血清肌酸激酶测定标准操作规程

血清肌酸激酶测定标准操作规程

1 检验申请

单独检验项目申请：血清肌酸激酶(缩写CK)测定，各种体液肌酸激酶测定；组合项目申请：血生化中心肌酶谱项目测定。临床医生根据需要提出检验申请。

2 标本采集与处理

2.1标本采集

2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。检查体液乳酸脱氢酶的体液标本应用肝素抗凝。

2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5下列标本为不合格标本

2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。

2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2标本保存

2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。

2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定4h，普通冰箱中（2～8℃）稳定12h。-20℃保存稳定30天。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。

2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。 2.3 标本采集的注意事项

2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，24h 不饮酒和12h 以上禁食空腹状态。 2.3.2 注意有无应用影响测试项目的药物。 2.3.3 可以使用肝素抗凝的血液标本。

3 方法原理

通过下面的3个反应式表示反应，在两个工具酶的参与下，将CK 的活性与NADPH 生成的量或速率相联系，在340nm 波长处连续监测NADPH 吸光度的增加速率，推算出CK 的活性。

ATP ADP CK +−→−+肌酸磷酸肌酸

ADP 6ATP HK +--−→−+磷酸葡萄糖葡萄糖

NADPH 6NADP 6PDH 6G +-−−−→−+

--磷酸葡萄糖酸磷酸葡萄糖

4 试剂及其他用品

4.1 试剂：肌酸激酶测定试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品。

4.2 试剂盒保存：未开瓶的试剂储存在2～8℃可稳定至有效期。试剂开瓶后，在仪器冰箱试剂仓中可保存28天。开盖后避免污染。当试剂变混浊，或者未开盖的液体有沉淀，或起始吸光率>0.8时，表明试剂已变质，不能继续使用。

4.3 试剂盒准备：液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。 4.4 试剂盒主要成分：

5 校准品与校准模式

校准品：不使用校准品，以NADPH的双波长（340/380nm）摩尔吸光系数计算CK活性

6 质控品与室内质控规则

6.1质控品采用由Beckman-Coulter公司提供的两个不同水平未定值质控血清。

6.2质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。

6.3质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。

6.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。

7 适用仪器

适用AEROSET和C16000全自动生化分析仪器全自动生化分析仪器。

8 标本检测步骤

装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。

9．主要分析参数

参见说明书。

10 结果计算

计算公式：CK(U/L) ＝ 3

)660340(10min min

--⨯⨯⨯⨯

∆=

⨯∆εl V V A K A

s

T

nm

公式中ΔA/min 即单位时间中吸光度降低的值，V T 为总反应体积ml （试剂总量＋标本量），V s 为标本体积ml ，l 为比色皿光径cm ，ε为NADPH 的340/380nm 测定的毫摩尔消光系数。仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。

11 检验结果的报告及范围

11.1 结果的报告

11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。

11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。

11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。

11.2 报告范围： 0～1200 U/L ，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。

12 操作性能

12.1 精密度：CV<0.52%，批间CV<3.21%。

12.2 方法的有限性及干扰因素：内源性干扰物溶血为1000mg/ml 、脂血2000mg/ml 、黄疸30mg/ml 、抗坏血酸300mg/ml 对测试结果无明显影响

12.3 灵敏度：肌酸磷酸激酶浓度为：500U/L 时，吸光度变化率ΔA 340nm /min 为0.130～0.158 12.4 线性范围：5～1200 U/L 。

13 参考范围及医学决定水平

0～190U/L

14 临床意义

14.1肌酸激酶广泛分布于骨胳肌、心肌、脑组织中，肝和红细胞不含此酶。CK是诊断急性心肌梗死（AMI）的酶学指标之一，但总CK的意义不及CK-MB。现在更受重视的AMI的实验室诊断指标是心肌肌钙蛋白。

14.2 CK也是反映神经肌肉损伤的敏感指标。各种肌营养不良均有血清CK活性增高，脑血管病及脑膜炎、脑炎、急性精神病患者血清CK活性也可升高。

15 结果审核以及分析与相关项目的联系

15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。

15.2认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。

15.3相关项目：审核与心肌酶谱其他酶的关系。如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。

16 无威胁生命的“紧急值”及报告规定

17 有关引用程序与文件

17.1 Abbott自动生化分析仪仪器标准操作规程。

17.2生化检验室内质控标准操作程序。

17.3 检验结果审核程序。

17.4标本送检和接收程序。

18 参考文献

18.1陆永绥，张伟民主编. 临床检验管理与技术规程. 杭州:浙江大学出版社, 2004.

18.2北京利德曼生化股份有限公司肌酸激酶测定试剂盒说明书。