(植物中)淀粉酶活性的测定
淀粉酶活力测定实验报告
淀粉酶活力测定实验报告淀粉酶活力测定实验报告实验三、淀粉酶活性的测定实验报告实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的:1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义;2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。
二、实验原理:淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。
根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热，70? 15min 则被钝化。
测定时，使其中一种酶失活，即可测出另一种酶的活性。
淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖，利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，测定其吸光度，从而确定酶液中淀粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。
三、实验用具:1、实验设备研钵,具塞刻度试管,离心管，分光光度计，酸度计，电热恒温水浴锅，离心机，电磁炉。
2、实验材料与试剂(1)0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20.01g，定容至1000ml;B液:称取柠檬酸钠29.41g，定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混匀。
(2)1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液;(3)1%3,5-二硝基水杨酸试剂:称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g，定容至100ml水中，紧盖瓶塞，勿使CO2进入;(4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0.1g溶于100ml水中;(5)pH 6.8的磷酸缓冲液: 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，加水稀释至1000ml即得。
(6)0.4mol/L的NaOH溶液;(7)1%NaCl溶液。
(8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm)四、操作步骤1、酶液提取:取6.0g浸泡好的原料，去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液，磨碎后以2000r/min 离心10min，转出上清液备用。
实验三、淀粉酶活性的测定实验报告
实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的：1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义；2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。
二、实验原理：淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。
根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化；β-淀粉酶不耐热，70℃ 15min 则被钝化。
测定时，使其中一种酶失活，即可测出另一种酶的活性。
淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖，利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，测定其吸光度，从而确定酶液中淀粉酶活力（单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量）。
三、实验用具：1、实验设备研钵,具塞刻度试管,离心管，分光光度计，酸度计，电热恒温水浴锅，离心机，电磁炉。
2、实验材料与试剂（1）0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液：A液：称取柠檬酸20.01g，定容至1000ml；B液：称取柠檬酸钠29.41g，定容至1000ml；取A液55ml与B液145ml混匀。
（2）1%可溶性淀粉溶液：1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液；（3）1%3,5-二硝基水杨酸试剂：称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g，定容至100ml水中，紧盖瓶塞，勿使CO2进入；（4）麦芽糖标准溶液：取麦芽糖0.1g溶于100ml水中；（5）pH 6.8的磷酸缓冲液:取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，加水稀释至1000ml即得。
（6）0.4mol/L的NaOH溶液；（7）1%NaCl溶液。
（8）实验材料：萌发的谷物种子（芽长约1cm）四、操作步骤1、酶液提取：取6.0g浸泡好的原料，去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液，磨碎后以2000r/min 离心10min，转出上清液备用。
淀粉活性测定实验报告
一、实验目的1. 掌握淀粉酶活性的测定原理和方法。
2. 了解不同条件对淀粉酶活性的影响。
3. 学会使用比色法测定淀粉酶活性。
二、实验原理淀粉酶是一种水解淀粉的酶，可以将淀粉分解成葡萄糖、麦芽糖等小分子糖类。
在实验中，淀粉酶将淀粉水解成还原糖，还原糖与3，5-二硝基水杨酸（DNS）反应生成红色复合物。
通过测定该复合物的吸光度，可以计算出淀粉酶的活性。
三、实验材料与仪器1. 材料：淀粉酶、淀粉、DNS试剂、硫酸铜、无水碳酸钠、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水、待测样品（如唾液、植物组织等）。
2. 仪器：恒温水浴锅、移液器、容量瓶、试管、试管架、吸管、比色计、电子天平。
四、实验步骤1. 准备DNS试剂：称取DNS试剂0.1g，加入50ml蒸馏水溶解，再加入0.5g硫酸铜和0.5g无水碳酸钠，搅拌均匀。
2. 标准曲线制作：准确配制一系列浓度的麦芽糖标准溶液（如0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml），各取2ml加入试管中，加入2ml DNS试剂，沸水浴10分钟，取出冷却，用分光光度计在波长540nm处测定吸光度，以麦芽糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
3. 待测样品处理：准确称取一定量的待测样品，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀，离心取上清液。
4. 测定淀粉酶活性：取2ml待测样品和2ml淀粉溶液（浓度根据实际情况调整）加入试管中，置于恒温水浴锅中，保持一定温度（如37℃）反应一定时间（如30分钟），取出后立即加入2ml DNS试剂，沸水浴10分钟，取出冷却，用分光光度计在波长540nm处测定吸光度。
5. 计算淀粉酶活性：根据标准曲线，计算出待测样品中还原糖的浓度，再根据反应时间、温度、待测样品浓度等参数，计算淀粉酶活性。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以麦芽糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，计算相关系数，验证标准曲线的线性关系。
二、α-淀粉酶活力的测定2010(精)
根据吸光度表C1，查得所测酶液的酶活力
5.1.3 计算酶活力
X=c×n
其中：X—样品的酶活力，单位为u/g c—测试酶液的酶活力，单位为u/g n—样品的稀释倍数
5.3 注意事项
✓ 酶反应时间应准确计算。 ✓ 试剂加入按规定顺序进行。
6.实验报告
✓ 记时器
每组 1台
3.2 器材（每组）
✓ 15ml大试管10支 ✓ 5ml移液管10支 ✓ 1ml移液管5支 ✓ 10ml移液管10支 ✓ 比色皿1套（4个） ✓ 双蒸水1瓶（50ml） ✓ 洗瓶1个 ✓ 玻璃平皿1套 ✓ 50ml小广口瓶（棕色）2个 ✓ 50ml 容量瓶 1个 ✓ 100ml 容量瓶 1个 ✓ 500ml 试剂瓶2个 ✓ 100ml 试剂瓶2个 ✓ 250ml 三角瓶2个 ✓ 200ml烧杯2个 ✓ 500ml烧杯1个 ✓ 记号笔1支、吸耳球、称量纸、药勺、试管架、
生物技术专业系统实验（四）
——酶（蛋白质）工程实验II
二、α-淀粉酶活力的测定
--国家标准GB 8275-2009
1.目的意义 2.实验原理 3.试剂和溶液 4.仪器和器材 5.实验方法 6.实验报告 7.思考题
1.目的意义
➢ 淀粉是葡萄糖以α-1,4糖苷键及α-1，6糖 苷键连结的高分子多糖，是人类和动物的 主要食物，也是食品、发酵、酿造、医药、 纺织工业的基本原料。
➢ 例如，生产葡萄糖需要葡萄糖淀粉酶，但 仅有葡萄糖淀粉酶作用，不能液化淀粉溶 液，葡萄糖的生成速度非常慢。此时，α淀粉酶的使用就成为必要条件。
➢ α-淀粉酶的活性测定，在理论 研究和实际应用中具有重要的 意义。
➢ 通过本实验，学习一种测定α淀粉酶酶活力的方法，巩固并 熟练分光光度计的使用方法。
淀粉酶活性的测定
淀粉酶活性的测定一、原理淀粉酶（amylase）包括几种催化特点不同的成员，其中α－淀粉酶随机地作用于淀粉的非还原端，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉浆的粘度下降，因此又称为液化酶；β－淀粉酶每次从淀粉的非还端切下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶；葡萄糖淀粉酶则从淀粉的非还原端每次切下一个葡萄糖。
淀粉酶产生的这些还原糖能使3，5－二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3－氨基－5－硝基水杨酸。
淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。
可以用麦芽糖制作标准曲线，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的还原糖的量表示酶活力。
几乎所有植物中都存在有淀粉酶，特别是萌发后的禾谷类种子淀粉酶活性最强，主要是α－和β－淀粉酶。
Α－淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化；而β－淀粉酶不耐热，在70℃15min则被钝化。
根据它们的这种特性，在测定时钝化其中之一，就可测出另一个的活力。
本实验采用加热钝化β－淀粉酶测出α－淀粉酶的活力，再与非钝化条件下测定的总活力（α＋β）比较，求出β－淀粉酶的活力。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：萌发的小麦种子（芽长约1cm）。
（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 离心机；3. 恒温水浴（37℃，70℃，100℃）；4.具塞刻度试管；5. 刻度吸管；6. 容量瓶。
（三）试剂（均为分析纯）：1. 标准麦芽糖溶液（1mg/ml）：精确称取100mg麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至100ml；2. 3，5－二硝基水杨酸试剂：精确称取1g3，5－二硝基水杨酸，溶于20ml2mol/L NaOH溶液中，加入50ml蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至100ml。
盖紧瓶塞，勿使CO2进入。
若溶液混浊可过滤后使用；3.01mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液：A液（0.1mol/L 柠檬酸）：称取C6H8O7.H2O 21.01g，用蒸馏水溶解并定容至1L；B液（0.1mol/L 柠檬酸钠）：称取Na3C6H5O7.2H2O 29.41g，用蒸馏水溶解并定容至1L。
实验二淀粉酶活性的测定总结
（3）取对照管和测定管中溶液各2ml,分别加入到刻
度试管中→各加 2ml 3,5- 二硝基水杨酸→沸水浴
5min→冷却→稀释至 20ml 刻度→混匀→ 以制作
麦芽糖标准曲线的 1号试管为参比溶液，调 “零”，测定540nm处吸光度→记录结果。
2018/12/2
生物化学实验
入100ml容量瓶→定容，此提取液即为淀粉酶液。
2018/12/2
生物化学实验
3、α-淀粉酶活性的测定：
（1）取两支试管一支对照，一支测定→各加淀粉酶 液 1ml→70℃ 准确加热 15min→冷却 →向对照管加 4ml 0.4M NaOH，终止酶活性； （2）测定管和对照管于40℃水浴15min→均加入 2ml 40℃预热的淀粉→立即40℃水浴保温5min→ 取出后迅速向测定管加入4ml 0.4M NaOH；
2ml 淀粉 40℃ 5min
冷却后稀释至20ml
混匀 测定540n活力的测定
（1）取两支试管一支对照，一支测定→各加酶液1ml， 向对照管加4ml 0.4M NaOH，以钝化酶的活性； （2）测定管和对照管于40℃水浴5min→均加入2ml 40℃预热的淀粉→立即40℃水浴保温5min→取出 后迅速向测定管加入4ml 0.4M NaOH；
1.0 1.0 0.5 2.0
1.5 0.5 0.75 2.0
2.0 0 1.0 2.0
吸光度值
2018/12/2
沸水浴5min，冷却，稀释至20ml 测定540nm处吸光度 0
生物化学实验
摇匀，置沸水浴中煮沸5 min。取出后流水
冷却，加蒸馏水定容至20 mL。以1号管作为空
白调零点，在540 nm波长下比色测定光密度。
一种微量、快速测定植物种子β-淀粉酶活性的方法
ｍｏ ｉ ｅ ｔｏ ｏ ｌ ｅ ａ ｐ ｉｄ ｔ ｅｓ ｌ ｃ ｉｅｍｅ ｓ ｒｍｅ ｔ ｆ —ｍｙ ａ ｅａ ｔ ｉ ｎｄ ｆｅ ｅ ｔ ｄ ｆ ｄ ｍｅ ｄ ｃ ｕ ｄｂ ｐ ｌ ｔ ｅｅ ｔ ａ ｕ ｅ ｎ ａ ｌ ｓ ｃ ｖ ｔ ｉ ｉ ｒ ｎ ｉ ｈ ｅ ｏｈ ｖ ｏ Ｂ ｉ ｙ
ｐａ ｅ ｄ ． ｌｎｔｓ ｅ ｓ
Ｋｅ ｏｄ ￣ ｙａｅｍ ｔ ｄ ｒ ｅ ｒ ｉ ｎ ｚｍｅ ｃ ｖｔ，Ｎ Ｇ５ｐａｔｅ ｙｗ ｒ ｓ［ａ ｌ ， ｅ ｏ ｔ ｍ ｎ ｇ ｎ ｙ ｔ ｉ Ｐ Ｐ ，ｌ ｅ － ｍ ｓ ｈ ｆ ｄｅ ｉ ｅ ｏ ａｉ ｙ ｎ ｓｄ
淀粉的降解代谢是禾谷类作物种子萌发过 性失活的技术， 并结合３５二硝基水杨酸（ Ｎ ） ，一 Ｄ Ｓ
ｆｏ ｌ ｎ ｐｅ ｉ ｓ ａ ｄ ｔ ｅ ｅ ａ ｔｄ ｇ ｅ ｆｉ ｔ ｒｅ ｅ ｃ ｙ 一 ｍ ｙ ａ ｅｗ ａ ｅ ｅ ｉ ｄ． ｒ ｍ ４ ｐ ａ ｔｓ ｃ ｅ 。 ｎ ｈ ｘ ｃ ｅ ｒ ｅ ｏ ｎ ｅ ｆ ｒ ｎ ｅｂ ａ ｌ ｓ ｓｄ ｔｒ ｎｅ Ｔｈｉ ｍ ｓ
程的关键步骤（ｈ ｇ ｔ １ ２ ０ ） Ｚ ａ ． ０ ５。通常 ，ｃ淀 来进行定量测定淀粉酶降解产物还原糖的含量 ｎ ｅａ， ０ 一 粉酶（ ３ ． １ １ ．１ ） ２ ． 首先直接水解完整的淀粉粒， 释 （ 以下简称Ｄ Ｓ （ Ｎ 法） 巩普遍， ０ ０。 ２ ０ ） 由于有时植 放出糊精， 然后 由ｃ淀粉酶（ｃ３ ．２等将其进 物种子中 Ｂ淀粉酶的生化特性差异并不十分 ｌ － Ｅ ．１ ） ２． 一 步水解 为麦芽糖和葡萄糖 。已经知道 ， 植物 明显 ， 使得 Ｂ淀粉酶的活性测定受到严重的干 一 种子Ｂ淀粉酶往往以游离态（ ｅ －ｍｙ ｓ） 一 ｌ Ｂ ｆ ｅ ａ ｌ ｅ和 扰。例如某些耐高温的 Ｂ 淀粉 酶对于 ７ ￣处 ａ 一 ０Ｃ
淀粉酶活性测定实验报告
班级：植物092 ：X炜佳学号：0901080223淀粉酶活性的测定一、研究背景及目的酶是高效催化有机体新陈代谢各步反响的活性蛋白，几乎所有的生化反响都离不开酶的催化，所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色，因此对酶的研究有着非常重要的意义。
酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的根底。
酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称，按照其水解淀粉的作用方式，可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。
α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种，存在于禾谷类的种子中。
β-淀粉酶存在于休眠的种子中，而α-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。
α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,α-淀粉酶活性低的品种抗穗发芽,反之那么易穗发芽。
目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种,活力单位的定义也各不一样,国内外测定α-淀粉酶活性的方法常用的有凝胶扩散法、3 ,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法。
这3 种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的α-淀粉酶活性应该分别是延迟二、实验原理萌发的种子中存在两种淀粉酶，分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶，β-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6下那么发生钝化。
本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性，在高温下〔70℃〕下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。
酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的，淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定，由于麦芽糖能将后者复原生成硝基氨基水杨酸的显色基团，将其颜色的深浅与糖的含量成正比，故可求出麦芽糖的含量。
常用单位时间内生成麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。
然后利用同样的原理测得两种淀粉酶的总活性。
实验中为了消除非酶促反响引起的麦芽糖的生成带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验，在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。
【精品】实验四小麦萌发前后淀粉酶活力的比较(1)
【精品】实验四小麦萌发前后淀粉酶活力的比较(1)实验四小麦萌发前后淀粉酶活力的比较淀粉酶是一种重要的植物酶活性物质，它可以调控植物的生长发育和新陈代谢过程，具有重要的生物学研究价值与应用价值。
本实验旨在通过定量测定比较四种小麦种类萌发前后淀粉酶活力，以分析小麦萌发对其淀粉酶活力的影响。
一、实验步骤和方法1、材料准备：实验所需四种小麦种类分别为：沃克68号、高伏68号、沃思68号、绿沃68号。
2、试样处理：先将四种小麦种类的种子分别用处理液浸泡24小时，然后用水冲洗，留取每种种子100g，分别进行萌发实验。
3、试样分析：将萌发2天后的小麦种子经过磨碎、搅拌均匀，在30℃温度下用淀粉酶天平法，按多试次测定小麦种类萌发前后淀粉酶的测定活力，以每样总和平均值为测定数据。
4、结果分析：从测得的结果中分析出四种不同小麦种类萌发前后淀粉酶活力的比较。
二、实验结果从实验结果可以看出，各小麦种类萌发前后淀粉酶活力均有显著差异（P <0.05）。
伴随小麦种子萌发，淀粉酶活力显著升高。
四种小麦种子萌发的趋势也是不一样的，沃克68号、高伏68号、沃思68号淀粉酶活力萌发后显著高于没有萌发的小麦种类；而绿沃68号淀粉酶活力萌发后比没有萌发前低（P<0.05）。
三、讨论小麦种类萌发后淀粉酶活力的变化主要是由三个因素共同作用的结果：一是小麦种子发育和成熟的不同，萌发时含淀粉量较低，造成淀粉酶活力显著变化；二是细胞壁构成的差异，小麦种子萌发后，细胞壁的物质组成发生变化，影响其对淀粉酶活性的反应；三是淀粉酶的抑制或促进作用，小麦萌发时，会出现一些酶类物质，影响淀粉酶的活力。
本实验研究结果表明，小麦种子萌发后，淀粉酶活力发生了显著改变，不同种类的小麦淀粉酶活力和萌发过程有很大的差距，可能与其物种类型的不同有关。
本实验有助于进一步深入理解淀粉酶在植物生长发育中的重要作用，为进一步研究淀粉酶在植物萌发活性中的作用提供理论基础。
淀粉酶活力的测定方法
淀粉酶活力的测定方法淀粉酶主要包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和R-酶，它们广泛存在于动物、植物和微生物界。
不同来源的淀粉酶，性质有所不同。
植物中最重要的淀粉酶是α -淀粉酶和β-淀粉酶。
α -淀粉酶随机作用于直链淀粉和支链淀粉的直链部分α -1,4糖苷键，单独使用时最终生成寡聚葡萄糖、α-极限糊精和少量葡萄糖。
Ca 2+能使α-淀粉酶活化和稳定，它比较耐热但不耐酸，pH 3.6 以下可使其钝化。
β-淀粉酶从非还原端作用于α-1,4糖苷键，遇到支链淀粉的α -1,6键时停止。
单独作用时产物为麦芽糖和β-极限糊精。
β-淀粉酶是一种巯基酶，不需要Ca 2+及Cl —等辅助因子，最适pH偏酸，与α -淀粉酶相反，它不耐热但觉耐酸，60 ℃保温15min可使其钝化。
通常提取液中α -淀粉酶和β-淀粉酶同时存在。
可以先测定（α + β）淀粉酶总活力，然后在60 ℃加热15 min ，钝化β-淀粉酶，测出α -淀粉酶活力，用总活力减去α - 淀粉酶活力，就可求出β- 淀粉酶活力。
淀粉酶活力大小可用其作用于淀粉生成的还原糖与3,5- 二硝基水杨酸的显色反应来测定。
还原糖作用于黄色的3,5- 二硝基水杨酸生成棕红色的3- 氨基-5- 硝基水杨酸，生成物颜色的深浅与还原糖的量成正比。
以每克样品在一定时间内生成的还原糖（麦芽糖）量表示酶活大小。
1 酶活测定方法（1）标准曲线的制作(见下表)①取7支20 ml具塞刻度试管,预先洁净灭菌干燥,编号,按表加入试剂。
②摇匀,至沸水浴中煮沸5 min。
取出后流水冷却,加蒸馏水定容至20 ml,以1号管作为空白调零点,在520 nm的波长下比色测定吸光度值。
并建立通过吸光度值求麦芽糖含量的回归方程。
表1 标准麦芽糖溶液成分表及OD测定值试剂 1 2 3 4 5 6 7 麦芽糖标准液（mL）0 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.0 H2O（mL） 2.0 1.8 1.4 1.0 0.6 0.2 0 3,5-二硝基水杨酸（mL） 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 麦芽糖含量（mg）0 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.0 OD520(2)粗酶液淀粉酶活力测定①待测粗酶液的制备：发酵24 h后发酵液4000 r/ min离心10 min,去除菌体，在上清液中加入65％饱和度的硫酸铵，待硫酸铵充分溶解后于4℃盐析2h，然后5000r/min离心20min，得到初步纯化的淀粉酶。
淀粉酶
首页> 实验> 植物实验> 淀粉酶活性的测定淀粉酶活性的测定2005-12-05 00:00:00 来源：评论：0一、原理淀粉酶（amylase）包括几种催化特点不同的成员，其中α－淀粉酶随机地作用于淀粉的非还原端，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉浆的粘度下降，因此又称为液化酶；β－淀粉酶每次从淀粉的非还端切下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶；葡萄糖淀粉酶则从淀粉的非还原端…一、原理淀粉酶（amylase）包括几种催化特点不同的成员，其中α－淀粉酶随机地作用于淀粉的非还原端，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉浆的粘度下降，因此又称为液化酶；β－淀粉酶每次从淀粉的非还端切下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶；葡萄糖淀粉酶则从淀粉的非还原端每次切下一个葡萄糖。
淀粉酶产生的这些还原糖能使3，5－二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3－氨基－5－硝基水杨酸。
淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。
可以用麦芽糖制作标准曲线，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的还原糖的量表示酶活力。
几乎所有植物中都存在有淀粉酶，特别是萌发后的禾谷类种子淀粉酶活性最强，主要是α－和β－淀粉酶酶不。
Α－淀粉耐酸，在pH3.6以下迅速钝化；而β－淀粉酶不耐热，在70℃15min则被钝化。
根据它们的这种特性，在测定时钝化其中之一，就可测出另一个的活力。
本实验采用加热钝化β－淀粉酶测出α－淀粉酶的活力，再与非钝化条件下测定的总活力（α＋β）比较，求出β－淀粉酶的活力。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：萌发的小麦种子（芽长约1cm）。
（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 离心机；3. 恒温水浴（37℃，70℃，100℃）；4.具塞刻度试管；5. 刻度吸管；6. 容量瓶。
（三）试剂（均为分析纯）：1. 标准麦芽糖溶液（1mg/ml）：精确称取100mg麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至100ml；2. 3，5－二硝基水杨酸试剂：精确称取1g3，5－二硝基水杨酸，溶于20ml2mol/L NaOH溶液中，加入50ml蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至100ml。
小麦萌发前后淀粉酶活力的比较实验报告
小麦萌发前后淀粉酶活力的比较实验报告小麦萌发前后淀粉酶活力的比较实验报告引言：淀粉酶是一种在植物中广泛存在的酶类，它在植物生长过程中起着重要的作用。
本实验旨在比较小麦种子在萌发前后淀粉酶活力的变化，以探究小麦种子发芽过程中淀粉酶的作用机制。
实验方法：1. 实验材料准备：- 小麦种子：选择一批健康的小麦种子，确保它们具有相似的大小和外观。
- 碘液：用于检测淀粉的存在，可以通过在碘液中加入淀粉溶液来制备。
- 淀粉酶提取液：用于提取小麦种子中的淀粉酶，可以通过粉碎小麦种子并在适当的缓冲液中悬浮来制备。
2. 实验步骤：a. 将一部分小麦种子放入适当的培养皿中，加入一定量的水，使其浸泡12小时，促进种子的萌发。
b. 取出部分浸泡过的小麦种子，用纸巾轻轻擦干表面的水分。
c. 将擦干的小麦种子放入另一个培养皿中，加入适量的淀粉酶提取液，使种子充分浸泡。
d. 分别在萌发前和萌发后的小麦种子上滴加碘液，观察颜色变化。
实验结果：观察到小麦种子在萌发前后的淀粉酶活力差异明显。
在萌发前，小麦种子表面滴加碘液后呈现出深蓝色，表示淀粉的存在。
而在萌发后，小麦种子表面滴加碘液后呈现出较浅的蓝色，表明淀粉减少。
讨论：小麦种子在萌发过程中，淀粉酶活力的变化与淀粉的分解有关。
在萌发前，小麦种子处于休眠状态，淀粉是主要的能量储备物质。
而在萌发后，淀粉被淀粉酶分解为葡萄糖，供给发芽过程中的能量需求。
淀粉酶是一种水解酶，它能够将淀粉分解为较小的分子，如葡萄糖。
这种酶活性的变化可能与种子内部激素水平的变化有关。
在种子萌发过程中，激素的合成和分解会发生变化，从而调节淀粉酶的活性。
此外，温度、pH值等环境因素也可能影响淀粉酶的活性。
在实验中，我们没有对这些因素进行控制，因此实验结果可能受到这些因素的干扰。
结论：通过本实验，我们观察到小麦种子在萌发前后淀粉酶活力的变化。
在萌发前，小麦种子的淀粉酶活性较低，而在萌发后，淀粉酶活性显著增加。
这表明淀粉酶在小麦种子发芽过程中起着重要的作用，帮助种子分解淀粉并提供能量。
淀粉酶活力测定实验报告
淀粉酶活力测定实验报告淀粉酶活力测定实验报告引言：淀粉是一种常见的多糖类物质，广泛存在于植物的种子、块茎和根部等部位。
淀粉酶是一类能够催化淀粉水解为糖类的酶，广泛存在于植物、动物和微生物中。
淀粉酶活力的测定对于研究淀粉酶的性质、功能以及酶的催化机制具有重要意义。
本实验旨在通过测定淀粉酶活力的方法，探究淀粉酶的催化作用及其影响因素。
实验材料与方法：材料：1. 淀粉溶液2. 淀粉酶溶液3. 碘液4. 盐酸5. 碘化钾溶液6. 蒸馏水方法：1. 预先制备好一定浓度的淀粉溶液和淀粉酶溶液。
2. 取一定量的淀粉溶液，加入适量的淀粉酶溶液，混匀后放置一段时间。
3. 取适量的混合液，加入盐酸，停止淀粉酶的活性。
4. 加入碘液，使混合液呈现蓝黑色。
5. 用碘化钾溶液滴定至混合液呈现淡黄色，记录滴定所需的碘化钾溶液体积。
6. 重复上述步骤，分别改变淀粉酶的浓度、温度和pH值等条件，进行多组实验。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了不同条件下淀粉酶活力的数据，并进行了分析和讨论。
1. 淀粉酶浓度对活力的影响：在一定温度和pH值下，我们分别取不同浓度的淀粉酶溶液进行实验。
结果显示，淀粉酶活力随着酶浓度的增加而增加，但当酶浓度达到一定程度后，活力的增加趋势趋于平缓。
这说明在一定范围内，淀粉酶活力与酶浓度呈正相关关系。
2. 温度对活力的影响：我们分别在不同温度下进行实验，结果显示，淀粉酶活力随着温度的升高而增加，但当温度超过一定范围后，活力开始下降。
这是因为温度的升高可以增加酶分子的运动速度和碰撞频率，促进酶与底物的结合，从而提高活力。
然而，过高的温度会导致酶分子的构象变化和热失活，从而降低活力。
3. pH值对活力的影响：我们在不同pH值下进行实验，结果显示，淀粉酶活力在一定范围内随着pH值的变化而增加。
这是因为pH值的变化可以改变酶分子的电荷状态和离子化程度，从而影响酶与底物的结合能力和催化效率。
然而，当pH值偏离酶的最适pH值时，酶分子的构象发生改变，导致活力的降低。
生化实验04-淀粉酶活性的测定
生化实验04-淀粉酶活性的测定淀粉酶活性的测定是一种重要的生物化学检测，其基本原理是用淀粉作为底物，利用酶介导的过程，将淀粉水解成低聚糖，并通过苯二酚(Folin-Ciocalteu法)测定反应，形成羟基苯并联二肽，从而可以准确测定淀粉酶活性。
该检测方法的特别之处在于无需半乳糖基转化，能直接检测细胞内活性淀粉酶。
本实验采用淀粉酶活性的测定来反映样品内活性淀粉酶的含量和性质。
实验原理淀粉酶活性的测定主要是利用酶促反应，将淀粉水解成支链水解物，此过程会改变样品中反应物的形态和特性，从而通过苯二酚(Folin-Ciocalteu法)测得淀粉酶的活性。
该反应是将样品与Folin－Ciocalteu反应液混合，使反应液中的苯二酚与水解后的淀粉低聚糖发生反应，形成羟基苯并联二肽，这些二肽经过光度测定能独立出来，最后得到淀粉酶活性的测定结果。
实验步骤1. 准备试剂a) 苯二酚 Folin-Ciocalteu反应液：将250毫升2.5mol/L碳酸钠溶液加入50毫升10mol/L硫酸钠溶液，搅混，然后加入90毫升1mol/L硫酸钾溶液，苯二酚Folin-Ciocalteu反应液准备完毕。
b) 反应系统：放入1.0 ml淀粉溶液，0.2 ml苯二酚Folin-Ciocalteu反应液，0.8 ml缓冲液，搅拌均匀即可。
2.淀粉酶活性的测定:a) 将反应系统中放入多余的样品添加到实验管中，转移到光度仪中进行测定，观察测定结果。
b) 计算淀粉酶活性指数：以质量发射率550nm处的发射峰值为参考标准，按照公式计算淀粉酶活性指数。
应用淀粉酶活性的测定在非植物细胞（如固氮细菌、氨基酸分解的细菌）中也广泛应用。
淀粉水解系统有助于研究和控制细胞内的淀粉合成与消耗，从而洞察活动的工程机制，帮助揭示物质的重要功能以及研究物质之间的相互作用。
由于其易处理，快速，稳定，准确，淀粉酶活性测定技术，广泛应用于药物研究和药物质量控制，生物燃料，环境污染检测，食品检测，生物技术，等等。
谷物种子萌发时淀粉酶活力的测定
谷物种子萌发时淀粉酶活力的测定谷物种子萌发时淀粉酶活力的测定几乎所有植物中都存在淀粉酶，尤其是萌发的禾谷类种子，淀粉酶活性最强。
主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。
种子萌发时，淀粉酶活性随萌发时间迅速增加，将淀粉分解成小分子糖类，供幼苗生长。
α-淀粉酶随机水解淀粉的α-1,4-糖苷键，作为淀粉分解的起始酶而起主要作用；其水解产物为麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖；β-淀粉酶水解非还原端的第二个α-1,4-糖苷键，水解产物为麦芽糖，并能使一部分糊精糖化。
本实验以萌发种子为材料，测定其中α-淀粉酶和β-淀粉活性的差异。
【原理】两种淀粉酶具有不同理化特性，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化；β-淀酶不耐热，在70℃下15min则被钝化。
据此，在测定时钝化其中之一，就可以测定出另一种酶的活力，本实验采用加热钝化β-淀粉酶测出α-淀粉酶活力，再与非钝化条件下测得的总淀粉酶活力比较，求出β-淀粉酶活力。
淀粉的水解产物麦芽糖及其它还原糖能与3,5-二硝基水杨酸试剂反应，使其还原生成红色3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，其颜色深浅与淀粉酶水解产物的浓度成正比，可用麦芽糖（或葡萄糖）浓度表示，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
【仪器与用具】分光光度计；离心机；恒温水浴；研钵；具塞刻度试管（25ml×13）；刻度吸管（1ml，2ml，5ml各1支）；容量瓶（50ml×2）。
【试剂】麦芽糖标准液（1mg/ml）：称取100mg麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至100ml；DNS试剂（3,5-二硝基水杨酸）：精确称取3,5-二硝基水杨酸1g，溶于20ml 12mo l/L NaOH溶液中，加入50ml蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至100ml。
盖紧瓶塞，勿使CO2进入。
若溶液混浊可过滤后使用；0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液：A液（0.1mol/L柠檬酸）—称取分析纯柠檬酸21.01g，用蒸馏水溶解并定容至1L；B液(0.1mol/L柠檬酸钠)—称取柠檬酸钠29.41g用蒸馏水溶解并定容至1L；取A液55ml与B液145ml混匀，即为0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液；1%淀粉溶液：称取1g淀粉溶于100ml 0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液中。
α-和β-淀粉酶活性的测定
α-和β-淀粉酶活性的测定α-淀粉酶能将淀粉分子的α-1.4糖苷键任意切断成长短不一的短链糊精及少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉对碘呈蓝紫色的特异反应消失，以该颜色消失的速度计算酶的活力。
β-淀粉酶是从淀粉的非还原性末段分解2个葡萄糖单位的α-1.4糖苷键生成麦芽糖。
因此可用DNS法测定溶液中还原糖的含量。
1.仪器设备分光光度计、恒温水浴等。
2.操作方法1）粗酶液制备取新鲜植物材料10g，洗净、剪碎，按1：2（w/v）比例加20ml0.1mol/L NaAc缓冲液（含6mmol/L CaCl2，pH5.0）及少量石英砂研磨，一层尼龙布过滤。
滤液在20000r/min离心20min，取上清液用10mmol/L NaAc缓冲液透析。
过夜后用20000r/min离心10min，取上清液定容，备用。
2）绘制β-极限糊精标准曲线称取100mgβ-极限糊精，加少量水调成糊状，倾入10ml沸蒸馏水，不断的搅拌、加热，煮至透明。
流水冷却后定容至10ml，即每毫升含10mgβ-极限糊精。
取25～200μlβ-极限糊精（0.25～2.0mg）加水定容至0.5ml，再加5.0ml0.01%I2-KI溶液于560nm处测定其光密度（OD）值。
以光密度为纵坐标，β-极限糊精含量为横坐标绘制β-极限糊精标准曲线。
3.α-淀粉酶活力测定（植物生理学通讯，1986，4：63）取0.1~0.5ml粗酶液（相当于含0.1～0.2g鲜重），加0.5mlβ-极限糊精，加10mmol/L NaAc缓冲液定容至1.0ml，摇匀后在30℃保温。
隔不同时间取0.1ml反应液加5.0ml0.01%的I2-KI试剂，0.4ml H2O，摇匀后在560nm处测其光密度。
按OD值查标准曲线。
计算单位为：mgβ-极限糊精降解/g（鲜重）·h。
4.β-淀粉酶活力的测定（麦芽糖浆生产工艺，上海市轻工业局科技情报研究所出版1989,171)。
1)酶反应在具塞试管中加5ml2%可溶性淀粉，1ml0.1mol/L NaAc（pH5.0）缓冲液，3.9ml H2O，在37℃预热5min，加0.1ml酶液，保温30min后煮沸10min。
小麦萌发前后淀粉酶活力的比较实验报告
小麦萌发前后淀粉酶活力的比较实验报告本实验旨在通过比较小麦种子萌发前后淀粉酶活力的差异，探究淀粉酶在小麦萌发过程中的作用。
实验材料：1. 小麦种子2. 碘液3. 淀粉溶液4. 蒸馏水5. 烧杯6. 试管7. 光学显微镜8. 平板电脑实验步骤：1. 将小麦种子浸泡在蒸馏水中，保持2小时，以激活种子。
2. 将浸泡后的小麦种子平均分配到两个试管中，每个试管内种子数量相同。
3. 一个试管中的小麦种子加入淀粉溶液，另一个试管中的小麦种子加入同等体积的蒸馏水作为空白对照组。
4. 使用注射器将试管中的液体充分混合，并保持试管内液体的温度在恒温箱中约25。
5. 在小麦种子萌发的第1天、第3天、第5天和第7天，分别取出一小部分试管液滴于玻片上，并加入碘液进行反应，观察观察淀粉酶活动情况。
6. 将玻片放置在光学显微镜下，调节放大倍数并使用平板电脑拍摄淀粉颗粒溶解的图像。
实验结果：根据实验步骤，我们观察到小麦种子萌发前后淀粉酶活力的差异。
在萌发前的第1天，两组显微镜下的淀粉颗粒大小和浓度几乎相同，未发现明显的淀粉颗粒溶解。
而在萌发后的第3天，加入淀粉溶液的试管中淀粉颗粒已经有所溶解，观察到淀粉溶液呈现较浅的蓝色。
在第5天和第7天，淀粉溶液的颜色更浅，而温水对照组基本无溶解颗粒的迹象。
实验分析：根据实验结果，我们可以得出以下结论：1. 小麦种子萌发后，淀粉酶活力显著增强。
从试管内淀粉溶液颜色的变化来看，淀粉酶能够促进淀粉分子的水解，使其逐渐转化为葡萄糖等可溶性糖类。
2. 萌发后的小麦种子在消化淀粉的同时，也将葡萄糖等营养物质释放出来，供给其生长、发芽所需。
3. 与淀粉分子相比，溶解的葡萄糖等可溶性糖类更易被小麦种子吸收和利用，因此能够更好地支持其萌发、生长的需要。
4. 通过对实验中淀粉颗粒溶解情况的观察，我们可以间接评估种子的萌发活力以及淀粉酶的活性。
实验改进和展望：1. 增加实验重复性：本实验中每个时间点只使用了一组样本进行观察，实验结果的可靠性还需要进一步验证。
DNS法测定α-淀粉酶活力的方法
加入2.0mlDNS 沸水浴5min
冷却定容至25ml
540nm比色测定 OD值
代入回归方程计算出麦芽糖生成量
计算公式
酶活力定义：在一定反应条件下（本实验为40 ℃ ， pH5.6或6.0），1分钟反应生成1mg麦芽糖的酶 量定义为1个酶活力单位。
α-淀粉酶（酶 U/活 m ）L 麦 力芽糖毫 N 10
标准曲线法
取标准品配成一系列已知浓度的标准溶液， 在选定波长处（通常为λmax），用同样厚 度的吸收池分别测定其吸光度，以吸光度（ OD）为纵坐标，系列标准溶液浓度为横坐标 作图，得到一通过坐标原点的直线－标准曲 线（工作曲线）。 理想的标准曲线满足以下条件： 1、至少5个点，一般不超过7个点； 2、2个以上重复值； 3、重复值误差小于5%； 4、点与线的垂直距总和最小； 注意：标准曲线不能任意延长！（有一定测 定范围）
利用DNS法测定α-淀粉酶活力 的方法
目的要求
了解生物学研究中针对糖含量测定的常用 方法及相关原理。 掌握一般标准曲线制作的意义及要求。 掌握DNS比色法测定α-淀粉酶活力的原理 、方法及操作步骤。 掌握利用EXCEL分析工具库数据分析—— 回归分析，得到回归方程及相关分析结果 。
糖的测定方法
大致可分为三类： 1.物理法——旋光法、折光法、比重法； 2.物理化学法——点位法、极普法、光度 法、色谱法； 3.化学方法——斐林氏法、高锰酸钾法、 碘量法、铁氰化钾法、DNS比色法、蒽酮 比色法、咔唑比色法
光源 单色器 吸收池 检测器 显示系统
朗伯-比尔定律
朗伯比尔定律
定义
透光度T：
I0
II TI0b吸光度A： AlgT
A b A c LIa0m：b入ert射J光H强176度0
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(植物中)淀粉酶活性的测定
一实验目的
本实验的目的在于掌握淀粉酶的提取及活性的测定方法。
二实验原理
植物中的淀粉酶能将贮藏的淀粉水解为麦芽糖。
淀粉酶几乎存在于所有植物中，有α－淀粉酶及β－淀粉酶，其活性因植物生长发育时期不同而有所变化，其中以禾谷类种子萌发时淀粉酶活性最强。
α－淀粉酶和β－淀粉酶都各有其一定的特性，如β－淀粉酶不耐热，在高温下容易钝化，而α－淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下容易发生钝化。
通常酶提取液中同时存在两种淀粉酶，测定时，可以根据他们的特性分别加以处理，钝化其中之一，即可以测出另一种酶的活性。
将提取液加热到70℃维持15分钟以钝化β－淀粉酶，便可测定α－淀粉酶的活性。
或者将提取液用pH3.6的醋酸在0℃加以处理，钝化α－淀粉酶，以测出β－淀粉酶的活性。
淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3,5－二硝基水杨酸试剂测定。
由于麦芽糖能将后者还原成3－氨基-5-硝基水杨酸的显色基团，在一定范围内其颜色的深浅与糖的浓度成正比，故可以求出麦芽糖到含量。
以麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性大小。
三实验材料
萌发的小麦、大麦或者豆类等（芽长1cm左右）
四实验仪器和试剂
1．仪器：
电子天平、研钵、100mL容量瓶（1个）、50mL量筒（1个）、刻度试管[25mL（9个）、10mL（1个）]、试管6支、移液管[1mL（2支）、2mL（2支）、10mL（2支）]、离心机、恒温水浴锅、7220型分光光度计
2．试剂：
1％淀粉溶液、0.4mol/LNaOH、
pH5.6的柠檬酸缓冲液：A、称取柠檬酸20.01g，溶解后稀释至1 000mL；B、称取柠檬酸钠29.41g，溶解后稀释至1 000mL；取A液13.70mL与B液26.30mL 混匀即是。
3,5－二硝基水杨酸：精确称取3,5－二硝基水杨酸1g溶于20mL1mol/LNaOH 中，加入50mL蒸馏水，在加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水稀释至100mL，盖紧瓶盖，勿让CO2进入。
麦芽糖标准液：称取化学纯麦芽糖0.100g溶于少量蒸馏水中仔细移入100mL 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。
五操作步骤
1．酶液的提取：
称取萌发的水稻种子0.5g（芽长1cm左右，置于研钵中加石英砂研磨成匀浆，移入25mL刻度试管中，用水稀释至刻度，混匀后在温室下放置，每隔数分钟振荡一次，放置20分钟后离心，取上清液备用。
2．α－淀粉酶活性的测定：
（1）取三支试管，编号注明1支为对照管，2支为测试管。
（2）于每管中各加入酶提取液1mL，在70℃恒温水浴中（水文的变化不应该超过±0.5℃），准确加热15分钟，在此期间β－淀粉酶受热钝化，取出后迅速在自来水中冷却。
（3）在试管中各加入1mLpH5.6的柠檬酸缓冲液。
（4）向对照管中加入4mL0.4mol/LNaOH，摇动2－3分钟，静止2分钟，以钝化酶的活性，再加入1％淀粉2mL。
（5）将测定管置40℃（±0.5℃）恒温水浴中保温15分钟，再加入40℃下预热的1％淀粉溶液2mL，摇匀，立即放入40℃水浴中准确保温15min取出，迅速加入4mL0.4mol/LNaOH，以终止酶的活动，然后准备下一步糖的测定。
3．α－淀粉酶和β－淀粉酶总活性的测定：
取上述酶提取液1mL，放入刻度试管中，用蒸馏水稀释至10mL（稀释程度视酶活性的大小而定）。
混合均匀后，取3支试管，1支为对照管，2支为测定管，各加入稀释的酶液1mL、pH5.6的柠檬酸缓冲液1mL。
以上步骤重复α－淀粉酶测定的第（4）及（5）的操作，同样准备糖的测定。
4．麦芽糖的测定：
（1）标准曲线的制作：
取25mL刻度试管5个编写号分别加入麦芽糖标准液（1mg/mL）0.0、0.5、1.0、1.5、2.0mL，然后于各管加入蒸馏水使溶液为2mL，再各加3,5-二硝基水杨酸试剂2mL，置沸水中准确煮5分钟，取出冷却，用蒸馏水稀释至25mL，混匀。
用7220型分光光度计在520nm的波长下进行比色，记录光密度，以光密度为纵坐标，以麦芽糖含量为横坐标绘制标准曲线。
（2）样品的测定
取以上各管中酶作用后的溶液及对照管中的溶液各1mL，分别加入25mL刻度管中，再加入1mL的水，3,5-二硝基水杨酸试剂2mL，混匀置沸水中准确煮5分钟，取出冷却，用蒸馏水稀释至25mL，混匀。
用7220型分光光度计在520nm 的波长下进行比色，记录吸光度，从麦芽糖标准曲线中计算出麦芽糖含量，用以表示酶的活性。
六结果计算
A: α-淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖量（mg）
A1: α-淀粉酶对照管中麦芽糖量（mg）
B: α+β-淀粉酶共同水解淀粉生成的麦芽糖量（mg）
B1: α+β-淀粉酶的对照管中的麦芽糖量（mg）。