葡萄的脱毒与快繁-植物组织培养

（3）将感染材料的修面芽插入健康指示植物的蔓 中，然后在38℃的环境中保持2个月，以后取出枝 条和接种芽继续生长。
2、茎尖培养脱毒
• 在25℃，相对湿度80%，每日16h的长日照 条件下水培生成新芽，剥离切取带1~3个叶 原基0.2~0.3mm茎尖进行立体培养，即可 获得脱毒苗。
3、无病毒苗的鉴定
一、形态特征和生物学习性
葡萄属落叶木质藤本植物，葡萄地 上部分的茎细。节上具有卷须，可向上 攀援。叶近圆型或卵型，3～5裂。 葡萄原产于温带地区，不太抗寒。 葡萄的根系抗寒力很弱，在－5～－7℃ 时即受冻。
二、葡萄的组织培养
1、选材接种：从生长旺盛的葡萄新梢顶端取1～2 ㎝的茎尖,消毒,分离出约2mm长的茎尖，接种到 培养基上。 2、培养基：MS培养基，再添加6-BA 1～2mg/L， NAA0.01mg/L，LH100mg/L，蔗糖2%，琼脂0.6%， 而B5培养基愈伤组织化严重，茎尖生长不好。 3、苗分化：6-BA0.5mg/L，同时添加GA30.2，黑 暗处理可促进幼茎的伸成，提高成苗率。 4、根分化：将苗转入 MS+IAA 0.4mg/L+NAA 0.05mg/L 培养基中进行生根。
3、生长与分化
• 接种成活的茎尖在一个月左右开始分化出 芽和侧芽，两个月左右形成芽丛，即可进 行大量增殖。每月继代一次，每个芽丛切 成10个。
4、生根培养
• 剪取2~3cm长的无根幼苗，插于上述培养 基上，1~2周内幼苗生根，一个月形成发达 的根系，同时长出5~6片新叶，生根率达 90%以上。
5、试管苗的驯化与移栽
• 试管苗长出5~7片新叶时，把瓶子移入温室 中，即时可打开培养瓶，历时7d。把苗从 培养瓶中取出，洗净培养基，栽于经过干 热灭菌处理的蛭石内，盘上塑料薄膜罩严， 置于阳光下，20 ℃，自然条件下锻炼15d。 移入土中。
Байду номын сангаас 小结：
葡 萄 的 脱 毒 与 快 繁 形态特征和生物学习性 选材接种 培养基 葡萄的组织培养 苗分化 根分化 脱毒 脱毒与快繁 快繁 热处理脱毒 茎尖培养脱毒 无病毒苗的鉴定 材料与消毒 培养条件 生长与分化 生根培养 试管苗的驯化与移栽
2、培养条件
• 培养基 • 茎尖分化与继代培养培养基：1/2MS+6-BA 0.5mg/L+LH100mg/L+NAA0.01mg/L+GA0.2mg /L,2%蔗糖，0.6%琼脂，PH=5.8 • 生根培养基： 1/2MS+IAA0.4mg/L+NAA0.05mg/L • 温度：25±2℃ • 光照：1000lx，16小时
• 用抗血清法、电子显微镜检测法、ELISA法 或指示植物进行病毒鉴定，以确保脱毒后 的试管苗不含病毒。
（二）快繁
• 1、材料与消毒 • 取经过脱毒的枝条稍1~2cm，用5%的次 氯酸钠aq消毒2~3min，用无菌水冲洗3次， 再在0.1%升汞aq中浸泡2min，用无菌水冲 洗4次。把芽放在解剖镜下，无菌条件下， 去除幼叶和叶原基，使生长点暴露。用刀 切下含有1~2个叶原基，大小为0.2~0.3mm 的生长点接种于培养基上。
三、脱毒与快繁
（一）脱毒 葡萄受到26种病毒的危害,主要有卷 叶病毒、栓皮病毒、扇叶病毒、黄脉病毒 和斑点病毒等。由于病毒的危害，葡萄的 长势减弱，产量降低，果实的糖分含量减 少，风味变劣。
葡萄卷叶病是危害最大的病毒病。
1、热处理脱毒：
（1）将材料置于38℃，CO21200mg/L的人工空气 侯箱内。经30min处理，较易从枝条尖端或休眠芽 中除去扇叶病毒。其他病毒较难消除。 （2）直接将葡萄蔓浸泡在50℃的 温水中10～ 20min，可以治疗皮尔斯病。