高效液相色谱分析技术—方法开发(陈桂良)
高效液相色谱法测定荔枝中有机酸的含量
１ 实验 部 分
１１仪器和试 剂 ．
Ｌ １ －Ｔ 高效 液相色谱 仪（ 元泵 、二极管 阵列检测器 Ｃ ０Ａ 二 Ｓ Ｄ— ０ （ Ｐ Ｍ２ Ａ）日本 岛津制作所） ；电子分析天平（ 日本 岛津 制作 所 Ａ ２ ） ｔｒ Ｈ计（ Ｙ１０ ；Ｓａ ｐ 奥立龙 ４ｓ ｒ；超声波脱气机（ ｔ ） ａ 天津 市恒奥科技 发展有 限公司 ＤＦ －０ ） 多功能食物搅拌机（ 山 Ｔ １０ ； 佛 市顺德 区任 发电器实业有限公 司 Ｂ ３ ３Ａ 。 Ｂ ３ 一 ） 标 准储 备 液 ： 取 酒 石 酸 （—ａ ａｉ ａｉ 美 国 ９ 称 ＬＴ ｒ ｒ ｃ ｔ ｃ ｄ ９％） 、柠 檬 酸 （ ｉｉ ｃｄ 美 国 ９ ． ％） ０ ００ ， 称 取 苹 果 酸 Ｃｔｃ ｉ ｒ ａ ９９ 各 ． ０ ｇ ５ （ — ｌ ｃｄ美 国 ９ ．％）丁二 酸 （ｕｃｎｃ ｃ 德 国 ９ ．％） Ｄ Ｍａ ｃ ｉ ｉａ ９３ 用去离子水溶解 ， ２ ｇ 定容至 ５ ０ ｍＬ， 此溶液酒石酸 、 苹果酸、 柠檬酸、 丁二酸的浓度分别为 １． ｍｇｍＬ ５ ／ 、 ０ ／ 、． ｍｇｍＬ ０ ０
荔枝的品质主要取决于其含糖量和有机酸含量 ， 本方法探 讨 了 用 高效 液 相 色 谱 法 测 定 荔枝 中有 机 酸 ， 性 、重 复性 和 回 线 收率，结果满意 。
称取去皮去核 的荔枝匀浆样约 １ （ ． ｇ精确至少数点后 四 ０ 位） ，加去离子水溶解 ，超声提取 １ ｎ ０ｍｉ，定容至 ５ ，混 ０ｍＬ 匀 ，放置 ３ ｎ ０ｍｉ，取 上清液经 ０４ ｍ 滤膜过滤 。 ．５ｐ
１ ０８
Ⅵ Ｖ ｇ ｃ ｅ ｃ ｍ ｗ．ｄ ｈ ｍ．ｏ
２ｌ ０ ０年 第 ７ 期 第３ ７卷 总第 ２ ７期 ０
高效液相色谱法测定荔枝 中有机 酸的含量
高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量-药学论文-基础医学论文-医学论文
高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量-药学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——阿司匹林肠溶片为非甾体类抗炎药，临床可用于抗血栓，也可用于治疗不稳定性心绞痛，是《国家基本药物目录》列入的品种。
本文采用高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量，该方法简单，快速，重现性好，回收率高，可用于该制剂的质量控制。
1 仪器与试药1.1 仪器：大连依利特P230 型高效液相色谱仪；UV230+紫外可见检测器；手动进样器；超声仪（型号KQ5200E，功率200W，频率40KHz）；电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司，0.0001g）。
1.2 试药：阿司匹林对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100113）；阿司匹林肠溶片（亚宝药业太原制药有限公司，批号：131210；石家庄康力药业有限公司，批号：121037；神威药业集团有限公司，批号：1306072），甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果2.1 色谱条件：色谱柱为Hypersil ODS2 柱（250mm4.6mm，5m）；流动相：甲醇∶0.5%乙酸溶液（37∶63）；流速：0.8mlmin-1；柱温：25∶；检测波长：267nm；理论板数按阿司匹林计不得少于3000。
2.2 溶液的制备：对照品溶液的制备：精密称取一定量阿司匹林对照品，置100ml 量瓶中，加1%醋酸甲醇溶解并定容制成100gml-1的对照品溶液。
供试品溶液的制备：取供试品（石家庄康力药业有限公司，批号：121037）约0.03g，精密称定，置100ml 量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液溶解并定容，过滤，取续滤液，作为供试品溶液。
阴性样品溶液的制备：按处方比例取辅料制成空白制剂，按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。
2.3 专属性实验：在2.1色谱条件下，分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液各10L，注入液相色谱仪，记录色谱图。
高效液相色谱分析技术-原理(陈桂良)
流动相
不同极性 不同极性 有机溶剂 有机溶剂 和水 吸附与解 吸 溶解与挥 发
不同pH值 有机溶剂 的缓冲溶 或一定pH 液 值的缓冲 溶液 可逆性的 离子交换 多孔凝胶 的渗透或 过滤
分离原理
色谱柱和色谱模式
• • • • • 3.1正相色谱（normal phase chromatography） 3.2 反相色谱（reverse phase chromatography） 3.3离子对色谱（ion-pair chromatography） 3.4 离子交换和离子色谱（ion-exchange and ion chromatography） 3.5 疏 水 作 用 色 谱 （ hydrophobic interaction chromatography） 3.6 亲和色谱（affinity chromatography） 3.7 排阻色谱（Size Exclusion Chromatography， SEC） 3.8凝胶渗透色谱（GPC）
其他
• 理论板数、相邻峰的分离度、多次进样 的相对标准偏差百分数以及拖尾因子 （色谱峰形偏离对称高斯峰的程度）作 为系统适用性参数。
系统适应性试验
• N=5.54*(tR/W1/2)2 =5.54*(1.065*60*tR/A/H)2 • R=2(t2-t1)/(W1+W2) (>1.5) • T=T/2d (Ch.P 0.95~1.05; USP <2.5) • RSD<2.0% • K=(t-tm)/tm
薄层色谱法（TLC） 平板色谱法 纸色谱法
高效毛细管电泳法（HPCE）
色谱学发展历史
1906年，Tweet发现色谱分离现象。 1941年，Martin和Synge发明了利用物质 在两种不相混溶的溶剂中因分配系数的不 同而达到分离的“分配色谱法”，1952年 获Nobel奖。同时提出以气体为流动相。
药物检验中超高效液相色谱法的应用策略
药物检验中超高效液相色谱法的应用策略发布时间：2021-09-01T09:41:22.473Z 来源：《健康世界》2021年11期作者：张春侠高继军[导读] 超高效液相色谱分析法是一种高速有效的分析分离技术张春侠高继军普洛药业股份有限公司浙江省东阳市 322118摘要：超高效液相色谱分析法是一种高速有效的分析分离技术，常用于对药物及食品的检测和检验。
超高效液相色谱法为研究高通量和分离复杂混合物的工作提供了更为有效的方法，在检测微量药物及药剂样品方面更为突出，在药品质量检验、药品成分识别、药物分子的代谢组合等方面应用较为广泛。
鉴于此，文章重点就药物检验中超高效液相色谱法的应用策略进行研究分析，以供参考和借鉴。
关键字：药物检验；超高效液相色谱技术；应用策略引言随着社会的发展与生活水平的提高，人们对食品以及药物质量的要求也不断提高，各种分离分析技术也层出不穷。
超高效液相色谱法具有样品组分容易吸收、样品处理方法简单、检测自动化、适用范围广、药物成分分离效率高、检测灵敏度高以及分离速度快等诸多优点，为监测药品及食品的质量安全提供了更为有效的平台。
1超高效液相色谱技术原理分析所谓超高效液相色谱技术，实质上是融合了超高压系及小颗粒填料色谱柱的新型检测技术。
在使用该项技术时，主要影响色谱柱性能的因素是固定相颗粒度，随着颗粒度参数的不断缩小，色谱柱性能逐渐趋于良好。
因此，在实际运用该项技术进行药物检验中，可以通过降低固定相颗粒度的方式，达到提升检测和分析灵敏度的实质性目的。
与此同时，也可以有效的减少药品分析的时间。
然而当前对于药物检验和分析质量要求不断提升，这对于超高效液相色谱的分离速度和效率提出了更高的要求，需要加强技术的创新和升级，具体如下：第一，对自动进样体积进行改进。
在整个超高效液相色谱技术体系当中，进样环节十分关键，会影响到检验结果的准确性。
通常尽可能的对进样死体积进行缩小，一方面可以缓解极端高压力波所产生的干扰，另一方面还可以加快进样的速度，达到提升检验和分析效率目的；第二，提高输液泵效率。
高效液相色谱分析技术—方法开发陈桂良共70页文档
71、既然我已经踏上这条道路，那么任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
高效液相色谱分析技术—方法开发陈桂良
31、园日涉以成趣，门虽设而常关。 32、鼓腹无所思。朝起暮归眠。 33、倾壶绝余沥，窥灶不见烟。
34、春秋满四泽，夏云多奇峰，秋月 扬明辉 ，冬岭 秀孤松 。 35、丈夫志四海，我愿不知老。
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反相高效液相色谱法测定果汁中11种有机酸条件的优化
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分析化学
第 32 卷
将流动相分别配成 0 、 0. 03 、 0. 06 、 0. 09 、 0. l2 、 0. l5 、 0. l8 和 0. 2l mOi / L 的 K2 HPO4 溶液 （ 用 H3 PO4 调 pH 值为 2. 65 ） ， 对标准溶液中的各有机酸进行分离。结果表明： 当流动相中不含有磷酸盐时， 各有机 酸分离效果不好； 逐步增加流动相中磷酸盐的浓度， 有机酸均能得到分离， 且不影响分离效果。由于高 浓度的盐会对泵和柱子的寿命产生影响， 所以本实验选用 0. 0l mOi / L 的 K2 HPO4 作为流动相。 3. 3 流动相 pH 值的选择 的 0. 0l mOi / L 的 K2 HPO4 溶液作流动相， 测定各有机酸的保留时间， 以不同 pH 值 （ 用 H3 PO4 调节） 结果显示流动相 pH 值对有机酸的分离影响很大 （ 见图 l ） 。当 pH 值为 2. 0 时， 琥珀酸和富马酸完全不 能分开； 逐步提高 pH 值， ll 种有机酸逐渐得到分离， 但柠 檬酸和富马酸、 酒石酸和奎宁酸的分离度却逐渐减小； 当 pH 值为 3. 0 时， 柠檬酸和富马酸、 酒石酸和奎宁酸不能有 效分离； 当 pH 值为 3. 2 时， 部分有机酸的出峰顺序发生变 化。由于 pH 值小于 2. 5 的溶液会影响色谱柱的寿命， 经 综合考虑， 最后选择 pH 值为 2. 6 磷酸盐缓冲溶液。 3. 4 流动相中甲醇含量的选择 在流动 相 中 加 入 少 量 甲 醇， 能 有 效 的 改 善 峰 形。以 溶液作流动相， 对不同的 0. 0l mOi / L 的 K2 HPO（ 4 pH 2. 6 ） 甲醇含量 （0、 l% 、 2% 、 3% 、 4% 、 5% ） 对色谱分离的影响进 行了比较， 结果表明， 随着流动相中甲醇含量的增加， 有机 酸的疏水端基与固定相的相互作用减弱， 保留时间下降， 3% 的甲醇-缓冲溶液 （ ! " !） 分离度和峰形较好。 3. 5 其它条件选择 溶液作流动相比较了 以 3% CH3 OH-K2 HPO（ 4 pH 2. 6 ） 柱温、 流 速 对 保 留 时 间 的 影 响。 结 果 发 现： 流 速 l. 0
高效液相色谱法测定大败毒胶囊中橙皮苷的含量
高效液相色谱法测定大败毒胶囊中橙皮苷的含量摘要】目的建立大败毒胶囊中橙皮苷含量的高效液相色谱法。
方法采用Agela Venusil MP C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm），以甲醇-醋酸溶液（每1000mL水中含冰醋酸25mL）（35:65）为流动相，流速为 1.0mL/min，检测波长为284nm，柱温30℃。
结果橙皮苷进样量在0.0352～1.1264μg（r=0.9999）范围内与峰面积积分值具有良好线性关系，平均加样回收率为98.18%,RSD为0.99%（n=9）。
结论该法简便、灵敏、准确可靠，可用于该药的含量测定。
【关键词】高效液相色谱法大败毒胶囊橙皮苷含量【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2013）32-0343-02大败毒胶囊为《卫生部药品标准中药成方制剂》第十二册收载的品 [1]，由大黄、蒲公英、赤芍、陈皮、黄柏等17味中药组成，具有清血败毒、消肿止痛等功效。
用于治疗脏腑毒热、血液不清引起的梅毒、血淋、白浊、尿道刺痛、大便秘结、疥疮等症。
原标准中无含量测定方法，方中陈皮为主要药味之,其有效成分为橙皮苷，为能有效地控制该药品质量，本试验采用HPLC法测定橙皮苷的含量，效果较好。
1 仪器与试药DIONEX UltiMate 3000 pump，DIONEX UltiMate 3000 Diode Array Detector液相色谱仪；橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110721-200613，供含量测定用，含量100%）；大败毒胶囊（批号121003、130301、130603，内蒙古通辽制药股份有限公司生产）；水为纯化水；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Agela Venusil MP C18柱（250mm×4.6mm,5μm）；流动相：甲醇-醋酸溶液（每1000mL水中含冰醋酸25mL）（35:65）；检测波长：284nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量10μL。
高效液相色谱分析技术—方法认证和注意事项(陈桂良)
定量限
• 定量限系指样品中被测物能被定量 测定的最低量，其测定结果应具一 定准确度和精密度。杂质和降解产 物用定量测定方法研究时，应确定 定量限。常用信噪比法确定定量限。 一般以信噪比为10∶1时相应的浓度 或注入仪器的量进行确定。
线性
• 指在设计的范围内，测试结果与试样 中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 应在规定的范围内测定线性关系。可 用一贮备液经精密稀释，或分别精密 称样，制备一系列供试样品的方法进 行测定，至少制备5份供试样品。函 数作图，或用最小二乘法进行线性回 归。响应信号也可经数学转换，再进 行线性回归计算。
• 在相同条件下，由一个分析人员测 定所得结果的精密度称为重复性； 在同一个实验室，不同时间由不同 分析人员用不同设备测定结果的精 密度，称为中间精密度；在不同实 验室由不同分析人员测定结果的精 密度，称为重现性。 • 含量测定和杂质定量测定应考虑方 法的精密度。
重复性
• 在规定范围内，至少用9次测定结果 进行评价，如制备3个不同浓度的样 品，各测定3次，或把被测物浓度当 作100%，用至少测定6次的结果进行 评价。
需验证的分析项目
• 鉴别试验，杂质定量或限度检查， 原料药或制剂中有效成分含量测定， 以及制剂中其他成分(如降解产物、 防腐剂等)的测定。药品溶出度、释 放度等功能检查中，其溶出量等测 试方法也应作必要验证。
典型的验证参数(Characteristics)
• • • • • 准确性(Accuracy) 精密度(Precision) 重复性(Repeatablity) 中间精密度(Intermediate Precision) 专属性(Specificity)
专属性
• 专属性系指在其他成分(如杂质、降 解产物、辅料等)可能存在下，采用 的方法能准确测定出被测物的特性。 鉴别反应、杂质检查、含量测定方 法，均应考察其专属性。如方法不 够专属，应采用多个方法予以补充。
高效液相色谱法在黄连解毒药剂质量检测上的应用
高效液相色谱法在黄连解毒药剂质量检测上的应用作者:梅景良黄连解毒汤中的黄芩具有抗菌消炎、降压利尿、解热、镇静、利胆解痉等作用，是此方的主要药物，而黄芩苷是黄芩中的主要有效成分，因此测定其含量已成为黄连解毒药质量控制标准之一。
目前医药界检测黄芩苷含量大多采用高效液相色谱法。
本文就高效液相色谱法在黄芩苷含量测定上的应用情况及其存在的问题作一简述。
1 黄芩苷含量常用测定方法简介1．1 薄层层析——比色法将含黄芩苷的药剂经过薄层层析分离，紫外光下定位，用一定溶剂洗脱后，利用其结构上的酚羟基及其还原性进行显色。
在721型分光光度计或72型光电分光光度计上测定其在黄芩苷吸收度，计算其含量。
在该法中，薄层层析的回收率是含量测定精确与否的判断标准。
该法与紫外法比较无明显差异。
1．2 薄层层析——紫外分光光度法含黄芩苷的样品经薄层层析分离后，紫外光下定位，经洗脱在751G或752型分光光度计上测定其大最大吸收波长处的吸收度，计算其含量。
须绘制黄芩苷的标准曲线，或求出回归方程。
然后在标准曲线上查出相当于黄芩苷的含量，或用回归方程计算含量。
在测定样品含量前，首先应对不同剂型的制剂进行一定的处理，再行测定。
该测定法的缺点是制剂成分复杂、干扰组分多时，会影响测定结果，且薄层回收率受固定相、洗脱剂的影响，必须预先选择适宜的固定相和洗脱剂，才能得到令人满意的回收率。
1．3 双波长分光光度法含黄芩苷的复方制剂可不经分离，直接在751G或Uv一265紫外分光光度计及UV-3000型双波长双光束自记式分光光度计上测定λ1(参比波长)和λ2(测定波长)处的吸收度，得吸收度差值ΔA，由此计算黄芩苷的含量。
λ2为测定波长，是测定样品中黄芩苷的最大吸收波长，λ1为参比波长，是测定样品中干扰成分与黄芩苷等吸收处的波长。
干扰成分在此波长处不影响黄芩苷的吸收度，不同成分的样品参比波长不同，须实际测定来确定。
在λ1和λ2处黄芩苷的吸收度差只与样品中黄芩苷的浓度成一定的函数关系，且在一定浓度范围内两者为线性关系。
最新 高效液相色谱法同时测定葡萄酒中5种酸性物质分析
高效液相色谱法同时测定葡萄酒中5种酸性物质分析葡萄酒是用新鲜的葡萄或葡萄汁经发酵酿制而成的一类酒精饮品。
通常分红葡萄酒和白葡萄酒两种。
因蕴含多种氨基酸、矿物质、维生素等对人体有益成分，其营养价值得到了广泛认可。
近年来，有关葡萄酒制假售假现象屡有报道，为了增强红葡萄酒的色泽同时降低生产成本，有不法企业向葡萄酒中添加人工合成色素，从而达到以假乱真的目的。
长期饮用此类假酒，会对人的肝脏、肾脏等产生危害。
因此对葡萄酒中可能添加的外来色素进行检测具有重要意义。
坚牢红（又名酸性红13）、偶氮玉红（又名酸性红）、孟加拉红（又名酸性红94）、奇通红S（又名酸性红52）和荧光桃红（又名酸性红92）均属于偶氮染料。
GB2760-2011《食品添加剂使用标准》中明确规定偶氮玉红不得在葡萄酒中添加[1]，其它四种色素在我国和欧盟等国家也均不允许在食品中使用。
目前食品中合成色素的检测方法主要有高效液相色谱法[2～8]、液质联用法[9]、电动毛细管色谱法[10]和极谱法[11]。
但同时测定葡萄酒中坚牢红、偶氮玉红、孟加拉红、奇通红S、和荧光桃红等5种酸性红色素的方法尚不多见。
为有效监控酸性工业染料在食品中的滥用，本实验建立了高效液相色谱法同时快速测定葡萄酒中5种酸性红色素的检测方法。
1材料与方法1.1仪器与试剂Waters 2695型高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器；AL204 电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；MS3基本型旋涡混合仪，德国IKA；KQ5200超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。
甲醇，色谱纯；醋酸铵，分析纯；坚牢红、偶氮玉红、孟加拉红、奇通红S、荧光桃红，Dr. Ehrenstorfer公司。
1.2标准溶液的制备将5种色素配制成质量浓度为50 mg/L的混合标准储备液，置于4℃冰箱中保存。
将混合标准储备液用水依次稀释成0.5、1.0、5.0、10.0、50.0 mg/L 的标准系列溶液。
1.3高效液相色谱条件色谱柱：Symmetry C18柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；采集波长：200～630 nm；进样量：10 μL。
高效液相色谱法在制药行业中的应用
高效液相色谱法在制药行业中的应用--陈诗语制药1081 1081604118 高效液相色谱法（HPLC）是20世纪70年代发展起来的一项高效、快速的分离分析技术已被广泛用于各个领域，它是以经典的液相色谱为基础，引入气相色谱的理论与实验方法，将流动相改为高压输送，并采用高效固定相及在线检测等手段，发展而成的分析、分离方法。
以其灵敏度高、选择性好，可分析微量组成甚至痕量样品等特点，成为医药分析领域应用最广、发展最快的现代分析技术之一。
有的已被列入药典，成为环境污染物检测技术及化工产品质量检验中的标准方法。
1．高效液相色谱的结构、原理和特点高效液相色谱仪主要由色谱泵及控制器、进样器、色谱柱、检测器和数据处理及控制五大部分组成，分离原理是一个物理过程，流动相携带着待分析化合物和其他一些共存物质流过色谱柱，利用不同物质在固定相上的保留时间不同，从而出峰时间不同而达到分离，利用保留时间定性，峰高或者峰面积定量，在将分离后的各个成分依次通过一紫外检测器时就可检测出各化合物的浓度来。
高效液相色谱法有“三高一广一快”的特点：（1）高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。
（2）高效：分离效能高。
可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。
（3）高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。
（4）应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。
（5）分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30 min，有些样品甚至在5min内即可完成，一般小于1h。
此外HPLC还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点。
2．高效液相色谱的研究应用进展药物与人类的健康，生活质量的提高关系极大，许多药品由于受到纯度的影响，药效不能充分发挥，甚至产生毒副作用；有时服用前需作各种试验，带来很多麻烦。
高效液相色谱法测定双黄连口服液有效部位中连翘苷含量
５ １ ０， ｈｎ ３ ｎ ｎＵ ｉ ｒｉ Ｃ Ｚ ｅ ｇｈ ｕ ５ ０ ８ Ｃ ｉ ） １４ ０ Ｃ ｉ ａ ． ａ ｎｖ ｓ ｏ Ｍ， ｈ ｎｚｏ ０ ０， ｈｎ Ｈｅ ｅ ｔ ｆＴ ｙ ４ ａ
Ａｂｔａ ｔ ｓ ｃ：０ｂｅｔ ｅＴ ｓａ ｆ ｈ ａｌＨＰ ｃ ｍｅｈｏ ｏ ｅｅｍｉａ ｏ ｆＦ ｒｙｈｎ ｉ ｆ ｃｉｅｐ ｒｓｏ ｒ ｊｃ ｖ ｏｅ ｔｂ ｓ ｌ ｉ ｉ Ｌ ｔ ｄ ｆｒｄ ｔｒ ｎ ｔ ｎ ｏ ｏ ｓ ｔ ｉ ｅ ｅ ｔ ａ ｔ ｆ ｉ ｎ ｖ
１ 广东药学院， ． 广东 广州 ５ ００ ；２ 何贤纪念 医院， 东 广卅Ｉ １ ４ ０ ． １０ ６ ． 广 １０ ；３ 河南 中医学院， ５ 河南 郑州 ４ ０ ０ ５ ０８
摘要 ：目的
建立双黄连 口服液有效部位 中连翘苷的含量测定方法。方法
采用大连依 利特 Ｈ ｐ ｒ ｉ Ｄ ２Ｃ ｙ ｅ ｓ Ｏ Ｓ ｌ
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５ ・ ２
Ｃ ｎ ｅ ｏ ｎ ｏ Ｉ ｏｒ ｈｉ ｅｓ Ｊ ｕｒ ａ１ ｆ ｎｆ ｍａｔ ｏ ｏ Ｔ Ｍ ｉｎ ｎ Ｃ
Ｍａｒ ２０ ２ ｏ１ １９ ｏ １ Ｖ ． Ｎ ．３
．
高效液相色谱法测定双黄连 口服液 有 效部位 中连翘 苷含量
王战红 谭玉彬 。李淑芳 王淑 美 ， ， ， ， 梁生 旺 ， 张海龙 。 ， 陈国琴 。
关 键 词 ：双 黄 连 １服 液 ； 连翘 苷 ； 高效 液 相 色谱 法 ； 含 量 测 定 ： ２
Ｄ ｌ １ ． ９ ９ ｊ ｉ ｓ． ０ ５ ５０ ． ０ ２ ０ ． ２ Ｏ ： ０ ３ ６ ／ ． ｎ １ ０ — ３ ４ ２ １ ． ３ ０ ０ ｓ
连
所建立 的方法 简便 、
中 图分 类 号 ：Ｒ ８ ． ２ ４１
高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中丹皮酚含量
高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中丹皮酚含量.txt等余震的心情，就像初恋的少女等情人，既怕他不来，又怕他乱来。
听说女人如衣服，兄弟如手足，回想起来，我竟然七手八脚地裸奔了二十多年！今天心情不好，我只有四句话想说，包括这句和前面的两句，我的话说完了！高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中丹皮酚含量更新日期：2010-12-22 点击：张忠春管玉民王健王官连提要采用HPLC法测定六味地黄胶囊中丹皮酚的含量，流动相为70%甲醇，检测波长274 nm，平均回收率99.48%。
方法简便，准确，重现性好。
关键词六味地黄胶囊；丹皮酚；高效液相色谱法Determination of Paeonol in Liuweidihuang Capsule by HPLCZhang Zhongchun, Guan Yumin, Wang Jian, et alShandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250012Abstract HPLC method has been used for the determination of paeonol in Liuweidihuang capsule with 70% methanol as mobile phase and detecting wavelength of 274 nm. The average recovery is 99.48%. The method is simple and accurate.Key words Liuweidihuang capsule; Paeonol; HPLC六味地黄胶囊是传统名中药六味地黄丸的改革剂型品种，有滋阴补肾之功效，由熟地黄、牡丹皮、山茱萸、泽泻、茯苓、山药组成，收载于部颁标准第8册。
标准中是水蒸气蒸馏—紫外分光光度法测定样品中丹皮酚的含量。
我们在实验中发现该方法操作繁琐费时，且结果不准确，而改用HPLC法测定，方法简便，快速，准确，重现性好。
高效液相色谱分析技术—方法开发(陈桂良)
8
VW D1 A, W av elength=230 nm (F: \PHEN1575\HPCHEM\2\DATA\SW 0503\ CARLO087.D)
m AU
80
60
40
20
0
0
2
4
6
8
VW D1 A, W av elength=230 nm (F: \PHEN1575\HPCHEM\2\DATA\SW 0503\ CARLO088.D)
● 方法开发前要确定的基本问题
2、混合分析物的主要差异
疏水性差异----用疏水性选择性强的色谱柱 极性差异----用具有极性选择性的色谱柱 芳香性差异----用芳香选择性色谱柱 混合差异----用多种选择型色谱柱 分子量差异----GPC、GFC
● 方法开发前要确定的基本问题
3、分子结构决定选用何种分析方法 HPLC-UV HPLC-IR HPLC-MS HPLC-ELSD Etc.
1.0 mL/min
Acidic, aromatic compounds 1. Indoprofen 2. Ethyl paraben 3. Naproxen 4. Diflunisal 5. Indomethacin 6. Ibuprofen
苯基的影响
mAU
140 120 100
80 60 40 20
10
12
O
14
m in
N O
H
H
O
O
O
O O
苯基的选择性影响
• 被分析物和固定相之间产生的作用 • 使用甲醇可以增加作用效果
O OH Si
O H3C Si O Si
O H3C Si O OH
高效液相色谱法测定凉粉草中天然有机酸——苯甲酸
关键词 ：凉粉草 ；天然有机酸 ；苯 甲酸 ；高效液相色谱
中图 分 类 号 ：Ｔ Ｓ ２ ０ ７ ． ３ 文 献标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１ ０ ０ ６— ２ ５ １ ３ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ５— ０ ２ ０ ６— ０ ８
Ｔｈ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ａｌ ａ ｃ ｉ ｄ—ｂ ｅ ｎ ｚ ｏ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｆ ｒ Ｏｍ ｍｅ ｓ ｏｎ ａ ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｎ ｓ ｉ ｓ ｂ ｅ ｎ ｔ ｈ ｂ ｙ ＨＰＬ Ｃ
高效液相色谱分析技术—方法开发陈桂良共70页文档
6、纪律是自由的第一条件。——黑格 尔 7、纪律是集体的面貌，集体的声音， 集体的 动作， 集体的 表情， 集体的 信念。 ——马 卡连柯
8、我们现在必须完全保持党的纪律， 否则一 切都会 陷入污 泥中。 ——马 克思 9、学校没有纪律便如磨坊没有水。— —夸美 纽斯
10、一个人应该：活泼而守纪律，天 真而不 幼稚， 勇敢而 鲁莽， 倔强而 有原则 ，热情 而不冲 动，乐 观而不 盲目。 ——马 克思
1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——非洲 2、最困难的事情就是认识自己。——希腊 3、有勇气承担命运这才是英雄好汉。——黑塞 4、与肝胆人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈
高效液相色谱方法开发
高效液相色谱方法开发
高效液相色谱方法开发是一个系统性的过程，涉及到多个步骤和决策。
以下是一个一般性的方法开发流程：
1.目标分析物确定：首先明确需要分析的目标化合物或类化合物的性质，包括分子量、结构式、极性等信息。
2.选择合适的色谱柱：根据目标化合物的性质选择合适的色谱柱。
例如，对于分子量较小、极性较大的化合物，可以选择亲水性较好的色谱柱；对于分子量较大、非极性较强的化合物，可以选择疏水性较强的色谱柱。
3.确定流动相：根据目标化合物的性质和色谱柱的特性，选择合适的流动相。
流动相的选择对于色谱分离效果和目标化合物的保留时间都有重要影响。
4.优化色谱条件：在确定了色谱柱和流动相之后，需要进行色谱条件的优化。
这包括流速、进样量、检测波长等参数的调整，以达到最佳的分离效果和灵敏度。
5.验证色谱方法：在优化了色谱条件之后，需要对方法进行验证。
这包括重复性、稳定性和耐用性等方面的测试，以确保方法的可靠性和重现性。
6.数据处理和分析：使用相应的数据处理软件对色谱数据进行处理和分析，包括峰识别、定量分析等。
7.方法优化和改进：根据数据处理和分析的结果，对色谱方法进行优化和改进。
这可能包括调整流动相的比例、改变色谱柱的类型或
规格等。
需要注意的是，高效液相色谱方法开发是一个迭代的过程，需要不断地进行实验和调整，以达到最佳的分离效果和分析结果。
同时，也需要根据具体的应用场景和需求进行针对性的优化和改进。
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疏水性的比较
8.000
C8 phase
6.000
300Å C18 phase
4.000
k butylbenzene
2.000
0.000
Synergi Hydro-RP
Luna C18(2)
Synergi Luna C8(2) Luna C5 Luna Phe- Jupiter C18 Synergi
Columns:
Mobile phase: Flow rate: Components:
苯基的影响
Luna™ 5m C18(2) 150x4.6mm Luna™5m Phenyl-Hexyl 150x4.6mm Synergi™ 4m Polar-RP150x4.6mm
50:50 Acetonitrile:20mM Potassium phosphate pH 2.5
Luna™ C8(2) & C5
• 减少疏水性化合物的保留时间 •减少分析的时间
Synergi™ Max-RP
• 疏水性和 C18柱类似 – 为一支C12柱 •提供比C18柱更尖的柱峰,尤其是分析碱性化合 物
Synergi™ Max-RP
Basic Drugs at Neutral pH
C18 phases
• ④由获得的色谱图进行定性分析和定量分析。
分析物
• 理化性质 • 混合分析物的主要差异 • 分子结构和特性
● 方法开发前要确定的基本问题
1、分析物的物理、化学性质
样品基质----决定前处理方法 溶解性----决定正、反相方法 酸碱性----确定色谱柱类型、流动相组成 pKa----确定流动相的pH值 化学结构、特征官能团、Etc.
Synergi™
Flow Rate (mL/min)
Synergi™ Max-RP
与C18柱性能类似的C12柱
Synergi™ Polar-RP®
• 保留极性和苯基化合物 • 100% 水溶液稳定 • 增加极性的选择性
Synergi™ Hydro-RP
• 疏水性非常强 • 极性封端100%水溶性稳定 • 增进极性的选择性
•永远不会坏
•理想分离度
决定峰分离度的三个要素
• 峰保留时间 • 选择性(出峰的顺序) • 柱效
固定相的选择
• 疏水性的选择 • 极性的选择 • 苯基的选择
固定相疏水性考虑的要素
• 键合相的种类 (C18, C8, Phenyl, etc) • 表面积 • 键合相的键合率
色谱柱选择表
• 颗粒直径及形状(球型及不规则型) • 柱长及柱内径 • 表面积及孔径 • 碳负荷及键合类型
Synergi Hydro-RP VS. Luna® C18(2)
Synergi™ Hydro-RP
Synergi Hydro-RP
Synergi Max-RP
Mobile Phase:
Gradient: Flow rate: Sample:
A: 20mM KH2PO4, pH 4.6 B: Acetonitrile A/B (95:5) to A/B (65:35) in 15 min 1.5 mL/min 1. Morphine 2. Hydromorphone 3. Codeine 4. Nalorphine 5. Oxycodone
Synergi™ Hydro-RP
Synergi™ Fusion-RP
• 增加极性的选择性同时减少疏水性的分析时间 • 在水溶液中100%稳定
mAU 500
VWD1 A, Wavelength=210 nm (S:\HPCHEM\1\DATA\SW1003\TEST0034.D)
400
300 极性增大
80
60
40
20
0
1
2
3
极性选择性
1+2
4
5
1+2
4
5
1 2
HO
min
O CH3 H HH
Estrone
min
HO
OH CH3 H HH
Estradiol
4
5
min
Synergi™
Synergi Max-RP - C12 Synergi Hydro-RP - C18 Synergi Fusion-RP – C18 Synergi Polar-RP – Phenyl
App ID 1125
Luna™ C18(2)
Ginseng Root
Column: Luna 5 µm C18 / ODS (2) Dimensions:150 x 4.6 mm ID Elution Type:Gradient Eluent A: Acetonitrile/water (15:85) Eluent B: Acetonitrile/water (80:20) Flow Rate:1.5 mL/min Temperature:25 °C Detection: UV-Vis Abs. – Variable Wave. @ 205 nm
● 方法开发前要确定的基本问题
2、混合分析物的主要差异
疏水性差异----用疏水性选择性强的色谱柱 极性差异----用具有极性选择性的色谱柱 芳香性差异----用芳香选择性色谱柱 混合差异----用多种选择型色谱柱 分子量差异----GPC、GFC
● 方法开发前要确定的基本问题
3、分子结构决定选用何种分析方法 HPLC-UV HPLC-IR HPLC-MS HPLC-ELSD Etc.
8
VW D1 A, W av elength=230 nm (F: \PHEN1575\HPCHEM\2\DATA\SW 0503\ CARLO087.D)
m AU
80
60
40
20
0
0
2
4
6
8
VW D1 A, W av elength=230 nm (F: \PHEN1575\HPCHEM\2\DATA\SW 0503\ CARLO088.D)
1.0 mL/min
Acidic, aromatic compounds 1. Indoprofen 2. Ethyl paraben 3. Naproxen 4. Diflunisal 5. Indomethacin 6. Ibuprofen
苯基的影响
mAU
140 120 100
80 60 40 20
200
100
0 0
mAU
2
4
6
VWD1 A, Wavelength=210 nm (S:\HPCHEM\1\DATA\SW1003\FUSI0046.D)
350
300
250
200
150
100
50
0
0
2
4
6
Running Conditions
Synergi Fusion-RP 4 80Å
疏水性减少
8
Luna™ 5m C18(2) YMC-Pack™ 5m Pro C18 Synergi™ 4m Polar-RP® (Ether-linked Phenyl)
150x4.6mm
Mobile phase: 75:25 Methanol:water
Flow rate: 1 mL/min
Components: 1. Estrone 2. Estradiol
10
12
一般的 C18柱
14
min
8
10
12
14
min
Mobile phase: 75:25 20mM Potassium phosphate pH 2.5: Acetonitrile Flow rate: 1.5 ml/min Temperature: Ambient Detection: 210nm Injection: 1. Maleic acid
App ID 14436
Luna™ Phenyl-Hexyl
Green Tea(绿茶)
Column: Luna™ 5u Phenyl-Hexyl Dimensions: 250x 4.6mm Mobile Phase A:0.2% Acetic acid in Water/Acetonitrile (91:9) B:Water/Acetonitrile (20:80) Gradient: 100%A to t=25min, (68:32) t=25min t t=35min, hold 100%B for 10 min. Flow Rate: 1ml/min Temperature: 350C
如何得到最理想的分析结果
流动相,被分析物,和固定相三者之间的作用影响峰 保留时间和峰分离性.峰保留时间短一般峰型较好, 但分离可能不理想.所以为了调节最理想的分析结果 ,可以改变下列的一项或数项条件:
流动相 固定相 温度
如何选择适当的色谱柱 理想的柱子
•可以适用于分析所有的化合物
Silica Advantage
Balancing Efficiency & Backpressure
5µ 4µ 3µ
higher efficiencies
lower backpressures
Plate Height (H) Pressure Drop (Bar)
Linear Velocity (mm/sec)
HO
OH CH3 H
HH HO
Estradiol
O CH3 H HH
Estrone
mAU
175 Luna™ C18(2)
150
125
100
75
50
25