常见致病菌检测

常见致病菌的检测

摘要：近年来食品药品安全的问题屡见不鲜，做好致病菌的检测，是防范于未然的措施，因而显得尤为的重要，也越来越受到人们的重视。这就要求我们对一些常见的致病菌检测技术的要有一定的了解。

关键词：致病菌，肠球菌，霉菌和酵母菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌。一.肠球菌

（1）、形态与染色【1】

肠球菌为革兰阳性（G+）球菌,广泛分布于自然环境及人和动物消化道内。20世纪80年代以来，肠球菌严重感染的发生率和病死率明显升高，并且由于肠球菌的固有耐药和获得性耐药，使许多常用抗菌药物在治疗肠球菌感染时失败。因此，从分子水平对肠球菌致病因子、肠球菌引起的感染机制与治疗的研究显得尤为重要。肠球菌为圆形或椭圆形、呈链状排列的革兰阳性球菌，无芽胞，无鞭毛，为需氧或兼性厌氧菌。本菌对营养要求较高，在含有血清的培养基上生长良好。

（3）致病性【1】

一般而言，肠球菌的毒力不高。与和相比，肠球菌对大多数动物的半数致死量（LD50）值相当高，而且肠球菌很少引起蜂窝织炎和呼吸道感染。

肠球菌只有在宿主组织寄殖，耐机体非特异及免疫防御机制，并引起病理改变，才能导致感染。粘附测定显示肠球菌可通过细菌表面表达的为粘附素，吸附至肠道、尿路上皮细胞及心脏细胞。这些粘附素的表达亦受细菌生长环境的影响。另外，肠球菌可产生一种聚合物质（系一种蛋白表面物质，可聚集供体与受体菌，以利质粒转移），在体外增强其对肾小管上皮细胞的粘附。

细菌生长环境亦影响肠球菌与多形核白细胞反应。中生长的肠球菌与多形核反应较弱，而肉汤中生长的细菌反应较强。体外多形核白细胞对肠球菌的有效杀灭作用需血清补体蛋白参与，而抗肠球菌抗体可增强该作用。

（4）、肠球菌属主要检测步骤如下：【2】

方法一：肠球菌平板计数法检验程序

25g (mL) + 225 mL 缓冲蛋白胨水

↓

10 倍梯度稀释

↓

选择2 个~3 个适宜连续稀释度，各取1 mL 分别加入灭菌培养皿

↙↘

KF琼脂36℃士1℃ 48h 士2h肠球菌琼脂35℃士2℃ 24h士2h

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确证实验

↓

肠球菌阳性

↓

菌落计数及计算

↓

报告结果

方法二：肠球菌最近似值（MPN ）测定法检验程序

25g（mL ) + 225 mL 缓冲蛋白胨水

↓

10 倍梯度稀释

↓

选择3 个适宜连续稀释度，各取1 ml 分别加入肉汤中

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叠氮化钠葡萄糖肉汤管肠球菌肉

汤管

37℃士1℃ ,

24h~48h 35C 士2 ℃ 24h 士2h

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↓

无混浊混

浊变黑不变黑

↓↓

↓↓

肠球菌阴性确证实

验确证实验肠球菌阴性

↓↓

肠球菌阳性肠球菌阳性

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MPN 值法报告肠球菌数／g(mI)

二．霉菌和酵母菌

（1）、形态【1】

酵母菌是单细胞真核微生物。酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。比细菌的单细胞个体要大得多，一般为1-5

微米×5-30微米。酵母菌无鞭毛，不能游动。其具有典型的真核细胞结构，有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、线粒体等，有的还具有微体。

霉菌是丝状真菌的俗称，意即“发霉的真菌”，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是霉菌。霉菌的菌丝。构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很像一根透明胶管，它的直径一般为3-10微米，比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。菌丝可伸长并产生分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。根据菌丝中是否存在隔膜，可把霉菌菌丝分成两种类型：无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。

（2）霉菌和酵母菌主要检测步骤如下【3】

检样

↓

21ml样品＋225ml无菌蒸馏水，均质

↓

10倍系列稀释

↓

选择2 个~3 个适宜连续稀释度，各取1 mL 分别加入灭菌培养皿

↓

每皿中加入15~20mlm马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基

↓

28℃士1℃ 5d

菌落计数及计算

↓

报告结果

三．金黄色葡萄球菌

（1）.生物学特性【4】

典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。

（2）致病性【2】

a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；

b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；

c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关；

d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌；

e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F五种血清型。

（3）.金黄色葡萄球菌主要检测步骤如下【5】

25g（mL ) + 225 mL 生理盐水或磷酸盐缓冲液

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10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤

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37℃士1℃ 18h~24h

Baird-Parker平板，血平板

↓

37℃士1℃血平板18h~24h，Baird-Parker平板或15h~48h

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涂片染色观察溶血 BHI肉汤和营养琼脂小斜面

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血浆凝固酶试验

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报告