双黄连口服液的质量分析
双黄连口服液质量标准的研究
双黄连口服液质量标准的研究发布时间：2021-12-31T07:03:07.080Z 来源：《中国科技人才》2021年第25期作者：段晓红黄晓蕾张黎达[导读] 采用薄层色谱法对处方中的金银花、黄芩和连翘成分进行定性鉴别，用高效液相色谱法对该口服液中的黄芩苷和绿原酸进行定量分析。
黄芩苷在0.72-2.58μg/mL的范围内线性关系良好；绿原酸在0.113-0.519μg/mL的范围内线性关系良好。
实验所采用的方法简便易行，准确可靠，能够为双黄连的质量标准研究提供依据。
哈药集团三精制药有限公司黑龙江省哈尔滨市 150069摘要：双黄连口服液是由金银花、黄芩、连翘三味中药经提取制成的口服液，具有疏风解表、清热解毒的功效，主要用于治疗病毒或细菌感染而引起的风热感冒发热、肺炎、呼吸道感染、扁桃体炎等疾病，疗效确切、安全有效。
研究对双黄连口服液中的中药材及其主要成分进行了定性、定量试验，采用薄层色谱法进行定性鉴别，采用高效液相色谱法来测定口服液中的绿原酸、黄芩苷、连翘苷成分的含量。
从而为双黄连口服液的质量标准研究提供依据。
关键词：双黄连口服液；薄层色谱法；高效液相色谱法采用薄层色谱法对处方中的金银花、黄芩和连翘成分进行定性鉴别，用高效液相色谱法对该口服液中的黄芩苷和绿原酸进行定量分析。
黄芩苷在0.72-2.58μg/mL的范围内线性关系良好；绿原酸在0.113-0.519μg/mL的范围内线性关系良好。
实验所采用的方法简便易行，准确可靠，能够为双黄连的质量标准研究提供依据。
一、实验材料1.药品和对照品。
双黄连口服液（哈药集团三精制药股份有限公司，批号：081109220811246208121342）。
绿原酸对照品、黄芩苷对照品、连翘药材对照品（中国药品生物制品鉴定所）。
2.仪器。
高校液相色谱仪：岛津LC－2A；超声处理器：LCQ－500E（昆山超声仪器有限公司）；分析天平：上海天平仪器厂生产。
二、实验方法和结果1.定性分析。
双黄连口服液相对密度的测定的收获和体会
双黄连口服液相对密度的测定的收获和体会以双黄连口服液相对密度的测定的收获和体会为标题，写一篇文章双黄连口服液是一种中药制剂，具有消炎解毒、清热利湿的功效，广泛应用于临床治疗。
而相对密度是一种常用的物理性质指标，可以反映出物质的密度和浓度等信息。
本文通过对双黄连口服液相对密度的测定，总结了一些收获和体会。
通过测定双黄连口服液的相对密度，我们可以了解到其密度和浓度的变化情况。
密度是物质质量和体积的比值，浓度则是溶液中溶质的质量与溶液总体积的比值。
通过对双黄连口服液的相对密度进行测定，可以进一步了解其成分的变化，为合理应用双黄连口服液提供了一定的参考。
相对密度的测定可以帮助我们判断双黄连口服液的质量。
相对密度是一个物质的固有性质，对于同一种物质而言，其相对密度应该是固定的。
通过对双黄连口服液相对密度的测定，可以了解到其质量是否符合标准要求。
如果相对密度偏离了理论值，可能意味着双黄连口服液的成分或浓度发生了变化，从而影响了其药效。
因此，相对密度的测定可以作为双黄连口服液质量控制的重要手段。
通过对双黄连口服液相对密度的测定，我们还可以研究其物理性质和化学性质之间的关系。
相对密度是一个综合性的物理性质指标，与物质的分子结构、化学键以及离子间的相互作用等有关。
通过对不同条件下双黄连口服液相对密度的测定，可以了解到其在不同温度、压力等条件下的变化规律，进一步探究其物质性质的变化规律。
在进行双黄连口服液相对密度测定的过程中，我们也收获了一些实验技能和科学思维方法。
首先是实验技能方面，我们需要熟悉使用密度计的操作步骤、注意事项和常见误差，保证实验数据的准确性和可靠性。
其次是科学思维方法方面，我们需要善于观察、分析和总结，从实验数据中提取有用信息，发现问题和规律，并进行合理的解释和推理。
通过对双黄连口服液相对密度的测定，我们可以了解到其密度和浓度的变化情况，判断其质量是否符合标准要求，研究其物理性质和化学性质之间的关系，并提升了实验技能和科学思维方法。
双黄连口服液质量标准
双黄连口服液质量标准双黄连口服液是一种常见的中药制剂，具有清热解毒、抗菌消炎的功效。
为了保证双黄连口服液的质量安全，制定了一系列的质量标准。
本文将详细介绍双黄连口服液的质量标准，以确保其安全有效地应用于临床。
一、外观特征双黄连口服液应为澄清的液体，无悬浮物和沉淀物。
颜色应为黄绿色，无异味。
外观特征是评价双黄连口服液质量的重要指标之一。
二、含量测定双黄连口服液中有效成分的含量是评价其质量的重要指标之一。
常用的有效成分有黄连素、黄连苷等。
含量测定可以通过高效液相色谱法、紫外分光光度法等方法进行。
三、溶出度测定溶出度是指双黄连口服液在一定时间内释放出有效成分的能力。
溶出度测定可以通过体外释放试验进行，以评估双黄连口服液的释放性能。
四、PH值测定PH值是评价双黄连口服液酸碱性的指标之一，也是其稳定性的重要参数。
PH值应在4.0-7.0之间，以确保双黄连口服液在储存和使用过程中的稳定性。
五、微生物限度双黄连口服液中微生物限度是评价其卫生质量的重要指标之一。
常见的微生物限度包括大肠菌群、霉菌和酵母菌等。
微生物限度应符合国家药典中规定的标准。
六、重金属含量测定重金属含量是评价双黄连口服液中重金属污染程度的指标之一。
常见的重金属有铅、镉、汞等。
重金属含量应符合国家药典中规定的标准，以确保双黄连口服液的安全性。
七、残留溶剂测定残留溶剂是指制剂制备过程中未完全挥发出来的溶剂。
常用的残留溶剂有甲醇、乙醇等。
残留溶剂测定可以通过气相色谱法等方法进行。
八、稳定性研究稳定性研究是评价双黄连口服液在储存期间质量变化情况的重要手段。
稳定性研究可以通过加速试验和长期储存试验等方法进行，以评估双黄连口服液在不同条件下的稳定性。
以上是双黄连口服液质量标准的主要内容，通过对这些指标的检测和评估，可以确保双黄连口服液的质量安全和有效性。
同时，生产企业应严格按照国家药典和相关法规要求进行生产，加强质量管理，确保产品符合标准要求，并对产品进行全程跟踪监控，以保障患者用药安全。
双黄连口服液的质量分析
双黄连口服液的质量分析一、实验目的1.掌握对照品对照法和对照药材对照法鉴别复方制剂中药材的方法。
2.掌握双黄连口服液中金银花、黄芩和连翘的质量检验方法。
二、仪器与试药1.仪器美国PE-60型高效液相色谱仪KQ-300E型超声波清洗器Mettler AL204电子天平ZF-2型三用紫外仪HHS型电热恒温干燥箱容量瓶规格：25mL 移液管规格：25mL 滤纸规格：直径10cm研钵硅胶G薄层板聚酰胺薄膜(5cm×7cm)2..试药双黄连口服液规格：每支装10mL黄芩苷、绿原酸对照品连翘对照药材乙醇二氯甲烷甲醇硫酸醋酸三、实验原理采用对照品对照法和对照药材对照法分别鉴别双黄连口服液中的金银花、黄芩和连翘三味主药。
四、实验内容【处方】金银花375g 黄芩375g 连翘750g【制法】以上三味，黄芩切片，加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩并在80℃时加入2mol/L盐酸溶液适量调节PH值至1.0～2.0，保温1小时，静置12小时，滤过，沉淀加6～8倍量水，用40%氢氧化钠溶液调节PH值至7.0，再加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用2mol/L盐酸溶液调节PH值至2.0，60℃保温30分钟，静置12小时，滤过，沉淀用乙醇洗至PH值7.0，挥尽乙醇备用；金银花、连翘加水温浸半小时后，煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对蜜度为1.20～1.25(70～80℃测)，冷至40℃时缓缓加入乙醇，使含醇量达75%，充分搅拌，静置12小时，滤取上清液，残渣加75%乙醇适量，搅匀，静置12小时，滤过，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味，加入黄芩提取物，并加水适量，以40%氢氧化钠溶液调节PH值至7.0，搅匀，冷藏（4～8℃）72小时，滤过，滤液加入蔗糖300g，搅拌使溶解，再加入香精适量并调节PH值至7.0，加水制成1000mL，搅匀，静置12小时，滤过，灌装，灭菌，即得。
双黄连口服液的质量检验
4、样品溶液的测定
❖ 分别精密吸取照品溶液与供试品溶液各5μl， 注入液相色谱仪，测定，根据峰面积来计算每支 口服液中黄芩苷的含量，即得。
5、计算公式
（1）计算理论塔板数（按黄芩苷计）
n5.54( tR )2 W1/2
(其中：A=1.065×h×w1/2) （2）计算分离度
R 2(tR1 tR2) W1 W2
实验内容
鉴别试验
含量测定
鉴别试验的项目
A
性状鉴别
Ｂ
薄层鉴别
❖ 性状鉴别
本品为棕红色的澄清液体；味甜，微苦。
❖薄层鉴别实验
供试品溶液：取本品1ml，加甲醇5ml，振摇使溶解，静置， 取上清液，即得。
对照药材溶液：另取连翘对照药材0.5g，加甲醇10ml，置 水浴上加热回流20分钟，滤过，滤液即为。
药物分析实验
双黄连口服液的质量检验
1
实验目的
2
实验仪器与试剂
3
实验内容
4
实验注意事项
5
讨论与思考题
实验目的
1、掌握中成药特征成分的薄层对照品法及药材 法的鉴别。
2、掌握中成药的HPLC含量测定的方法。
实验仪器与试剂
❖ 仪器：回流提取器、高效液相色谱仪、微量进样 器、层析缸
❖试剂：黄芩苷 、连翘药材、氯仿、甲醇、冰醋酸
（3）计算黄芩苷的含量（外标法）
C A 样 样 C A 标 标 C 样 C 标 A A 样 标 m VC 样 D
其中：C—浓度（mg/ml)； A—峰面积； m—黄芩苷的质量（mg）； D—稀释倍数； V—每支样液的体积(ml)
实验注意事项
❖ 制备样品时，一定要用唯恐滤膜过滤 ❖ 进样时进样器一定要清洗干净 ❖ 进样前色谱仪一定要用流动相平衡 ❖ 进样完毕后，一定要清洗色谱柱后方可关机。
双黄连口服液内控质量标准
制药GMP管理文件一、目的：制定双黄连口服液的内控标准，规范公司双黄连口服液的生产。
二、适用范围：适用于双黄连口服液的生产与检验。
三、责任者：生产部、检验员、仓库保管员四、正文：双黄连口服液【处方】金银花375g 黄芩375g 连翘750g【制法】以上3味，黄芩切片，加水煎煮3次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩并在80℃时加入2mol/l盐酸溶液适量调节PH值至1.0～2.0，保温1小时，静置12小时，滤过，沉淀加6～8倍量水，用40%氢氧化钠溶液调PH值至7.0，再加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用2mol/l盐酸溶液调PH值至2.0，60℃保温30分钟，静置12小时，滤过，沉淀用乙醇洗至PH值至7.0，挥尽乙醇备用。
金银花、连翘加水温浸0.5小时后，煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密谋为1.20～1.25（70～80℃测），冷至40℃时缓慢加入乙醇，使含醇量达75%，充分搅拌，静置12小时，滤取上清液，残渣加75%乙醇适量，搅匀，静置12小时滤过，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味，加入黄芩提取物，并加水适量，以40%氢氧化钠溶液调节PH值至7.0，搅匀，冷藏（4～8℃）72小时，滤过，滤液调节PH值至7.0，加水制成1000ml，搅匀，静置12小时，滤过，灌装，灭菌，即得。
【性状】本品为棕红色的澄明液体一，久置可有微量沉淀；味微苦。
【鉴别】（1）取本品1ml，加75%乙醇溶液5ml，摇匀，作为供试品溶液。
另取黄芩苷对照品及绿原酸对照品，分别加75%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2ul，分别点于同一以羟甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（8.5：2.5：2）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
双黄连口服液成品质量标准.doc
XXXX公司 GMP管理文件题目双黄连口服液成品质量标准编码及检验操作规程共 5 页制定审核批准制定日期审核日期批准日期颁发部门GMP办颁发数量生效日期分发单位质量部生产部1.主题内容本文件规定了双黄连口服液的技术指标、检验方法、贮藏条件、包装规格等内容。
2.适用范围本文件适用于双黄连口服液成品的质量控制。
3.责任本文件由质保部QA主管负责起草，质保部部长负责审核，厂长负责批准。
4.物料名称商品名：品名：双黄连口服液汉语拼音： Shuanghuanglian Koufuye英文名：5.物料代码6.引用标准、依据：《中华人民共和国兽药典》 2010 年版二部处方及剂型金银花375g黄芩375g连翘750g吐温 80 5g纯化水加至1000ml本品为口服液。
8．技术指标性状本品为红棕色的澄清液体；微苦。
鉴别8.2.1 取本品 1ml，加 75%乙醇溶液 5ml，摇匀，作为供试品溶液。
另取黄芩苷对照品及绿原酸对照品，分别加 75%乙醇制成每 1ml 含的溶液，作为对照液。
照《薄层色谱法检验操作规程》（编号： BZLCZTY01501）实验，吸取上述三种溶液各 1-2 μ l ，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（ 365nm）下检视。
供试品色谱中，在与黄芩苷对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；在与绿原酸对照品色谱相应位置上，显相同以颜色的荧光斑点。
8.2.2 取本品 1ml，加甲醇 5ml，摇匀，静置，取上清液，作为供试品溶液。
另取连翘对照药材 0.5g ，加甲醇 10ml，加热回流 20 分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。
照《薄层色谱法检验操作规程》（编号： BZLCZTY01501）实验，吸取上述两种溶液各 5μl ，分别点于同一硅胶 G包层板上，以三氯甲烷 - 甲醇（ 5:1 ）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105℃加热至斑点显色清晰。
双黄连口服液质量分析_1
双黄连口服液质量分析发布时间：2022-01-21T09:07:55.690Z 来源：《中国科技人才》2021年第29期作者：于永杰李卉[导读] 应从中药材的源头控制及制剂生产环节全过程进行产品质量控制，确保产品质量稳定可控。
哈药集团三精制药有限公司黑龙江省哈尔滨市 150069摘要：双黄连口服液是由金银花、黄芩、连翘提取精制而成，具有解表、清热解毒的功效。
现代药理研究表明，双黄连口服液具有广谱抗菌、抗病毒、解热抗炎、免疫调节等作用。
对治疗畜禽感冒、炎症、细菌感染等疾病有很好的临床效果。
，且其毒副作用小，因此被广泛应用于兽医临床。
关键词：双黄连口服液；薄层色谱；高效液相色谱法测定18批双黄连口服液的合格率为33.33%:而定性检测合格的比例为66.67%;黄芩苷含量范围为0.17%～439.61%，黄芩苷含量合格率为61.11%;绿原酸含量范围为0.02%～231.48%，绿原酸含量合格率为33.33%;连翘苷含量范围为0.46%～341.87%，连翘苷含量合格率为38.89%。
源于18个厂家的双黄连口服液的合格率仅为33.33%，且双黄连口服液中主要成分含量相差较大，因此，应从中药材的源头控制及制剂生产环节全过程进行产品质量控制，确保产品质量稳定可控。
一、方法1.定性鉴别。
（1）黄芩苷、绿原酸的定性鉴别方法。
供试品溶液的制备:分别量取18个厂家的双黄连口服液1mL，分别加75%乙醇溶液5mL，摇匀，既得。
对照品溶液的制备:精密称取黄芩苷对照品11.49mg、绿原酸对照品1.14mg，加入75%乙醇分别定容在10mL量瓶中，浓度为1.122和0.114mg/mL。
方法测定:照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以36%乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。
检查供试品色谱中，在与黄芩苷对照品、绿原酸对照品色谱相应的位置上，是否显相同颜色的荧光斑点。
双黄连口服液中有效成份含量测定技术
双黄连口服液中有效成份含量测定技术目的利用HPLC法对双黄连口服液中黄芩苷的含量进行科学测定。
方法其固定相主要是在结合实际的基础上对十八烷基键合硅胶进行选择。
其中流动相为甲醇：水：冰乙酸（60：50：1）。
结果黄芩苷所呈现的线性良好，但是为范围在25～220μg范围内，注意其平均回收率需要控制在100.59%。
结论该种方法不仅可实现对杂质的有效分离，对该制剂中黄芩苷的含量测定工作的顺利开展有积极意义。
标签：高效液相色谱法；黄芩苷；双黄连口服液金银花、黄芩和连翘是双黄连口服液处方的主要成分，辛凉解表、清热解毒是双黄连口服液的主要功效，在缓解外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛症状方面也起着相当重要的作用。
中国要药典针对双黄连口服液中黄芩苷含量测定工作所使用的质量指标为HPLC法。
通过实验发现黄芩苷峰与杂质峰之间呈现出无法分离的状态。
效果好，快速准确，重现性好是改变流动相比例的明显优势，因此我我们说将其用于制剂质量控制工作过程中至关重要。
一、仪器与试药1.SSIⅣ型液相泵是在实际实验过程中所使用的主要仪器，该仪器由美国生产，M525紫外检测器，Anastar色谱工作站也是同一公司所提供的试验仪器。
电子天平也是试验过程中不可缺少的工具之一，其型号为赛多利斯BP-211D。
2.中国药品生物制品检定所，批号200512的黄芩苷是本次试验的对照品。
双黄连口服液主要由哈高科白天鹅药业集团有限公司、江苏吴中实业股份有限公司苏州长征制药厂以及中国黑龙江完达山制药提供，批号分别为05117-1、050114以及050301。
甲醇（色谱纯）、冰乙酸（AR）以及重蒸水也是在试验过程中所必须使用的材料，在实际准备过程中必须对其质量进行严格检验。
KromasilC18柱（5μm，250mm×4.6mm）是药典流动相样品的HPLC色谱条件色谱柱，甲醇：水：冰乙醇（60：50：1）作为流动相存在于上述试验中，注意其温度最高不可超过40°C，检测波长也需要借助必要的措施与手段控制在274nm。
双黄连口服液的质量检验
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（3）计算黄芩苷的含量（外标法）
C样 A样
C标 A标
C样
C标
A样 A标
m V
C样 D
其中：C—浓度（mg/ml)；
A—峰面积；
m—黄芩苷的质量（mg）；
D—稀释倍数；
V—每支样液的体积(ml)
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实验注意事项
❖ 制备样品时，一定要用唯恐滤膜过滤 ❖ 进样时进样器一定要清洗干净 ❖ 进样前色谱仪一定要用流动相平衡 ❖ 进样完毕后，一定要清洗色谱柱后方可关机。
对照药材溶液：另取连翘对照药材0.5g，加甲醇10ml，置 水浴上加热回流20分钟，滤过，滤液即为。
展开条件：点样量各为5μl，硅胶G薄层板，展开剂：氯仿甲醇（5:1），显色剂：10%硫酸乙醇溶液，在105℃加 热数分钟显色。
结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显 相同颜色的斑点。
含量测定
讨论与思考题
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1、在中成药及中药材的薄层色谱鉴别中何时采 用对照药材法？
2、中药材及制剂高效液相色谱测定的注意事项 有哪些？
3、黄芩苷高效液相色谱含量测定中，流动相中 的冰乙酸有何作用？
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A色谱条件及系统适应性Ｂ对照品溶液的配制Ｃ
供试品溶液的制备
D
样品溶液的测定
E
计算公式
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1、色谱条件与系统适用性试验
❖ ODSC18柱；流动相：甲醇-水-冰醋酸（50:50:1）； 检测波长：274nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低 于1500。
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4、样品溶液的测定
双黄连口服液成品质量标准
XXXX公司GMP管理文件1.本文件规定了双黄连口服液的技术指标、检验方法、贮藏条件、包装规格等内容。
2.适用范围本文件适用于双黄连口服液成品的质量控制。
3.责任本文件由质保部QA主管负责起草，质保部部长负责审核，厂长负责批准。
4.物料名称商品名：品名：双黄连口服液汉语拼音：Shuanghuanglian Koufuye英文名：5.物料代码6.引用标准、依据：《中华人民共和国兽药典》2010年版二部处方及剂型金银花 375g黄芩 375g连翘 750g吐温80 5g纯化水加至 1000ml本品为口服液。
8．技术指标性状本品为红棕色的澄清液体；微苦。
鉴别8.2.1取本品1ml，加75%乙醇溶液5ml，摇匀，作为供试品溶液。
另取黄芩苷对照品及绿原酸对照品，分别加75%乙醇制成每1ml含的溶液，作为对照液。
照《薄层色谱法检验操作规程》（编号：BZLCZTY01501）实验，吸取上述三种溶液各1-2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视。
供试品色谱中，在与黄芩苷对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；在与绿原酸对照品色谱相应位置上，显相同以颜色的荧光斑点。
8.2.2取本品1ml，加甲醇5ml，摇匀，静置，取上清液，作为供试品溶液。
另取连翘对照药材0.5g，加甲醇10ml，加热回流20分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。
照《薄层色谱法检验操作规程》（编号：BZLCZTY01501）实验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G包层板上，以三氯甲烷-甲醇（5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
检查8.3.1PH值取本品适量，依pH值测定法操作规程（编码：BZLCZTY01701）检查，应为。
8.3.2相对密度按相对密度比重瓶测定法检查，相对密度应不低于。
双黄连口服液成品质量标准
XXXX公司GMP管理文件1.本文件规定了双黄连口服液的技术指标、检验方法、贮藏条件、包装规格等内容。
2.适用范围本文件适用于双黄连口服液成品的质量控制。
3.责任本文件由质保部QA主管负责起草，质保部部长负责审核，厂长负责批准。
4.物料名称商品名：品名：双黄连口服液汉语拼音：Shuanghuanglian Koufuye英文名：5.物料代码6.引用标准、依据：《中华人民共和国兽药典》2010年版二部处方及剂型金银花 375g黄芩 375g连翘 750g吐温80 5g纯化水加至 1000ml本品为口服液。
8．技术指标8.1性状本品为红棕色的澄清液体；微苦。
8.2鉴别8.2.1取本品1ml，加75%乙醇溶液5ml，摇匀，作为供试品溶液。
另取黄芩苷对照品及绿原酸对照品，分别加75%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照液。
照《薄层色谱法检验操作规程》（编号：BZLCZTY01501）实验，吸取上述三种溶液各1-2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视。
供试品色谱中，在与黄芩苷对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；在与绿原酸对照品色谱相应位置上，显相同以颜色的荧光斑点。
8.2.2取本品1ml，加甲醇5ml，摇匀，静置，取上清液，作为供试品溶液。
另取连翘对照药材0.5g，加甲醇10ml，加热回流20分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。
照《薄层色谱法检验操作规程》（编号：BZLCZTY01501）实验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G包层板上，以三氯甲烷-甲醇（5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
8.3检查8.3.1PH值取本品适量，依pH值测定法操作规程（编码：BZLCZTY01701）检查，应为5.0-7.0。
8.3.2相对密度按相对密度比重瓶测定法检查，相对密度应不低于1.02。
双黄连口服液(成品)检验操作规程
GMP管理文件一、目的：为规定双黄连口服液生产过程中的质量控制和检验操作要求，特制定此操作规程。
二、适用范围：适用于双黄连口服液成品的检验。
三、责任者：生产部经理、检验员、生产人员四、正文：【质量标准】见双黄连口服液成品内控质量标准【检验内容】【性状】本品为棕红色的澄清液体，久置可有微量沉淀；味微苦。
【鉴别】（1）取本品1ml，加75%乙醇溶液5ml，摇匀，作为供试品溶液。
另取黄芩苷对照品及绿原酸对照品，分别加75%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（8.5：2.5：2）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
（2）取本品1ml，加甲醇5ml，摇匀，静置，取上清液，作为供试品溶液，另取连翘对照药材0.5g，加甲醇10ml，加热回流20分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（5：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【检查】pH值应为5.0-7.0相对密度应不低于1.02.其他应符合合剂项下的有关各项规定。
【含量测定】照高效液相色谱法测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水-冰醋酸（50：50：1）为流动相，检测波长为274nm，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500.对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品10mg，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，置水浴中振摇使溶解，放置至室温，稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
双黄连口服液4种提制工艺制品的质量分析
双黄连口服液 4种提制工艺制品的质量分析【摘要】本文探讨了双黄连口服液4种提制工艺制品的质量，分别是水醇法、醇水法、提取法以及综合法，对由四者制成的药物进行质量分析，同时比较各自对应的主要药代动力学参数。
实验结果证明通过醇水法制备的药物当中黄苓甙和绿原酸占比较高，色泽鲜明，效果最佳。
其次分别为提取法和水醇法，综合法提取效果最差。
而在实际生产过程中，所用提取方法不同药代动力学参数同样存在差异，其中由醇水法生成的黄芩甙AUC优于其他三种方法，具有极高的生o-11物价值。
【关键词】双黄连口服液；提制工艺；质量分析此次实验选用家兔作为研究对象，围绕双黄连口服液四种制备工艺进行分析探究，确定工艺生产质量，测定对象内药代动力学参数。
实验结果证明，诸多方法当中醇水法制备效果最佳，由该方法生产出来的药物中含量占比最高，稳定性较佳，相比于其它方法对应的主要药代动力学参数醇水法主要药动力参数更优，正因如此实际生产中选用该方法制备要去实验详情如下：一、双黄连口服液概述双黄连口服液于中国药典2005、2010、2015版中均有收录，其具有辛凉解表，疏风解热作用，适用于感冒所引起的咳嗽、发热、咽痛。
处方由金银花、连翘、黄芩这3味药材组成，标准规定是以栀子苷和黄芩苷为指标成分，利用HPLC法测定其含量，但不能有效的多样的测定其内部含量。
目前中外文献中关于双黄连口服液的含量测定已有很多的研究和报道，但是大多都集中在测定其某种单一成分的含量，仅有少数的研究和报道使用单波长测定2-3个成分的含量，鲜有同时测定其四种或以上成分的报道，而且测定药品中各种成分所需要的色谱条件也都不尽相同。
本文参照相应文献，建立HPLC法同时测定双黄连口服液中绿原酸、栀子苷、黄芩苷、丹皮酚等四种有效成分的含量，操作便捷、而且精确，为其质量标准的测定和鉴别提供了良好的依据。
二、4种提制工艺及样品制音此次实验所用药物处方成分如下：250g双花和黄芩，500g连翘，170g蔗糖，适量香精，经过适当提炼由这些物质最终制成200ml的双黄连口服液。
双黄连口服液成品质量标准
XXXX公司GMP管理文件本文件规定了双黄连口服液的技术指标、检验方法、贮藏条件、包装规格等内容。
2.适用范围本文件适用于双黄连口服液成品的质量控制。
3.责任本文件由质保部QA主管负责起草，质保部部长负责审核，厂长负责批准。
4.物料名称商品名：品名：双黄连口服液汉语拼音：Shuanghuanglian Koufuye英文名：5.物料代码6.引用标准、依据：《中华人民共和国兽药典》2010年版二部处方及剂型金银花375g黄芩375g连翘750g吐温80 5g纯化水加至1000ml本品为口服液。
8．技术指标8.1性状本品为红棕色的澄清液体；微苦。
8.2鉴别8.2.1取本品1ml，加75%乙醇溶液5ml，摇匀，作为供试品溶液。
另取黄芩苷对照品及绿原酸对照品，分别加75%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照液。
照《薄层色谱法检验操作规程》（编号：BZLCZTY01501）实验，吸取上述三种溶液各1-2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视。
供试品色谱中，在与黄芩苷对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；在与绿原酸对照品色谱相应位置上，显相同以颜色的荧光斑点。
8.2.2取本品1ml，加甲醇5ml，摇匀，静置，取上清液，作为供试品溶液。
另取连翘对照药材0.5g，加甲醇10ml，加热回流20分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。
照《薄层色谱法检验操作规程》（编号：BZLCZTY01501）实验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G包层板上，以三氯甲烷-甲醇（5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
8.3检查8.3.1PH值取本品适量，依pH值测定法操作规程（编码：BZLCZTY01701）检查，应为5.0-7.0。
8.3.2相对密度按相对密度比重瓶测定法检查，相对密度应不低于1.02。
双黄连口服液1H NMR质量稳定性分析方法研究
双黄连口服液1H NMR质量稳定性分析方法研究沙沂;李文;李宁;肖皖【摘要】The 1 H NMR NOESYPR1D technique was used to analyze quality stability of complex prescription Chinese drugs. Shuanghuanglian oral liquid produced by different companies was analyzed by the method, and indices for similarity were established. The results showed that the method described in the paper can be used to assess the quality of Shuanghuanglian oral liquid effectively.%采用NOESYPR1D(水峰抑制)技术,测定双黄连口服液的1H NMR谱图,用Mnova 和Excel 2003软件分析处理谱图,以相似度为指标,判别分析不同厂家、不同批次的双黄连口服液中主要成分的差异.所建立的双黄连口服液的1H NMR质量分析方法可以有效判别不同批次双黄连口服液质量的差异.实验方法简单、快速、稳定、重现性好,可以为中药成方制剂的质量评价提供新的思路和方法.【期刊名称】《波谱学杂志》【年(卷),期】2011(028)003【总页数】8页(P366-373)【关键词】NOESYPRlD(水峰抑制)技术;双黄连口服液;质量稳定性【作者】沙沂;李文;李宁;肖皖【作者单位】沈阳药科大学,辽宁沈阳 110016;沈阳药科大学,辽宁沈阳 110016;沈阳药科大学,辽宁沈阳 110016;沈阳药科大学,辽宁沈阳 110016【正文语种】中文【中图分类】O482.53引言中药复方制剂质量稳定性分析和评价技术是中药质量控制的关键任务之一.中药复方是多种药味组成的“有制之师”,其物质基础是复方中的复杂成分.中药复方制剂的功效是多种有效成分共同作用于机体的综合作用,检测复方制剂的一个或几个化学成分含量难以准确评价中药质量优劣,因此从技术上说,复方制剂的质量稳定性分析方法应具有同时分析多种成分的能力.但众所周知,同时分析复杂组分的多种类型的多种成分,比同时分析一种类型的多个成分更困难[1],到目前为止,复方制剂和复杂中药提取物的质量分析方法还难以令人满意,中药复方制剂的质量分析方法在同时分析多种成分方面还有待深入研究.因此,本文基于建立全面表征中药成方制剂中复杂成分的分析方法的思路,建立了中药小复方制剂双黄连口服液[2-4]的NOESYPR1D技术(水峰抑制技术)的1H NMR质量稳定性控制方法.该方法借助1H NMR谱图中质子信号的化学位移及其积分比值对复杂成分结构类型和含量比例的表征,以及无需对照品和成分分析的全面性及非歧视性的优势,将1H NMR谱图数字化处理并进行统计分析,建立了快速、全面的评价双黄连口服液成分的质量稳定性的分析方法.1 实验部分1.1 仪器与试剂NMR测试采用布鲁克Avance-600型核磁共振谱仪;测试样品采用D2O为测试溶剂.1.2 试药双黄连口服液为哈药集团三精、黑龙江瑞格及珍宝岛(批号:09111814 09112114 09121834 10011124 10011517 10032514 10032917 10011931 10021063 090719 20100204 20100227 20100167);所用试剂为重水和内标 TSP均为美国NORELL公司生产.采用平均等值的方法,取不同厂家13个批号的双黄连口服液等比例混合,作为双黄连口服液的参照样品.1.3 实验方法核磁谱仪测定参数的设置:1H NMR实验为标准的NOESYPR1D(水峰抑制)脉冲序列:RD-90°-t1-90°-tm-90°-FID.参数:t1为3μs、混合时间 tm为100 ms、谱宽6 000 Hz、累加次数为32.取同一批号双黄连口服液5支,置于500 mL锥形瓶中,混匀,精密移取0.4 mL至干燥NMR管中,定量加入D2O 0.1 mL,置核磁谱仪中测定1H NMR谱图,结果见图1.参照样品的1H NMR谱图见图2.图1 双黄连口服液的1H NMR谱图(批号10011931)Fig.1 1H NMR spectrum of shuanghuanglian oral liquid(10011931)图2 双黄连口服液参照样品的1H NMR谱图Fig.2 1H NMR spectrum of shuanghuanglian oral liquid reference双黄连口服液1H NMR谱图的数字化转换:由于δ3.02～5.62范围内质子主要来自口服液中的蔗糖,因此将所测得的双黄连口服液的1H NMR谱图用Mnova软件,仅对化学位移δ0.34～3.02和δ5.62～8.50范围的质子信号进行数字化转换,每隔0.04个化学位移单位积分一次,共得141个积分面积数值.见图3.图3 双黄连口服液δ0.34～3.02和δ5.62～8.50的1H NMR谱图Fig.3 1H NMR spectra of shuanghuanglian oral liquid forδ0.34～3.02 andδ5.62～8.50双黄连口服液质量的稳定均衡性评价方法:以双黄连口服液1H NMR谱图的积分值为变量,用软件Excel 2003进行处理,计算相关系数和夹角余弦值,作为评价指标.精密度试验:取双黄连口服液(批号:10021063),按照上述1.3节中的方法制备供试样品,重复6次测定其1H NMR谱图.所得1H NMR谱图采用Mnova软件进行图谱积分处理,主要化学位移范围质子信号的积分面积的RSD(%)=2.78%,可见仪器和积分软件精密度较好.稳定性试验:将上述精密度试验样品在制备后0 h、0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、 6 h、7 h、8 h测定1H NMR图谱.分别将所得1H NMR谱图采用Mnova软件进行谱图积分处理,主要化学位移范围质子信号的积分面积的RSD(%)=2.12%,可见样品在8 h内稳定性良好.重复性试验:取双黄连口服液(批号:10021063)6份,按照1.3节中方法,制备供试品溶液,并测定1H NMR谱图.所得1H NMR谱图采用Mnova软件进行图谱积分处理,主要化学位移质子信号的积分面积的RSD(%)=2.37%,可见本方法的重复性良好,适于样品质量分析.2 结果与讨论2.1 试验结果照前述方法,测定13批双黄连口服液 1H NMR谱图,采用Mnova软件和MestReNova6.1进行数据统计处理,结果见表1,谱图见图4.表1 不同批号双黄连口服液相似度测定结果Table 1 The determination results of shuanghuanglian oral liquid with different batch numbers样品批号相关系数夹角余旋09111814 0.90416283 0.93158078 09112114 0.944686110.89364068 09121834 0.99694419 0.99803408 10011124 0.956320260.97207525 10011517 0.99223171 0.93492538 10032514 0.992306280.98245562 10032917 0.99310521 0.99548703 10011931 0.884972590.95763142 10021063 0.99591951 0.99743283 090719 0.914840430.91709389 20100204 0.97362580 0.87468627 20100227 0.904162830.88497259 20100167 0.94468611 0.98591951由表1可见,夹角余旋和相关夹角余旋均能很好地表征不同批次双黄连口服液的质量差异,说明本方法可以用于双黄连口服液的质量稳定性评价.由图4可见,不同批次双黄连口服液1H NMR谱图有较大差异,经统计学对不同化学位移范围质子信号的积分面积进行处理,可以更明确这些差异是由那些类型化学成分引起的.图4 13批双黄连口服液的 1H NMR谱图(批号分别为1.参照样品,2.0911181,3.409112114,4.09121834,5.10011124,6.10011517,7.10032514,8.10032917,9.10011931,10.1 0021063,11. 090719,12.20100204,13.20100227,14.20100167)Fig.4 1H NMR spectra of shuanghuanglian oral liquid with 13 different batchnumbers(1.referencesample,2.0911181,3.409112114,4.09121834,5.10011124,6.10011517,7.1003 2514,8.10032917,9.10011931,10.10021063,11.090719,12.20100204,13.20100227,1 4.20100167)2.2 讨论2.2.1 双黄连口服液质量稳定性分析双黄连口服液的总成分的δ6.10～7.90的质子信号提示,复杂组分中含有大量带苯环的化合物,这与连翘中含有苯乙醇、木脂素、黄酮,双花中含有咖啡酰类有机酸、黄酮以及黄芩中黄酮类成分中的苯环结构十分吻合[5-7].尤其是δ7.05(d,J=8.3 Hz), 6.39(dd,J=3.3 Hz,8.04 Hz)的质子信号提示复方组分中有1,2,4-取代苯环结构的成分.高场处δ0.60、0.69、0.70、0.77、0.84、0.88、0.81、1.07、1.09、1.11、1.16、1.19、1.30等信号提示复杂组分中可能含有大量结构中具有甲基的萜类化合物,而且以三萜皂苷类成分为主(三萜皂苷中的甲基一般都在此化学位移范围内),这与连翘中含有乌苏烷型、齐墩果烷型、羽扇豆烷型、达玛烷型三萜、单萜[5],金银花中含有环烯醚萜和三萜的成分特征基本一致[6].δ3.02～5.62范围的质子信号主要来自于口服液中蔗糖,上述信息提示双黄连口服液中主要成分是含有苯环的苯丙素、黄酮和三萜皂苷成分的复杂组合.综上分析,双黄连口服液1H NMR谱图中δ0.34～3.02和δ5.62～8.50范围的质子信号能很好表征双黄连口服液中主要成分特征及其相对比例,干扰小、误差小,因此文中以1H NMR谱图中δ0.34～3.02和δ5.62～8.50范围的质子为研究对象评价双黄连口服液的质量均衡性.中药制剂的质量差异主要是由所含有化学成分组成和含量比例引起的,因此能够评价中药制剂的成分及其比例差异的方法可以作为质量稳定性或均衡性的评价方法.1H NMR谱由于具有单一性、全面性、定量性、易变辨性等优点,不仅可以表征双黄连口服液的质量的均衡性,而且可以通过谱图差异(质子的化学位移)判断影响质量均衡的化学成分,可以用于制剂的质量及稳定性的控制.从夹角余旋和相关系数对多批双黄连口服液的相似度计算结果可以看出,不同厂家、不同批次样品的质量差异较大,由此可见市售该产品的质量的稳定性和均衡性值得重视.2.2.2 供试样品的制备及测试传统的中药质量分析方法多需对样品进行复杂前处理,但本实验经对各种前处理方法比较,所得图谱的信息量和未经处理的图谱信息量差别较小(选几个图比较),因此最终采用加入少量蒸馏水的方法制备样品,不仅大大节约经费,而且所制备的样品因未经前处理,所得图谱信息没有前处理的干扰,更能表达样品的原始信息.本文采用NOESYPR1D(水峰抑制)技术不仅能够压制溶剂吸收峰,而且能够提供活泼质子信息,使图谱信息量更多.2.2.3 参照样品的制备由于国家没有中药复方制剂的法定对照品,又因本文主要研究市售双黄连口服液的质量均衡性,基于市售药品均为合格药品,但不同厂家、不同批次样品之间的成分差异可能较大,其等比混合物能更好表征该产品的平均水平,故采用市售药品的等比混合物,制备参照样品.我们认为,随着活性成分研究和活性机理研究的深入,可以用药效指标筛选出具有标准疗效的样品作为对照样品.采用本文的方法将能更有效地判定中药复方制剂的质量及不同批次产品的均衡性.2.2.4 样品质量稳定性的多元统计方法实验方法学的精密度考察实验中,同时计算双黄连口服液(批号:1002106)5份供试品的1H NMR谱图的欧氏距离、(K-d)/K、PRIMA法距离(D)、(C-D)/C(见表2)、相关系数、夹角余旋,结果表明在主要化学位移范围质子信号的积分面积的RSD(%)= 2.78%为良好精密度条件下,欧氏距离、(K-d)/K、PRIMA法距离(D)、(C-D)/C差值较大,而相关系数和夹角余旋的相似度均达到99.4%以上,而且不同批次样品的相似度计算结果显示,相关系数和夹角余旋能很好评价不同批次样品质量的差异(见表1).因此,综合精密度和不同批次样品质量相似度评价结果,本实验采用相关系数和夹角余旋评价不同批次双黄连口服液质量的稳定性.表2 同一样品双黄连口服液相似度测定结果Table 2 The determination results of similarity of shuanghuanglian oral liquid样品号相关系数夹角余弦欧氏距离(d) (K-d)/K PRIMA法距离(D) (C-D)/C JXA-1 0.99591951 0.997432838.42038299 0.91999973 12.31622187 0.07396828 JXA-2 0.994840430.99709389 5.02773485 0.90999984 4.44691644 0.66564538 JXA-30.99468333 0.99278906 9.53780275 0.89999969 28.845282701.1688182 JXA-4 0.99230628 0.99245562 8.20758463 0.99999974 12.498840010.06023759 JXA-5 0.99303226 0.99452526 5.20785436 0.919799774.84984100 0.07230759 JXA-5 0.99263082 0.99412652 4.975806340.89109907 22.40814019 0.603725913 结论1H NMR技术具有良好的分析复杂成分的能力,因此近年来被广泛引入代谢组学和复杂成分质量分析等药学研究中,并获得良好的结果[8,9].本文所建立的质量分析方法不仅具有无需预处理,被测样品加入蒸馏水和重水后直接测试,方法的稳定性、精密度、重复性、准确性均具优势,且分析速度快(一般在5 min所有即可完成一个样品的1H NMR谱图测定),大大节约分析时间和成本,可以用作中成药的质量分析的新方法. NMR波谱仪做为大型仪器,其造价昂贵,因此提高其使用率一直是科研与生产结合的一个重要方向,本文对双黄连口服液的质量研究为NMR波谱仪在实践中的推广、普及、使用提供了借鉴.1H NMR谱图能够同时表征多种类型的多种化学成分[11,12],文献参考价值高,其不同化学位移范围的积分比值也能反应多种成分的相对比例,相比之下,弥补了HPLC和HPLC-MS指纹图谱所存在的需要大量对照品或深入的质谱裂解规律研究的不足.本文只对3味药组成的小复方制剂的质量稳定性评价做了探讨,相信随着更多复方成分的1H NMR图谱研究,将使该方法在中药成方制剂的质量稳定性分析方面充分发挥其成分分析的全面性的优势,也必将使该方法更加完善、有效.参考文献:【相关文献】[1] Leung K S Y,Fu C M.improved chromatographic assessment of Chinese medicinal products by multi-chemical classes analysis[J].Planta Med,2009,75:1 171-1 179.[2] The Peoples Republic of China Pharmacopoeia Commitee of Ministry of Health(中华人民共和国卫生部药典委员会).Chinese Pharmacopoeia 1[中华人民共和国药典(一部)][M].Beijing(北京):China Medicel Sciencel Press (中国医药科技出版社),2010,611.[3] Zhang Yu-jie(张玉洁),Huang Hai-xin(黄海欣).Determination of forsythin in Shuanghuanglian oral solution by HPLC(HPLC测定双黄连口服液中连翘苷的含量)[J].WestChina Journal of Pharmaceutical Sciences(华西药学杂志),2005,20(4):360-361.[4] Mo Zhi-jiang(莫志江),Mo Ke-yuan(莫可元).Determination of baicaline in shuanghuanglian oral liquid by RP HPLC(反相高效液相色谱法测定双黄连口服液黄芩甙含量)[J].Shizhen Medicine and Material Medica Research(时珍国医国药),2000,11(3):196-197.[5] Li Qian(李倩),Feng Wei-sheng(冯卫生).Recent development of chemical components of studies fructus forsythiae(连翘的化学成分研究进展)[J].Journal of Henan University of Chinese Medicine(河南中医学院学报), 2005,20(117):78-80.[6] He Wei(贺伟).Recent development of chemical components and pharmacological actions of honeysuckle flower (金银花的化学成分及药理作用研究)[J].China Medical Herald(中国医药导报),2007,4(24):8-9.[7] Cui Xue-jun(崔学军).Recent development of chemical components and pharmacological actions of coptis chinensis franch(黄连及其有效成分的药理研究进展)[J].China Pharmacist(中国药师),2006,9(5):469-470.[8] Huo T G,Cai S,Lu X M,et al.Metabonomic study of biochemical changes in the serum of type2 diabetes mellitus patients after the treatment of metformin hydrochloride[J].J Pharm Biomed Anal,2009,(1):1-7.[9] Yang W J(杨为进),Wang Y H(王亚韡),Zhou Q F(周群芳),et al.NMR analysis of huamn urine(人体尿液代谢组NMR分析)[J].Scientia Sinica Chimice(中国科学:化学),2008,38(1):85-92.[10]Dai H,Xiao C N,Liu H B,et bined NMR and LC-DAD-MS analysis reveals comprehensive metabonomic variations for three phenotypic cultivars ofSalvia Miltiorrhizabunge[J].J Proteome Res,2010,9:1 565-1 578.[11]Sha Yi(沙沂),Li Wen(李文),Shen Hui-en(申会恩).Determination of clarithromycin content by NMR(克拉霉素胶囊的NMR定量方法研究)[J].Chinese J Magn Reson(波谱学杂志),2009,26(3):308-315.[12]Mao Xuan(毛璇),Zhang Dong-juan(张冬娟),Guan You-fei(管又飞),et al.A metabonomic study of aqueous kidney extract in the mouse model of typeⅡdiabetic nephropathy(Ⅱ型糖尿病肾病小鼠肾水提物代谢组学研究)[J].Chinese J Magn Reson(波谱学杂志),2010,27(4):532-539.。
双黄连口服液成品质量标准
1.本文件规定了双黄连口服液的技术指标、检验方法、贮藏条件、包装规格等内容。
2.适用范围本文件适用于双黄连口服液成品的质量控制.3.责任本文件由质保部QA主管负责起草，质保部部长负责审核，厂长负责批准。
4.物料名称商品名：品名：双黄连口服液汉语拼音：Shuanghuanglian Koufuye英文名:5.物料代码6.引用标准、依据：《中华人民共和国兽药典》2010年版二部处方及剂型金银花375g黄芩375g连翘750g吐温80 5g纯化水加至 1000ml本品为口服液。
8．技术指标8.1性状本品为红棕色的澄清液体；微苦.8。
2鉴别8.2.1取本品1ml，加75%乙醇溶液5ml，摇匀，作为供试品溶液。
另取黄芩苷对照品及绿原酸对照品，分别加75％乙醇制成每1ml含0。
1mg的溶液，作为对照液。
照《薄层色谱法检验操作规程》（编号：BZLCZTY01501）实验,吸取上述三种溶液各1-2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂,展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视.供试品色谱中,在与黄芩苷对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；在与绿原酸对照品色谱相应位置上，显相同以颜色的荧光斑点。
8。
2。
2取本品1ml，加甲醇5ml，摇匀，静置,取上清液，作为供试品溶液。
另取连翘对照药材0。
5g，加甲醇10ml，加热回流20分钟，滤过,滤液作为对照药材溶液。
照《薄层色谱法检验操作规程》（编号：BZLCZTY01501）实验,吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G包层板上,以三氯甲烷-甲醇(5:1）为展开剂,展开，取出，晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
8。
3检查8.3。
1PH值取本品适量，依pH值测定法操作规程（编码:BZLCZTY01701)检查，应为5。
0—7。
0。
8。
3。
2相对密度按相对密度比重瓶测定法检查，相对密度应不低于1。
双黄连口服液质量标准研究
双黄连口服液质量标准研究
张立明;郑传丽;权洪峰;任晓军
【期刊名称】《亚太传统医药》
【年(卷),期】2010(6)3
【摘要】目的:研究双黄连口服液的质量标准.方法:采用薄层色谱法对黄芩苷、绿原酸和连翘成分进行定性分析,用高效液相色谱法对口服液中的黄芩甙和绿原酸进行定量分析.结果:黄芩甙在0.65～2.65μg/mL范围内线性关系良好(R=0.9995);绿原酸在0.105～O.525μg/mL范围内线性关系良好(R=0.9996).经测定,3批双黄连口服液中黄芩甙、绿原酸的含量均符合药典标准.结论:该方法准确可靠,可作为双黄连质量标准监控方法.
【总页数】2页(P44-45)
【作者】张立明;郑传丽;权洪峰;任晓军
【作者单位】宁夏医科大学,药学院,宁夏,银川,750004;宁夏医科大学附属医院,宁夏,银川,750004;宁夏医科大学,药学院,宁夏,银川,750004;宁夏医科大学,药学院,宁夏,银川,750004
【正文语种】中文
【中图分类】R284
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双黄连口服液的质量分析
一、实验目的
1.掌握对照品对照法和对照药材对照法鉴别复方制剂中药材的方法。
2.掌握双黄连口服液中金银花、黄芩和连翘的质量检验方法。
二、仪器与试药
1.仪器
美国PE-60型高效液相色谱仪KQ-300E型超声波清洗器
Mettler AL204电子天平ZF-2型三用紫外仪HHS型电热恒温干燥箱
容量瓶规格：25mL 移液管规格：25mL 滤纸规格：直径10cm
研钵硅胶G薄层板聚酰胺薄膜(5cm×7cm)
2..试药
双黄连口服液规格：每支装10mL
黄芩苷、绿原酸对照品连翘对照药材乙醇二氯甲烷甲醇硫酸醋酸
三、实验原理
采用对照品对照法和对照药材对照法分别鉴别双黄连口服液中的金银花、黄芩和连翘三味主药。
四、实验内容
【处方】金银花375g 黄芩375g 连翘750g
【制法】以上三味，黄芩切片，加水煎煮三次，第一次2小时，第二、三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩并在80℃时加入2mol/L盐酸溶液适量调节PH值至1.0～2.0，保温1小时，静置12小时，滤过，沉淀加6～8倍量水，用40%氢氧化钠溶液调节PH值至7.0，再加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用2mol/L盐酸溶液调节PH值至2.0，60℃保温30分钟，静置12小时，滤过，沉淀用乙醇洗至PH值7.0，挥尽乙醇备用；金银花、连翘加水温浸半小时后，煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对蜜度为1.20～1.25(70～80℃测)，冷至40℃时缓缓加入乙醇，使含醇量达75%，充分搅拌，静置12小时，滤取上清液，残渣加75%乙醇适量，搅匀，静置12小时，滤过，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味，加入黄芩提取物，并加水适量，以40%氢氧化钠溶液调节PH值至7.0，搅匀，冷藏（4～8℃）72小时，滤过，滤液加入蔗糖300g，搅拌使溶解，再加入香精适量并调节PH值至7.0，加水制成1000mL，搅匀，静置12小时，滤过，灌装，灭菌，即得。
【性状】本品为棕红色的澄清液体；味甜，微苦。
【鉴别】(1) 取本品1mL,加75%乙醇溶液5mL，摇匀，作为供试品溶液。
另取黄芩苷、绿原酸对照品，分别加75％乙醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法(中国药典2010年版附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各1～2μL，分别点于同一聚酰胺薄膜
(5cm×7cm)上,以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2) 取本品1mL，加甲醇5mL，振摇使溶解，静置，取上清液，作为供试品溶液。
另取连翘对照药材0.5g，加甲醇10mL，置水浴上加热回流20分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。
照薄层色谱法（中国药典2010年版附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇（5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热数分钟。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【检查】pH值应为5.0～7.0(附录Ⅶ G)。
相对密度 应不低于1.12（附录Ⅶ A)。
其他 应符合合剂项下有关的各项规定(中国药典2010年版附录Ⅰ J)。
【含量测定】 照高效液相色谱法（中国药典2010年版附录Ⅵ D）测定。
高效液相色谱法的应用范围很广，适于分析沸点高、受热不稳定、不同极性的有机化合物、生物活性物质和多种天然物质。
1.分离原理
被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱，根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。
2.系统适用性试验
色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度和拖尾因子等指标。
按各品种项下要求对色谱系统进行适用性试验，如达不到要求，可对色谱分离条件作适当的调整。
(1) 色谱柱的理论板数(n) 在规定的色谱条件下，注入供试品溶液，记录色谱图，按下式计算色谱柱的理论板数。
t R :供试品主成分峰或内标物质峰的保留时间
W h/2：1/2峰高处的峰宽
（2）分离度(R) 无论是定性鉴别还是定量分析，均要求待测峰与其他峰、内标峰或特定的杂质对照峰之间有较好的分离度。
分离度的计算公式为：
21)
(212W W t t R R R +-= R ≥1.5
2R t ：相邻两峰中后一峰的保留时间； 1R t ：相邻两峰中前一峰的保留时间
W 1及W 2：此相邻两峰的峰宽
（3）拖尾因子(f s ) 为保证分离效果和测量精密度，应检查待测峰的拖尾因子是否符合各品种项下的规定。
拖尾因子计算公式为：
A W f h s 2/05.0=
W 0.05h ：5%峰高处的峰宽； A ：峰极大至峰前沿之间的距离
3.实验条件与方法
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸（50:50:1）为流动相；检测波长为274nm 。
理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品10mg ，置100mL 量瓶中，加50%甲醇适量，置水浴中振摇使溶解，放置至室温，稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL 中含黄芩苷0.1mg ）。
供试品溶液的制备 精密量取装量项下的本品1mL ，置50mL 量瓶中,加50%甲醇适量,超声处理20分钟，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每支含黄芩按黄芩苷(C 21H 18O 11)计，不得少于80mg 。
五、注意事项
1.进样前色谱仪一定要用流动相平衡，方可进样。
2.进样时进样器一定要清洗干净。
3.进样完毕后，一定先用20％甲醇水溶液冲洗色谱柱，再用100％甲醇平衡色谱柱方可关机。
4.制样时，一定要用微孔滤膜过滤。
22
/)(54.5h R W t n =
六、思考题
1.采用对照品对照法和对照药材对照法鉴别双黄连口服液中金银花、黄芩和连翘时的影响因素有哪些？
2. 在HPLC测定样品含量时，实验操作中应注意哪些问题？
3.色谱系统适应性检验的目的与指标是什么？
七、参考文献
《中国药典》2010年版一部，405，化学工业出版社。
附：美国PE-60高效液相色谱仪操作程序：
开机：1.闭合电源开关，使电压稳定在220V。
2.启动A、B、C三泵，启动SPD-6A检测器，待检测器稳定后（屏幕显示数值为0），打开柱温箱（CTO-6A）开关：开启系统控制器（SCL-6B，仅当检测器稳定后系统控制器可以工作）；系统控制器联动进样器（SIL-6B，分自动进样与手动进样）。
3.用系统控制器设置A、B、C三泵的流动相（流量）、柱压（最大与最小）、柱温（最高与最低）、检测波长。
4.启动计算机控制，屏幕显示SET SYSTEM DISK OK，运行程序（仅当有该系统软件时），屏幕显示Press[SET] first to set DATE and TIME，掀SET键，显示菜单，选指令2，掀回车键，掀1（表示打开1通道），计算机叫一声，此时，整个色谱分析系统联通，打开流动相阀，排除运行体系中的空气（空气未排完就进样的话，系统会自动停止工作）。
测定：按各品种项下的要求进样。
关机：键入CLOSE TRS 1，计算机叫一声，可以关机，按以下顺序：关闭系统控制器，关闭柱温箱，关闭检测器，调节A、B、C三泵的压力至0，关闭A、B、C三泵。