2010版沙门氏菌检验资料
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沙 门 氏 菌 属 简 介
沙门氏菌属是一群符合肠杆菌科定义并与其血清 学相关的革兰氏阴性、需氧性、无芽孢杆菌。本菌 属种类繁多，抗原结构复杂，现已发现 2000多个血 清型，我国已发现血清型近200个。
形态特征：
革兰氏阴性，大小为1~3×0.4~0.9μm的两端钝圆 的短杆菌，无芽孢，一般无荚膜，除鸡沙门氏菌和 雏沙门氏菌以外，都有周身鞭毛，运动力强。
返回
结果与报告
综合以上生化实验和血清学鉴定的结 果，报告25g（ml）样品中检出或未检 出沙门氏菌。
1、前增菌
称取25 g （mL ）样品放入盛有225 mL BPW 的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min 均质 。 1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW 的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍 打1 min～2 min。若样品为液态，不需要均质， 振荡混匀。如需测定pH 值，用 1 mol/mL 无菌 NaOH 或HCl 调pH至6.8±0.2。 无菌操作将样 品转至 500 mL 锥形瓶中，如使用均质袋，可直 接进行培养，于 3℃±1 ℃培养8 h～ 18h。如 为冷冻产品,应在45 ℃以下不超过 15 min,或2 ℃～5 ℃不超过 18 h 解冻。
沙门氏菌属的生物学特性
培养特性：
沙门氏菌需氧或兼性厌氧，10～42 ℃都可生长，最适 生长温度为37℃，最适pH为6.8～7.8。 营养琼脂平板上：35～37℃培养18~24h，其菌落大小一 般为2～3mm，光滑、湿润、无色、半透明、边缘整齐。 血平板上：中等大小的灰白色菌落。 绝大多数沙门氏菌有规律的发酵葡萄糖产酸产气，但也
★无菌培养皿
★无菌吸管 ★无菌毛细管 ★ pH 计或pH 比 色管或精密pH 试 纸 ★全自动微生物生 化鉴定系统
培 养 基 和 试 剂
缓冲蛋白胨水（BPW ） 四硫磺酸钠煌绿（TTB） 增菌液 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增 菌液 亚硫酸铋（BS ）琼脂 HE 琼脂 木糖赖氨酸脱氧胆盐 （XLD ）琼脂 沙门氏菌属显色培养基 三糖铁（TSI）琼脂
范
围
本标准规定了食品中沙门氏菌
（Salmonella ）的检验方法。
本标准适用于食品中沙门氏菌
的检验。
设 备 和 材 料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他还有：
★冰箱：2 ℃～5 ℃。 ★恒温培养箱 ★均质器 ★振荡器 ★电子天平：感量0.1g ★无菌锥形瓶:容量 500mL，250 mL ★无菌试管
2010-03-26发布
2010-06-01实施
ຫໍສະໝຸດ Baidu
中华人民共和国卫生部
发布
前
言
本标准代替GB/T 4789.4-2008 《食品卫生微生物检验沙门氏菌检验》。 本标准与GB/T 4789.4-2008 相比，主要变化如下： ——修改了标准的中英文名称； ——修改了标准的范围； ——修改了培养基和试剂； ——修改了设备和材料； ——修改了附录A。 本标准的附录A、附录B 为规范性附录。 本标准所代替的历次版本发布情况为： ——GB 4789.4-84、GB 4789.4-1994、 GB/T 4789.4-2003、GB/T 4789.4-2008
b）多价菌体抗原（O）鉴定
在玻片上划出2 个约 1 cm×2 cm 的区域， 挑取1 环待测菌，各放 1/2 环于玻片上的每一 区域上部，在其中一个区域下部加 1 滴多价菌 体（O）抗血清，在另一区域下部加入1 滴生 理盐水，作为对照。再用无菌的接种环或针分 别将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾 斜摇动混合 1 min，并对着黑暗背景进行观察， 任何程度的凝集现象皆为阳性反应。 c）多价鞭毛抗原（H）鉴定 同b）。 d）血清学分型 （选做项目）
挑取可疑菌落
TSI，赖氨酸，NA，靛基质，尿素（pH7.2），KCN
生化鉴定 试剂盒 或全自动 微生物 生化鉴定 系统+
A1
A2
甘露醇+、山梨醇+
A3
ONPG-
反应 结果 与左侧 描述 不符
沙门氏菌，血清学试验
报 告
非沙门氏菌
5、血清学鉴定
a）抗原的准备 一般采用 1.2％～1.5％琼脂培养物作为玻片凝集 试验用的抗原。 O 血清不凝集时，将菌株接种在琼脂量较高的 （如2 ％～3％） 培养基上再检查；如果是由于Vi 抗原的存在而阻止了O 凝集反应时，可挑取菌苔于 1 mL 生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮 沸后再检查。H 抗原发育不良时，将菌株接种在 0.55％～0.65％半固体琼脂平板的中央，俟菌落蔓 延生长时，在其边缘部分取菌检查；或将菌株通过 装有0.3％～0.4％半固体琼脂的小玻管1次～2 次, 自远端取菌培养后再检查。 返回
蛋白胨水、靛基质试剂 氰化钾（KCN ） 培养 尿素琼脂 赖氨酸脱羧酶试验培养基 糖发酵管 邻硝基酚 β-D 半乳糖苷 （ONPG）培养基 半固体琼脂 丙二酸钠培养基 沙门氏菌O 和H 诊断血清。 生化鉴定试剂盒
操作步骤
1、前增菌——第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养 基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。 2、选择性增菌——在含选择性抑制剂的促生长培养基中间， 样品进一步增菌的一个步骤。此培养基允许沙门氏菌持续增 殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。 3、选择性平板分离——这一步采用固体选择性培养基，抑制 非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的 识别。 4、生物化学筛选——排除大多数非沙门氏菌。也提供了沙门 氏菌培养物菌属的初步鉴定。 5、血清学技术——提供了培养物菌种的鉴定。
检样
沙 门 氏 菌 检 验 程 序
25g(ml)样品+225mlBPW
36℃±1 ℃，8h-18h 36 ℃±1 ℃，18h~24h
1ml+TTB10ml
42 ℃±1 ℃，18h~24h
1ml+SC10ml
BS
36 ℃±1 ℃，40h~48h
XLD(或HE、显色培养基)
36 ℃±1 ℃，18h~24h
生化特性：
有不产气者，不发酵蔗糖和侧金盏花醇、不产生吲哚、
不分解尿素。
沙 门 氏 菌 典 型 群 落
伤寒沙门氏菌
食品安全国家标准
食品微生物学检验 沙门氏菌检验
National food safety standard
Food microbiologial examination:Salmonella
沙门氏菌属是一群符合肠杆菌科定义并与其血清 学相关的革兰氏阴性、需氧性、无芽孢杆菌。本菌 属种类繁多，抗原结构复杂，现已发现 2000多个血 清型，我国已发现血清型近200个。
形态特征：
革兰氏阴性，大小为1~3×0.4~0.9μm的两端钝圆 的短杆菌，无芽孢，一般无荚膜，除鸡沙门氏菌和 雏沙门氏菌以外，都有周身鞭毛，运动力强。
返回
结果与报告
综合以上生化实验和血清学鉴定的结 果，报告25g（ml）样品中检出或未检 出沙门氏菌。
1、前增菌
称取25 g （mL ）样品放入盛有225 mL BPW 的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min 均质 。 1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW 的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍 打1 min～2 min。若样品为液态，不需要均质， 振荡混匀。如需测定pH 值，用 1 mol/mL 无菌 NaOH 或HCl 调pH至6.8±0.2。 无菌操作将样 品转至 500 mL 锥形瓶中，如使用均质袋，可直 接进行培养，于 3℃±1 ℃培养8 h～ 18h。如 为冷冻产品,应在45 ℃以下不超过 15 min,或2 ℃～5 ℃不超过 18 h 解冻。
沙门氏菌属的生物学特性
培养特性：
沙门氏菌需氧或兼性厌氧，10～42 ℃都可生长，最适 生长温度为37℃，最适pH为6.8～7.8。 营养琼脂平板上：35～37℃培养18~24h，其菌落大小一 般为2～3mm，光滑、湿润、无色、半透明、边缘整齐。 血平板上：中等大小的灰白色菌落。 绝大多数沙门氏菌有规律的发酵葡萄糖产酸产气，但也
★无菌培养皿
★无菌吸管 ★无菌毛细管 ★ pH 计或pH 比 色管或精密pH 试 纸 ★全自动微生物生 化鉴定系统
培 养 基 和 试 剂
缓冲蛋白胨水（BPW ） 四硫磺酸钠煌绿（TTB） 增菌液 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增 菌液 亚硫酸铋（BS ）琼脂 HE 琼脂 木糖赖氨酸脱氧胆盐 （XLD ）琼脂 沙门氏菌属显色培养基 三糖铁（TSI）琼脂
范
围
本标准规定了食品中沙门氏菌
（Salmonella ）的检验方法。
本标准适用于食品中沙门氏菌
的检验。
设 备 和 材 料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他还有：
★冰箱：2 ℃～5 ℃。 ★恒温培养箱 ★均质器 ★振荡器 ★电子天平：感量0.1g ★无菌锥形瓶:容量 500mL，250 mL ★无菌试管
2010-03-26发布
2010-06-01实施
ຫໍສະໝຸດ Baidu
中华人民共和国卫生部
发布
前
言
本标准代替GB/T 4789.4-2008 《食品卫生微生物检验沙门氏菌检验》。 本标准与GB/T 4789.4-2008 相比，主要变化如下： ——修改了标准的中英文名称； ——修改了标准的范围； ——修改了培养基和试剂； ——修改了设备和材料； ——修改了附录A。 本标准的附录A、附录B 为规范性附录。 本标准所代替的历次版本发布情况为： ——GB 4789.4-84、GB 4789.4-1994、 GB/T 4789.4-2003、GB/T 4789.4-2008
b）多价菌体抗原（O）鉴定
在玻片上划出2 个约 1 cm×2 cm 的区域， 挑取1 环待测菌，各放 1/2 环于玻片上的每一 区域上部，在其中一个区域下部加 1 滴多价菌 体（O）抗血清，在另一区域下部加入1 滴生 理盐水，作为对照。再用无菌的接种环或针分 别将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾 斜摇动混合 1 min，并对着黑暗背景进行观察， 任何程度的凝集现象皆为阳性反应。 c）多价鞭毛抗原（H）鉴定 同b）。 d）血清学分型 （选做项目）
挑取可疑菌落
TSI，赖氨酸，NA，靛基质，尿素（pH7.2），KCN
生化鉴定 试剂盒 或全自动 微生物 生化鉴定 系统+
A1
A2
甘露醇+、山梨醇+
A3
ONPG-
反应 结果 与左侧 描述 不符
沙门氏菌，血清学试验
报 告
非沙门氏菌
5、血清学鉴定
a）抗原的准备 一般采用 1.2％～1.5％琼脂培养物作为玻片凝集 试验用的抗原。 O 血清不凝集时，将菌株接种在琼脂量较高的 （如2 ％～3％） 培养基上再检查；如果是由于Vi 抗原的存在而阻止了O 凝集反应时，可挑取菌苔于 1 mL 生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮 沸后再检查。H 抗原发育不良时，将菌株接种在 0.55％～0.65％半固体琼脂平板的中央，俟菌落蔓 延生长时，在其边缘部分取菌检查；或将菌株通过 装有0.3％～0.4％半固体琼脂的小玻管1次～2 次, 自远端取菌培养后再检查。 返回
蛋白胨水、靛基质试剂 氰化钾（KCN ） 培养 尿素琼脂 赖氨酸脱羧酶试验培养基 糖发酵管 邻硝基酚 β-D 半乳糖苷 （ONPG）培养基 半固体琼脂 丙二酸钠培养基 沙门氏菌O 和H 诊断血清。 生化鉴定试剂盒
操作步骤
1、前增菌——第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养 基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。 2、选择性增菌——在含选择性抑制剂的促生长培养基中间， 样品进一步增菌的一个步骤。此培养基允许沙门氏菌持续增 殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。 3、选择性平板分离——这一步采用固体选择性培养基，抑制 非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的 识别。 4、生物化学筛选——排除大多数非沙门氏菌。也提供了沙门 氏菌培养物菌属的初步鉴定。 5、血清学技术——提供了培养物菌种的鉴定。
检样
沙 门 氏 菌 检 验 程 序
25g(ml)样品+225mlBPW
36℃±1 ℃，8h-18h 36 ℃±1 ℃，18h~24h
1ml+TTB10ml
42 ℃±1 ℃，18h~24h
1ml+SC10ml
BS
36 ℃±1 ℃，40h~48h
XLD(或HE、显色培养基)
36 ℃±1 ℃，18h~24h
生化特性：
有不产气者，不发酵蔗糖和侧金盏花醇、不产生吲哚、
不分解尿素。
沙 门 氏 菌 典 型 群 落
伤寒沙门氏菌
食品安全国家标准
食品微生物学检验 沙门氏菌检验
National food safety standard
Food microbiologial examination:Salmonella