苏木素伊红染色
皮肤组织病理切片技术
一、V — G法（胶元纤维染色法） 结缔组织含有三种纤维，即胶原纤维、网 状纤维、弹力纤维。胶原纤维在结缔组织中 含量最多，起支持作用，具有一定的韧性和 坚固性，抗拉力强的特点。胶原纤维染色在 病理诊断上主要用于和肌纤维的鉴别。常用 的胶原纤维染色方法为V—G法。 结果： 细胞核蓝黑色或黑色，胶原纤维红色，肌 纤维、细胞浆、红血球呈黄色。
配法：(PH 7.0~7.2)
甲醛 NaH2PO4· 2H2O 或 无水 Na2HPO4· 12H2O 或 无水 蒸馏水 100ml 5.2g 4.0g 16.4g 6.5g 900ml
三、脱水
组织脱水，就是把组织内的水分彻底 除掉，故亦称无水法。无论任何组织都 含有不同程度的水分。一般组织经过固
皮肤组织病理切片技术
一、取材
1、手术取材。 适用于：（ 1 ）面部、关节部，易出血部位 等；（2）较大、较深的皮疹；（3）结节 和囊肿性皮疹；（ 4 ）切除治疗和检查， 主要用于小的肿瘤。 2、钻孔取材。（角膜钻孔器）
适用于一般的皮疹取材。
二、固定
固定的作用和目的：
1、可以防止组织溶解及腐败。
2 、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶 等各种成分沉淀保存下来，保持它原有
透明
切片 染色
切 片 质 量 标 准（100分）
切片完整 没有刀痕 厚薄均匀 附贴适量 平坦无褶 10分 5分 10分（一层细胞） 5分 10分
树胶适量 染色鲜艳 对比清晰 透明度好 片内无污染 无“人工”现象 玻片整洁 标签端正
5分 10分 10分 10分 10分 5分 5分 5分
常 规 染 色
固定的注意事项：
1、组织块必须小而薄。 2、固定液对组织有收缩及硬化作用，亦有 使组织膨胀的作用。
病理组织切片制作
实验四病理组织切片制作一、实验目的组织切片技术是病理学中不可缺少的一个组成部分。
通过实验，能够使学生了解和掌握病理组织切片的基本方法之一，即石蜡包埋的组织切片法。
二、实验原理根据病变及检查的要求，合理采集病料，经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋后进行切片，在进行染色得到结果。
固定是用化学药品把组织原来的结构保存下来，以便观察。
脱水是除去组织中的水分，以利于透明和浸蜡。
组织的透明是便于透蜡包埋。
包埋的是使石蜡透入组织内部，把软组织变为适当硬度的包埋块，以便切成薄片。
最后使用切片机，将包埋块中组织切成薄片。
三、主要仪器及试材已固定好病料，石蜡，手术刀，手术剪，镊子，脱水框，染色缸，梯度脱水酒精和透明剂一套，烘箱，切片机，毛笔，玻片，蛋白甘油，染色架，酒精灯，三角架，大烧杯，温度计，火柴，切片刀，记号笔或铅笔。
四、实验方法与步骤。
（一）固定采取的病理材料必须立即放入10％福尔马林固定液中。
（二）脱水组织经固定后，尚含有多量水分，而水与透明剂苯、石蜡根本不相融合。
必须先把组织中的水分除去。
但脱水剂必须是与水在任何比率下均能混合的液体，脱水剂常兼有硬化组织的作用。
最常用的脱水剂为酒精、丙酮等。
1．酒精沸点78．4℃，为最常用的脱水剂。
脱水能力强，并能使组织硬化，能较好地与二甲苯透明剂相混合。
最终结果表明，只要脱水环节处理好，都会得到好的切片。
脱水的程序为70％一80％一95％一100％。
各级酒精2—4小时，视材料的大小、厚薄而定。
100％酒精有硬化组织的作用，时间不宜太长，一般不超过3小时。
脑组织、脂肪组织或疏松结缔组织，脱水时间要适当延长。
2．丙酮沸点为56℃。
脱水作用比乙醇强，但对组织块的收缩较大，主要用于快速脱水或固定兼脱水。
脱水时间l一3小时左右。
（三）透明透明对组织有脱酒精及透明两种作用。
当组织中全部为透明剂占有时，光线可以透过，组织可呈现不同程度的透明状态，此种现象称为透明，具有这种作用的试剂称为透明剂。
怎样染好HE切片
95%酒精（Ⅰ） 2~5小时
95%酒精（Ⅱ） 2~5小时
无水酒精（Ⅰ）
无水酒精（Ⅱ） 无水酒精（Ⅲ）
30分钟
30分钟 30分钟
（三）脱水注意事项
1．组织脱水必须掌握由低浓度逐步 过渡到高浓度的原则
2．脱水时间要适度
3．组织脱水要彻底干净
四、透明
（一）透明意义及透明剂
组织脱水后，内部仅含脱水剂，但大多数脱 水剂不能与石蜡相溶，石蜡仍不能浸入组织内进 行包埋和切片。为此，需要一种既能溶于脱水剂 又能溶于包埋剂（石蜡）的溶剂，以便逐步将脱 水剂置换成包埋剂。这一过程往往使组织呈半透 明状，故称透明 二甲苯为石蜡包埋法中最常用的透明剂；它 透明能力强，但易使组织收缩、变脆，故组织块 的透明时间不宜太长，小组织块以30分钟为宜， 较大组织块适当延长但不超过2小时
染色原理
苏 木素是一种天然染料，是从苏木素树（Haematoxylin Compechianum） 的树心木提炼出来的。它原产于墨西哥的坎佩切（Campeche），因此而 得名。它多生长在西印度群岛，虽然使用年限较早，但 是着色性能一直很 差。直到70年代苏木素有了新的提取方法，是将苏木树锯倒后剥去外皮， 将树心木先用热水浸泡，再加尿素沉淀（Lamb，1974）后制成 的染料才 比较稳定。自从有苏木素以来，苏木素在单独使用时着色能力很差，但仍 然是最常用的染细胞核的组织学染料。为了获得最佳的苏木素染色液必须 具备以下 两个条件：一是必须能产生有效成分苏木因（Haematein）；二 是染色时需要加适量的媒染剂（如硫酸铝钾、氯化铁及硫酸铁胺等）。 苏木因是由苏木素氧化而产生的，是按传统的方法暴露于阳光和空气之下， 叫做熟化，需要3—4个月的时间。如用氧化剂使之快速成熟也可得到较好 的结果，但是使用寿命不如自然氧化的苏木素。 苏 木素所以被称为染料是因为苏木素的分子氧化后成为生物染料——氧化 苏木红。在常规苏木素伊红染色中，苏木素经过氧化变成酸性染料苏木红， 苏木红与二价或三 价的金属盐或氢氧化物结合形成带正电荷的蓝色色精， 只有在这种情况下才能与细胞中带负电荷的脱氧核糖核酸结合完成染色。 苏木红和媒染剂的结合不但较好地显 示细胞核成分，还可与组织中的其他 物质进行结合。
结晶紫染色液配制及使用说明
编码
品名
规格
单位
北京华越洋生物
结晶紫染色液(1%)
10ml
瓶
GT79031-10ml
北京华越洋生物
结晶紫染色液(1%)
100ml
瓶
GT79032-100ml
北京华越洋生物
结晶紫染色液(1%)
500ml
瓶
GT79033-500ml
产品说明：
结晶紫染色液(CrystalVioletStainingSolution)是一种组织或细胞染色时常用的可以把
500ml
100ml 苏木素伊红混合染色液(一 100ml
步法)
50ml 苏木素伊红混合染色液(一 500ml
步法)
3×50ml 改良 Harris 苏木素染色液 100ml
50ml 改良 Harris 苏木素染色液 500ml
100ml Mayer 苏木素染色液
100ml
100ml Mayer 苏木素染色液
500ml
(GillNo.3)
改良型石炭酸复红染液(苯酚品红 100ml Heidenhain 铁苏木素染色 3×
染液)
液
100ml
抗酸染色液（试剂盒）
50ml×3 天青石蓝苏木素染色液
2×50ml
吕氏碱性美蓝染色液（0.1%）
100ml 改良 MacConaill 铅苏木素 140ml
染色液
卢戈碘液（革兰氏染色）
7×50ml 茜素红 S 染色液(1%,pH4.2) 100mL
2*50ml 0.2%核固红染色液
100ml
2*100ml 改良 Lillie-Mayer 苏木素 100ml
染色液
(仅供参考)苏木素伊红染色液说明书
苏木素-伊红染色液（H-E）说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液（H-E）H&E Staining System【产品编号】HE-500ml,HE-1000ml,HE-2500ml【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml2500ml；伊红染色液500ml、1000ml 2500ml；返蓝染色液500ml、1000ml2500ml。
【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】苏木素-伊红染色液（H-E）由3部分组成：苏木素染色液、伊红染色液和返蓝染色液。
苏木素氧化后与金属媒染剂作用，可形成不可替代的细胞核颜料。
带有正电荷的苏木素-金属媒染剂复合体，易与细胞核内DNA上带负电荷的磷酸基团结合，因而使细胞核染色形成特定的蓝色。
伊红染色液是一种广泛用于组织学染色中与苏木素染色形成对比的染料（HE染色法）。
此染色法可观察到清晰的细胞结构。
样本中细胞核可经苏木素染色呈蓝色，细胞质经伊红染色呈粉红色。
伊红是一种阴离子染料，可将红细胞染成亮红色，同样也可对其他基本的细胞组分（细胞质，胶原及肌纤维）进行染色。
返蓝染色液为组织学染色试剂，可替代水洗，快速使核染色质和核膜显现蓝色。
由于其坚硬度和碱性，水冲洗后改变苏木素染核后的颜色。
使用BioGnost 返蓝染色液，粘附在玻片上的样本不会发生像使用其他返蓝染色液时发生降解。
【主要组成成分】苏木素：乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝；伊红：伊红、乙醇；返蓝染色液：碳酸锂。
【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C和+25°C 之间。
保持储存环境干燥，不要放置于寒冷的环境中，不要冷冻产品，避免直接阳光直射。
产品使用效期为2年，具体效期见标签。
【适用仪器】不适用【样本要求】使用合适的设备仪器收集组织样本，并标记清楚，根据操作说明进行实验。
为避免发生错误，染色及诊断过程最好由具相关专业知识的技术人员操作。
根据标准医疗诊断实验室标准镜检诊断。
病理组织切片染色中的常见问题及解决方法
条例 能够 浇实 到位 ，随时检 查监督 。规定凡 是进入 Ｎ Ｉ Ｃ Ｕ的人 员一律
要 先洗手 、更衣 、换鞋 、戴 口罩和 帽子 】 。尤其强调对 手的清洗 和消 毒 ，在每 个 温箱 旁边 都要 放置 一瓶洗 手 消毒剂 ，医生 和护士 在对 患 儿进 行 常规检 查 之前 和检 查之 后一 定要记 得洗 手 消毒 。对每 个 患儿 的 用 品做 到 一婴 一用 一消 毒 ；保 持 空气 清新 ，无 致病 菌生 长 。有 研 究 表 明手 的清洁 和物 体表 面的 清洁 在控 制 医院感 染 中起到 了重要 的 作 用 ，在 常规 的手 清洁和 环境 清 洁的基 础上 适量 使用 消毒 剂 消毒杀 菌 能达 到较 好 的控制 医 院感染 的作 用 。医 院感染 科要 求对 整体 医 院 每 月进 行至 少一 次 以上 的环境 卫生 监测 ，其 中包 括空 气 、物体表 面
程 序 、可 能 出现 的问题 及 相应 的解 决方 法进行 了归 纳总结 ，并 对一 些 实验 步骤 与操 作 方 法进行 了改进 ，使 组织脱 水彻 底 、 固定完 全、 切 片
较 薄、 染 色效果较 好 ，提 高切 片的质 量 水平 。 【 关键 词 】病 理 组织 切 片；染 色 ；常 见问题 ；解 决方 法
中图分类号：Ｒ ３ ６ １ ． ２
文献标识码 ：Ａ
文章编号 ：１ ６ ７ １ － ８ １ ９ ４（ ２ ０ １ ３ ）２ ８ － ０ ５ ７ ８ － ０ ２
应该保 存密封容器 内 ，并且在容 器外贴上 标签 ，及时注 明材料来源 、 固定液 以及 日期等主要信 息。材料 固定 之后 ，除 了乙醇之外 ，其他 固 定液必须冲洗 干净 ，否则残 留在组 织材 料内的 固定 液可能会产生 结晶
苏木素伊红(HE)染色试剂盒
苏木素伊红(HE)染色试剂盒产品简介：苏木素(Hematoxylin)和伊红( Eosin)染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用机器广泛。
苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。
在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。
对于确定或鉴别病变组织、细胞中出现的某些异常物质与特殊成分，而需要采用的特殊染色方法、酶组织化学方法、免疫组织化学方法等也均是在观察HE染色组织切片的基础上进行的。
在HE染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。
Leagene苏木素伊红染色试剂盒中，苏木素染色液采用进口的高纯度苏木精、硫酸铝钾、甘油等组成，不含氧化汞、甲醇等有害物质，对细胞核染色效果好。
其特点：长期保存，不易产生沉淀和金属; 应用范围广，可以用于人、动物、畜牧、水产等领域，可以用于组织石蜡切片、冰冻切片和组织细胞的染色等；苏木素染色液可以重复使用。
染色原理：1、细胞核染色的原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。
细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA 双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。
苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
2、细胞浆染色的原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。
细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。
当染液的pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。
伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。
常用染色步骤HE,马松,糖原
常用染色步骤HE,马松,糖原联系人:周昌斌137******** 133********苏木素伊红染色液一.苏木素伊红染色液套装组合:Harris苏木素染色液50ml水溶性伊红染色液50ml苏木素染色分化液50ml苏木素染色返兰液50ml概述:苏木素伊红染色是组织病理学经典的常规染色方法,历经上百年的应用历史至今仍无可替代。
因此,苏木素伊红染色是病理切片制作中极为重要的技术环节。
二.染色方法:1. 切片脱蜡二甲苯I 5分钟,2. 切片脱蜡二甲苯II 5分钟,3. 100%1、100%2、95%1、95%2、70%梯度乙醇各30,秒钟,4. 自来水流水冲洗1分钟,5. 苏木素染色5—8分钟(依染液新旧调整染色时间),6. 自来水流水冲洗1分钟,7. 进入分化液分化数秒钟,8. 自来水流水冲洗1分钟,9. 进入返兰液处理5—10秒钟,10. 自来水流水冲洗2分钟,11. 进入伊红染色液1-3分钟,12. 自来水冲洗30—60秒钟,13. 75%I、75%II乙醇脱水分色各10秒钟,14. 95%乙醇1、95%乙醇2各脱水10秒钟,15. 100%乙醇1、100%2脱水30-60秒钟,16. 二甲苯1、二甲苯2透明各1分钟,17. 中性树胶封固。
三.染色技术要点:苏木素染色液在静止由于时染液表面于空气中的氧分子接触极液体代表面水分蒸发会产生氧化作用并形成氧化膜。
因此,在使用前应使用滤纸吸附去除氧化膜以免污染切片。
一般情况下应建立良好的使用习惯,每隔2~3天将苏木素染液彻底过滤一次。
为保证HE切片的恒定染色质量建议每500ml苏木素染色液染1200~1500张切片为宜。
苏木素染色液在用于免疫组织化学染色的的复染时应注意调控染色时间,核染色过浅不易辨识组织结构而核染色过深则喧宾夺主,一般复染的时间应控在10-30秒以内。
此外,复染后的分化和返兰步骤不应省略否则将造成整张切片呈淡蓝色,使DAB呈现土黄色。
分化和返兰步骤是HE染色关键点,应在染色实践中依据分化液和返兰液的新旧调整分化和返兰的处理时间。
病毒包涵体染色液(亚甲蓝伊红法)
病毒包涵体染色液(亚甲蓝伊红法)简介：病毒是一类体积极其微小，能够通过滤菌器的只能在活细胞内生长增殖的微生物。
病毒颗粒一般在10～30nm ，主要由核酸和蛋白质组成。
普通光镜下，某些病毒感染的细胞内可见大小和数量不等的圆形或不规则小体，称为病毒包涵体。
该物质多位于细胞质内，呈酸性，如狂犬病毒包涵体；有些位于细胞核内，呈碱性，如腺病毒核内包涵体；有些既在细胞质内也在细胞核内，如麻疹病毒包涵体。
RNA 病毒常形成细胞质内包涵体，DNA 病毒多形成细胞核内包涵体。
Leagene 病毒包涵体染色液采用Mann 亚甲蓝伊红染色法，细胞核被亚甲蓝染成蓝色，包涵体被伊红染成红色。
在病毒感染中，包涵体可能是病毒增殖部位，但应注意并非细胞内的所有包涵体都是病毒，细胞变性也会形成包涵体。
组成：自备材料：1、10%中性福尔马林固定液2、蒸馏水3、系列乙醇操作步骤(仅供参考)：1、常规固定(常采用10%福尔马林), 常规脱水包埋。
2、组织切片脱蜡入蒸馏水。
3、入亚甲蓝伊红染色液，浸染。
5、蒸馏水洗。
6、Mann 分化液分化。
7、丙酮脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
染色结果：编号 名称DM0062 2×20ml DM0062 2×50ml Storage试剂(A): 亚甲蓝伊红染色液 20ml 50ml RT 避光 试剂(B): Mann 分化液 20ml50mlRT 避光使用说明书1份包涵体红色细胞核蓝色注意事项：1、病毒很小，光镜下不易被发现，应仔细观察。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：编号名称DC0032 Masson三色染色试剂盒DE0001 碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法)DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)DG0007 AB-PAS染色液DH0006 苏木素伊红(HE)染色液PS0013 RIPA裂解液(强)PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)。
生物实验染色剂
生物实验染色剂北京华越洋生物过碘酸溶液(0.5%) 100ml 碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称高碘酸溶液，是一种氧化剂，常与Schiff试剂合用对糖原进行染色过碘酸溶液(1%) 100ml 碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称高碘酸溶液，是一种氧化剂，常与Schiff试剂合用对糖原进行染色Schiff试剂50ml 碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称雪夫试剂、希夫试剂，主要用于碳水化合物染色：如糖原,粘蛋白,糖蛋白,多糖,透明质酸。
又称无色品红染色液。
为无色液体，一般变黄或粉红应弃用。
Schiff试剂100ml 碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称雪夫试剂、希夫试剂，主要用于碳水化合物染色：如糖原,粘蛋白,糖蛋白,多糖,透明质酸。
又称无色品红染色液。
为无色液体，一般变黄或粉红应弃用。
糖原PAS染色液4×50ml 碳水染色40% 4℃,避光,6个月经典的糖原染色法,不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜糖原染色中北京华越洋生物推荐采用该染色液，是最常用的经典糖原染色法,高碘酸和schiff试剂应低温保存。
染色结果为：PAS反应阳性物质(糖原或多糖)均呈红色或紫红色；细胞核呈蓝色。
糖原PAS染色液4×100ml 碳水染色40% 4℃,避光,6个月经典的糖原染色法,不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜糖原染色中北京华越洋生物推荐采用该染色液，是最常用的经典糖原染色法,高碘酸和schiff试剂应低温保存。
染色结果为：PAS反应阳性物质(糖原或多糖)均呈红色或紫红色；细胞核呈蓝色。
糖原PAS染色液(细胞专用) 4×20ml 碳水染色40% 4℃,避光,6个月经典的糖原染色法,不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质,特别适用于细胞、极其薄的切片。
常规HE染色质量控制
常规HE染色质量控制摘要：病理切片染色质量控制是一个多环节、多步骤的过程。
组织离体后从取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色全过程，其中某一环节出现问题均会影响切片的质量，而苏木素、伊红染色在切片过程中是关键的一个环节，首先，要配制好试剂，苏木素要变成真正的染料，氧化是关键的一步。
苏木素在氧化过程中，氧化剂量的控制对苏木素是非常关键[3]，氧化不足或未经过氧化的苏木素染色能力差，氧化过度，表面一层氧化膜，易引起切片污染和操作不便。
苏木素染液的配制在加入冰醋酸要适量，适量的加入抑制了苏木素对胞浆的着色力，加多了会影响细胞核着色，加少了引起核浆共染。
同时，在日常工作中把工作制度化，加强学习，现代病理技术已经不是单纯的大体标本和普通的he染色切片制作，而是多学科相互渗透，相互影响，综合性理论、技术性都很强的学科技术。
关键词：he染色质量控制【中图分类号】r9【文献标识码】b【文章编号】1671-8801（2013）03-0284-01苏木精和伊红染色方法，简称he染色方法，是生物学和医学的细胞和组织学最广泛用的染色方法。
he染色是石蜡切片最基本的染色方法，优质的he染色仍是临床病理诊断最可靠的依据。
组织制片过程中，组织需经过取材、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片后，he染色多种环节技术操作，制作一张优质的he染色切片，是每个病理实验技术人员必须掌握的一项基本技能。
1材料与方法1.1材料。
组织块10%中性福尔马林（na2hpo46.5g，nah2po44g，40%甲醛10ml，加水至1000ml调至7.0ph）无水乙醇、95%乙醇、80乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡、苏木素染液、1%盐酸酒精、伊红染液等。
1.2方法。
常规组织处理。
①标本接受时，认真核对申请单与送检单是否一致，符合要求方可接受[1]，让送检人及接受人签字；②固定：标本离体后要及时固定（30min内），10%中性福尔马林，固定液量为组织块4-5倍，可达15-20倍，大块组织固定时间24小时（或以上），小块组织4-6小时；需把标本全浸在固定液中。
皮肤组织病理制片的技术要领
皮肤组织病理制片的技术要领摘要：皮肤病理是皮肤科的重要组成，没有高质量的皮肤病理切片和染色，就难以作出正确的病理诊断，本文总结了制片技术要领以尽量避免皮肤组织病理制片质量不高可能导致的误诊、误治。
关键词：皮肤组织；病理制片皮肤组织的特殊结构导致皮肤病理制片是病理制片中的一大难题，皮肤组织大致分为表皮、真皮、皮下组织、皮肤附属器等复杂结构。
表皮层细胞较多、结构致密、组织较硬；真皮层主要由胶原纤维、弹力纤维、网状纤维与基质构成；皮下组织主要为脂肪，细胞少，结构疏松，这些组织致密程度不尽相同，给制片增加了相当大的难度。
高质量的皮肤病理切片要经过取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色等多个步骤环环相扣而制成，每个步骤的具体技术要领如下：1、取材皮肤组织的活检取材与病理诊断有关，一般的皮损取材我们应有所了解，如：常见的水疱要取24小时以内发生的新鲜水疱，保持疱壁完整；环状皮疹要取边缘部位；皮下结节性损害要深取到皮下脂肪层；根治的肿瘤标本要取肿瘤中间及周边多处组织，判定肿瘤是否切除干净，切忌在活检时对组织挤压；组织切取大小不超过1.5cm╳1.5cm╳0.2cm，取材后要及时进行组织固定。
2、固定一张好的皮肤病理切片与组织的固定密切相关。
常规组织固定液为10%甲醛溶液或中性甲醛溶液。
标本必须充分固定，一般要求固定在3小时以上。
10%甲醛溶液或中性甲醛溶液不仅要存组织细胞形态结构的完整性，同时还要保存组织细胞的抗原性。
3、脱水、透明脱水酒精应从低浓度逐步至高浓度将组织内的水分逐步置换出来，为了避免皮肤组织过渡收缩变硬，要求脱水酒精的浓度梯度要小，具体步骤：AF液1.5小时，80%酒精1.5小时，85%酒精1.5小时，90%酒精1.5小时，95 %酒精ⅠⅡ各2小时，无水酒精ⅠⅡ各2小时，二甲苯ⅠⅡ各2小时，脱水的时间应根据标本的大小和厚度酌情而定。
脱水必须彻底，否则切片会出现凹陷，且影响染色效果。
为保证制片质量，脱水剂应定期更换。
亚历山大染色液配制与使用
亚历山大染色液
编码名称规格保存条件
北京华越洋QC061亚历山大染色液
100ml
室温,避光,12个
月
北京华越洋QC062亚历山大染色液
50ml
室温,避光,12个
月
亚历山大染色液是植物花粉染料，常用于细胞核染色，对于植物花粉，染色后成紫红色。
主要由孔雀绿，酸性品红，苯酚等组成，显酸性，是较好的花粉粒染色剂。
自备材料：1载玻片，盖玻片
2光学显微镜
亚历山大染色液操作步骤：
1取新鲜花朵，去除花瓣和雌蕊
2将花粉物质置于载玻片，滴加2-3滴染色液。
3充分混合，立即盖上盖玻片染色5-10h。
4吸去多余液体，显微镜下观察。
注意：1染色后立即显微镜下观察。
一种中性粒细胞型鼻息肉小鼠模型的建立方法[发明专利]
![一种中性粒细胞型鼻息肉小鼠模型的建立方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1efb51f4ab00b52acfc789eb172ded630b1c9839.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201711443223.5(22)申请日 2017.12.27(71)申请人 王水斌地址 443100 湖北省宜昌市夷陵区东湖大道32号(72)发明人 王水斌 (74)专利代理机构 北京市东方至睿知识产权代理事务所(特殊普通合伙)11485代理人 霍金虎(51)Int.Cl.A61K 31/739(2006.01)A61P 11/02(2006.01)(54)发明名称一种中性粒细胞型鼻息肉小鼠模型的建立方法(57)摘要本发明提供了一种中性粒细胞型鼻息肉小鼠模型的建立方法，包括：将脂多糖(LPS)滴入小鼠鼻腔中。
本发明通过苏木素伊红染色、高碘酸希夫反应、免疫组织化学、ELISA、嗅觉实验等多种检测方法和多个检测指标，充分证实了本发明提供的方法成功且可靠地建立了中性粒细胞型鼻息肉小鼠模型。
该鼻息肉小鼠模型病理特征符合中性粒细胞鼻息肉患者的特征性症状和体征改变，即与人类中性粒细胞鼻息肉患者的病理过程相符，操作可控性好、稳定性佳，可用于研究中性粒细胞型鼻息肉的发生发展机制及防治措施。
权利要求书1页 说明书6页 附图3页CN 108245532 A 2018.07.06C N 108245532A1.一种中性粒细胞型鼻息肉小鼠模型的建立方法，其特征在于，包括：将脂多糖(LPS)滴入小鼠鼻腔中。
2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，小鼠为无特异性病原体(SPF)6-8周龄的体重为18-23克的C57BL/6J小鼠。
3.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，小鼠鼻腔滴入LPS，每周三次，连续三个月。
4.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，每次滴入的LPS的剂量为5μg LPS/10μl-10μg LPS/10μl。
5.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，通过组织病理改变、鼻腔细胞因子变化、嗅觉功能指标改变来确定模型构建是否成功以及鉴别是否是中性粒细胞型鼻息肉。
苏木素伊红染色实验流程
苏木素伊红染色实验流程
选材料，这可得仔细挑。
咱们得找那些合适的组织标本，才能
进行后面的实验。
挑好后，咱们就得处理它们了，让它们的形态和
结构固定下来，这样才能看得更清楚。
染色啦！首先，咱们得把标本泡进苏木素染料里，这样细胞核
就能染上漂亮的蓝色。
等它们吸饱染料后，咱们再用水洗一洗，去
掉多余的染料，让细胞核的颜色更均匀。
接下来，就是给细胞质上色了。
这时候，咱们用伊红染料，把
细胞质染成红色。
跟蓝色的细胞核一对比，特别明显！染完色，再
洗一洗，去掉多余的染料，标本就准备好了。
最后一步，封片！咱们把标本固定在玻璃片上，再盖上一层薄
薄的封片剂，这样，细胞的样子就被永久地保存下来了。
以后想看，直接在显微镜下瞅一眼就行！
整个实验过程得特别小心，每个步骤都不能马虎。
只有这样，
咱们才能看到清晰、准确的染色效果，为医学研究提供有用的帮助。
常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片的制作
常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片的制作杨世明;张敏海;张亦农;汪薇曦;王小丽【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2015(0)6【摘要】目的探索一种结合常规染色与特殊染色的多种肌组织混合切片的制作方法.方法取实验动物狗的平滑肌、心肌、骨骼肌.所有组织均采取单一包埋制作蜡块.另取心肌组织块,制作显示心肌闰盘的特殊块染标本的蜡块.将四种蜡块切片的蜡带进行组合粘片,同时粘在一张载玻片上.对除心肌闰盘外的三种肌组织切片进行苏木素伊红染色.再将所有切片浸入二甲苯,最后共同封片.结果获得常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片.可在一张混合切片上分别观察到平滑肌、心肌、骨骼肌、心肌闰盘四种结构.不同标本的形态结构保存完好,对比非常清晰.结论采取单一包埋与不同蜡带的组合粘片法,过程简单,操作容易,适合制作常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片.【总页数】3页(P588-590)【作者】杨世明;张敏海;张亦农;汪薇曦;王小丽【作者单位】华中科技大学同济医学院基础医学院解剖学系组织学与胚胎学教研室,武汉430030;华中科技大学同济医学院基础医学院解剖学系组织学与胚胎学教研室,武汉430030;华中科技大学同济医学院基础医学院解剖学系组织学与胚胎学教研室,武汉430030;华中科技大学同济医学院基础医学院解剖学系组织学与胚胎学教研室,武汉430030;华中科技大学同济医学院基础医学院解剖学系组织学与胚胎学教研室,武汉430030【正文语种】中文【中图分类】R329【相关文献】1.常规组织切片染色制作中常见问题及其解决方法 [J], 吕俊耀;于晓军;刘卯阳2.牙胚牙体组织切片的特殊染色方法及应用探讨 [J], 程敏;马宁;张泽兵;孙宏晨;李成库3.骨髓活检组织石蜡切片制作的改进及特殊染色的应用 [J], 胥维勇4.人结肠切片三种特殊染色的比较 [J], 李甜;陈红香;廖礼彬;冯树梅;秦纹;白生宾5.苏木精-伊红染色制作骨骼肌组织教学切片的方法优化 [J], Wu Yixian;Dong Juanjuan;Ma Yire ·Tuerhong;Li Qin;Xu Peng;Li Xiumei因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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苏木素-伊红染色液(H-E)说明书
【产品名称】
苏木素-伊红染色液(H-E）
【型号】
苏木素染色液分别为：Mayer型、改良Harris型、改良Lillie-Mayer型；
伊红染色液分别为：水溶型、醇溶型；
苏木素-伊红染色液混合型。
【包装规格】
货号：DH0006
单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml；
每套/盒包装规格分别为：2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。
【预期用途】
主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合主要用于对细胞组织进行染色，简称HE染色，是病理学常规
制片中最基本的染色方法，应用极其广泛，苏木素-伊红染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必
不可少的最基本的染色方法，在病理诊断、教学与科研中广泛应用，具有重要价值，细胞中的细胞核是由
酸性物质组成，它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强；细胞浆则相反，它所含的碱性物质与酸性染料(伊红)
的亲和力较大。
因此细胞或组织切片经苏木素-伊红染色液染色后，细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色，细
胞浆、肌纤维、胶元纤维等呈不同程度的红色，红细胞则呈橙红色。
【主要组成成分】
试剂组成主要成分苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)或木素染色液(改良Harris)或木素染色液(Mayer) 苏木色精伊红染色液(水溶)或伊红染色液(醇溶) 伊红
苏木素-伊红染色液混合型苏木色精、伊红【储存条件及有效期】
5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为18个月，在有效期内的已开封染色建议在开封后6
个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】
涂片和切片必须充分固定，石蜡切片要充分脱蜡。
【检验方法】
l、石蜡切片于二甲苯I、II中各脱蜡若干分钟；
2、经无水乙醇和95%乙醇各约若干分钟，经8O%乙醇若干分钟，自来水冲洗若干分钟；
3、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer或改良Harris)染色若干分钟，自来水洗若干分钟；或苏木素染色液(Mayer)染色若干分钟；或苏木素-伊红染色液(混合型)染色若干分钟；
4、苏木素染色后用l%盐酸乙醇溶液分化数秒(l%盐酸乙醇溶液配制：99m1 75%乙醇加1ml浓盐酸）；
若用苏木素染色液(Mayer)和苏木素-伊红染色液(混合型)染色后则不需分化；
5、自来水冲洗返蓝若干分钟；亦可用碳酸锂水溶液返蓝若干秒，自来水洗若干分钟；
6、入伊红染色液(水溶)染色若干分钟，稍洗；若用伊红染液(醇溶），切片应先经80%乙醇脱水后，再
入伊红染液(醇溶)染色若干分钟(忌水洗）；此步骤苏木素-伊红染色液(混合型)不适用。
7、95%乙醇I、II中各调色约若干秒，时间不宜过长；
8、无水乙醇I、II中各脱水若干分钟，二甲苯I、II中各透明I、II中各透明若干分钟；
9、封片胶封片，镜检。
【检验结果的解释】
细胞核呈蓝紫色，细胞质、间质、各种纤维呈不同程度的红色。
【检验方法的局限性】
仅供细胞和组织形态学观察染色使用。
【注意事项】
1、温度较低时苏木素染色液不易着色，可适当延长染色时间。
2、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)染色时，亦可考虑不用分化，但应相应缩短苏木素染色时间。
3、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)、苏木素(改良Harris)不含汞等有毒物质，其着色强度可能会因使用日期不同而稍有差异，故开封后可先试染，根据试染结果稍调整苏木素染色时间以保证较佳染色效果。
4、盐酸乙醇分化时间应根据染色结果的具体情况而定。
5、碳酸锂水溶液的配方：取本产品附送的碳酸锂粉末一包，完全溶解于1000ml蒸馏水中，即为碳酸锂水溶液。
6、该染色液主要用于组织切片的染色，亦可用于某些细胞染色，但染色时间应作调整。
7、本产品仅用于体外诊断，应由专业人士使用及进行结果的判读。
8、使用前应详细阅读说明书，并做好个人卫生防护，在有效期内使用，生产日期、生产批号和失效日期见包装。
9、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。
【基本信息】
备案人/生产企业名称：安徽雷根生物技术有限公司
住所：淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房。