控制菌检查法
(整理)年药典通则1106非无菌产品微生物限度检查.
通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按下列规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。
供试品检出控制菌或其他致病菌时,按一次检出结果为准,不再复试。
供试液制备及实验环境要求同“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”。
如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或中和。
供试品检查时, 若使用了中和剂或灭活剂，应确认有效性及对微生物无毒性。
供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。
培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验供试品控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
供试品的控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的控制菌检查。
若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，控制菌检查方法应重新进行适用性试验。
菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC（B）10 104〕大肠埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC（B）44 102〕乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi B)〔CMCC（B）50 094〕白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC（F）98 001〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕菌液制备将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或在胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24 小时；将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养2～3 天；将生孢梭菌接种于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30～35℃培养24～48 小时或接种于硫乙醇酸盐流体培养基中30～35℃培养18～24 小时。
【实验】控制菌检查实验报告
【关键字】实验控制菌检查实验报告篇一：控制菌检查方法验证试验记录控制菌检查方法验证试验报告一、目的：确认供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性。
二、内容：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌测定。
三、菌种：金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】、大肠杆菌【CMCC（F）44102】、乙型副伤寒沙门菌【CMCC（B）50094】、铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】、生孢梭菌【CMCC（B）64941】.四、方法：常规法（）；培养基稀释法（）；薄膜法（）；综合法（）（依据《中国药典XX版》二部微生物限度检查法方法验证实验）五、验证方法：（1）试验组取ml供试液及ml（50～100cfu/ml）试验菌加入增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行检查（2）阴性菌对照组方法同试验组，验证大肠杆埃希菌、大肠菌群、乙型副伤寒沙门菌检查法时的(本文来自：小草范文网:控制菌检查实验报告)阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌；验证铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、生孢梭菌检查法时的阴性对照菌采用大肠杆埃希菌。
阴性对照菌不得检出。
六、试验记录：七、结论：通过以上方法学验证实验证明，采用稀释法（）；培养基稀释法（）；薄膜法（）；综合法（）阳性代表菌株验证实验均符合要求, 故该方法适用于复核人：试验人：年月日篇二：控制菌检查控制菌检查简述控制菌检查是用于检查某些特定微生物，规定按一次检出结果为准，不再复试。
由于控制菌为一次性报告试验结果，故应注意方法的有效性确证（方法验证或阳性对照）、实验过程保障和结果确证，以提高检验结果的可靠性。
既要躲免漏检造成的假阴性结果，又要躲免实验室污染造成的假阳性结果。
控制菌检查中，涉及实验室监控菌株的分离鉴定、样品阳性菌株的分离分析、方法验证试验中的阳性菌操作等，应在专门的阳性菌实验室进行。
除另有规定外，阳性菌实验室应符合国家二级生物安全标准，阳性菌实验室应配备生物安全柜。
阳性菌操作不得在供试品检验用洁净实验室内进行。
《中国药典》2015年版控制菌检查法实例
1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法----培养基适用性检查（2/2）
控制菌检查 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
梭菌
白色念珠菌
培养基 溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基
甘露醇氯化钠琼脂培养基 梭菌增菌培养基
哥伦比亚琼脂培养基 沙氏葡萄糖液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基
念珠菌显色培养基
特性 促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示特性 抑制能力 促生长能力 促生长能力 促生长能力 促生长能力+指示特性 促生长能力+指示能力 抑制能力
1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法----培养基适用性检查
液体培养基促 生长能力检查
• 分别接种不大于100cfu的试验菌于被检培养基和对照培养基 中，在规定的温度和培养时间下，与对照培养基管相比，被
检培养基管试验菌应生长良好。
固体培养基促 生长能力检查
• 用涂布法分别接种不大于100cfu的试验菌于被检培养基和对 照培养基平板上，在规定的温度和培养时间下，被检培养基
《中国药典》2015年版----控制菌检查法实例
中国药典2015年版
1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法
• 计数培养基适用性检查 • 供试品计数方法适用性试验
1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法
• 培养基适用性检查 • 控制菌检查方法适用性试验
1107 非无菌药品微生物限度标准
特性 促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示特性 促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示特性 促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示特性 指示能力
试验菌株 大肠埃希菌、铜绿假单胞菌
金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌、铜绿假单胞菌
微生物限度检查-控制菌检查法标准操作规程
微生物限度检查-控制菌检查法标准操作规程1 目的明确微生物限度检查-控制菌检查法的过程，保证产品质量。
2 适用范围检查非无菌制剂及其原、辅料等是否存在特定的微生物（如：铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌）, 从而判断是否符合相应的微生物限度标准。
3 定义无。
4 职责与权限检验员：按本标准判定产品质量并出具报告。
负责人：监督执行情况，审批最终结果。
5 内容及流程5.1 实验说明5.1.1 TSB为“胰酪大豆胨液体培养基”。
5.1.2 所用材料及用具（待检品、菌株除外）应经过灭菌处理；检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
5.1.3 供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。
5.2 检验量从一批中随机抽取不少于2个最小包装的供试品，混合后，从中抽取10g或10mL。
5.3 实验材料与用具5.3.1 混合后的待检品（供试品）、TSB培养基（9mL/管）、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液；5.3.2 铜绿假单胞菌实验用材料：铜绿假单胞菌菌悬液（≤100cfu/mL）、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基、1%二盐酸N,N-二甲基对苯二胺试液（即用即配）；5.3.3 金黄色葡萄球菌实验用材料：金黄色葡萄球菌菌悬液（≤100cfu/mL）、甘露醇氯化钠琼脂培养基；5.3.4 用具：培养皿、接种环、洁净滤纸片、无菌玻棒。
5.4 供试液制备5.4.1 取供试品和pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以1:10稀释成供试液。
5.4.2 必要时，用统一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释；也可用混合的供试品原液作为供试液。
5.5 增菌培养5.5.1 供试品组：取1mL供试液，接种至9mL的TSB中，混匀，共接种2管。
5.5.2 阳性对照：取1mL菌液，与供试液同法操作，接种至9mL的TSB中，混匀，接种1管。
5.5.3 阴性对照：取1mL pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，与供试液同法操作，接种至9mL 的TSB中，混匀，接种1管。
控制菌(大肠埃希菌)检查操作规程
控制菌（大肠埃希菌）检查操作规程1.目的建立一个控制菌大肠埃希菌控制菌大肠埃希菌检查标准工作程序，规范QC控制菌大肠埃希菌检查人员的控制菌大肠埃希菌检查的操作。
2.范围适用于本公司的口服制剂完成内包后外包前的中间体和局部给药制剂产品的内包装材料的控制菌大肠埃希菌的检测。
3.责任者QC控制菌大肠埃希菌检查人员；质量管理部4.内容4.1检测准备4.1.1 QC人员接到控制菌大肠埃希菌检查的《工作进程计划单》后，核对《取样指令》，确定控制菌大肠埃希菌检查所需容器具、试液、培养基等项目和数量，执行微生物检查准备工作操作程序和培养基配制操作规程，进行控制菌大肠埃希菌检查前的准备工作。
4.1.2 为了保证被检品在取样后规定的时间内完成检验，取样前应准备好检验需要的各种器皿（清洗→干燥→包裹）、培养基和稀释剂等（配制→分装→包裹），并灭菌备用。
4.2 供试液的制备4.2.1 供试液供试液是指按照供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法将供试品制成供试验用的均匀液体。
4.2.2 供试液的制备根据供试品的理化特性与生物需特性，采取适宜的方法制备供试液。
如果使用了乳化剂、分散剂、中和剂和灭活剂，其用量应证明是有效的，并对微生物的生长和存活无影响性。
4.2.2.1 可溶性液体供试品取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试液。
可溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。
4.2.2.2 非水溶性液体供试品油剂可先加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀，然后再加0.9%无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100m，混匀，作为供试液。
4.2.2.3 水溶性固体、半固体或黏稠性供试品称取供试品10g，置PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml中，用匀浆仪或其他适宜方法，混匀，作为1：10供试液。
必要时可加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。
4.2.2.4 非水溶性供试品取供试品5g(5m1)，加入含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使其充分乳化，作为1:20供试液。
微生物控制菌检查方法验证方案
微生物控制菌检查方法验证方案一、背景介绍在制药、食品、医疗器械等行业中，微生物控制是非常重要的环节之一。
为了确保产品的安全性和合规性，对微生物的检查方法进行验证就显得尤为重要。
本文旨在提出一种可行的微生物控制菌检查方法验证方案。
二、方法验证目的本方案的目的是验证微生物控制菌检查方法的准确性、重复性、中间值和检测限度等关键指标，以确保该方法在实际应用中的可靠性。
三、验证方案1. 选择验证样品- 针对待验证的微生物控制菌检查方法，选择适当的微生物控制菌株作为验证样品。
验证样品应包含革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌等常见微生物类型。
- 确保验证样品的纯度和活性，并按照国际、行业规定的标准方法进行检测。
2. 实验设计- 确定验证实验的设计方案，包括样品分组、样品数量、重复次数等。
- 考虑到实验条件对验证结果的影响，应合理设置对照组和正试验组。
3. 数据采集与处理- 在验证实验中，记录样品的检测结果、测试方法和环境因素等重要信息。
- 利用统计学方法对验证结果进行分析，计算实验数据的平均值、标准差、变异系数等，并进行显著性分析。
4. 验证指标- 准确性：评估该微生物控制菌检查方法的准确性，即其与已知标准方法结果的一致性。
- 重复性：通过对同一样品在相同条件下进行多次测试来评估方法的重复性，计算重复测定之间的变异程度。
- 中间值：通过对同一样品在不同批次进行测试来评估方法的中间值，计算不同批次之间的变异程度。
- 检测限度：确定该方法能够可靠地检测到微生物的最低浓度水平。
五、验证结果分析根据数据采集和处理的结果，对所验证的微生物控制菌检查方法进行评估，如准确性、重复性等指标是否符合要求。
若验证结果不符合要求，则需对该方法进行优化或调整，重新进行验证。
六、验证报告根据验证结果编写验证报告，并包括实验设计、数据采集与处理、验证结果分析等内容。
报告应具备准确性、完整性和清晰度，以便他人能够理解和复现验证过程。
七、验证结果的应用验证结果应用于实际微生物控制菌检查方法的应用中，作为判定产品合格与否的依据。
控制菌检查法
控制菌检查控制菌检查用得培养基应进行培养基得适应性检查，成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配置得培养基均应检查。
菌种试验用菌种得传代次数不得超过５代(从菌种保藏中心获得得冷冻干燥菌种为第0代),并采用适宜得菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株得生物学特性。
大肠埃希菌(Escherichia cｏli)[CMＣC(B)44102或ＣVCC1５70]金黄色葡萄球菌(Sｔａpｈylｏccocus aureus）［ＣMCC(B）26０03或CVCC1８８2］乙型副伤寒沙门菌（ＳａｌmonellａparatyｐｈiB)[CMCＣ（B）50０94]铜绿假单胞菌（Psｅuｄｏmonasａeｒugｉnosa)［CMCC（B)10104］生孢梭菌（Ｃlostridiuｍsｐorｏgｅnes）[CＭCC（B)６49４1］白色念珠球菌(ｃaｎiｄｉａaｌbiｃans）[CMCC(F）98001]菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌得新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基上,生孢梭菌得新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，培养18～2４小时;接种白色念珠球菌得新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，培养18~２4小时。
用0、9％无菌氯化钠溶液制成每1ｍl含菌数为1０~１00ｃfｕ得菌悬液。
菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2~8℃可在24小时内使用。
适应性检查控制菌检查用培养基得适应性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力得检查.表1控制菌检查用培养基得促生长能力、抑制能力及指示能力检查液体培养基促生长能力检查分别接种不大于10０cfu得试验菌（表1）于被检培养基与对照培养基中，在相应控制菌检查规定得培养温度及最短培养时间下培养。
与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。
固体培养基促生长能力检查取试验菌各０、1mｌ（含菌数5０～１0０cfｕ）分别涂布于被检培养基与对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定得培养温度及最短培养时间下培养。
控制菌检验方法验证
（七）控制菌检验方法验证当建立药品的微生物限度检查时，应进行控制菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的控制菌检查方法测定。
若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检验方法应该进行重新验证。
验证试验也可与供试品的控制菌检查同时进行。
1.验证用菌株大肠埃希菌（Esherichia coli）【CMCC(B)44102】、验证实验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌珠的生物学特性。
2.菌液制备接种大肠埃希菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，35-37℃培养18~24小时;分别取培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5~10-7，制成每1ml含菌数10~100cfu的菌悬液。
2.1阴性菌对照组设立阴性菌对照组是为了验证该控制菌检查方法的专属性。
方法同试验组，验证大肠埃希菌的阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌。
阴性对照菌不得检出。
2.2常规法大肠埃希菌取相当于1g木香顺气丸的供试液至100ml胆盐乳糖培养基中，阳性菌对照加入大肠埃希菌10~100cfu，阴性菌对照加入金黄色葡萄球菌10~100cfu，35~37℃培养18~24小时，取出培养物按《微生物限度检查SOP》大肠埃希菌项下规定检查。
2.3进行3次独立平行试验。
回收率阳性菌培养时间菌液组菌数试验组菌数供试品对照组菌数大肠埃希菌结果判断：以上试验菌回收不低于70%，则可按常规法进行控制菌检查。
结论：本品按中国药典2010版微生物限度检查，经方法适用性验证试验，结果可用平皿法进行细菌计数方法检验，用平皿法进行霉菌和酵母菌计数方法检验，用常规法进行控制菌检查。
检验者：校对者：。
控制菌检验记录(耐胆盐格兰阴性菌)定量
0.1
0.01
0.001
阳性对照
供试品阳性对照
阴性对照
接种量
培养基用量
培养结果
紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基
配制批号：
0.1
0.01
0.001
阳性对照
供试品阳性对照
阴性对照
报告数(cfu/g或cfu/ml)
标 准
耐胆盐革兰阴性菌应小于
结论
□符合规定 □不符合规定
检验人/日期复核人/日期
控制菌检查记录（耐胆盐革兰阴性菌）
检品名称
批 号
检验数量
规 格
包装
备 注
检验依据
《中国药典》2015年版四部通则1106、1107
1、检查法：
（1）供试液制备：取供试品，
（2）稀释液：名称：来源：批号：规格：ml/瓶
（3）冲洗液：名称：来源：批号：冲洗量：瓶
（4）备注：
2、耐胆盐革兰阴性菌定量检查（□常规法□薄膜过滤法□其他）
（1）增菌培养培养温度：30～35℃培养箱编号：ZJ-O1-01-010检验起止时间：
（2）选择和分离培养培养温度:30～35℃培养箱编号:ZJ-O1-01-010检验起止时间：
菌悬液制备
取菌，第代培养物，稀释级别为，加ml,计数结果cfu/皿。
计数培养基名称：配制批号
肠道菌增菌液体培养基
配制批号：
非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法
2020版药典非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按下列规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。
供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。
供试液制备及实验环境要求同“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）”。
如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或中和。
供试品检查时，若使用了中和剂或灭活剂，应确认有效性及对微生物无毒性。
供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。
培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验供试品控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
供试品的控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所釆用的方法适合于该产品的控制菌检查。
若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，控制菌检查方法应重新进行适用性试验。
菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC（B）10 104〕大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B）44 102〕乙型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi B）〔CMCC（B）50 094〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（B）98 001〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕菌液制备将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时；将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养2～3天；将生孢梭菌接种于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30～35℃培养24～48小时或接种于硫乙醇酸盐流体培养基中30～35℃培养18～24小时。
控制菌(大肠埃希菌)检查操作规程
控制菌（大肠埃希菌）检查操作规程1.目的建立一个控制菌大肠埃希菌控制菌大肠埃希菌检查标准工作程序，规范QC控制菌大肠埃希菌检查人员的控制菌大肠埃希菌检查的操作。
2.范围适用于本公司的口服制剂完成内包后外包前的中间体和局部给药制剂产品的内包装材料的控制菌大肠埃希菌的检测。
3.责任者QC控制菌大肠埃希菌检查人员；质量管理部4.内容4.1检测准备4.1.1 QC人员接到控制菌大肠埃希菌检查的《工作进程计划单》后，核对《取样指令》，确定控制菌大肠埃希菌检查所需容器具、试液、培养基等项目和数量，执行微生物检查准备工作操作程序和培养基配制操作规程，进行控制菌大肠埃希菌检查前的准备工作。
4.1.2 为了保证被检品在取样后规定的时间内完成检验，取样前应准备好检验需要的各种器皿（清洗→干燥→包裹）、培养基和稀释剂等（配制→分装→包裹），并灭菌备用。
4.2 供试液的制备4.2.1 供试液供试液是指按照供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法将供试品制成供试验用的均匀液体。
4.2.2 供试液的制备根据供试品的理化特性与生物需特性，采取适宜的方法制备供试液。
如果使用了乳化剂、分散剂、中和剂和灭活剂，其用量应证明是有效的，并对微生物的生长和存活无影响性。
4.2.2.1 可溶性液体供试品取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试液。
可溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。
4.2.2.2 非水溶性液体供试品油剂可先加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀，然后再加0.9%无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100m，混匀，作为供试液。
4.2.2.3 水溶性固体、半固体或黏稠性供试品称取供试品10g，置PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml中，用匀浆仪或其他适宜方法，混匀，作为1：10供试液。
必要时可加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。
4.2.2.4 非水溶性供试品取供试品5g(5m1)，加入含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使其充分乳化，作为1:20供试液。
微生物控制菌检查方法(薄膜过滤法)验证方案
微生物控制菌检查方法(薄膜过滤法)验证方案微生物控制菌检查方法(薄膜过滤法) 验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理1.1验证目的本实验是关于的微生物控制菌检查试验的验证。
验证结果应显示的微生物控制菌试验方法，对检品中可能存在的微生物没有抑制作用，符合验证要求。
1.2原理按照已建立的药品微生物控制菌检查方法，通过已知菌数试液的对照菌的培训对照，验证其操作方法适合该药品的微生物控制菌的检测的正确性。
2.验证方法步骤2.1验证前的准备：将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。
试验菌应选择相应的阴性对照菌。
2.2验证试验的操作计划：用3个不同批号产品按照微生物控制菌检测方法进行平行试验，通过观测是否长菌来判断。
2.3试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物控制菌检查试验对检品中微生物的抑菌性。
试验结果应显示；阴性菌对照组不得检出阴性对照菌，试验组应检出试验菌。
3.试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。
3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。
环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。
操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于5pa。
3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。
3.1.6验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。
3.1.7器具：无菌薄膜过滤器：（孔径0.45um直径50mm）、无菌培养皿（直径90mm）、无菌移液管（5ml）4.验证方法4.1试验菌种的制备和稀释接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至相应的营养肉汤或BL增菌液10ml中,30～35℃培养18～24小时。
非无菌产品微生物限度检查,控制菌检查法
结果判断 若木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂平板上有疑似菌落生长，且三糖铁 琼脂培养基的斜面为红色、底层为黄色，或斜面黄色、底层有黑色，应进一步进 行适宜的鉴定试验, 确证是否为沙门菌。如果平板上没有菌落生长，或虽有菌落 生长但鉴定结果为阴性，或三糖铁琼脂培养基的斜面未见红色、底层未见黄色； 或斜面黄色、底层无黑色，判供试品未检出沙门菌。
则每 1g(或 1mL)供试品中可能的菌数（N）应相应增加 10 倍。
大肠埃希菌(Escherichia coli) 供试液制备和增菌培养 取供试品，照“非无菌产品微生物限度检查：微生
物计数法” （附录×××）制成 1：10 供试液。取相当于 1g 或 1mL 供试品的供 试液，接种至适宜体积（经方法适用性试验确定的）的胰酪大豆胨肉汤中，混匀， 30～35℃培养 18～24 小时。
耐胆盐革兰阴性菌的最大可能数。
表 2 耐胆盐革兰阴性菌的可能菌数
各供试品量的检查结果
0.1g 或 0.1ml ＋
0.01g 或 0.01ml
＋
0.001g 或 0.001ml
＋
每 1g(或 1mL)供试品中可能的菌数（N） N＞103
＋
＋
－
102＜N＜103
＋
－
－
10＜N＜102
－
－
－
N＜10
注：⑴ ＋代表紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上有菌落生长；－代表紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上 无菌落生长。 ⑵ 若供试品量减少 10 倍（如 0.01g 或 0.01ml，0.001g 或 0.001ml，0.0001g 或 0.0001ml），
控制菌检查法名词解释
控制菌检查法名词解释
嘿，咱今儿个就来讲讲这控制菌检查法！啥叫控制菌检查法呢？简
单说呀，就是一种超级重要的检测手段！比如说吧，就像咱出门得知
道天气咋样，带不带伞一样，控制菌检查法就是为了搞清楚那些可能
会捣乱的菌菌们在不在，有多少！
你想想，要是咱吃的东西、用的东西里面有那些坏坏的菌，那不就
麻烦啦！控制菌检查法就像是一个厉害的侦探，专门去揪出这些潜在
的“捣蛋鬼”。
比如说，在药品生产里，要是没做好控制菌检查，哎呀呀，那生产出来的药说不定就不安全啦，这可不是闹着玩的呀！
咱再类比一下，控制菌检查法就像是给一个大集体做体检，得把那
些可能会影响整体健康的家伙给找出来。
它可不是随随便便搞搞的哦，得有严格的步骤和标准呢！检查人员就像一个个细心的卫士，认真地
排查着每一个可能有问题的角落。
而且哦，这个检查法还在不断发展和完善呢！就跟咱人一样，得不
断学习进步呀。
它变得越来越厉害，就能更好地保障我们的生活啦！
我觉得呀，控制菌检查法真的太重要啦！它就是我们健康和安全的
一道有力防线，绝对不能小瞧它！我们得感谢那些研究和运用这个方
法的人，是他们让我们的生活更有保障呀！。
控制菌及螨类检查技术—控制菌检查方法验证
• 3.3.1.2固体、半固体或黏稠液供试品 • 取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪或其 他适宜的方法，混匀，作为供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置 水浴中适当加温使供试品分散均匀。 • 3.4验证方法 • 3.4.1试验组：取规定量供试液及10～100cfu试验菌加入增菌培养基中， 按相应的控制菌检查法进行检查，当采用薄膜过滤法时，试验菌应加在最后 一次冲洗液中，冲洗后，取出滤膜接至增菌培养基中。
• 3.3方法验证用供试液的制备 • 根据被检药品的理化特性与生物学特性，采取适宣的方法制备供试液。所 用乳化剂、分散剂、中和剂或灭活剂及其用量应证明是有效的，并对微生物 无毒性。供试液的制备若需用水溶加温时，温度不应超过45℃，时间不得超 过30min。除另有规定外,常用的供试品制备方法如下。 • 3.3.1一般供试品溶液的制备 • 3.3.1.1.液体供试品 取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 至100ml，混匀，作为供试液。油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品 分散均匀。水溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。
任务3 控制菌检查方法验证 知识点3 控制菌检查方法验证步骤
• 3控制菌检查方法验证 • 当建立药品的控制菌检查方法时，应进行控制菌检查方法的验证，以确认 所采用的方法是用于药品的控制菌检查。若药品的组分或原检查条件发生改 变可能影响检查结果时，检查方法应重新验证。 • 验证时，各品种向下控制菌检查标准中规定的菌种进行选择，验证大肠杆 菌检查法时，采用大肠埃希菌作为验证菌株。 •
• 3.2方法验证用菌液制备 • 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿假单胞的新 鮮培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，生孢梭菌的新鲜培养物 至硫乙醇酸盐流体培养基中，培养18-24h;接种白色念珠菌的新鲜培养物至 改良马丁养基中或改良马丁琼脂培养基上，培养18-24h。用0.9％无菌氯化 钠溶液制成1ml含菌数为10-100cfu的菌悬液。 • 菌悬液在室温下放置应在2h内使用，若保存在2～8℃可在24h内使用。
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控制菌检查
控制菌检查用的培养基应进行培养基的适应性检查，成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配置的培养基均应检查。
菌种试验用菌种的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B)44102或CVCC1570]
金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）[CMCC(B)26003或CVCC1882]
乙型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphiB）[CMCC(B)50094]
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC(B)10104]
生孢梭菌（Clostridium sporogenes）[CMCC(B)64941]
白色念珠球菌（canidia albicans）[CMCC(F)98001]
菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基上，生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，培养18～24小时；接种白色念珠球菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，培养18～24小时。
用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10～100cfu的菌悬液。
菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在24小时内使用。
适应性检查控制菌检查用培养基的适应性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。
液体培养基促生长能力检查分别接种不大于100cfu的试验菌（表1）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。
与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。
固体培养基促生长能力检查取试验菌各0.1ml（含菌数50～100cfu）分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。
被检培养基和对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。
培养基抑制能力检查接种不少于100cfu的试验菌（表1）于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度计最长时间下培养，试验菌应不得生长。
固体培养基指示能力检查取试验菌各0.1ml（含菌数50～100cfu）分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度培养时间下培养。
被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。
液体培养基指示能力检查分别接种不大于100cfu的试验菌（表1）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。
与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应等应与对照培养基一致。
控制菌检查方法的验证
当建立兽药的微生物限度检查法时，应进行控制菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于该兽药的控制菌检查。
若兽药的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检查方法应重新验证。
验证时，依各品种项下微生物限度标准中规定检查的控制菌选择相应验证的菌株，验证大肠菌群检查。