组织提取RNA步骤

组织提取RNA步骤

1.将组织在液氮中磨碎，每50～100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。

样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

2.可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质。可于2～8℃10000×

g离心10min，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

3.每1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15s，室温放置5min。

4.2～8℃10000×g离心15min。样品分为三层。RNA主要在水相中，水相体积约为所

用TRIzol试剂的60℅。

5.把水相转移到新的EP管中加入等体积的异丙醇，室温放置10min。

6.2～8℃10000×g离心10min，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶

状白色沉淀。弃上清进行下一步操作。

7.用75℅冰预冷的乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。

2～8℃不超过7500×g离心5min，弃上清。

8.超净台中风干大约5～10min。不要过于干燥，否则会导致RNA的溶解性大大降低。

加入25～200μl无RNase的水使RNA溶解。

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