实验3 PEG介导的动物细胞融合技术

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PEG诱导鸡血细胞融合实验方法比较

PEG诱导鸡血细胞融合实验方法比较PEG（聚乙二醇）介导的鸡血细胞融合实验是一种常用的细胞学实验方法，用于研究细胞融合、基因转移、病毒感染等现象。

在这个实验中，PEG起到促进融合的作用。

本文将对常用的PEG诱导鸡血细胞融合实验方法进行比较。

1.直接混合法：直接混合法是最简单直接的方法，将两种不同细胞类型的细胞直接混合，加入PEG处理后，通过细胞的融合产生融合细胞。

实验步骤：a.将两种不同类型的鸡血细胞分别培养至对数生长期。

b.将细胞收集、洗涤后，按照一定比例混合在一起。

c.在混合细胞悬液中加入PEG，进行处理。

d.处理后的细胞悬液进行培养。

优点：简单快捷，操作方便。

缺点：融合效率低，融合细胞的纯度较低，难以鉴定融合细胞。

2.等渗处理法：等渗处理法使用PEG使两个细胞类型的渗透压基本相等，减小由于渗透压差带来的融合细胞死亡的可能性。

实验步骤类似于直接混合法，不同之处在于在混合前要将细胞分别处理加入等量的PEG。

优点：可以减少融合细胞死亡的可能性。

缺点：融合效率仍然较低，难以确保融合细胞的纯度。

3.高瓶底法：高瓶底法是一种间接融合法，将两种细胞性的细胞分别培养到八倍增生指数时接种于两个高菌瓶内，将角质层去除，用高菌瓶口与高速离心的纺棉花轻摩转盘瓶底，离心至指定g数。

因离心后双方菌瓶接触，菌体外膜断裂，细胞在瓶壁内微小空间聚集，有利于融合。

实验步骤：a.将两种不同类型的鸡血细胞分别培养至八倍增生指数。

b.将细胞收集后接种于两个高菌瓶内。

c.去除角质层，将高菌瓶口与高速离心的纺毛轻摩转盘瓶底。

d.将菌瓶离心至指定g数。

优点：融合效率较高，融合细胞纯度较高。

缺点：操作复杂，需要使用专用设备。

4.电熔法：电熔法是利用电场将两种细胞融合的方法。

通过电熔法可以达到融合效率较高的效果。

实验步骤：a.将两种不同类型的鸡血细胞分别培养至对数生长期。

b.将细胞收集后接种于电熔腔中。

c.设置一定的电场参数，通过电场产生的作用使细胞融合。

PEG诱导的细胞融合实验

3、混合细胞并洗涤：肿瘤细胞和鸡红细胞各1ml 混合，吸取0.2ml于EP 管中用作对照；另加6ml Hanks液，混匀后 1000rpm离心5min，弃上清；再用8 ml Hanks液洗细胞一次，800 rpm离心 5min弃上清，约留0.1ml液体
【实验操作】
4、 PEG介导融合：用手指轻弹离心管底部，使沉淀松散，然后将离心管放在37ºC水浴中；吸取预热至37℃的50％PEG 0.5ml ，逐滴加入到细胞沉淀中，边加边振摇浑匀，使细胞在50％PEG 中总时间控制在90秒之内；
PEG诱导的细胞融合实验
细胞融合（cell fusion）
• 又称细胞杂交（cell hybridization），是指两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的现象。
用细胞融合方法培育的薯番茄
细胞融合抗盐碱耐干旱葡萄新品种
细胞融合生产单克隆抗体
细胞融合的诱导
1、病毒诱导：如仙台病毒（Sendaivirus），主要用于动
• 了解聚乙二醇诱导细胞融合的原理与技术； • 学会鉴别： 1、鸡红细胞 2、小鼠腹水瘤细胞二、实验器材普通离心机水浴锅：50ºC，37ºC 计数板
三、实验试剂
1、180IU/ml肝素钠生理盐水溶液 2、Hanks溶液 3、50％PEG：将10gPEG加入带盖离心管中，
融合细胞核数 ×100％融合细胞核数＋未融合的细胞核数
【注意事项】
• 保持PEG温度，否则易凝固 • PEG处理时间不宜过长，否则会造成细胞
破坏或有多个细胞彼此融合形成巨大的合胞体。 • 经PEG处理后加液混匀时应轻轻吹打，以免刚刚融合的细胞分开。
【参考书】
1、《体外培养的原理与技术》第一版，薛庆善编，科学出版社。

动物细胞融合实验实验报告

动物细胞融合实验实验报告
实验目的：1、了解动物细胞融合的常用方法
2、学习化学融合的基本操作过过程
3、观察动物细胞融合过程中的细胞行为和变化
实验材料：鸡血红细胞、50%PEG溶液、0.85%氯化钠溶液、显微镜、离心机、载玻片、盖玻片等
实验原理：聚乙二醇（PEG）能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。

在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分
子层的互相亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。

实验步骤：1、取鸡血，离心后去除上清液，以0.85%氯化钠溶液制成5%~10%的悬液
2、加入GKN液4ml，混匀
3、加入14滴PEG液，静置3~5min后混匀，放于显微镜下观察
实验结果：显微镜下可观察到有些细胞发生质膜融合
分析与讨论：细胞融合的应用有微生物原生质体融合构成新菌株、利用原生质体融合和培养技术培育新植物、细胞杂交瘤技术与单克隆抗体、用于基因定位和绘制人类基因
图谱、用于生产树突状细胞抗肿瘤疫苗、用于动物育种、用于细胞疗法等。

PEG介导的细胞融合

PEG介导的细胞融合摘要：细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的现象，也称细胞杂交，可通过自发或人工诱导实现。

本实验中主要是以小鼠的脾脏淋巴细胞为融合实验材料，通过化学方法（聚乙二醇PEG）来最终使细胞达融合，主要目的是为了探究不同浓度的PEG与细胞融合率的关系。

将小鼠脾脏取出制成脾脏淋巴细胞悬液后，分别取1毫升分装到A、B、C、D、E五根离心管中，离心后加入不同浓度的融合剂各0.5毫升，实验中设置了20%、35%、50%、65%、80%五个PEG浓度梯度，经处理之后制成玻片在高倍显微镜下观察，对视野中细胞总数和融合细胞对数进行计数，就算融合率，最终得出结果。

结果表明：在一定浓度范围内（20%-70%），细胞的融合率与PEG的浓度成正比关系；当浓度过大时，细胞融合率反而会有降低。

关键词：细胞融合；PEG；融合率；不同浓度前言：人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。

由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。

基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体。

细胞融合不仅可用于基础研究，而且还有重要的应用价值，在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。

细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体，单克隆抗体可以用作诊断试剂，治疗疾病和运载药物，具有准确，高效，简易，快速等优点。

因此，融合细胞的研究为生物学无论在基础理论上或生产实践上开辟了一条新的道路。

这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。

1.材料与方法1.1实验材料：小鼠脾脏细胞1.2实验器材：10ml离心管、吸管、载玻片、盖玻片、离心机、恒温水浴锅、显微镜、解剖剪刀、镊子、培养皿、漏斗、尼龙布、1ml注射器、6#针头。

1.3试剂：PEG、D-Hanks液、蒸馏水、0.87%NH4Cl。

peg诱导细胞融合原理

peg诱导细胞融合原理
PEG诱导细胞融合原理
PEG是聚乙二醇的缩写，是一种具有高分子量的线性聚合物。

PEG在
生物学研究中被广泛应用，其中最常见的应用之一就是诱导细胞融合。

细胞融合是指将两个或多个细胞融合成一个单独的细胞。

这种技术被
广泛应用于生物学研究中，例如制备杂交瘤细胞、制备单克隆抗体和
产生转基因动物等。

PEG诱导细胞融合的原理是利用PEG分子与细胞膜相互作用，使得两个或多个不同类型的细胞在PEG存在下发生融合。

具体来说，PEG通过以下机制促进了细胞融合：
1. 破坏细胞膜结构
PEG分子可以与水形成氢键，并且可以与亲水性区域结合。

当PEG溶液与细胞接触时，它会插入到细胞表面，并破坏部分磷脂双层结构，
从而使得两个或多个不同类型的细胞暴露出其内部的细胞质。

2. 促进细胞膜的接触
PEG分子可以通过两种方式促进细胞膜的接触。

首先，PEG可以降低水的表面张力，使得两个或多个细胞之间的距离缩小。

其次，PEG可以与细胞膜表面的亲水性区域结合，从而增加了两个或多个细胞之间的吸引力。

3. 促进细胞融合
当两个或多个不同类型的细胞表面接触时，PEG会形成一个临时性的孔道，使得两个或多个细胞质混合在一起。

这些孔道很快就会关闭，并且新形成的单一细胞会拥有所有原始细胞中所包含的遗传物质和生物学特性。

总之，PEG诱导细胞融合是一种简单、有效、广泛应用于生物学研究中的技术。

它利用PEG分子与细胞膜相互作用来促进不同类型细胞之间发生融合，并且可以产生许多重要的研究工具和应用。

聚乙二醇(PEG)介导的细胞融合实验原理及步骤

实验三：聚乙二醇（PEG）介导的细胞融合【课前预习】1．介导细胞融合的方法有哪些？2．细胞融合技术有哪些方面的应用？【目的要求】掌握细胞融合原理以及应用PEG 诱导细胞融合的方法。

【基本原理】两个以上的细胞合并成为一个双核或多核细胞称为融合细胞。

在通常情况下，两个细胞接触并不发生融合现象，因为各自存在完整的细胞膜，在特殊融合诱导物的作用下，两个细胞膜发生一定的变化，就可促进两个或多个细胞聚集，相接触的细胞膜之间融合，继之细胞质融合，形成一个大的融合细胞。

人工细胞融合开始于五十年代，六十年代到七十年代作为一门新兴的技术发展很快，应用范围极广。

细胞与组织不同，不排斥异类、异种细胞。

不仅能产生同种细胞融合、种间细胞融合，而且也能诱导动植物细胞间产生融合。

因此，融合细胞的研究为生物学无论在基础理论上或生产实践上开辟了一条新的道路。

这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。

细胞融合(Cell fusion)，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。

人工诱导的细胞融合不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域，如研究核质关系、绘制染色体基因图谱、制备单克隆抗体、育种等。

细胞融合的诱导物种类很多．常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendai virus) ，聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）和电脉冲。

目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。

聚乙二醇(PEG)结构为：HOH2C(CH2OCH2)n CH2OH，相对分子质量在200-6000 均可用作细胞融合剂。

普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。

PEG诱导细胞融合

科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合日期姓名*** 系年级2011级生物基地学号***实验一利用聚乙二醇为媒介物进行细胞融合摘要细胞融合(cell fusion)是在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。

基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。

诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（离心，震动，电刺激）。

某些病毒如：仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白（fusion protein），可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合，因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。

化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变，去掉作用因素之后，质膜恢复原有的有序结构，在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。

关键词细胞融合；人工诱导；PEG前言人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。

由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。

基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体（homokaryon）；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体（heterokaryon）。

细胞融合不仅可用于基础研究，而且还有重要的应用价值，在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。

细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体，单克隆抗体可以用作诊断试剂，治疗疾病和运载药物，具有准确，高效，简易，快速等优点。

因此，融合细胞的研究为生物学无论在基础理论上或生产实践上开辟了一条新的道路。

这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。

一．实验目的1.了解动物细胞融合的常用方法及原理。

2.掌握利用PEG为介导物对细胞进行诱导融合的方法。

细胞生物学实验报告——动物细胞融合

山东大学细胞生物学实验报告聚乙二醇（PEG ）法诱导的动物细胞融合实验2012/9/11实验目的：了解细胞融合技术的发展过程和主要方法的基本原理，用聚乙二醇(PEG)化学诱导法进行鸡血红细胞的融合实验，掌握实验的基本操作，观察鸡血红细胞融合的不同时期。

实验原理：1. 细胞融合的概念两个或两个以上的细胞或原生质体在自然或人为诱导的情况下细胞质膜相互融合，细胞质相互混合成为一个整体杂合细胞的现象被称为细胞融合。

细胞融合可以发生在同种细胞之间也可以在不同物种间实现。

2. 细胞人工融合的主要方法及基本原理细胞体外融合的主要方法分为病毒诱导，化学诱导和物理诱导。

1953年，M. Kuroya 在临床中第一次分离到仙台病毒（HVJ ）[1]。

1958年，日本学者Okada 发现仙台病毒（HVJ ）能诱导动物细胞融合[2]，其基本原理是仙台病毒的衣壳上有细胞表面受体的结合位点，可以诱导不同细胞凝集，最终使不同细胞的细胞膜相互融合。

1974年，加拿大学者高国楠发明了细胞的聚乙二醇（Polyethyleneglycol ，PEG ）化学融合法，由于该方法对实验条件要求极低，试剂易得，操作简单，成为应用最广泛的细胞融合方法。

化学诱导细胞融合的基本原理是PEG 等化学物质能够诱导细胞膜磷脂分子的极性基团发生结构重排，相互接触的细胞在细胞膜恢复过程中借助磷脂分子的亲和作用和表面张力实现融合。

比之于仙台病毒诱导法，PEG 诱导法的效率提高了几百倍。

80年代，科学家发明了细胞电融合法[4, 5]，电融合法将细胞融合的产率提高到了50%-80%。

电融合法的建立是基于细胞膜表面带电荷的性质。

当在细胞悬液周围加入特定方向的电场时，细胞表面会发生极化现象，相邻的细胞将吸附在一起。

这时突然提高电场强度，细胞间彼此接触的细胞膜会被击穿，细胞膜修复时受到磷脂分子间的亲和作用和细胞膜表面张力的作用将会发生融合。

图2. 以电融合方法得到的3T3-C2融合细胞（引自J. Teissie 等，1982 )。

动物细胞融合技术

动物细胞融合技术一、实验目的：1. 通过PEG介导的鸡血细胞融合实验, 对体细胞融合有一个清楚的概念2. 并初步掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技术二、实验原理：利用PEG介导的动物细胞融合，其实验原理到目前为止还没有完全定论。

学者们一般认为，PEG改变各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散、进而使其结构发生重排，再加上膜脂双层的相互亲合以及彼此间表面张力的作用，引起相临的重排质膜在修复时相互合并在一起, 使两细胞的胞质沟通, 从而造成相互接触的细胞之间发生融合。

利用PEG介导细胞融合, 其融合效果受以下几种因素的影响：1. PEG的分子量与浓度: 细胞融合效果与PEG的分子量及其浓度成正比；但PEG 的分子量越大、浓度越高, 对细胞的毒性也就越大。

为了兼顾二者，在实验时常常采用的PEG分子量一般为1000~4000，浓度一般为40~60%。

2. PEG的pH值: 经验证，PEG的pH值在8.0~8.2之间融合效果最好。

3. PEG的处理时间: 处理时间越长，融合效果越好, 但对细胞的毒害也就越大。

故一般将处理时间限制在1分钟之内。

本实验中细胞融合后无需继续培养, 故处理时间可适当放宽至数分钟。

4. 融合时的温度: 由于生物膜膜的流动性与温度成正比，故细胞的融合效果也与温度成正比。

因此，为了获得更好的融合效果, 在细胞可能承受的温度范围内可适当提高处理的温度。

对于哺乳动物的细胞, 一般采用的温度为38~40℃。

经PEG处理后，在显微镜下，可观察到未融合的单核细胞、融合后的双核细胞和融合后的多核细胞。

细胞的融合率指在显微镜的视野内，已发生融合的细胞的核的总数与此视野内所有细胞的细胞核总数之比。

可用如下公式表示：在实验中统计融合率时, 要进行多个视野计数，然后再加以平均，以使计算更为准确。

三、实验材料：**材料：鸡血***试剂：1. Alsever液制备葡萄糖(Glucose) 2.05g枸椽酸钠 0.8g氯化钠(NaCl) 0.42g重蒸水至 100ml2. 0.85%生理盐水液3. GKN液氯化钠 8g氯化钾(KCl) 0.4gNa2HPO4•2H2O 1.77gNaH2PO4•H2O 0.69g葡萄糖 2g酚红(phenolred) 0.01g溶于1000ml重蒸水中。

PEG促细胞融合实验报告

PEG促细胞融合实验报告实验目的：通过PEG促细胞融合实验，探究细胞融合的原理和过程，以及利用细胞融合实验来研究细胞生物学和生物医学相关领域的应用。

实验原理：PEG（聚乙二醇）促进细胞融合是一种流行的实验方法。

PEG具有双亲性分子，在水溶液中既溶于水，又溶于脂质双层。

通过PEG融合神经元，可以融合细胞的细胞膜，使其形成一个大的细胞。

实验材料：1.神经元细胞系2.细胞培养培养基3.聚乙二醇（PEG）4.显微镜检查设备5.细胞培养相关试剂实验步骤：1.准备两个相同类型的细胞培养皿，将细胞预先培养至适当的密度。

2.将细胞培养基抽取掉，用无血清的培养基洗涤细胞。

并将细胞置于含有2g/LPEG的无血清培养基中。

3.轻轻撤离培养皿，将第一个细胞制备物转移到第二个相匹配的细胞制备物上。

4.将含有PEG的细胞悬液迅速转运到冷缓冲液中禁止PEG分子的扩散。

并禁止PEG浓度随温度变化引起细胞融合。

5.分离悬浮细胞，使用显微镜观察新形成的细胞结构。

实验结果与讨论：在经过实验之后，我们观察到了细胞融合的现象。

在尝试不同类型的细胞融合时，我们注意到不同类型的细胞在融合后可以形成具有新功能的细胞。

细胞融合可以通过PEG分子的作用，在较短的时间内实现细胞膜的融合。

PEG作为双亲性分子，能够同时溶解在水和脂质双层中，在融合时充当桥梁的作用。

实验的关键参数之一是PEG的浓度，不同浓度的PEG可能导致不同程度的细胞融合。

较低浓度的PEG可能只形成微小的细胞团，而高浓度的PEG则可能导致更大的细胞聚集。

细胞融合实验常用于细胞融合技术的开发和细胞混合实验的需要。

该技术可以应用于多个领域，包括研究免疫细胞抗原识别，细胞生物学和生物医学研究。

细胞融合的原理和实验方法的深入理解对于相关领域的研究和应用具有重要意义。

通过细胞融合实验，可以研究不同细胞类型之间的相互作用和交流，为细胞生物学和生物医学研究提供新的视角和手段。

综上所述，PEG促细胞融合实验是一种重要的实验方法，可以用于深入研究细胞融合的原理和应用。

PEG诱导蟾蜍血细胞融合实验步骤

PEG诱导蟾蜍血细胞融合1、实验器材：50% PEG; 阿氏液; 0. 85% 生理盐水；GKN 液；0.2%次甲基蓝溶液;蟾蜍红细胞；1ml移液枪及枪头若干；10ml无菌注射器；电子天平；100ml容量瓶；PH试纸；试管2支；载玻片，盖玻片。

2、实验仪器：离心机及15ml离心管6支；水浴锅;显微镜Alsver液：葡萄糖2.05g，柠檬酸钠0.8g、氯化钠0.42 g、用柠檬酸溶液调节pH值至7.2,最后用重蒸水定容至100 mL。

0.85％生理盐水：0.85g氯化钠溶于100mL重蒸水中。

GKN液：氯化钠8g，氯化钾0.4g，磷酸氢二钠1.77g，磷酸二氢钠0.69g，葡萄糖2g，酚红0.01g，溶于1000mL重蒸水中。

50％PEG混合液：定量称取PEG(Mw8000)放人刻度离心管内，在沸水浴中加热，使其溶化，待冷却至50℃时，加入预热至50℃的等体积的GKN液，混匀后置于37℃水浴中，待用。

0.2%次甲基蓝溶液：次甲基蓝(Methyene blue)0.2g，加蒸馏水100ml，室温保存,防止皮肤和眼睛接触3、实验原理：PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子量的多聚体。

PEG 可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组, 由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。

4、实验过程（1）用灭菌的注射器吸入 1ml Alsver液后从蟾蜍主动脉弓抽取红细胞 1ml 注入刻度离心管内,按照 3：1加入 6ml Alsver 液混匀（2）取悬液 1ml 移入 10ml 的刻度离心管内, 加入 4ml 0. 85%生理盐水混匀, 1 500r/min离心 5min(3)弃上清液(用吸管吸去)加0.85%生理盐水至5ml,混匀后1500r/min再离心5min,重复上述条件,再离心洗涤1次。

（4）收集最后一次离心沉淀的血细胞,用手指轻弹底壁使沉淀松散, 加入适量的 GKN 液3ml混匀后放入37℃水浴锅内预热20min, 待用。

PEG促细胞融合实验报告

四川大学实验报告题目：PEG促细胞融合一．实验目的:1.掌握细胞融合的方法2.学习使用PEG促进细胞融合的方法和步骤二．实验原理1.细胞融合：在自然条件下或用人工方法（生物的、物理的、化学的）使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。

由于体外培养的细胞很少会发生自发融合融合频率?4?6之间，因此要采用生物、化学或物理的方法人为地促使细胞10融合。

10大约在 -2.促进细胞融合的方法a)生物方法：病毒（Sendai virus，Newcastle disease virus，Vaceine virus）b)化学方法：聚乙二醇、盐类融合剂、二甲亚砜（DMSO）、甘油-醋酸酯、油酸盐、脂质、Ca2+配合物等。

PEG相对分子质量在200-6000均可用作细胞融合剂。

在众多的化学试剂中，PEG应用最为广泛，因PEG液比病毒更易制备和控制、活性稳定、使用方便、而且促进细胞融合的能力更强。

c)物理方法：电融合:电处理融合法是20世纪80年代发展起来的细胞融合技术，是融合率大为提高。

电脉冲作用时引起膜结构局部扰乱，出现小孔洞。

而相对的脂双层间分子在范德华力作用下，形成脂分子桥。

由于连接处的细胞膜表面曲率大，处于高张力状态，在热力学上是不稳定的，所以最终导致两细胞逐渐融合成一个圆形的大球状细胞。

与ⅣG法比较，电融合法融合率高：重复性强：诱导仅发生在质膜接触部位，对细胞或原生质体伤害小：融合是在同步状态下进行，活细胞数目多；装置精巧，方法简单，可在显微镜下观察或录象融合过程：免去PEG诱导后的洗涤过程，诱导过程可控制性强。

三．实验材料及设备1.实验材料：a)50%PEG混合液1 / 7四川大学实验报告b)鸡红细胞悬液c)生理盐水d)Hanks溶液2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片若干，注射器c)酒精灯、恒温水浴锅d)离心管若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤1.制取鸡血红细胞悬液2.取细胞悬液1mL，移入10mL离心管，加入4mL0.85%生理盐水混匀。

动物细胞融合实验报告

一、实验目的1. 理解动物细胞融合的基本原理和常用方法。

2. 掌握化学融合和电融合的基本操作步骤。

3. 观察动物细胞融合过程中的行为和变化。

4. 通过实验验证细胞融合技术的有效性。

二、实验原理细胞融合是指两个或两个以上的细胞在自发或诱导条件下，合并成为双核或多核细胞的过程。

动物细胞融合技术广泛应用于生物医学、细胞工程等领域。

目前，常见的诱导细胞融合的方法包括病毒诱导融合、化学融合、电融合等。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 小鼠脾细胞- 小鼠骨髓瘤细胞- 聚乙二醇（PEG）- 灭活仙台病毒- 电融合仪- 液体培养基- 洗涤缓冲液- 倒置显微镜2. 实验仪器：- 倒置显微镜- 低温冰箱- 恒温培养箱- 超净工作台- 电子天平- 移液器四、实验步骤1. 细胞培养：将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞分别培养在含有10%胎牛血清的液体培养基中，置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。

2. 细胞收获：将培养至对数生长期的细胞用胰酶消化，收集细胞，用洗涤缓冲液洗涤，调整细胞浓度为1×10^6个/mL。

3. 化学融合：- 将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞混合，加入适量PEG，充分混合后静置5分钟。

- 加入洗涤缓冲液，终止反应，洗涤细胞。

4. 电融合：- 将混合后的细胞放入电融合仪的电极槽中，设定电压和时间参数。

- 启动电融合仪，进行电融合实验。

5. 细胞培养：将融合后的细胞接种于含有10%胎牛血清的液体培养基中，置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。

6. 细胞观察：利用倒置显微镜观察融合细胞的形态和细胞核的变化。

五、实验结果与分析1. 在化学融合实验中，观察到部分细胞发生融合，形成双核或多核细胞。

2. 在电融合实验中，观察到部分细胞发生融合，形成双核或多核细胞。

3. 融合细胞的细胞核呈现明显的核仁，且核膜清晰。

六、实验结论本实验成功实现了小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞的融合，验证了细胞融合技术的有效性。

细胞生物学实验PEG介导的动物细胞融合技术

细胞生物学实验PEG介导的动物细胞融合技术一、【实验目的】1、通过PEG介导的鸡血细胞融合实验, 对体细胞融合有一个清楚的概念2、并初步掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技术3、通过实验操作，进行细胞融合，并测定融合率。

二、【实验原理】真核细胞通过介导和培养，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合(cell fusion)或细胞杂交(cell hybridization)。

人工的细胞融合开始于20世纪50年代, 60年代到70代作为一门新兴的技术, 发展非常快, 应用范围也极为广泛, 不仅同种类细胞间可以融合, 种间远缘细胞也能融合, 细胞与组织不同, 不排斥异类、异种细胞, 动物细胞如此，植物细胞也是如此。

基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体(homokaryon)；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体(heterokaryon)。

利用PEG介导的动物细胞融合，其实验原理到目前为止还没有完全定论。

利用PEG介导细胞融合, 其融合效果受以下几种因素的影响。

1. PEG的分子量与浓度: 细胞融合效果与PEG的分子量及其浓度成正比；但PEG的分子量越大、浓度越高, 对细胞的毒性也就越大。

为了兼顾二者，在实验时常常采用的PEG分子量一般为1000~4000，浓度一般为40~60%。

2. PEG的pH值: 经验证，PEG的pH值在8.0~8.2之间融合效果最好。

3. PEG的处理时间: 处理时间越长，融合效果越好, 但对细胞的毒害也就越大。

故一般将处理时间限制在1分钟之内。

本实验中细胞融合后无需继续培养, 故处理时间可适当放宽至数分钟。

实验3 PEG介导的动物细胞融合技术

实验3 PEG介导的动物细胞融合技术
PEG介导的动物细胞融合技术是一种常用的体外融合细胞的方法，主要应用于融合一些生长速度缓慢或难以进行杂交的细胞。

该技术利用聚乙二醇（PEG）使两种不同细胞融合成一个细胞，从而产生一些杂合细胞，可以获得有趣的遗传组合。

技术原理
PEG确保了细胞融合的前提是细胞外膜的破裂。

PEG受到细胞表面膜过渡物质的吸引，然后与细胞表面膜结合，形成一个PEG-膜复合物。

虽然聚乙二醇是一种高分子，但由于其化学性质与细胞膜相似，在一定程度上可以渗透到细胞膜中，从而使细胞表面膜发生缺陷和破裂，从而产生细胞融合。

实验步骤
1.将需要融合的两种细胞分别进行繁殖和培育，并将其分离。

2.将细胞置于无血清的生长培养基中，进行24-48小时的饥饿处理，使细胞停止生长。

3.制备PEG溶液，将细胞加入到PEG中，进行处理。

4.将PEG处理后的细胞转移到培养基中，定期更换培养基供给其营养并观察其生长情况。

实验注意事项
1.选择渗透性强，尺寸相似的细胞，以利于融合。

2.通过显微镜观察细胞的形态和数量，确保细胞膜在PEG处理后的破裂和细胞融合情况。

3.注意PEG用量，一般为2-4 g/L，过多的PEG处理可能会导致不必要的副作用。

4.注意细胞的状态和健康程度，以保证实验的稳定性和可靠性。

实验应用
PEG介导的细胞融合技术被广泛应用于细胞融合和制备杂交瘤，可以产生一些具有较好生长特性和生物学功能的新型细胞。

此外，该技术也应用于基因转移、卵母细胞和体细胞融合技术，以及其他相关研究领域中。

peg诱导细胞融合原理

peg诱导细胞融合原理- 引言在生物学和医学领域，细胞融合是一项重要的技术，其应用广泛，包括胚胎学研究、克隆技术、组织重建和干细胞研究等。

近年来，一种名为PEG诱导细胞融合的方法受到了广泛关注和应用。

本文将深入探讨PEG诱导细胞融合原理的多个方面，从基本概念到应用领域，以期帮助读者更好地理解这一重要技术。

1. PEG诱导细胞融合的基本原理PEG，全称聚乙二醇（Polyethylene glycol），是一种无机化合物，在细胞融合中被用作诱导剂。

PEG能够在一定条件下促使细胞膜的融合，从而使细胞融合成为可能。

2. PEG诱导细胞融合的条件在进行PEG诱导细胞融合时，需要考虑一些关键条件。

细胞必须处于活跃状态，以确保融合的成功性。

PEG的浓度和温度也是非常重要的参数，过高或过低的浓度和温度都会影响融合效果。

融合细胞的类型和比例也对融合结果有一定影响。

3. PEG诱导细胞融合的作用机制PEG诱导细胞融合的作用机制尚不完全清楚，但目前的研究认为其主要是通过对细胞膜的作用来促使细胞融合。

PEG可以改变细胞膜的性质，增加膜的可塑性，从而使细胞融合点的形成成为可能。

PEG还可能通过改变膜蛋白的构象和作用，进一步促进细胞融合。

4. PEG诱导细胞融合的应用领域PEG诱导细胞融合在多个领域具有广泛的应用。

在胚胎学研究中，利用PEG诱导的细胞融合可以用于制造嵌合胚胎，以研究胚胎发育过程和基因调控机制。

在克隆技术中，PEG诱导的细胞融合可以用于制造嵌合胚胎，进一步获得胚胎干细胞。

PEG诱导细胞融合还可以应用于组织重建和干细胞研究等领域。

5. 我对PEG诱导细胞融合的观点和理解在我看来，PEG诱导细胞融合是一种非常有潜力的技术，可以在多个领域带来重要的突破和进展。

通过PEG诱导细胞融合，我们可以更好地理解细胞融合的机制，揭示细胞发育和生命过程中的重要信息。

PEG诱导细胞融合还可以应用于医学研究和治疗，如干细胞治疗和组织工程等。

实验3 PEG介导的动物细胞融合技术

中国海洋大学实验报告姓名：常天易系年级：海洋生命学院2012级专业：生物科学科目：分子细胞生物学实验学号：12050011006PEG 介导的动物细胞融合技术一、实验目的（１）、通过实验，对体细胞融合有一个清醒的认识（２）、通过ＰＥＧ介导鸡血细胞融合，初步掌握利用ＰＥＧ介导动物细胞融合的实验技术。

二、实验原理真核细胞通过介导和培养，两个或多个细胞合并成一个双核或多核的细胞的过程称为细胞融合，通过此技术可以实现不同种类的细胞的融合。

基因型相同的细胞融合称为同核体（ｈｏｍｏｋａｒｙｏｎ），基因型不同的细胞融合称为异核体（ｈｅｔｅｒｏｋａｒｙｏｎ）目前，诱导细胞融合的技术主要有三种：病毒，聚乙二醇（ＰＥＧ），电激。

第一种方法是通过生物病毒的方式，诱导细胞与细胞之间的融合。

后两种方法通过化学物理的手段使得细胞膜的膜脂类分子的排列发生变化，去掉作用因素后，质膜分子的排列恢复原有的形态，在恢复的过程中，可以诱导相接触的细胞发生融合。

ＰＥＧ介导的细胞融合，其融合效果受到以下几个因素的影响①、ＰＥＧ的分子量与浓度ＰＥＧ的分子量及其浓度越大，细胞融合效果越明显，但对细胞的毒性也越大。

本实验使用的ＰＥＧ分子量为４０００Ｄ，浓度为５０％②、ＰＥＧ的ｐｈ值经验证，ＰＥＧ的浓度在８.０～８.２时，融合效果最好③、ＰＥＧ处理时间处理实验越长，融合效果越好，但对细胞的毒性也越大。

故一般将处理时间限制在１分钟以内。

本实验不涉及后续的细胞培养，所以处理时间可适当放宽至数分钟④、融合时的温度温度越高，细胞膜脂质的流动性越好，故在细胞可以承受的范围内，适当的提高温度有利于细胞的融合三、实验材料新鲜鸡血０.８５％生理盐水ＧＫＮ液５０％ＰＥＧ液四、实验步骤取出鸡血悬液1ml，加入0.85%生理盐水，4ml，混匀。

1200r/min离心5分钟，移除上清液加入4ml 0.85%生理盐水，重悬细胞，1200r/min，离心5min，加入4ml 0.85%生理盐水，重悬细胞，1200r/min ，离心10min ，移除上清向离心沉淀中加入2mlGKN，使之成为10%的细胞悬液取血球悬液1ml，加入0.5ml 50%的PEG液，混匀，开始计时从计时开始，到盖上盖玻片在显微镜下观察为止。

利用聚乙二醇(简称PEG)为媒介物进行细胞融合实验原理及步骤

利用聚乙二醇（简称PEG）为媒介物进行细胞融合
一、溶液配制
①Alsver液（同前S）
②0。

85生理盐水液
③GKN液
NaCl 8g、KCl 0.4g、Na
2HPO
4
·2H
2
O1.77g，NaH
2
PO
4
·H
2
O 0.69g，Glucose（葡
萄糖）2g，酚红 0。

01g溶于1000ml重蒸水中。

④根据实验需要，称取少量PEG（MW=4000）放入刻度试管或刻度离心管内，在沸水浴或高压蒸汽灭菌30分钟，待冷却至50℃时，加入等体积并预热至50℃的GKN液混匀。

二、融合方法
注射器内先吸入2mlAlsver液，再从翼下静脉取鸡血2ml，注入管内，再加入Alsver液6ml，使成为悬液，混匀后放在4℃下，可使用3-4天。

取以上悬液1ml0。

85%生理盐水，混匀后，以1200rpm离心5分钟，去上清液后，再以上述条件离心两次（5分钟，10分钟）。

将最后一次离心沉淀的血球去上清液，加入适量GKN液，使成10%的悬液。

取上悬液，以血球计数法计数，再以GKN液稀释至每立方毫米含红细胞3-4万个。

取以上血球悬液1ml，加入0。

5ml 15%的PEG液混匀，在常温下2-3分钟后发即可进行镜检，并计算出融合率。

融合率指在显微镜的视野内，已发生融合的细胞其细胞核的总数与此视野内所有细胞（包括已融合细胞）的细胞核总数之比。

称为融合率，通常以百分数表示，而且要进行多个视野测定，再加以平均统计，更为准确。