血清肌酸激酶测定标准操作规程
心肌酶的检测方法
心肌酶谱的检测方法1 检验目的规范检测“肌酸激酶（CK）”的过程。
2 适用范围适用于正常人和病人血清“肌酸激酶（CK）”的测定。
3 职责3.1 责任人：生化室当班工作人员。
3.2 质量要求：按照《临床化检验室内质量控制作业指导书》进行室内质控，合格后可发报告。
3.3 完成时间：门诊检验结果当天下午2:30发报告；病房检验结果当天下午4:00发报告。
4 检验原理：酶偶联法CK磷酸肌酸＋ADP－→葡萄糖－6－磷酸＋ADPG6PDH葡萄糖－6－磷酸＋NADP－→6－磷酸－葡萄糖酸＋NADPH＋H＋，NADPH的生成。
引起在340nm吸光度上升，上升的速率与CK的活力成正比，可以用（340nm和405nm）速率法测量。
5 样本要求：5.1 样本类型\样本量:空腹取静脉血3ml(血清或肝素抗凝血浆),按顺序将申请单和样本一一对应编号。
认真检查检验材料、检验目的、病人姓名、性别、科室、床号、血液量等。
5.2 容器和抗凝剂种类: 黄色胶头试管，含促凝剂；红色胶头普通生化管；肝素钠、肝素锂抗凝试管。
5.3 样本处理方法将已编号的样本放入37℃的水温箱中，待血液自动凝固后，取出配平离心，3000r/min×5min。
将血清分离放入DADE BEHRING RXL专用样本杯后，仔细观察是否符合要求，否则申请重新采集样本; 上雅培AEROSET全自动生化分析仪直接将试管放入样本架上。
5.4 样本的稳定性:血清、血浆肌酸激酶（CK在20-25℃放置可保存1天，2-8℃贮存最多7天；冷冻保存可超过1个月。
已检测标本2—8℃保存3天。
6 仪器：杜邦RXL全自动生化分析仪雅培AEROSET全自动生化分析仪7 试剂:7.1 杜邦RXL全自动生化分析仪配套试剂；雅培AEROSET全自动生化分析仪配套试剂。
7.2 杜邦RXL全自动生化分析仪配套试剂准备:将肌酸激酶（CK）试剂船按仪器操作说明书加入仪器试剂仓内。
避光，2-8℃保存24hr，15-25℃保存5hr。
心肌同工酶(CK-MB)测定操作规程(SOP)
心肌同工酶(CK-MB)测定操作规程（SOP）一、用途本产品用于体外定量测定血清样品中肌酸激酶同工酶（CKMB）的活性。
二、临床意义（一）概述肌酸激酶是由M型和B型两种亚基组成的二聚体，结合形成三种CK同工酶：CK-BB、CK-MB、CK-MM。
骨骼肌中大多数为CK-MM；胃肠道和脑组织中以CK-BB为主；心肌中以CK-MB为主。
当心肌损害，特别是发生心肌梗塞时，血液中CK-MB水平升高。
胸疼发生后4-6小时CK-MB水平开始升高，12-24小时到达高峰，48小时后回到基质水平。
（二）临床意义CK－MB主要存在于心肌中，约为心肌总CK的１4％,血清CK-MB上升先于总活力的升高，24小时达峰值，36小时内其波动曲线与总活力相平行，至48小时消失。
（三）医学决定水平15U/L: 高于此值，且有持续性临床表现（胸痛、心电图显示特异性改变等），提示为急性心肌梗塞，应及时进行治疗。
90U/L: 高于此值多由于非心肌性CK-MB释放，如恶性肿瘤，应采取其他有关诊断方法，予以确诊。
三、检验原理磷酸肌酸 + ADP −−→−-B CK肌酸 + ATP ATP + 葡萄糖−−→−HK葡萄糖-6-磷酸 + ADP葡萄糖-6-磷酸 + NADP −−−−→−PDH G 66-磷酸-葡萄糖 + NADPH + H+用特异的抗CK-M 抗体抑制CK-M 的活性，在340nm 波长处，通过连续监测吸光度的上升速率(△A ／min)，测定CK-B 的活性，将CK-B 活性测定值乘以2，即可计算出样品中CK-MB 的活性。
四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。
样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。
肌酸激酶测定SOP_CK临床意义_检验科生化项目SOP
推荐选用血清。酶活性的高低易受标本采集时间的影响较大。避免溶血、脂血、黄疸。
3试剂和设备
3.1试剂
采用西门子医学诊断产品（上海）有限公司提供的试剂盒。
3.1.1试剂组成
试剂船1~6孔为己糖激酶4500 U/L，G-6-PDH 2800 U/L，ADP1.88 Mm，磷酸肌酸18.1 mM，葡萄糖11.65 mM，NADP2.88 mM，缓冲液，AK抑制物，激活剂物，片剂。
3.1.2试剂准备
直接使用。
3.1.3试剂保存
试剂2~8℃保存，有效期内稳定。
肌酸激酶测定
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版本号：
页码：第页共页
3.2质控品
美国BIORAD液体多项质控品。
3.3校准品
西门子校准品。
3.4仪器
SIEMENS DIMENSION Xpand Plus/RxL Max全自动生化分析系统。
4操作程序
磷酸肌酸+ ADPCK肌酸+ ATP
Mg++，DTE，EDTA
ATP +葡萄糖HKADP +葡萄糖-6-磷酸盐
Mg++
葡萄糖-6-磷酸盐+ NADP+G-6-PDH6-磷酸葡萄糖内酯+NADPH+(H+)
2标本采集与处理
2.1采血方法
空腹采不抗凝静脉血2~3ml。
2.2标本保存
采集后应及时送检。如果不能及时送检，应将标本及时离心后分离血清，避光置冰箱保存。室温4h、4℃8~12h、冰冻3~4天能维持活性不变。
但在肌肉损伤或疾病，甚至肌注某些药物如青霉素、氯丙嗪等以及电复律、心导管检查时也可引起肌酸激酶活性升高。故肌酸激酶诊断急性心肌梗死阳性率虽高达98%，但特异性不高，约为85%，如有可能同时作肌酸激酶同工酶检查会更好。
心肌酶的检测方法
心肌酶谱的检测方法1 检验目的规范检测“肌酸激酶（CK）”的过程。
2 适用范围适用于正常人和病人血清“肌酸激酶（CK）”的测定。
3 职责3.1 责任人：生化室当班工作人员。
3.2 质量要求：按照《临床化检验室内质量控制作业指导书》进行室内质控，合格后可发报告。
3.3 完成时间：门诊检验结果当天下午2:30发报告；病房检验结果当天下午4:00发报告。
4 检验原理：酶偶联法CK磷酸肌酸＋ADP－→葡萄糖－6－磷酸＋ADPG6PDH葡萄糖－6－磷酸＋NADP－→6－磷酸－葡萄糖酸＋NADPH＋H＋，NADPH的生成。
引起在340nm吸光度上升，上升的速率与CK的活力成正比，可以用（340nm和405nm）速率法测量。
5 样本要求：5.1 样本类型\样本量:空腹取静脉血3ml(血清或肝素抗凝血浆),按顺序将申请单和样本一一对应编号。
认真检查检验材料、检验目的、病人姓名、性别、科室、床号、血液量等。
5.2 容器和抗凝剂种类: 黄色胶头试管，含促凝剂；红色胶头普通生化管；肝素钠、肝素锂抗凝试管。
5.3 样本处理方法将已编号的样本放入37℃的水温箱中，待血液自动凝固后，取出配平离心，3000r/min×5min。
将血清分离放入DADE BEHRING RXL专用样本杯后，仔细观察是否符合要求，否则申请重新采集样本; 上雅培AEROSET全自动生化分析仪直接将试管放入样本架上。
5.4 样本的稳定性:血清、血浆肌酸激酶（CK在20-25℃放置可保存1天，2-8℃贮存最多7天；冷冻保存可超过1个月。
已检测标本2—8℃保存3天。
6 仪器：杜邦RXL全自动生化分析仪雅培AEROSET全自动生化分析仪7 试剂:7.1 杜邦RXL全自动生化分析仪配套试剂；雅培AEROSET全自动生化分析仪配套试剂。
7.2 杜邦RXL全自动生化分析仪配套试剂准备:将肌酸激酶（CK）试剂船按仪器操作说明书加入仪器试剂仓内。
避光，2-8℃保存24hr，15-25℃保存5hr。
实验二十四 肌酸激酶测定
一、实验原理： 磷酸肌酸＋ADP CK 肌酸＋ATP ATP＋葡萄糖 HK 葡萄糖－6－磷酸＋ ADP 葡萄糖－6－磷酸＋NADP G6PDH ＋ 6－磷酸－葡萄糖酸＋NADPH＋H
二、实验试剂： R1：HK、 G6PDH、ADP、AMP、AP5A、 NADP、NAC R2：葡萄糖、缓冲液 10mlR2复溶R1，混匀，即为工作液。
实验二十四 酶偶联法测定肌酸激酶
临床意义
CK主要分布于骨骼肌、心肌和脑。以骨骼 肌含量最高，其次为心肌， 肌酸激酶的同工酶： CK-MM型主要存在于各种肌肉细胞 中 CK-BB型主要存在于脑细胞中 CK-MB型主要存在于心肌细胞中 临床上测定的血清CK指的是总的活性。
临床意义
检查血清CK是诊断神经肌肉病的最有价 值和最敏感的检查方法之一。一般情况 下，患进行性肌营养不良、肢带型肌营 养不良、肌炎等肌肉病时，CK升高非常 明显（超过正常的30倍）。 CK主要用于心肌梗死的诊断。此酶对诊 断心肌梗死较AST、LD的阳性率高，特异 性强，是用于心肌梗死早期诊断的一项 较好指标，同时对估计病情和判断预后 也有参考价值。
三、实验操作： 蒸馏水 血清 试剂 空白 20μl 0.5ml 测定 20μl 0.5ml
混匀37℃水浴2min,半自动生化分析 仪测定 测试程序17
四.参考值： CK：男：24-195U/L 女：24-170U/L
五、注意事项：
1、血清中CK异常高时，用生理盐 水稀释后。结果乘以稀释倍数。 2、血清中CK不稳定，样品收集后 要尽快分析，在室温4小时，在4℃8-12 小时，CK活性下降。
血清肌酸激酶同工酶测定标准操作规程
33、血清肌酸激酶同工酶测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清肌酸激酶同工酶测定(缩写CK-MB), 组合项目申请：血生化中心肌酶谱项目测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
检查体液乳酸脱氢酶的体液标本应用肝素抗凝。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定4h，普通冰箱中（2～8℃）稳定8h 。
-20℃保存稳定30天。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3 标本采集的注意事项2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，24h 不饮酒和12h 以上禁食空腹状态。
2.3.2 注意有无应用影响测试项目的药物。
2.3.3 可以使用肝素抗凝的血液标本。
3 方法原理试剂中抑制CK 同工酶CK-M 的抗体，完全抑制CK-M 的活性而不影响另一种CK 同工酶CK-B 的活性。
CK-B 在两个工具酶的参与下，通过下面三个反应式所表示的反应，最后使NADP 转化成在340nm 波长处有光吸收的NADPH ，在340nm 波长处连续监测NADPH 吸光度的增加速率，推算出CK-B 的活性。
肌酸激酶同工酶定量测定试剂盒标准操作程序
肌酸激酶同工酶测定标准操作程序1. 摘要肌酸激酶MB 型同工酶（CK-MB ）试剂盒（免疫抑制法）试剂盒适用于在生化分析仪上定量测定人血清肌酸激酶MB 型同工酶（CK －MB ）的活力。
2. 适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中CK-MB 的浓度。
3. 职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定CK-MB 浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行,室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的肌酸激酶MB 型同工酶（CK-MB ）试剂盒采用的是免疫抑制法。
5. 原理应用抗CK-M 抗体抑制CK-M ，但不影响MB 和BB 中B 单位活性，然后用CK 试剂（NAC 为激活剂）测试CK 的活力，测得的CK 活力乘以2即为CK-MB 活力，即肌酸激酶（CK ）催化磷酸肌酸与二磷酸腺苷（ADP ）反应产生三磷酸腺苷（ATP ）与肌酸；偶联己糖激酶（HK ）及葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G6PD ）的催化反应。
HK 催化葡萄糖与ATP 反应，形成葡萄糖－6－磷酸（G6P ），G6PD 催化G6P 氧化，形成6－磷酸葡萄糖内酯（6－PG ）及还原型辅酶Ⅱ（NADPH ）。
NADPH 形成的速率与血清中肌酸激酶（CK ）的活性成正比。
+-+++−−−→−+++−→−++−−−→−+H NADPH O H NADP ADPATP ATPADP DH P G HK PH CK 磷酸葡萄糖酸磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖葡萄糖肌酸磷酸肌酸-6--6--6-628.6,6. 仪器日立7600自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：R1：咪唑缓冲液，醋酸镁，葡萄糖，EDTA ，AMP,ADP,NAD,5-磷酸二腺苷，N-乙酰半胱氨酸，己糖激酶，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，抗CK-M 抗体，防腐剂R2: 咪唑缓冲液，磷酸肌酶，防腐剂7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
血清肌酸激酶MB同工酶测定
血清肌酸激酶MB同工酶测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理使用CK-M 多克隆抗体对肌酸激酶（CK）中CK-M同工酶的活性进行抑制后，采用德国临床化学会（DGKC）和国际临床化学会（IFCC）推荐的连续监测法测定余下的肌酸激酶（CK）活性。
其反应原理如下：⑴CK-MM 型同工酶 + CK-M抗体→ CK-MM型同工酶的活性被抑制；CK-MB 型同工酶+ CK-M 抗体→ 50%的CK-MB 型同工酶的活性被抑制；⑵剩余的50%无活性的CK-MB型同工酶 + N-乙酰半胱氨酸→有活性的CK-B型同工酶CK同工酶⑶磷酸肌酸 + ADP 肌酸 + ATP己糖激酶(HK)ATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖-6-磷酸(G6P-DH)葡萄糖-6-磷酸+NADP+6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+式中：ADP为二磷酸腺苷；ATP为三磷酸腺苷；NADP+为氧化型辅酶II；NADPH+H+为还原型辅酶II。
在上述反应中，NADPH+H+ 的生成速率与样本中肌酸激酶B 型同工酶（CK-B）的活性成正比。
通过在波长340nm 处监测吸光度值的上升速率，即可测得样本中肌酸激酶B 型同工酶（CK-B）的活性。
肌酸激酶B 型同工酶（CK-B）活性相当于1/2肌酸激酶MB型同工酶的活性，将所测得的肌酸激酶B型同工酶（CK-B）的活性乘以2，即为肌酸激酶MB 型同工酶（CK-MB）的活性。
3 标本：3.1 病人准备：无特殊。
3.2 类型：血清或肝素血浆。
3.3 标本存放：稳定性：-20℃保存稳定4周（避光保存）。
活性损失：2～8℃保存24小时或18～22℃保存1小时至少损失10%。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
血标本应尽快送往化验室,室温下放置30―45分钟,后离心,放置时间不得超过3h.血清必须吸出,转移至有盖的试管中.3.5 标本拒收标准：细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司CK-MB试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：D-葡萄糖27mmol/L 咪唑缓冲液60mmol/L乙酸镁14mmol/L NADP 2.7mmol/LN-乙酰半胱氨酸27mmol/L AMP 7mmol/L试剂2（R2）：磷酸肌酸 160mmol/L 6-磷酸葡萄糖脱氢酶≥20KU/LADP 11mmol/L 糖激酶≥20KU/LCK-M 抗体4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
CK文档,肌酸激酶测定试剂盒(CK)检测标准操作规程
1、方法依据：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司肌酸激酶测定试剂盒(CK)测定方法 2、适用范围：适用于人血清或血浆肌酸激酶(CK)的测定。
3、试剂仪器：3.1 试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒。
3.2未开启的试剂盒避光保存于2℃～8℃有效期为一年。
试剂开瓶后应避光保存，在2℃～8℃可稳定30天。
试剂不可冰冻。
3.3 仪器：迈瑞BS-2000M 全自动生化分析仪. 4、操作程序4.1方法原理ADP + 磷酸肌酸肌酸 + ATPATP + 葡萄糖ADP + 葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-6-磷酸 + NAD + 6-磷酸葡萄糖酸 + NADH + H +4.2样本要求新鲜血清、肝素或EDTA 血浆，样本收集后应尽快测定，避免溶血或污染。
样品在2℃～8℃保存7天内或25℃保存24小时活性损失2%。
4.3上机操作4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-2000M 全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”。
4.3.2 校准：4.3.2.1 标准液的准备：校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司配套冻干品，按说明书要求稀释后分装，-20℃冷冻保存，用前提前15分钟从冰箱中取出，复溶到室温后CKG-6-PDH己糖激酶上机检测。
4.3.2.2 校准程序：首次使用校准。
当有以下情况时需重新定标：1）换试剂批号或出现质控漂移时；2）当仪器做完保养后；3）仪器进行零件更换时。
每次试验前用准备好的校准品进行定标，定标通过后进行检测。
4.3.2.3 质控：在标本开始之前做质控，质控通过后方能进行标本的检测。
4.3.3 测试基本参数4.4参考范围男：24～190 U/L女：24～170 U/L（注：各实验室应有自己的参考范围。
）4.5 方法评价线性范围：5～1000U/L。
当样本测定值超过上限时，应将样本用生理盐水作稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数。
精密度：批内变异系数CV ≤ 3.0 %批间变异系数CV ≤ 4.0 %分析灵敏度：本试剂盒的检测低限5U/L5、临床意义肌酸激酶（ CK）是由不同亚基 M 和 B 组成的二聚体，正常人体中有三种同工酶，即 CK－ BB、 CK－ MB 和CK-MM。
心肌酶检测操作流程及评分标准
心肌酶检测操作流程及评分标准心肌酶检测是一种常用的方法，用于评估心肌损伤和心肌梗死的严重程度。
本文将介绍心肌酶检测的操作流程以及评分标准，帮助读者更好地理解该检测方法的实施和结果解读。
一、概述心肌酶检测通过测定心肌细胞损伤后释放到血液中的特定酶的活性，来评估心肌损伤的程度。
常用的心肌酶包括肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶-MB（CK-MB）和心肌肌钙蛋白（cTn）等。
二、心肌酶检测操作流程1. 患者准备在进行心肌酶检测前，患者需要暂时禁食，并停止一些可能影响检测结果的药物使用（如抗凝药物）。
如果患者正在进行其他检查，应该遵循相应检查的准备要求。
2. 血液采集常规情况下，心肌酶检测使用外周静脉血作为样本。
在采集血液前，护士或医生需要正确消毒采血部位，并戴上一次性手套，确保操作的无菌环境。
采集的血液样本一般会直接放入离心管中，避免与其他物质接触。
3. 检测操作使用相应的试剂盒，根据说明书进行操作。
心肌酶检测一般会采用比色法、免疫测定法等进行。
首先，按照试剂盒要求，将样本和试剂按比例混合，加入反应管中。
然后，根据试剂盒的要求，设定相应的温度和时间，进行反应。
最后，使用专业的仪器（如分光光度计）对反应后的样本进行读数。
4. 结果记录将检测结果记录在相应的检测表中。
每个样本的检测结果包括酶活性的数值和单位，以及参考范围（正常范围）等信息。
同时，还需要记录患者的基本信息（如姓名、年龄、性别）等。
三、评分标准心肌酶检测结果的评分标准会因不同的酶类别而有所差异。
以下是一般情况下常用的评分标准：1. 肌酸激酶（CK）和肌酸激酶同工酶-MB（CK-MB）- 正常范围：男性 5-25 U/L，女性 5-20 U/L- 轻度心肌损伤：CK 或 CK-MB 升高 1-2 倍- 中度心肌损伤：CK 或 CK-MB 升高 2-5 倍- 严重心肌损伤（心肌梗死）：CK 或 CK-MB 升高超过 5 倍2. 心肌肌钙蛋白（cTn）- 正常范围：低于检测限- 轻度心肌损伤：cTn 升高至正常范围的上限- 中度心肌损伤：cTn 升高 1-3 倍正常上限- 严重心肌损伤（心肌梗死）：cTn 升高超过正常上限 3 倍以上需要注意的是，不同试剂盒的标准可能会有所差异，具体评分标准应根据所用试剂盒的说明书进行解读。
肌酸激酶(Creatine Kinase, CK)测定试剂盒说明书
货号：MS1107 规格：100管/96样肌酸激酶（Creatine Kinase, CK）测定试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中，能可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应，在能量运转、肌肉收缩和ATP再生中有重要作用，是临床诊断心脑疾病的一个重要指标。
测定原理：CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH，导致340nm光吸收值增加。
自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存，使用前加10mL蒸馏水溶解。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。
工作液：临用前根据用量将试剂一和试剂二以1:1混合。
使用前37℃温育2min。
粗酶液提取：1.组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心15min。
2.血清样本：直接测定。
测定操作表：1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至340nm。
CK活性计算公式：a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下（1）按组织蛋白含量计算酶活定义：37℃，pH7.0时，每毫克蛋白质1min内催化产生1nmolNADPH为一个酶活单位。
第1页，共2页第2页，共2页CK 活性（nmol/min/ mg prot ）=dA ⨯∆ε×V 反总÷（V 样×Cpr ）= 804×△A ÷Cpr （2）按组织样本质量计算：酶活定义：37℃，pH7.0时，每克样品1min 内催化产生1nmolNADPH 为一个酶活单位。
肌酸激酶测定方法
肌酸激酶测定方法
肌酸激酶测定方法是一种常见的生化分析技术，用于评估细胞内肌酸激酶(CK)酶活性的水平。
肌酸激酶是一种酶，存在于多种组织和细胞内，包括肌肉、心脏和脑部组织。
肌酸激酶的水平通常被用作一种生物标志物，以帮助诊断心肌梗死、肌无力症、红细胞破裂等疾病。
常用的肌酸激酶测定方法包括酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫荧
光法(IF)、放射性免疫沉淀法(RIA)等。
其中，ELISA法是最常用的
方法之一，它利用特异性抗体与肌酸激酶结合，再通过酶标记技术进行检测和定量。
肌酸激酶测定方法的操作步骤一般包括样品的制备、试剂的配制、反应的进行和结果的读取。
在样品制备中，通常需要将含有肌酸激酶的样品(如血液、尿液等)离心、稀释等处理，以获得适宜的测量浓度。
在试剂配制方面，需要根据具体的检测方法选择合适的试剂，并按照指导书的要求进行配制。
反应的进行通常需要在特定的温度、时间、pH等条件下进行，以保证反应的稳定和准确性。
结果的读取可以通
过光度计、荧光计等仪器进行，也可以通过目视判断等方法进行初步分析。
总的来说，肌酸激酶测定方法是一种简单、快速、可靠的生化分析技术，广泛应用于医学、生物学等领域。
在实际应用中，需要根据具体的研究目的和需求选择合适的检测方法，并注意操作规范和安全。
- 1 -。
【检验医学】连续监测法测定血清肌酸激酶
= △A/min×F
= △A/min×4921
参考区间
CK总活性：男性为：37~174U/L 女性为：26~140U/L
CK-MB活性：<15 U/L CK-MB质量： <5 µg/L
临床意义
1 心肌疾患 急性心肌梗死后3-8小时开始增高，10-24小时达高峰，3-4天恢复 正常。病毒性心肌炎时也增高。
在上述反应中NADPH的生成速率与样本中CK活性成正比， NADPH 在340nm有特征性吸收峰，通过在340nm波长处测定吸光度的上升 速率，即可测得样本中CK的活性。
实验试剂
液体双试剂（R1+R2）
R1：己糖激酶 (HK)
＞3000U/L
葡糖糖-6-磷酸脱氢酶（ G-6-PDH） ＞2000 U/L
标本采集与要求
最好用血清标本，也可用肝素血浆。 本次实验标本为生化室当天病人标本。
实验操作步骤
吸R1试剂300ul、 R2试剂150ul加入测定 管中，混合。
加血清15ul，混合，立即吸入仪器测定。 记录实验数据。
结果计算
△A/min×TV×1000 CK（U/L）= ————————
连续监测法测定血清肌酸激酶 酶学分析技术
实验目的
掌握连续监测法测定血清肌酸激酶的原理 熟悉连续监测法测定血清肌酸激酶的操作 掌握酶学分析技术的基本知识
实验原理
肌酸激酶的生物学特性
1 肌酸激酶（creatine kinase,CK）系统名是三磷酸 腺苷：肌酸转磷酸酶，是一种转移酶。
2 CK分布全身，骨骼肌含量最高，其次是心肌和脑。
CK（U/L）= ————————_
ε×SV×P
= △A/min×F
44、肌酸激酶标准操作规程(CK-SOP)
前言为使临床检验操作规范化，指导检验人员严格按规程进行正确的常规操作，保证检验质量，特制定本操作规程。
本规程的编写遵循了ISO 15189《医学实验室——关于质量和能力的特殊要求》及WS/T 227-2002《临床检验操作规程编写要求》的有关规定并结合产品实际情况制订，作为本产品的标准操作程序。
本规程从2007年5月2日起实施，每2年复审1次。
本规程由浙江伊利康生物技术有限公司编制。
本规程起草单位：伊利康生物技术有限公司技术部。
本规程主要起草人：蒙凯、蔡其浩。
本规程首次起草。
目录1 检验申请 (3)2 标本采集与处理 (3)3 试剂及成份 (4)4方法原理 (4)5 仪器 (4)6 校准液及校准模式 (4)7质控品与室内质控规则 (4)8标本检测步骤 (5)9 结果计算 (5)10 操作性能 (5)11试剂使用的注意事项 (5)12参考范围及医学决定水平 (5)13检验结果的报告及范围 (5)14临床意义 (6)15结果审核分析以及相关项目的联系 (6)16威胁生命的“紧急值”及报告规定. (6)17有关引用程序与文件 (6)18参考文献附录A XXX型全自动生化分析仪参数肌酸激酶测定标准操作规程1.检验申请单独检验项目申请：血清肌酸激酶（Creatine Kinase,缩写CK）测定；组合项目申请：心肌酶谱分析。
临床医生根据需要提出检验申请。
2.标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后。
体检对象抽血前应有两周的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2标本采集2.2.1除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带，不抗凝，置普通试管中。
肌酸激酶检测方法
肌酸激酶检测方法肌酸激酶（Creatine Kinase，CK）是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，能催化肌酸磷酸盐（creatine phosphate，CP）与ADP之间的磷酸转移反应，生成肌酸（creatine）和ATP，为供能储备提供了重要的基质。
肌酸激酶检测方法是通过测定体内血清或尿液中的肌酸激酶活性来评估体内的肌肉和心肌等组织受损程度。
这种检测方法广泛应用于临床诊断中，特别是对急性心肌梗死的早期诊断起到了重要的作用。
肌酸激酶检测方法一般包括血清检测和尿液检测。
下面将详细介绍这两种检测方法及其相关的注意事项。
1. 血清检测肌酸激酶的血清检测方法一般采用酶促荧光法、酶促免疫法、比色法等。
其中最常用的是酶促荧光法。
（1）酶促荧光法酶促荧光法是一种通过在底物与酶催化下发光产生信号，进而测定酶活性的方法。
该方法通过测定在特定条件下底物水解的速率，即可计算出肌酸激酶的活性。
酶促荧光法通常由两个步骤组成：底物与酶反应和读数。
首先是将底物与酶混合，使其反应产生化学荧光。
然后使用荧光分析仪读取发光的强度，根据标准曲线计算出待测样品中肌酸激酶的浓度。
（2）注意事项a. 空腹检测：由于肌酸激酶在多种组织中都有分布，因此血清中的肌酸激酶可能来自多个源头，比如肌肉、心肌、脑组织等。
为了减少其他组织来源的肌酸激酶对结果的干扰，一般要求患者在8小时内禁食，并且避免剧烈运动。
b. 时间窗口：肌酸激酶是一个特殊的指标，其峰值活性在损伤后的6-24小时之间，通常在2-3天后恢复正常水平。
因此，若对心肌梗死等疾病进行早期诊断，需要在损伤发生后的6-24小时内进行检测。
c. 辅助检测：肌酸激酶的检测结果是个综合指标，虽然对某些疾病的诊断具有重要的参考价值，但并非完全特异。
因此，在临床上常结合其他生化指标如心肌肌钙蛋白（cTroponin）等进行综合分析。
2. 尿液检测尿液中的肌酸激酶主要来自于肾小球滤过的肌酸激酶，因此，尿液中的肌酸激酶活性与血清中的活性相关。
血清肌酸激酶DGKC推荐方法测定
血清肌酸激酶(CK) DGKC 推荐方法测定1. 实验原理德国临床化学学会(DGKC)和国际临床化学学会(IFCC)推荐的连续监测法。
ADP + 磷酸肌酸 肌酸 + ATPATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖-6-磷酸 葡萄糖-6-磷酸+NADP + 6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H +NADPH 在340nm 处有特异吸收，通过测定NADPH 生成速率计算出CK 活性。
2. 标本：2.1 病人准备：无特殊要求。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA 血浆。
3. 标本存放：稳定性：2～8℃保存稳定7天;15～25℃保存稳定1天;-20℃保存稳定4周（避光保存）。
3天内的活性损失：2～8℃保存24小时或18～22℃保存1小时至少损失10%。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂 利德曼CK 测定试剂盒（试剂1 6×64ml 试剂2 6×16ml ）6.1.1 试剂组成：试剂1（R1）+试剂2（R2）：咪唑缓冲液 pH6.7 100mmol/L磷酸肌酸 30mmol/L葡萄糖 20mmol/LN-乙酰半胱氨酸（NAC ） 20mmol/LEDTA-Na 2 2mmol/LADP 2mmol/LNADP 2mmol/L二腺苷-5'-磷酸 10μmol/L6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6P-DH ） >1500U/L已糖激酶（HK ） >2500U/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
CK 己糖激酶(HK)(G6P-DH)6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
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血清肌酸激酶测定标准操作规程
1 检验申请
单独检验项目申请：血清肌酸激酶(缩写CK)测定，各种体液肌酸激酶测定；组合项目申请：血生化中心肌酶谱项目测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理
2.1标本采集
2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
检查体液乳酸脱氢酶的体液标本应用肝素抗凝。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本
2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存
2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定4h，普通冰箱中（2～8℃）稳定12h。
-20℃保存稳定30天。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3 标本采集的注意事项
2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，24h 不饮酒和12h 以上禁食空腹状态。
2.3.2 注意有无应用影响测试项目的药物。
2.3.3 可以使用肝素抗凝的血液标本。
3 方法原理
通过下面的3个反应式表示反应，在两个工具酶的参与下，将CK 的活性与NADPH 生成的量或速率相联系，在340nm 波长处连续监测NADPH 吸光度的增加速率，推算出CK 的活性。
ATP ADP CK +−→−+肌酸磷酸肌酸
ADP 6ATP HK +--−→−+磷酸葡萄糖葡萄糖
NADPH 6NADP 6PDH 6G +-−−−→−+
--磷酸葡萄糖酸磷酸葡萄糖
4 试剂及其他用品
4.1 试剂：肌酸激酶测定试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品。
4.2 试剂盒保存：未开瓶的试剂储存在2～8℃可稳定至有效期。
试剂开瓶后，在仪器冰箱试剂仓中可保存28天。
开盖后避免污染。
当试剂变混浊，或者未开盖的液体有沉淀，或起始吸光率>0.8时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.3 试剂盒准备：液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。
4.4 试剂盒主要成分：
5 校准品与校准模式
校准品：不使用校准品，以NADPH的双波长（340/380nm）摩尔吸光系数计算CK活性
6 质控品与室内质控规则
6.1质控品采用由Beckman-Coulter公司提供的两个不同水平未定值质控血清。
6.2质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。
6.3质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。
6.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。
7 适用仪器
适用AEROSET和C16000全自动生化分析仪器全自动生化分析仪器。
8 标本检测步骤
装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。
9．主要分析参数
参见说明书。
10 结果计算
计算公式：CK(U/L) ＝ 3
)660340(10min min
--⨯⨯⨯⨯
∆=
⨯∆εl V V A K A
s
T
nm
公式中ΔA/min 即单位时间中吸光度降低的值，V T 为总反应体积ml （试剂总量＋标本量），V s 为标本体积ml ，l 为比色皿光径cm ，ε为NADPH 的340/380nm 测定的毫摩尔消光系数。
仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。
11 检验结果的报告及范围
11.1 结果的报告
11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。
11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。
11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。
11.2 报告范围： 0～1200 U/L ，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。
12 操作性能
12.1 精密度：CV<0.52%，批间CV<3.21%。
12.2 方法的有限性及干扰因素：内源性干扰物溶血为1000mg/ml 、脂血2000mg/ml 、黄疸30mg/ml 、抗坏血酸300mg/ml 对测试结果无明显影响
12.3 灵敏度：肌酸磷酸激酶浓度为：500U/L 时，吸光度变化率ΔA 340nm /min 为0.130～0.158 12.4 线性范围：5～1200 U/L 。
13 参考范围及医学决定水平
0～190U/L
14 临床意义
14.1肌酸激酶广泛分布于骨胳肌、心肌、脑组织中，肝和红细胞不含此酶。
CK是诊断急性心肌梗死（AMI）的酶学指标之一，但总CK的意义不及CK-MB。
现在更受重视的AMI的实验室诊断指标是心肌肌钙蛋白。
14.2 CK也是反映神经肌肉损伤的敏感指标。
各种肌营养不良均有血清CK活性增高，脑血管病及脑膜炎、脑炎、急性精神病患者血清CK活性也可升高。
15 结果审核以及分析与相关项目的联系
15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。
15.2认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。
15.3相关项目：审核与心肌酶谱其他酶的关系。
如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。
16 无威胁生命的“紧急值”及报告规定
17 有关引用程序与文件
17.1 Abbott自动生化分析仪仪器标准操作规程。
17.2生化检验室内质控标准操作程序。
17.3 检验结果审核程序。
17.4标本送检和接收程序。
18 参考文献
18.1陆永绥，张伟民主编. 临床检验管理与技术规程. 杭州:浙江大学出版社, 2004.
18.2北京利德曼生化股份有限公司肌酸激酶测定试剂盒说明书。