Waters高效液相色谱仪标准操作规程

XXXXXXXXXX部仪器设备标准操作规程

1 目的：建立Waters高效液相色谱仪标准操作规程。

2 范围：Waters高效液相色谱仪。

3 责任：化验室操作者。

4 规程：

4.1 型号与主要性能指标

4.1.1 型号

4.1.1.1 主机Waters2695分离单元、Waters2489紫外/可见光检测器。

4.1.1.2 工作站Empower2。

4.2 主要技术指标:

4.2.1 泵流量设定：0.000和0.010到10.000毫升/分，增量为0.001毫升/分。

流量准确度：±1%或10μL/分，取其中的较大值（0.200到5.000毫升/分），反压为600psi下的脱气甲醇。

４.2.2 检测器：光源：氘灯。

波长范围：190～700nm

波长精度：±1nm

4.2.3 柱温箱：温度设定范围：20～60℃，间隔：1℃

控温精度：±5℃

4.2.4 工作站计算机：Dell OPTIPLEX330（操作系统Windows XP）。

4.2.5 打印机：HP LaserJet P1008打印机。

5 操作条件：

5.1 电源要求：950VA（最大值）

线电压：85到132Vac或180到250Vac

频率：47到63Hz

5.2 环境条件：温度：4～40℃，相对湿度：20～80%。

5.3 机房内应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，室内排风良好。

5.4 仪器应平稳放置在工作台面上，便于操作，周围无强烈的机械震动和电磁干扰，仪器接地应良好。

6 操作前准备:

6.1 配制所需流动相。

6.2 配制和制备所需的对照品溶液和供试品溶液。

6.3 将色谱柱连接到色谱仪管路系统上。

7 操作步骤：

7.1 打开交流稳压电源开关，稳压电源上电压表指示并稳定至220V。

7.2 将“2695分离单元”电源开关（位于左侧面板的面板顶部）推到（开）I 位置即可启动“2695分离单元”, 启动诊断程序将启动。启动诊断程序的初始部分成功后，前面板上将显示Main（主）屏幕。启动诊断程序将继续执行，将初始化：针头、注射器和阀门；样品转盘托架；溶剂管理系统。诊断运行时，Main（主）屏幕的标题区内将显示这些机械诊断测试的状态。如果启动诊断程序不成功，则排除故障。当启动诊断程序完成后，“分离单元”将进入“空闲”模式。仪器开始自检（4-5分钟），待屏幕上方出现“idle”字样表示自检成功。

7.3 将输液泵上的烧结不锈钢过滤器及吸液管放入流动相中，使导管内充满溶剂。打开在线脱气，使其伪on,设定柱温，一般为35℃，清洗柱塞杆1～2分钟（Prime seal wash），将每一个会用到的管道进行排气一次（Wet prime），注射器排气泡及清洗（Purge injector）,清洗注射针（Prime needle wash）。

7.4 打开“2489紫外/可见光检测器”电源开关至ON(1)的位置，画面即刻出现自我诊断检查字样：Startup Diagnostics, 注意是否有任何故障讯息出现。接着出现Waters 2487 Dual λAbsorbance Detector, 并开始执行“热机”检查，出现Warmup Time倒数时间画面。待“热机”检查完毕无误，画面之上排显示吸收讯号数字，下两排显示前一次关机时之波长与AUFS设定值。欲设定使用之波长λ,将游标移至λ位置，输入波长数字，Enter即可。等系统平衡稳定后，于注入检体前，按一下Autozero键，使检测器自动归零，再开始进样做分析检测。

7.5 打开计算机电源，在计算机上运行液相色谱工作站软件Empower，双击电脑桌面上的Empower图标，或点击“开始﹥Empower﹥Empower”，出现Empower 登录窗口。输入用户名和密码，单击确定，出现Empower Pro界面窗口。单击Pro界面的“运行样品”窗口，即可进入“运行样品”界面。在左侧选择项目，右侧选择对应的色谱系统，然后单击“确定”，进入“运行样品”窗口。选择“创建方法组”，调用方法组编辑器向导，分别设定流量、检测波长、柱温箱温度等，保存仪器方法，然后在“仪器方法”中选择刚建立的仪器方法，并点击“监视器”，平衡系统，观察基线。等系统达到平衡状态，终止观察基线，系统空闲后，写入样品名称，选择对应的方法组，确定运行时间，然后选择菜单“进样-进样”，或者单击“单进样”，开始采集数据。如果需要在采集数据的同时，放大查看数据，可单击“传送数据到查看”来进行具体的查看，乃至于数据的处理。

7.6 分析结束后，打印色谱分析报告。

8 关机：

8.1 分析完毕后，应先退出色谱工作站软件，以断开计算机与系统控制器的连接通道。然后关闭检测器、分离单元电源。

8.2 关闭计算机，再关闭稳压电源开关。

9 注意事项：

9.1每次开机自检一定要等到界面上出现“idle”时方可进行下一步的操作。每天

开机后必须进行溶剂系统前处理。

9.2 高效液相色谱仪具有自诊断故障功能，在开机或运行中出现故障，会出现相应的错误信息提示，根据出现的错误信息作相应的处理。

9.3 建议做分析检测前，至少须让检测器或D2灯源“热机”30分钟以上。

9.4 各流动相需经脱气并过滤，特别是当有离子对试剂时，必须要进行过滤。换流动相的时候，应对滤头进行清洗，以免两种流动相发生混淆，影响实验。

9.5流动相中含有无机盐，分析工作结束后应先用水清洗整个管路系统中的无机盐成分，然后再用有机溶剂（如甲醇等）替换管路系统中的水。盛放各种溶液的瓶子需隔一段时间进行清洗，且每次开机之前观察各瓶的滤头是否在溶液液面一下，如不在应将其置于液面之下。

9.6 对照品溶液和供试品溶液须经0.45μm或更小孔径的滤膜过滤。

9.7 仪器设备长时间不使用，应每周开机一次，每次两小时，并用甲醇或异丙醇清洗管路系统。