实验1 高吸光度示差分析法
示差分光光度法
示差分光光度法
示差分光光度法是一种在分子取向反应或光谱特性中应用广泛的
分析方法。
首先，示差分光光度法通过比较两种不同取向下的吸收光谱，来
探测反应中的分子结构变化。
通过这种方法，我们可以更好地理解反
应的机理和特性。
其次，示差分光光度法在不同波长或时间段内测量光谱信号，可
以得到很高的灵敏度和分辨率。
这使得该方法在许多不同领域都有应用，如化学、生物学、医学等等。
此外，示差分光光度法还可以用于探测微量物质的存在和浓度变化。
这种方法可以用于监测环境污染、药物代谢等方面。
需要注意的是，示差分光光度法需要设备精细和技术娴熟的操作。
对于初学者来说，需要认真学习理论知识和实验技能，才能获得准确
的测量结果。
总之，示差分光光度法是一种应用广泛、灵敏度高、分辨率高的
分析方法。
在化学、生物学、医学等领域都有广泛的应用前景。
如今，随着技术的不断发展和创新，示差分光光度法将会得到更广泛的应用
和挖掘。
仪器分析：差示法测定样品中高含量镍
附表：溶液配制一览表
No 1
2
3
4
5
镍标液 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
（ml）
柠檬酸铵溶液0.5 mL
67 0.6 样品
0.5
0.1mol/L碘溶液0.25 mL，摇匀
0.2%丁二酮肟溶液1 mL，用蒸馏水稀释至5 mL ， 摇匀
A 参比
• 可见分光光度计使用
• （1）检查检测波长是否是530nm
• （2）先按模式键调到透射比档，把溶液放 进仪器内，用1号管开盖调0%，关盖调 100%。
• （3）按模式键调到吸光度档，进行检测。
五、实验记录及数据处理
镍标准溶液体积 V/mL
镍标准溶液浓度C/ （mg/mL） 镍标液与参比液浓 度差⊿C 吸光度A
0.20
0.30 0.40
0.50 0.60 试样 溶液 0.5
作差示分光光度法标准曲线， 求算试样溶液的浓度。
注意事项： 1.移液管的使用 2.标准曲线绘制的注意事项 3.数据处理报告的形式 4.分光光度计的使用（比色皿） 5.实验结束，清理实验用品。值日生打扫 卫生及清点实验用品。
二、实验原理
高吸光度差示法是以一个浓度比待测 溶液稍低的已知浓度溶液作参比溶液， 调节透光度为100%（或吸光度为0）， 然后测量一个或数个标准溶液（其浓度 均必须大于参比溶液的浓度）的吸光度 和待测试样溶液的吸光度，用比较法或 工作曲线法求得待测溶液的浓度。
显色原理：
1
Ni2+ + 2 H3C C NOH H3C C NOH
差示法测定样品中高含量镍
一、实验目的
1、了解高吸光度差示法的基本原理及其 优点 2、掌握高吸光度差示法测定的基本操作
实验五 高吸光度示差分析法
实验二高吸光度示差分析法一、目的：通过标准曲线的绘制及试样溶液的测定，了解高吸光度示差分析法的基本原理，方法优点。
掌握721型分光光度计的使用方法。
二、原理：普通吸光光度法是基于测量试样溶液与试剂空白溶液（或溶剂）相比较的吸光度，从相同条件下所作的标准曲线来计算被测组份的含量，这种方法的准确度一般不会优于1～2%，因此，它不适合于高含量组份的测定。
为了提高吸光光度法测定的准确度，使其适合于高含量组分的测定，可采用高吸光度示差分析法。
示差法与普通吸光光度法的不同之处，在于用一个待测组份的标准溶液代替试剂空白溶液作为参比溶液，测量待测量溶液的吸光度。
它的测定步骤如下：(1)在仪器没有光线通过时（接受器上无光照射时）调节透光率为0，这与比色法或普通分光光度法相同。
(2)将一个比待测溶液（浓度为C＋△C）稍稀的参比溶液（浓度为C）放在仪器光路中，调节透光率为100%。
(3)将待测量溶液（或标准溶液）推入光路中，读取表现吸光度A f。
表观吸光度A f实际上是由△C引起的吸收大小，可表达为：A f=ab△c上式说明，待测溶液（或标准溶液）与参比溶液的吸光度之差与这两次溶液的浓度差成正比。
无论普通吸光度或高吸光度示差法，只要符合比尔定律，而且测量误差仅仅是由于透光率（或吸光度）读数的不确定所引起的，则可以方便地计算出分析的误差。
仪器刻度上透光率读数改变数（dT）所引起的浓度误差dc为绝对误差，它与透光率有关，其关系式容易由比耳定律推得：A f=ab△c=k△clgT=-A f=-k△c0.43lnT=-k△cKT dc 43.0 ·dT式中k 为标准曲线（A ～C ）的斜率。
实验中三条曲线的三个k 很接近。
根据k 值及上述关系可以计算出实验中各点的绝对误差（假设透光率读数误差为l%，即dT=0.01）。
对于化学工作者来说，更有意义的是浓度的相对误差(c dc)，或者相对百分误差(c dc×100)。
化学物质的吸光度测定
化学物质的吸光度测定引言：吸光度测定是一种广泛应用于化学分析领域的方法，通过测量溶液或气体对特定波长的光的吸收程度，可以获得物质的浓度或含量信息。
本文将介绍吸光度测定的原理、实验操作步骤以及其在化学分析中的应用。
一、吸光度测定的原理吸光度测定是基于比尔—朗伯定律原理的一种分析方法。
根据比尔—朗伯定律，溶液中溶质的吸收光强与溶液的浓度成正比关系，即A=εlc，其中A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，l为样品溶液的光程长度，c为溶质的浓度。
二、吸光度测定的实验操作步骤1. 准备样品溶液：将待测化学物质溶解于适当的溶剂中，得到一定浓度的样品溶液。
2. 设置仪器参数：根据待测物质的吸收特性，选择合适的波长和光路，调整光谱仪或分光光度计的参数。
3. 建立工作曲线：根据已知浓度的标准溶液，进行一系列测定，得到吸光度和浓度之间的关系，建立工作曲线。
4. 测量样品溶液的吸光度：使用建立的工作曲线，测量样品溶液的吸光度，并据此计算出溶质的浓度。
5. 数据处理与分析：根据实验结果，进行数据处理与分析，包括误差分析、结果统计等。
三、吸光度测定的应用1. 环境监测：吸光度测定可用于水质、大气、土壤等环境样品中重金属、有机污染物等的测定，为环境保护提供重要数据。
2. 药物分析：在药物研究和生产中，吸光度测定可用于药物含量测定、溶出度测定、药物稳定性研究等。
3. 食品安全：吸光度测定可用于食品中添加剂、农药残留、重金属等有害物质的测定，确保食品安全。
4. 生化分析：吸光度测定广泛应用于蛋白质、核酸、酶活性等生化实验中，为生物学研究提供可靠分析手段。
结论：吸光度测定是一种简便、快速、灵敏度较高的化学分析方法，广泛应用于环境监测、药物分析、食品安全和生化分析等领域。
通过建立工作曲线，测定样品溶液的吸光度，可以获得物质的浓度或含量信息，为科学研究和工业生产提供重要参考。
在实际应用中，我们还需结合具体样品的特点和实验条件，合理选择测量方法和参数，以获得准确可靠的结果。
第章：吸光光度法
吸收光谱 Absorption Spectrum
S3
h
S2
S1
E3 A E2
E1
S0
E0
纯 电子能态 间跃迁
S2
h
A
S1
S0 分子内电子跃迁
锐线光谱
带状光谱
讨论：
（1）转动能级间的能量差ΔEr：0.005～0.050eV，跃迁
产生吸收光谱位于远红外区。远红外光谱或分子转动光谱；
（2）振动能级的能量差ΔEv约为：0.05～１eV，跃迁产
式中：Ｉo1、Ｉo2分别为λ1、λ2 的入射光强度； Ｉt1、Ｉt2分别为λ1、λ2 的透射光强度；
ε1、ε2分别为λ1、λ2的摩尔吸光系数； 因实际上只能测总吸光度A总，并不能分别测得A1与A2，故
因实际上只能测总吸光度A总，并不能分别测得
A1与A2，故：
A总 ＝ lg（Ｉo总/Ｉt总 ) ＝lg(Io1+Ｉo2)/(Ｉt1+Ｉt2） ＝ lg(Io1+Ｉo2)/(Ｉo110-ε1bc +Ｉo210-ε2bc ）
b：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位；
c：溶液的摩尔浓度，单位mol·L－１；
ε：摩尔吸光系数，单位L·mol－１·cm－１；
或:
A＝lg（I0/It)= a b c
c：溶液的浓度，单位g·L－１
a：吸光系数，单位L·g－１·cm－１
a与ε的关系为：
a =ε/M （M为摩尔质量）
吸光度与光程的关系 A = bc
• 布格(Bouguer)与朗伯(Lambert)先后于1729年和
1760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关系。A∝b
• 1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度与吸收物
高吸光度示差分析法
实验二高吸光度示差分析法一、目的：通过标准曲线的绘制及试样溶液的测定，了解高吸光度示差分析法的基本原理，方法优点。
掌握721型分光光度计的使用方法。
二、原理：普通吸光光度法是基于测量试样溶液与试剂空白溶液（或溶剂）相比较的吸光度，从相同条件下所作的标准曲线来计算被测组份的含量，这种方法的准确度一般不会优于1～2%，因此，它不适合于高含量组份的测定。
为了提高吸光光度法测定的准确度，使其适合于高含量组分的测定，可采用高吸光度示差分析法。
示差法与普通吸光光度法的不同之处，在于用一个待测组份的标准溶液代替试剂空白溶液作为参比溶液，测量待测量溶液的吸光度。
它的测定步骤如下：(1)在仪器没有光线通过时（接受器上无光照射时）调节透光率为0，这与比色法或普通分光光度法相同。
(2)将一个比待测溶液（浓度为C＋△C）稍稀的参比溶液（浓度为C）放在仪器光路中，调节透光率为100%。
(3)将待测量溶液（或标准溶液）推入光路中，读取表现吸光度A。
f实际上是由△C引起的吸收大小，可表达为：表观吸光度Af=ab△cAf上式说明，待测溶液（或标准溶液）与参比溶液的吸光度之差与这两次溶液的浓度差成正比。
无论普通吸光度或高吸光度示差法，只要符合比尔定律，而且测量误差仅仅是由于透光率（或吸光度）读数的不确定所引起的，则可以方便地计算出分析的误差。
仪器刻度上透光率读数改变数（dT）所引起的浓度误差dc为绝对误差，它与透光率有关，其关系式容易由比耳定律推得：=ab△c=k△cAf=-k△clgT=-Af0.43lnT=-k△cKT dc 43.0 〃dT式中k 为标准曲线（A ～C ）的斜率。
实验中三条曲线的三个k 很接近。
根据k 值及上述关系可以计算出实验中各点的绝对误差（假设透光率读数误差为l%，即dT=0.01）。
对于化学工作者来说，更有意义的是浓度的相对误差(c dc)，或者相对百分误差(c dc×100)。
浓度相对百分误差与参比溶液的浓度关系密切。
示差吸光光度法
A bc
两种吸收系数之间的关系为：ε=aM （2）桑德尔(Sandell)灵敏度S • 桑德尔(Sandell)灵敏度(灵敏度指数) 用 S来表示。S是指当仪器的检测极限 A=0.001时，单位截面积光程内所能检 测出来的吸光物质的最低含量，其单位为 μg· cm-2，S 与ε及吸光物质摩尔质量M 的关系为： M
2.吸收系数和桑德尔(Sandell)灵敏度 （1）吸收系数 *吸收系数a 当浓度c用g· L-1，液层厚度b用cm为单位表示时，则K用 a来表示称为吸收系数，单位为L· g-1· cm-1，它表示物质的 量浓度为l g· L-1，液层厚度为lcm时溶液的吸光度。
A=abc
* 摩尔吸收系数 molar absorptivity 当浓度c 用mol· L-1，液层厚度b 用cm为单位表示，则 K 用另一符号ε来表示。ε称为摩尔吸收系数，单位为 L· mol-l· m-1，它表示物质的量浓度为l mol· L-1，液层厚度 为l cm时溶液的吸光度。
克服非单色光引起的偏离的措施是使用比较 好的单色器，从而获得纯度较高的“单色光”， 使标准曲线有较宽的线性范围；入射光波长选择 在被测物质的最大吸收处，保证测定有较高的灵 敏度，此处的吸收曲线较为平坦，在此最大吸收 波长附近各波长的光的ε值大体相等，由于非单色 光引起的偏离要比在其他波长处小得多；测定时 应选择适当的浓度范围，使吸光度读数在标准曲 线的线性范围内。 （2）非平行入射光引起的偏离 朗伯-比尔定律要求采用平行光垂直入射。 若入射光为非平行光，就不能保证入射光全部垂 直通过吸收池，可能导致平均光程大于吸收池厚 度，实际测得的吸光度将大于理论值，引起正偏 离。
8.3分光光度计及其基本部件 分光光度计按工作波长范围分类，紫 外、可见分光光度计应用于无机物和有机 物含量的测定，红外分光光度计主要用于 结构分析。分光光度计又可分为单光束和 双光束两类。722型分光光度计是数字显 示的单光束、可见分光光度计 （recording spectrophotometer）。 分光光度计的基本部件有光源、单色 器、比色皿、检测器和显示装置。如图８. ４
吸光度准确度的测试方法
吸光度准确度的测试方法
嘿，咱今儿就来聊聊吸光度准确度的测试方法！你可别小瞧了这玩意儿，它在好多领域那可都是相当重要的呢！
你想想看，就好像咱要去衡量一个东西到底有多靠谱，吸光度准确度不也是这么个道理嘛！那怎么测试呢？
首先啊，咱得准备好那些专门的仪器设备，这就好比战士上战场得有称手的兵器呀！然后呢，得设置好各种参数，就跟给机器调好频道似的，可不能马虎。
有一种方法呢，是用标准物质来进行测试。
这就好像找个标准的榜样来对比一样，看看咱测出来的和标准的差距有多大。
把标准物质放进去，测一测吸光度，再和已知的标准值比一比，不就心里有数啦？
还有一种呢，是通过重复测量来验证。
就跟咱反复确认一件事儿是不是真的一样，多测几次，看看结果稳不稳定。
要是一会儿一个样，那可不行，说明准确度不咋地呀！
再比如说，可以和其他已知准确的方法进行对比。
这就像你有个好朋友，他的水平你知道，你自己的水平和他一比，不就清楚啦？要是差得远，那可得找找原因，好好改进改进。
咱在做这些测试的时候，可一定要细心再细心，不能有一点马虎。
就像盖房子，一砖一瓦都得放对地方，不然房子可就不结实啦！
吸光度准确度的测试，那真的是个技术活。
但咱只要认真对待，按
照正确的方法来，肯定能把它给搞定！你说是不是？咱可不能在这上
面掉链子呀，这关系到好多重要的实验和研究呢！所以，大家都得重
视起来，把这个吸光度准确度的测试给做好，让咱的实验结果更可靠，更有说服力！这样咱在相关领域才能走得更稳，更远呀！。
物理实验技术中的吸光度测量方法与技巧
物理实验技术中的吸光度测量方法与技巧引言：在物理学和化学等科学领域中，吸光度是一种重要的测量参数，用于研究溶液中的物质浓度、反应动力学和分子结构等。
本文将介绍物理实验中吸光度的测量方法与技巧，帮助读者更好地理解和应用这一重要的实验技术。
一、吸光度的概念和原理吸光度是指溶液对入射光强的吸收程度，用I表示。
根据贝尔-比亚-朗伯定律，吸光度与溶液中溶质的浓度和杂质物质的影响成正比，与光程成正比，与溶液中溶质的吸收性质相关。
吸光度的定义公式为A=log(I0/I)，其中I0为入射光强，I为透射光强。
二、常用的吸光度测量方法吸光度的测量方法多种多样，下面介绍几种常用的方法：1. 分光光度法分光光度法是一种间接测定吸光度的方法，通过测量透射光的强度来计算样品的吸光度。
这种方法利用分光光度计的分光仪器，通过选择合适的波长，可以使被测样品的吸光度最大化。
2. 滴定法滴定法是一种直接测定吸光度的方法，通过溶液中反应的终点来测定吸光度。
这种方法常用于分析溶液中的金属离子或酸碱度等参数。
3. 标准曲线法标准曲线法是一种建立吸光度与浓度之间关系的方法，通过测定不同浓度的标准溶液的吸光度，建立吸光度与浓度的标准曲线。
然后通过测量待测溶液的吸光度，利用标准曲线来计算其浓度。
三、吸光度测量的技巧在进行吸光度测量时，有一些技巧和注意事项可以帮助我们获得准确可靠的测量结果：1. 选择适当的波长不同的化合物在不同波长的光下吸收情况会有所不同，因此在进行测量时选择适当的波长可以使吸光度达到最大化或最小化，提高测量的灵敏度和准确性。
2. 校正反射和散射在测量透射光强时，反射和散射会产生一定的干扰。
为减小干扰，可以使用空白对比法，即在没有溶质的情况下测量背景透过光强，再和含溶质的样品进行比较。
3. 控制光程光程是指光通过样品的路径长度，通常使用经过校准的导光管或比色皿来控制光程。
保持光程的一致性可以减小误差，确保测量结果的可靠性。
4. 溶液制备和处理在进行吸光度测量前，需要正确制备溶液并进行适当的处理。
测定吸光度实验报告
一、实验目的1. 了解紫外分光光度法的基本原理和应用。
2. 掌握紫外-可见分光光度计的使用方法。
3. 通过实验，学会测定吸光度，并分析实验结果。
二、实验原理紫外-可见分光光度法是利用物质在紫外和可见光区域的吸收特性，对物质进行定性和定量分析的方法。
实验中，通过测定溶液在特定波长下的吸光度，根据朗伯-比尔定律（A = εlc），可以计算出溶液中待测物质的浓度。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外-可见分光光度计、移液管、容量瓶、比色皿、洗耳球等。
2. 试剂：待测溶液、标准溶液、蒸馏水、氢氧化钠溶液、盐酸溶液等。
四、实验步骤1. 标准曲线的制作：首先配制一系列已知浓度的标准溶液，分别测定其吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 待测溶液的吸光度测定：将待测溶液稀释至适当浓度，使用移液管准确移取一定体积，置于比色皿中，在特定波长下测定吸光度。
3. 结果分析：根据标准曲线，计算出待测溶液的浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
根据实验数据，得到标准曲线的线性方程为：A = 0.0478c + 0.0018，相关系数R² =0.9982。
2. 待测溶液的吸光度测定：将待测溶液稀释至适当浓度，测定其吸光度为0.745。
3. 结果分析：根据标准曲线，计算待测溶液的浓度为1.56×10⁻³ mol/L。
六、实验讨论1. 实验过程中，要注意溶液的稀释，避免溶液浓度过高或过低，影响吸光度测定的准确性。
2. 实验过程中，要确保比色皿的清洁，避免杂质对吸光度测定的干扰。
3. 实验过程中，要控制好温度和pH值，避免对吸光度测定的结果产生影响。
4. 实验过程中，要注意仪器的操作，避免人为误差。
七、实验总结通过本次实验，我们了解了紫外-可见分光光度法的基本原理和应用，掌握了紫外-可见分光光度计的使用方法，学会了测定吸光度，并分析了实验结果。
分析吸光度实验数据处理
分析吸光度实验数据处理引言：吸光度实验是化学和生物学实验中常用的一种实验手段，通过测定物质溶液中的吸光度来推断溶液中物质的浓度或者其他相关参数。
吸光度实验数据处理是实验结果的重要环节，本文将通过分析吸光度实验数据处理的方法和步骤，帮助读者更好地理解和运用吸光度实验数据。
一、实验数据获取和准备在进行吸光度实验之前，需要准备好实验所需的仪器设备和试剂。
实验中使用的仪器主要是分光光度计，其接收一定波长范围内的光信号，并且可以测量该波长范围内的光强度。
试剂的选择需要根据实验目的和具体物质的性质来确定。
实验数据一般可以通过分光光度计上的显示屏读取。
确保实验设备和试剂的质量良好和正确使用能够保证实验数据的准确性。
二、吸光度实验数据处理步骤1. 清洗和调零在进行吸光度实验之前，需要进行清洗和调零操作。
首先，需要用纯水进行冲洗，以确保试样槽或光学系统的无污染。
接下来，进行调零操作，将分光光度计的显示调整为零值，以消除仪器本身的误差。
2. 统计实验数据在进行吸光度实验时，需要按照一定的时间间隔记录实验数据，通常选择每隔固定时间记录一次数据。
实验数据包括时间和吸光度值。
3. 值的处理吸光度值处理是吸光度实验数据处理中的核心步骤。
吸光度值是测量的光强度与实验操作、试剂和仪器的相关参数有关的。
通常，我们通过计算差值法、标准曲线法或其他线性回归法来计算吸光度值。
差值法即计算不同时间点之间吸光度的差值，可以用于研究物质浓度随时间变化的趋势。
标准曲线法则需要事先制备一系列不同浓度的标准溶液，通过测定吸光度和浓度之间的关系建立一条标准曲线，然后根据曲线来计算未知样品的浓度。
4. 数据分析和结果展示经过吸光度值处理后，可以进行数据分析和结果展示。
在数据分析方面，可以计算出浓度随时间的变化率、定量测量目标物质的浓度等。
在结果展示方面，可以通过绘制曲线图、柱状图或其他图形来展示实验结果。
这样可以更直观地观察和理解实验数据。
三、吸光度实验数据处理的注意事项1. 实验设备的选择和操作要准确，以保证实验数据的可靠性和准确性。
吸光光度实验报告
一、实验目的1. 了解吸光光度法的基本原理和应用；2. 掌握使用分光光度计测定溶液中铁离子浓度的方法；3. 熟悉实验操作步骤和数据处理方法。
二、实验原理吸光光度法是一种基于物质对特定波长光吸收程度与其浓度成正比的定量分析方法。
当一定波长的光通过含有吸光物质的溶液时，溶液中的物质会吸收部分光能，从而使光强度减弱。
溶液的吸光度与溶液中吸光物质的浓度成正比，即符合朗伯-比耳定律（A = εlc），其中A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，l为比色皿厚度，c为溶液浓度。
本实验采用邻菲罗啉分光光度法测定溶液中铁离子的浓度。
邻菲罗啉与铁离子在pH3~9的条件下形成稳定的橙红色络合物，该络合物的最大吸收波长为510nm。
通过绘制标准曲线，可以测定未知溶液中铁离子的浓度。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：分光光度计、比色皿、移液管、容量瓶、酸度计等；2. 试剂：铁储备液、邻菲罗啉试剂、10%盐酸羟胺水溶液、醋酸-醋酸钠缓冲溶液、pH试纸等。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：（1）准确移取一定量的铁储备液于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得到一系列不同浓度的铁标准溶液；（2）用移液管分别移取上述铁标准溶液各1mL于比色皿中，加入1mL邻菲罗啉试剂和1mL醋酸-醋酸钠缓冲溶液；（3）将比色皿放入分光光度计中，在510nm波长下测定吸光度，记录数据；（4）以铁离子浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 未知溶液中铁离子浓度的测定：（1）准确移取一定量的未知溶液于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀；（2）用移液管分别移取上述溶液各1mL于比色皿中，加入1mL邻菲罗啉试剂和1mL醋酸-醋酸钠缓冲溶液；（3）将比色皿放入分光光度计中，在510nm波长下测定吸光度；（4）根据标准曲线，计算未知溶液中铁离子的浓度。
五、实验数据与结果1. 标准曲线的绘制：铁离子浓度（mg/L） | 吸光度---------------------|--------0.00 | 0.0000.10 | 0.1500.20 | 0.3000.30 | 0.4500.40 | 0.6002. 未知溶液中铁离子浓度的测定：未知溶液的吸光度为0.250，根据标准曲线计算得到未知溶液中铁离子的浓度为0.20mg/L。
实验1 高吸光度示差分析法
实验二高吸光度示差分析法一、目的：通过标准曲线的绘制及试样溶液的测定，了解高吸光度示差分析法的基本原理，方法优点。
掌握721型分光光度计的使用方法。
二、原理：普通吸光光度法是基于测量试样溶液与试剂空白溶液（或溶剂）相比较的吸光度，从相同条件下所作的标准曲线来计算被测组份的含量，这种方法的准确度一般不会优于1～2%，因此，它不适合于高含量组份的测定。
为了提高吸光光度法测定的准确度，使其适合于高含量组分的测定，可采用高吸光度示差分析法。
示差法与普通吸光光度法的不同之处，在于用一个待测组份的标准溶液代替试剂空白溶液作为参比溶液，测量待测量溶液的吸光度。
它的测定步骤如下：(1)在仪器没有光线通过时（接受器上无光照射时）调节透光率为0，这与比色法或普通分光光度法相同。
(2)将一个比待测溶液（浓度为C＋△C）稍稀的参比溶液（浓度为C）放在仪器光路中，调节透光率为100%。
(3)将待测量溶液（或标准溶液）推入光路中，读取表现吸光度A f。
表观吸光度A f实际上是由△C引起的吸收大小，可表达为：A f=ab△c上式说明，待测溶液（或标准溶液）与参比溶液的吸光度之差与这两次溶液的浓度差成正比。
无论普通吸光度或高吸光度示差法，只要符合比尔定律，而且测量误差仅仅是由于透光率（或吸光度）读数的不确定所引起的，则可以方便地计算出分析的误差。
仪器刻度上透光率读数改变数（dT ）所引起的浓度误差dc 为绝对误差，它与透光率有关，其关系式容易由比耳定律推得：A f =ab △c=k △clgT=-A f =-k △c0.43lnT=-k △cKT dc 43.0 ·dT式中k 为标准曲线（A ～C ）的斜率。
实验中三条曲线的三个k 很接近。
根据k 值及上述关系可以计算出实验中各点的绝对误差（假设透光率读数误差为l%，即dT=0.01）。
对于化学工作者来说，更有意义的是浓度的相对误差(c dc)，或者相对百分误差(c dc×100)。
化学实验报告吸光度
一、实验目的1. 理解吸光度的概念及其在化学分析中的应用。
2. 掌握使用分光光度计测定溶液吸光度的方法。
3. 学习如何根据吸光度计算溶液的浓度。
二、实验原理吸光度（A）是指溶液对光的吸收程度，它是通过比色法来测定的。
根据朗伯-比尔定律，溶液的吸光度与溶液的浓度、光程和光的波长有关，公式如下：A = εlc其中，A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，l为光程，c为溶液的浓度。
在实验中，通过测量溶液在一定波长下的吸光度，可以计算出溶液的浓度。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：分光光度计、比色皿、移液管、容量瓶、吸管、烧杯等。
2. 试剂：标准溶液、待测溶液、溶剂等。
四、实验步骤1. 准备工作a. 检查仪器是否正常工作。
b. 用蒸馏水清洗比色皿，晾干后放入分光光度计的样品池中。
c. 设置分光光度计的波长为所需测量的波长。
2. 标准曲线的制作a. 准备一系列已知浓度的标准溶液。
b. 用移液管将标准溶液分别加入比色皿中，用溶剂稀释至刻度线。
c. 将比色皿放入分光光度计中，依次测量各标准溶液的吸光度。
d. 以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 待测溶液的测定a. 用移液管将待测溶液加入比色皿中，用溶剂稀释至刻度线。
b. 将比色皿放入分光光度计中，测量待测溶液的吸光度。
c. 根据标准曲线，从吸光度值求出待测溶液的浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作标准曲线如图所示，其中横坐标为标准溶液的浓度，纵坐标为吸光度。
2. 待测溶液的测定待测溶液的浓度为：0.0025 mol/L。
六、实验讨论1. 实验过程中，比色皿的清洗和干燥对实验结果有较大影响，应严格按照操作规程进行。
2. 实验过程中，注意保持分光光度计的稳定性和准确性。
3. 实验结果可能受到环境因素的影响，如温度、湿度等，应尽量在相同条件下进行实验。
七、实验总结本次实验通过测定溶液的吸光度，学会了使用分光光度计进行化学分析。
实验过程中，掌握了标准曲线的制作方法，以及如何根据吸光度计算溶液的浓度。
仪器分析：6.6差示分光光度法
stop
（3x
1 100 %
C1
100
最精密法
用较浓的参比溶液 (C2>Cx)调零点
用较稀的参比溶液 (C1<Cx)调满标
适于整个测量范围的测定。
stop
2. 差示吸光度与样品浓度的关系
差示透光度：
f
2 1 2
普通法
高吸光度法
用光闸调零点
Af=A测 =Ax-A1
=L (Cx-C1) 适于 =(0～20)%范围的测定。
用较稀的参比溶液 (C1<Cx)调满标
stop
a. 计算法
测得标液(Cs)的吸光度 Af(s)=L(Cs-C1) 测得试样(Cx)的吸光度 Af(x)=L(Cx-C1)
Cx
C1
Af (x) Af (s)
f1 f2 2
差示吸光度：
Af lg f
样品溶液的吸光度： A lg
LC lg( 1 10 Af 2 10 Af 2 )
对于高吸光度法： 2 0
1 1
stop
A lg(1 10 Af )
A A1 Af
Af A A1 LC
Af 与C为线性。
对于低吸光度法： 1=1 2 >0 LC lg(10 Af 2 10 Af 2 )
Af 与C为非线性。
对于最精确法：1<1 2>0
LC lg( 1 10 Af 2 10 Af 2 )
Af 与C为非线性。
stop
(Cs
C1)
b. 标准曲线法
作 Af —(Cs-C1) 曲线
Af
Ax
Cx=x+C1
x=Cx-C1 (Cs-C1)
吸光度实验报告
吸光度实验报告引言吸光度实验是一种常见的分析实验方法，用于测定物质溶液中某种化学物质的浓度。
该实验基于兰伯特-比尔定律，即物质的吸光度与其浓度成正比。
本实验的目的是通过测定不同浓度的标准溶液的吸光度值，建立吸光度与浓度之间的关系曲线，并利用该曲线来测定未知溶液的浓度。
实验原理根据兰伯特-比尔定律，溶液的吸光度（A）与其浓度（C）之间存在一个线性关系，可以表示为以下公式：A = ε * C * l其中，A为吸光度，ε为比摩尔吸光度（摩尔实吸光度与溶液的摩尔浓度之比），C为溶液的浓度，l为光程长度（通常为1 cm）。
根据上述公式，我们可以通过测定一系列已知浓度的标准溶液的吸光度，并绘制吸光度与浓度之间的关系曲线，从而通过比较未知溶液的吸光度值，推导出其浓度。
实验步骤1. 制备标准溶液首先，准备一系列已知浓度的标准溶液。
根据实验需要，我们选择5个浓度不同的标准溶液（C1，C2，C3，C4，C5），分别为0.1 mol/L，0.08 mol/L，0.06 mol/L，0.04 mol/L和0.02 mol/L。
将分别加入不同浓度的标准品到5个容量瓶中，并用去离子水稀释至相同体积（通常为25 mL）。
确保每个容量瓶的溶液严格按照所需浓度制备。
2. 测定吸光度使用分光光度计测定每个标准溶液的吸光度。
设置波长为所测定物质的吸收最大波长，并保持恒定。
取出一个废液试管，用去离子水清洗，并用细滴管吸取标准溶液样品加入试管。
置入分光光度计，并记录吸光度值。
重复以上步骤，对每个标准溶液测定吸光度值，并记录在实验数据表中。
3. 构建吸光度-浓度曲线将实验得到的标准溶液吸光度值和浓度值绘制在坐标轴上，并通过拟合得到线性关系曲线。
利用拟合得到的曲线，我们可以根据任意吸光度值估计相应的浓度。
实验数据浓度 (mol/L) 吸光度 (A)0.1 0.4560.08 0.3780.06 0.3030.04 0.1990.02 0.102数据处理与分析根据实验数据，我们可以利用线性拟合的方法得到吸光度-浓度的关系曲线。
同一样品吸光度误差分析
同一样品吸光度误差分析
同一样品吸光度的误差分析可以涉及以下几个方面：
1. 仪器误差：使用不同的光谱仪器可能会导致吸光度测量结果
的差异。
这可能是由于仪器的校准、精度或灵敏度等方面的差异所致。
为了减小这种误差，应该在进行实验前对仪器进行标定和校准，并保证不同实验中使用的仪器具备相似的性能。
2. 操作误差：操作人员在样品制备、取样、测量过程中的差异
也可能导致吸光度误差的产生。
例如，样品制备的时间、温度、容器的选择等因素都可能对吸光度测量结果产生影响。
为了减小操作误差，应该严格按照实验方法进行操作，并尽量保持操作条件的一致性。
3. 环境误差：环境因素，如温度、湿度、光线等也可能对吸光
度测量结果造成一定影响。
确保实验室环境稳定，并采取适当的措施来消除或减小环境误差对实验结果的影响。
4. 样品本身的变化：同一样品在不同时间、保存条件下可能会
发生一定的变化，导致吸光度的差异。
为了控制样品本身的变化，应该严格按照实验方法中规定的样品处理和保存条件进行操作。
在进行吸光度测量时，需要尽量减小以上各方面的误差，并采取合适的统计分析方法对数据进行处理，以获得准确可靠的结果。
吸光度比较法
吸光度比较法吸光度比较法是一种常用的分析方法，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
它通过测量样品溶液的吸光度来确定其中所含物质的浓度或反应程度。
本文将介绍吸光度比较法的原理、操作步骤和应用领域。
一、原理吸光度比较法基于比尔-朗伯定律，即溶液的吸光度与溶液中溶质浓度成正比。
根据该定律，当光线通过溶液时，溶液中的溶质会吸收一部分光线，使得透过溶液的光线强度减弱。
吸光度（A）定义为入射光线强度（I₀）与透过溶液后光线强度（I）之间的比率：A=log(I₀/I)。
二、操作步骤1. 准备样品溶液：按照实验要求，将待测溶质溶解于适当的溶剂中，得到一系列不同浓度的溶液。
2. 设置比色皿：将样品溶液分别倒入比色皿中，确保每个比色皿中的溶液量相同。
3. 调节光路：将比色皿放入分光光度计，并调节光路，使得入射光线垂直通过样品溶液。
4. 测量吸光度：使用分光光度计测量每个比色皿中溶液的吸光度，并记录下各个浓度对应的吸光度数值。
5. 绘制标准曲线：将各个浓度对应的吸光度数值绘制在坐标系中，并通过拟合曲线得到吸光度与浓度的关系。
6. 测定未知样品的浓度：根据标准曲线，测定未知样品的吸光度，并通过标准曲线确定其浓度。
三、应用领域吸光度比较法在许多领域都得到了广泛应用。
1. 化学分析：吸光度比较法可以用于测定溶液中各种化学物质的浓度，如金属离子、有机物等。
2. 生物学研究：吸光度比较法可以用于检测生物样品中的蛋白质、核酸等生物大分子的含量。
3. 药物研发：吸光度比较法可以用于药物合成过程中反应的监测和纯度的评价。
4. 环境监测：吸光度比较法可以用于水质、大气等环境样品中有害物质的浓度检测。
四、注意事项1. 操作过程中要保持实验环境的清洁和安静，避免外界因素对实验结果的影响。
2. 样品溶液的制备要准确，确保溶质充分溶解，避免对实验结果的影响。
3. 分光光度计的使用要按照仪器说明进行，并定期进行校准和维护。
4. 在绘制标准曲线时，要尽量选择多个浓度点，以获得更准确的拟合结果。
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实验二高吸光度示差分析法
一、目的：
通过标准曲线的绘制及试样溶液的测定，了解高吸光度示差分析法的基本原理，方法优点。
掌握721型分光光度计的使用方法。
二、原理：
普通吸光光度法是基于测量试样溶液与试剂空白溶液（或溶剂）相比较的吸光度，从相同条件下所作的标准曲线来计算被测组份的含量，这种方法的准确度一般不会优于1～2%，因此，它不适合于高含量组份的测定。
为了提高吸光光度法测定的准确度，使其适合于高含量组分的测定，可采用高吸光度示差分析法。
示差法与普通吸光光度法的不同之处，在于用一个待测组份的标准溶液代替试剂空白溶液作为参比溶液，测量待测量溶液的吸光度。
它的测定步骤如下：
(1)在仪器没有光线通过时（接受器上无光照射时）调节透光率为0，这与比色法或普通分光光度法相同。
(2)将一个比待测溶液（浓度为C＋△C）稍稀的参比溶液（浓度为C）放在仪器光路中，调节透光率为100%。
(3)将待测量溶液（或标准溶液）推入光路中，读取表现吸光度A f。
表观吸光度A f实际上是由△C引起的吸收大小，可表达为：
A f=ab△c
上式说明，待测溶液（或标准溶液）与参比溶液的吸光度之差与这两次溶液的浓度差成正比。
无论普通吸光度或高吸光度示差法，只要符合比尔定律，而且测量误差仅仅是由于透光率（或吸光度）读数的不确定所引起的，则可以方便地计算出分析的
误差。
仪器刻度上透光率读数改变数（dT ）所引起的浓度误差dc 为绝对误差，它与透光率有关，其关系式容易由比耳定律推得：
A f =ab △c=k △c
lgT=-A f =-k △c
0.43lnT=-k △c
KT dc 43
.0 ·dT
式中k 为标准曲线（A ～C ）的斜率。
实验中三条曲线的三个k 很接近。
根据k 值及上述关系可以计算出实验中各点的绝对误差（假设透光率读数误差为l%，即dT=0.01）。
对于化学工作者来说，更有意义的是浓度的相对误差(c dc
)，或者相对百分误差(c dc
×100)。
浓度相对百分误差与参比溶液的浓度关系密切。
随着有色参比溶液浓度的增加（或A 的增加），相对百分误差也随之减小。
当所用参比溶液的A=1.736时，最低的相对百分误差也可减小至0.25%。
由此可见了，差示法中高吸光度法可达到容量分析和重量分析的准确度。
三、仪器与试剂
721型分光光度计（附2只1厘米比色皿）
0～10ml 微量滴定管1支（刻度准确至0.005ml ）
25ml 容量瓶×16
0.2500M Cr （NO 3）3
四、实验步骤
l、标准溶液的配制
在16支25ml容量瓶中，用微量滴定管分别放入1.0,2.0,3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，10.0，11.0，12.0，13.0，14.0，15.0，16.0ml，0.2500 M Cr（NO3）3溶液（也可放置相接近的毫升数，但须正确读到0.005ml），再用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
2、标准曲线的绘制及待测溶液的测定
选择一对合适的厚度为lcm比色皿，在550nm波长下分别测量下列三组溶液的吸光光度。
(1)以蒸馏水为参比溶液，测量1.0～5.0m1 0.2500M Cr （No3）3/25ml溶液的吸光度。
(2)以5.0m1 0.2500M Cr（NO3）3/25m1溶液为参比溶液，测量6.0～11.0ml0.2500M Cr（NO3）3/25ml溶液的吸光度。
(3)以10.0ml 0.2500M Cr（NO3）3/25ml溶液为参比溶液，测量11.0～16.0ml 0.2500M Cr（NO3）3/25ml溶液及待测溶液的吸光度。
(4)为了消除由于标准溶液浓度、液槽厚度与光学性能不一致所带来的误差，常采用中性滤光片代替参比溶液，以获得良好的结果。
以中性滤光片（相对空气其A约为1.0）代替参比溶液，测量11-16毫升0.2500 M Cr（NO3）3/25ml溶液及试样溶液的吸光度。
（注意：应固定中性滤光片的位置）
五、结果与处理
1、在同一坐标纸上绘制（l）-（3）组的A-C标准曲线。
2、从（3）组标准曲线上求算待测溶液的溶度。
3、根据（1）-（3）组标准曲线，分别求其K值，然后计算出每个实验点
的c dc ×100，绘制（1）-（3）组c dc
×100～T 图，从图可以引出什么结论。
六、思考题．
1、在普通分光光度法中，若透光率读数改变0.01，最小误差点（即T=36.8%）的相对百分误差是多少？
2、根据实验数据，指出哪一个实验点的相对百分误差最低？比普通分光光度法中T 为36.8%处精确多少倍？
七、参考资料
1、朱世盛，《仪器分析》，第37页，复旦大学出版社，1983。
2、田笠卿，化学通报，第5期，301页，1963年。