体外诊断试剂 校准品量值溯源报告 赋值及不确定度 企业参考品赋值 25-羟基维生素D测定试剂盒(免疫荧光法)

25-羟基维生素D测定试剂盒（免疫荧光法）

校准品溯源报告

1.目的

制备性能稳定的工作校准品，用作25-羟基维生素D测定试剂盒（免疫荧光法）的质控控制。

2.范围

适用于25-羟基维生素D测定试剂盒（免疫荧光法）校准品的溯源、制备、赋值。3.制备过程

3.1材料

（1）高纯度的25-羟基维生素D抗原（纯度≥99%）。

（2）采用标准小牛血清作为基质。

3.2制备方法

取适量高纯度的25-羟基维生素D抗原（纯度≥99%），用标准小牛血清将其稀释成约6.5、20、30、50、100ng/mL。

4.浓度测定、赋值过程

4.1试剂

参考测量程序：

Immunodiagnostic Systems Limited生产的25羟基维生素D检测试剂盒（酶联免疫法），注册证号：国械注进20172402311。

常规测量程序：

****生物25羟基维生素D测定试剂盒（免疫荧光法）、干式免疫荧光分析仪；

有证参考物质：NIST SRM1950。

4.2赋值流程

按下图的溯源流程对制备的工作校准品进行赋值。

校准

物质

程序实施

4.2.1操作步骤

4.2.1.1制造商选定测量程序（参考测量程序）的校准

按《GB/T21415-2008/ISO17511:2003体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》4.2.2f 要求:制造商选定测量程序应是一个或多个现有一级或二级校准品校准的测量系统。

用参考测量程序重复测量NIST SRM1950，对测量结果进行Z 检验，验证测量值是否与参考物质的理论值存在显著差异。

Z 检验一般用于大样本(即样本容量大于30)平均值差异性检验的方法。它是用标准正态分布的理论来推断差异发生的概率，从而比较两个平均数的差异是否显著。另外，对于Z 检验我国的统计学教材大多采用U 检验的说法。而国外英文统计学书籍，大多采用Z 检验。

在δ已知的情况下，单个平均数的显著性检验—u 检验（u-test）统计量计算公式如下：

计量学溯源

国际公认参考测量程序

NIST SRM1950

制造商工作校准品

IVD 制造商内部参考测量程序：

Immunodiagnostic

Systems Limited 生产的25羟基维生素D 检测试剂盒（酶联免疫法）IVD 常设测量程序本公司产品多次测量

制造商产品校准品

IVD 制造商常规测量程序

临床样本

临床检测结果

中检所或相关组织

****IVD 制造商

终端用户

n

0δu x u -=

参考测量程序校准结果如下：

NIST SRM1950（24.78±0.77ng/ml,k=2）参考测量程序测量值

24.7626.0825.5825.7623.1223.1823.1224.8226.2224.1623.0424.7623.0026.6425.5026.3025.1422.8425.1026.2023.2824.7826.1624.3422.8424.4024.6225.1226.2223.8625.5626.4223.0825.5026.7625.2424.68

23.12

24.94

26.10

25.68

25.54

NIST SRM1950的理论值u 0=24.78ng/mL，包含因子k 取2，则不确定度（δ）取值为0.385ng/mL，经计算，统计量u=1.122

校准结果显示，参考测量程序检测结果与理论值差异不明显，测量误差由随机因素造成，可用y=x 公式用于参考测量程序对工作校准品赋值,不必引入校正因子。4.2.1.2工作校准品的赋值

按《GB/T21415-2008/ISO17511:2003体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》4.2.2g 的要求：制造商工作校准品应由一个或多个制造商选定测量程序赋值。

用参考测量程序测工作校准品20次，以其平均值为工作校准品的赋值，结果如下：水平1：

实验次数

测量结果ng/ml

实验次数测量结果ng/ml

1 6.5811 6.83

2 6.0212 6.81

3 6.4313 6.97

4 5.98147.37

5 5.86157.14

6 5.8216 6.2177.421

7 5.57

8 5.82

18 6.80

9 5.8419 6.78

10 6.6820 6.93

平均值（赋值） 6.50标准差0.57

水平2：

实验次数测量结果ng/ml实验次数测量结果ng/ml 121.601118.06

219.021221.42

319.581318.36

421.901420.14

520.121521.22

620.481619.42

719.081721.92

818.521818.72

921.541918.42

1020.422020.00

平均值（赋值）20.00标准差 1.29

水平3：

实验次数测量结果ng/ml实验次数测量结果ng/ml 127.871129.43

231.681229.13

332.641329.10

429.791431.50

532.041527.90

628.201629.13

728.201728.89

832.521831.35

932.791929.67

1029.732028.32

平均值（赋值）30.00标准差 1.70

水平4：

实验次数测量结果ng/ml实验次数测量结果ng/ml 150.881150.83

248.551249.58

348.981349.25

452.201448.50

551.531552.30

649.081650.18

748.631750.08

851.431850.53

949.501950.60

1048.882048.30