将所有细菌分为阳性与阴性两类，可初步识别细菌， 以利进一步鉴定。
选择药物：
可根据革兰氏染色性的不同，供临床初步选择用药方向。
与致病性相关：
大多数革兰氏阳性菌的致病物质为外毒素，而大多数革兰氏阴性菌的致 病物质为内毒素。由此，可采取有针对性的治疗方案。