15抗生素类药物的分析

1.聚合物
头孢他啶中聚合物测定
Yang Xin-Ji
第二节 β–内酰胺类
色谱条件与系统适用性试验
用葡聚糖凝胶G-10（40～ 120m）为填充剂，玻璃柱内径1.3～1.6cm，床体积50～60ml；流 动相A为含3.5%硫酸铵的0.1mol/L磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠 2.19g和磷酸二氢钠0.54g，加水100ml使溶解，调节pH至7.0），流 动相B为水；流速为0.8ml/min；检测波长为254nm。以流动相A为流 动相，用0.1mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液进样200l进行测定，理论 板数应不低于900，拖尾因子在0.75～1.5。两种流动相系统中蓝色 葡聚糖的保留时间比应在0.93～1.07之间。对照品溶液以流动相B 为流动相，重复进样200l，峰面积值的相对标准差应小于5.0%。
抗生素类 药物的分析
Contents
1
概述
2
β-内酰胺类
氨基糖苷类 四环素类
3
4
Yangቤተ መጻሕፍቲ ባይዱXin-Ji
第一节 抗生素类药物分析
3、抗生素效价单位 抗生素效价的标示量，原则上应按所含特定的抗 菌活性部分的重量来计算。 在应用中，抗生素类药物有效成分的表示方法， 是按照各种抗生素的特点及使用经验，采用符合 客观实际的效价单位表示。 常用的抗生素效价单位有重量单位、类似重量单 位、重量折算单位、特定单位。
有机碱盐难溶于水。
CH 2 C OHN O N S CH 3 CH 3 COOK
S N CH 3 CH 3 COOH NH 2
CH 2
C OHN O
普鲁卡因青霉素
C 2 H 5 2 NCH 2 CH 2 OOC
Yang Xin-Ji
第二节 β–内酰胺类
2.手性C （旋光性）
﹡ ﹡ 6 5
7
S
1 2 3 ﹡
CH COHN NH2 O
CH COHN NH2 O
S N
CH3 CH3 COOH
氨苄西林
HO
S N
CH3 CH3 COOH
阿莫西林
Yang Xin-Ji
第二节 β–内酰胺类
CH COHN NH2 O S N CH3 COOH
CH COHN NH2 O
S N CH3 COOH
头孢氨苄
HO CH COHN NH2 O S N
酸、碱、青霉素酶
降解 头孢菌素类 内酰胺酶 失效
酸、碱、胺类
Yang Xin-Ji
第二节 β–内酰胺类
二、Identification
(一)色谱法 (二)光谱法
HPLC (tR) TLC (Rf) IR UV NMR
Yang Xin-Ji
第二节 β–内酰胺类
HO
CH 2 NH 2
异构体
橄榄绿色
Yang Xin-Ji
HAc
CuSO 4
NaOH
第二节 β–内酰胺类
7）硫酸-甲醛反应(BP)
氨苄西林 呈暗黄色
青霉素钾和青霉素钠呈红棕色 (四)焰色反应——K+、Na+
水湿润
硫酸-甲醛
水浴加热
三、Purity Test(聚合物、有关物质、异构体等)
第一节 抗生素类药物分析
我国抗生素国家标准品就是按上述原则制订的。 但是我国的特有品种则以理论上的纯品一定量定为 1个单位，即为1μg，以某批精制纯品作为原始标 准品，再去标定暂行标准品或国家标准品。 我国药典和部颁标准所规定的抗生素效价检定用标 准品，是由中国人民共和国卫生部主持，由中国药 品生物制品检定所统一负责，与国内有关的药检所 或药厂对原料进行选择，理化分析、协作标定效价 单位、分装、稳定性考查、分发等工作。 每批标准品都有有效期的规定。
HO O
O CH2 HCOH CH2 O O
OH
O HO
CH2 OH
O O
OH O CH2 O CH2 HCOH O CH OH OH 2 HO O O HO O O H2C O CH2 HCOH CH2 O O CH2 O HO O OH OH O HO O CH2 O CH2 HCOH H2C OH
： 3
多重峰信号
： 5
Yang Xin-Ji
第二节 β–内酰胺类
(三)呈色反应 1）羟肟酸铁反应——β–内酰胺环 β–内酰 胺类
S O N
NH2OH· HCl Fe3+ 羟肟酸 NaOH H+
S
H 2NOH HCl O C N H
显色
S O
3+ Fe 3
C NH NH O
NHOH
2）茚三酮反应——α-氨基 茚三酮
Yang Xin-Ji
第一节 概述
1.抗生素（antibiotics）
在低微浓度下即可对某些生物（病原微生物）的生命活动 有特异抑制作用的化学物质的总称
2.分类
β –内酰胺类(青霉素类、头孢菌素类) 氨基糖苷类(链霉素、庆大霉素、依替米星) 四环素类(四环素、金霉素、土霉素) 大环内酯类(红霉素、螺旋霉素、麦迪霉素) 多烯大环类(制霉菌素、两性霉素B) 多肽类(多黏菌素、放线菌素)
O CH2 OH HCOH CH2 O O HO OH O CH2
O CH2
CH2 HO OH
O O
HO
O CH2 HCOH CH2 O OH CH2 O
CH2 HO OH
O O
HO
O CH2 HCOH CH2 O OH CH2 O
O HO
CH2 OH
O O
O
O CH2 HCOH CH2 HO O O HO O H2C O
第一节 抗生素类药物分析
4、抗生素微生物检定用标准品 标准品是指与商品同质且纯度较高的抗生素，每 1mg含有一定的活性单位，用作供试品效价测定 时的标准。 国际标准品是经过国际有关机构协议认定的每 1mg含有一定单位的标准品。其单位称为国际单 位。 抗生素标准品效价单位的含义，世界各国应一致。 抗生素的国际标准品是在联合国世界卫生组织生物 检定专家委员会主持下，委托英国（伦敦）国立生 物标准检定所负责（如标准品原料的挑选、理化分 析、分装与分发等）。 Yang Xin-Ji
紫色
OH 2
Yang Xin-Ji
第二节 β–内酰胺类
4）变色酸-硫酸反应
CH 2 C OHN O CH 3 S H SO
2
N
Δ
4
变色酸
CH 3 COOK
HCHO
（缩合）
显 色
5）重氮苯磺酸反应——酚羟基
C6 H 5 OH 橙黄色 （偶合）
重氮苯磺酸
6）铜盐反应——头孢氨苄的专属反应
（红、棕、褐）
Δ
蓝紫色
Yang Xin-Ji
第二节 β–内酰胺类
NH2 C O
+
OH C N C
O
+
α
2
HO HO O O C O
+
3 H2O
H
O
3）双缩脲反应——β–内酰胺类 碱性酒石酸铜
NH 2 CH 2 H HO C N COHN S O COONa CH 3 CH 3 Cu CH 2 NH 2 CO HN HO C N H O S CH 3 CH 3 COONa
Yang Xin-Ji
第一节 抗生素类药物分析
（2）类似重量单位 以特定的纯抗生素制品盐的重 量1μg作为一个单位，即1mg＝1000单位，其 中包括了无抗菌活性的酸根在内。 如四环素盐酸盐（包括无生物活性的盐酸根在 内）。 这种类似重量单位，虽然并不合理，但在国际上 已经习惯沿用。 （3）重量折算单位 以特定的纯抗生素制品的某一 重量为一个单位而加以折算。 如青霉素国际标准品（ 1952 年）青霉素 G 钠称 重 0.5998μg 为 1 单位，即 1mg=1670 单位， 则80万单位的青霉素G钠称重应为0.48g 。 Yang Xin-Ji
主成分自身对照法 面积归一化法
限量法
自身对照外标法
Yang Xin-Ji
第二节 β–内酰胺类
CH2 H2C HO OH O CH2 HCOH CH2 O OH CH2 O O O O O O HO H2C OH O O HO H2C HO O
O
O H2C O O HO
HO
O
CH3 OH
Yang Xin-Ji
第一节 抗生素类药物分析
（1）重量单位 以抗生素中所含特定的抗菌活性部 分（纯游离碱或游离酸）的重量 1μg 作为 1 单位， 即1mg=1000单位。 如链霉素、红霉素、卡那霉素、新霉素、庆大霉 素、土霉素；氯霉素、新生霉素酸、利福霉素SV 等均以重量单位表示。 用这种方法表示，对不同有机酸根的同一抗生素， 只要单位一样或有效部分重量一样，则这一抗生 素的各种盐类虽然称重不同，但实际有效含量是 相同的。
头孢拉定
头孢羟氨苄
CH3 COOH
S
CH 2 CONH O N
S CH 2OCOCH 3 COONa
头孢噻吩钠
Yang Xin-Ji
第二节 β–内酰胺类
S ＊ 1 RCO HN ＊ 5 6
7
CH3
2 3
6-aminopenicillanic acid, 简称6-APA
O
N
4
CH3
氢化噻唑环COOH
对照品溶液的制备 取头孢他啶对照品适量，精密称定，加水
制成每1ml中含头孢他啶100g的溶液，摇匀
Yang Xin-Ji
第二节 β–内酰胺类
测定法 取本品适量，精密称定，加水制成每1ml中约含头孢他啶