蛋白质分子量测定方法的比较

蛋白质分子量测定方法的比较

蛋白质分子量是指蛋白质分子中所包含的氨基酸数量和分子量之和。

确定蛋白质分子量对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。随着科技的

发展，出现了多种蛋白质分子量测定方法。本文将比较常用的几种方法：

紫外吸收光谱法、凝胶电泳法、质谱法和核磁共振法。

1. 紫外吸收光谱法：该方法基于蛋白质中芳香族氨基酸（如酪氨酸、苯丙氨酸）吸收紫外光的特性，通过测量蛋白质在280nm处的吸光度来估

计蛋白质的分子量。该方法简单、快速，不需要额外的标准物质，适用于

大多数蛋白质的分子量估计。然而，该方法对蛋白质中其他吸光物质的影

响较大，且误差较大，无法提供高精度的分子量测定结果。

2.凝胶电泳法：凝胶电泳法是常用的分离和测定蛋白质分子量的方法，主要包括SDS-和聚丙烯酰胺凝胶电泳（）。SDS-使用表面活性剂SDS使

蛋白质在电场中具有相同的负电荷，根据蛋白质迁移速度的不同来估计其

分子量。通过聚丙烯酰胺分子筛效应，使蛋白质根据其分子量大小迁移至

不同位置。凝胶电泳法可以提供较高的分辨率和较准确的分子量测定结果，但需要标准物质来建立标准曲线。

3.质谱法：质谱法是一种通过测量样品分子在质谱仪中形成的离子质

量和丰度信息来分析蛋白质分子量的方法。常见的质谱技术包括基质辅助

激光解析离子飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）和液相色谱电喷雾离子源质

谱（LC-ESI-MS）。质谱法具有极高的灵敏度、分辨率和准确性，可以同

时测定多个蛋白质的分子量，并且还可以提供蛋白质的部分序列信息。然而，质谱法设备昂贵，操作复杂，通常需要专业技术人员进行操作和数据

解析。

4.核磁共振法：核磁共振法是一种通过测量样品核自旋来分析分子结

构和构象的方法。对于蛋白质分子量的测定，核磁共振法通常使用质子核

磁共振（^1H-NMR）或碳核磁共振（^13C-NMR）。这些方法可以直接测量

蛋白质中的原子数量，并通过相应的核磁共振谱图来确定蛋白质的分子量。核磁共振法具有非常高的准确性和分辨率，但对于大多数蛋白质来说，需

要大量的纯化样品，并且数据分析相对复杂。

综上所述，各种蛋白质分子量测定方法各有优势和局限性。在选择方

法时需考虑样品特性、实验需求和实验条件。对于一般的分子量估计，紫

外吸收光谱法和凝胶电泳法都是简便有效的方法。对于高精度的分子量测

定和结构分析，质谱法和核磁共振法则是理想选择，但要求更为复杂的操

作和设备条件。