最新脂肪干细胞的体外培养专业知识讲座
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干细胞技术: − 又称为再生医疗技术，是指通过对干细胞进行分离、体外培养、定向诱导、 甚至基因修饰等过程，在体外繁育出全新的、正常的甚至更年轻的细胞、 组织或器官，并最终通过细胞、组织或器官的移植实现对临床疾病的治疗。
干细胞是整个人体生长发育的基础“材料”。
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Zuk等认为，ASC可能由多种异源性细胞构成，其中包括内皮细胞、成纤 维细胞、平滑肌细胞以及前体脂肪细胞等。现有ASC主要由成纤维细胞以 及来自间叶组织的细胞构成，仅伴有少量内皮细胞与平滑肌细胞。上述细 胞在ASC中的含量甚低，不可能定向培养分化为其他组织细胞，但进一步 确认和识别真正的ASC的表面蛋白及其基因仍是必要的。
a)粘附分子：ADAS细胞始终表达tetraspan蛋白(CD9)、整合素β1(CD29)和 α4(CD49 d)；细胞间粘附分子1(ICAM 1，CD54)、endoglin(cd102)、血管细胞 粘附分子(VCAM，CD106)及活化的淋巴细胞粘附分子(ALCAM，CD166)。但不表 达神经细胞粘附分子(NCAM，CD56)、细胞间粘附分子3(ICAM-3，CD50)、整合 素αb(CD11b)和β2(CD18)及内皮选择蛋白(E selectin，CD62)； b)分子受体：可表达透明质酸盐(CD44)和转铁蛋白(CD71)的受体； c)细胞外基质蛋白和糖蛋白：ADAS细胞能生成Ⅰ和型胶原、骨桥蛋白、ostenectin 、Thy-1(CD90)和MUC-18(CD146)； d)肌蛋白：能表达平滑肌细胞内的肌动蛋白和波形蛋白；e)造血细胞标记：不表达 造血细胞标志物CD14、CD31或CD45； f)补体调节蛋白：确定能表达衰变加速因子(CD55)和补体蛋白； g)组织相容性抗原：表达类组织相容性蛋白HLA-ABC，而不表达类蛋白HLA-DR。
ASC和BMSC均表达CD13、CD29、CD44、CD105，均不表达CD31、CD34、 CD45、HLA-DR。虽然从分子标识上看ASC和BMSC具有相同的表面粘附分子 和受体分子，但两者仍有区别。ASC表达CD49d，而不表达CD106，BMSC则 相反，造成这种区别的机制可能与细胞所处的微环境及具体功能有关。
间充质干细胞没有特异的表面标志已得到公认。免疫组化染色和流式细胞仪检 测等免疫表型的结果对确认脂肪干细胞有辅助作用，但鉴定脂肪干细胞的最好 方法是进行多系定向诱导，并进行相应检测以确定诱导成功。
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在缺少分化刺激因子的条件下，ASC表面标志蛋白有HLA-ABC、CD9、CD10、 CD13、CD29、CD34、CD44、CD49、CD54、CD55、CD59、CD105、CD146、 CD166；
经过14d的诱导培养后, ASC虽然发生了形态变化，表现出成脂细胞、成软骨细 胞、成骨细胞等分化的特征，但表面蛋白的表达却大致与未分化前一致，这些 表面蛋白与BMSC的表面蛋白很相似。
不同的试验结果结果有不同，但这种差异可能是在细胞分离、培养、纯正 化方法不同，以及免疫组化技术和流式细胞仪敏感性的不同而造成。总的 来说，PAL细胞的免疫表型与已经报道的骨髓间充质干细胞是相似的。
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脂肪来源间充质干细胞 (Adipose Derived Msenchymal Stem Cell, AD-MSC(ASC))
不富含CD34+细 胞,SVF培养P2之后
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脂肪干细胞生物学特性
2001年，Zuk等首次从人抽脂术抽取的脂肪组织中分离出一种多向分化干 细胞，因其与骨髓间充质干细胞(BMSC)形态相似而称为脂肪间充质干细胞 （ASC）。
脂肪干细胞具有向脂肪、骨、软骨、肌肉、内皮、造血、肝、胰岛和神经 等多种细胞方向分化的多分化潜能,是一种理想的种子细胞。因脂肪干细胞 具有分化为脂肪的潜能，且其具有易获得性、可迅速扩增、不易衰老等特 点，目前脂肪干细胞已成为脂肪组织工程中种子细胞的研究热点。
脂肪干细胞在脂肪组织中含量很低，要利用脂肪干细胞就必须进 行体外分离培养扩增。常用的方法是将剪碎的脂肪组织消化离心，倾 去上层脂肪及上清，获得基质血管层，将其收集到培养瓶中培养，除 去未贴壁的红细胞和残渣，剩余的细胞群体称为加工过的脂肪吸取物 。原代培养的细胞中贴壁的细胞较少，细胞生长至融合后传代，传代 后的细胞称为脂肪干细胞。平均每300mL脂肪组织可获得2×108～ 6×108 个这样的细胞。
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脂肪来源血管基质成分
(Stromal Vascular Fraction,SVF)
富含大量的CD34+细胞, 从脂肪组织直接获得
脂肪来源干细胞
(Adipose Derived Stem Cell, ADSC)
富含一定量的CD34+细 胞,SVF培养P0-P2
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干细胞（Stem cell，SC）： − 干细胞（Stem cell，SC）是有自我复制、高度增殖和多向化潜能的细胞群 体，这些细胞以通过细胞分裂维持自身细胞的大小，同时又可以进一步分 成为各种不同的组织细胞，从构成机体各种复杂的组织器官。
干细胞是整个人体生长发育的基础“材料”。
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Zuk等认为，ASC可能由多种异源性细胞构成，其中包括内皮细胞、成纤 维细胞、平滑肌细胞以及前体脂肪细胞等。现有ASC主要由成纤维细胞以 及来自间叶组织的细胞构成，仅伴有少量内皮细胞与平滑肌细胞。上述细 胞在ASC中的含量甚低，不可能定向培养分化为其他组织细胞，但进一步 确认和识别真正的ASC的表面蛋白及其基因仍是必要的。
a)粘附分子：ADAS细胞始终表达tetraspan蛋白(CD9)、整合素β1(CD29)和 α4(CD49 d)；细胞间粘附分子1(ICAM 1，CD54)、endoglin(cd102)、血管细胞 粘附分子(VCAM，CD106)及活化的淋巴细胞粘附分子(ALCAM，CD166)。但不表 达神经细胞粘附分子(NCAM，CD56)、细胞间粘附分子3(ICAM-3，CD50)、整合 素αb(CD11b)和β2(CD18)及内皮选择蛋白(E selectin，CD62)； b)分子受体：可表达透明质酸盐(CD44)和转铁蛋白(CD71)的受体； c)细胞外基质蛋白和糖蛋白：ADAS细胞能生成Ⅰ和型胶原、骨桥蛋白、ostenectin 、Thy-1(CD90)和MUC-18(CD146)； d)肌蛋白：能表达平滑肌细胞内的肌动蛋白和波形蛋白；e)造血细胞标记：不表达 造血细胞标志物CD14、CD31或CD45； f)补体调节蛋白：确定能表达衰变加速因子(CD55)和补体蛋白； g)组织相容性抗原：表达类组织相容性蛋白HLA-ABC，而不表达类蛋白HLA-DR。
ASC和BMSC均表达CD13、CD29、CD44、CD105，均不表达CD31、CD34、 CD45、HLA-DR。虽然从分子标识上看ASC和BMSC具有相同的表面粘附分子 和受体分子，但两者仍有区别。ASC表达CD49d，而不表达CD106，BMSC则 相反，造成这种区别的机制可能与细胞所处的微环境及具体功能有关。
间充质干细胞没有特异的表面标志已得到公认。免疫组化染色和流式细胞仪检 测等免疫表型的结果对确认脂肪干细胞有辅助作用，但鉴定脂肪干细胞的最好 方法是进行多系定向诱导，并进行相应检测以确定诱导成功。
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在缺少分化刺激因子的条件下，ASC表面标志蛋白有HLA-ABC、CD9、CD10、 CD13、CD29、CD34、CD44、CD49、CD54、CD55、CD59、CD105、CD146、 CD166；
经过14d的诱导培养后, ASC虽然发生了形态变化，表现出成脂细胞、成软骨细 胞、成骨细胞等分化的特征，但表面蛋白的表达却大致与未分化前一致，这些 表面蛋白与BMSC的表面蛋白很相似。
不同的试验结果结果有不同，但这种差异可能是在细胞分离、培养、纯正 化方法不同，以及免疫组化技术和流式细胞仪敏感性的不同而造成。总的 来说，PAL细胞的免疫表型与已经报道的骨髓间充质干细胞是相似的。
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脂肪来源间充质干细胞 (Adipose Derived Msenchymal Stem Cell, AD-MSC(ASC))
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脂肪干细胞生物学特性
2001年，Zuk等首次从人抽脂术抽取的脂肪组织中分离出一种多向分化干 细胞，因其与骨髓间充质干细胞(BMSC)形态相似而称为脂肪间充质干细胞 （ASC）。
脂肪干细胞具有向脂肪、骨、软骨、肌肉、内皮、造血、肝、胰岛和神经 等多种细胞方向分化的多分化潜能,是一种理想的种子细胞。因脂肪干细胞 具有分化为脂肪的潜能，且其具有易获得性、可迅速扩增、不易衰老等特 点，目前脂肪干细胞已成为脂肪组织工程中种子细胞的研究热点。
脂肪干细胞在脂肪组织中含量很低，要利用脂肪干细胞就必须进 行体外分离培养扩增。常用的方法是将剪碎的脂肪组织消化离心，倾 去上层脂肪及上清，获得基质血管层，将其收集到培养瓶中培养，除 去未贴壁的红细胞和残渣，剩余的细胞群体称为加工过的脂肪吸取物 。原代培养的细胞中贴壁的细胞较少，细胞生长至融合后传代，传代 后的细胞称为脂肪干细胞。平均每300mL脂肪组织可获得2×108～ 6×108 个这样的细胞。
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脂肪来源血管基质成分
(Stromal Vascular Fraction,SVF)
富含大量的CD34+细胞, 从脂肪组织直接获得
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富含一定量的CD34+细 胞,SVF培养P0-P2
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干细胞（Stem cell，SC）： − 干细胞（Stem cell，SC）是有自我复制、高度增殖和多向化潜能的细胞群 体，这些细胞以通过细胞分裂维持自身细胞的大小，同时又可以进一步分 成为各种不同的组织细胞，从构成机体各种复杂的组织器官。