链霉素的分析
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O
百度文库
O
/3 Fe3 + O
NH
NH2
O
CH3
H+ Fe3+
OH
分子重排
OH
O
CH3
麦芽酚
OH
例 硫酸链霉素
Ch.P（2010）
【鉴别】（2）取本品约20mg，加水5ml溶解
后，加氢氧化钠试液0.3ml，置水浴上加热5分钟,
加硫酸铁铵溶液（取硫酸铁铵0.1g，加0.5mol/L
硫酸溶液5ml使溶解） 0.5ml，即显紫红色。
（3）稳定性 链霉素pH5~7.5稳定
链霉素 链霉胍 链霉双糖胺 OH
坂口反应
链霉糖
OH-
H
N-甲基 葡萄糖 胺反应
麦芽酚反应
NH
（4）UV 链霉素 λmax=230nm
H2N
NH NH
NH OH HO
NH2
OH O CHO H3C OH O OH HO O CH3 NH O
3
N H
CH3
乙酰丙酮
OH
OH- (缩合)
（二）麦芽酚反应 链霉糖特征反应
（Maltol反应）
链霉素 链霉糖 △
紫红色 麦芽酚 + H
Fe
3
OH
分子重排
麦芽酚反应
NH NH H2N NH OH HO OH O CHO H3C OH O OH HO O CH3 NH O
（三）坂口反应
（Sakaguchi反应）
链霉胍特征反应
OH
链霉素 链霉胍
水解
次溴酸钠 8-羟基喹啉 （或α- 萘酚）
橙红色
坂口反应
NH NH H2N NH OH HO OH O CHO H3C OH O OH HO O CH3 NH
N O Br
N
- R N C N NH2
OH
单位相当于1mgC21H38N7O12。
液，置日光灯（3000Lx）下照射24小时，作为分离度试验用溶
液。取妥布霉素对照品适量，用分离度试验用溶液溶解并稀释制 成每1ml中约含妥布霉素0.06mg的溶液，量取10µ l注入液相色谱
仪，记录色谱图。链霉素峰保留时间约为10～12分钟，链霉素峰
（相对保留时间为1.0）与相对保留时间为0.9处的杂质峰的分离 度和链霉素峰与妥布霉素峰的分离度分别应不小于1.2和1.5。连 续进样5次，链霉素峰面积的相对标准偏差应不大于2.0%。
链霉糖
H3C
O CHO OH O OH HO O
O
CH3 NH
N-甲基葡萄糖胺
（氨基糖）
OH
2. 性质
（1）溶解性与碱性 溶解性
碱性
-OH
-NH2
水溶性
可与酸成盐
临床上多用硫酸盐
（2）旋光性
各种链霉素盐的分子，均含有许多 手性碳原子，故都具有旋光性。一定范 围内链霉素的比旋度与链霉素浓度的关 系可绘制曲线，利用这种关系就能直接 迅速测得链霉素的浓度。
单一杂质限量=C单一杂质浓度/C主成分浓度 ×100%≦2.0%
杂质总量= C杂质总浓度/C主成分浓度 ×100%≦5.0%
第四节 含量测定 微生物检定法 微生物检定法 （管碟法和浊度法）
例 硫酸链霉素 Ch.P（2010）
【含量测定】精密称取本品适量，加灭菌水
定量制成每1ml中约含1000单位的溶液，照抗生 素微生物检定法（附录Ⅺ A ）测定， 1000链霉素
OH
第二节
鉴别试验
NH
坂口反应
H2N
NH NH
NH OH HO
NH2
OH O CHO H3C OH O OH HO O CH3 NH O
麦芽酚反应
N-甲基葡萄 糖胺反应
OH
（一）N-甲基葡萄糖胺反应
（Elson-Morgan反应）
链霉素 N 甲基葡萄糖胺
水解
H
乙酰丙酮 OH-
吡咯衍生物
BrO
NH
NH2
+
O
OH
O
BrO
N
Br
O
OH
R NHCONH N
例 硫酸链霉素
Ch.P（2010）
【鉴别】（1）取本品约0.5mg，加水4ml溶解
后，加氢氧化钠试液2.5ml与0.1%8-羟基喹啉的乙
醇溶液1ml，放冷至约15℃，加次溴酸钠试液3滴,
即显橙红色。
（四）光谱法
IR 法
链霉素的分析
主 要 内 容
第一节 第二节 第三节 第四节 结构与性质 鉴别试验 特殊杂质检查 含量测定
第一节 结构与性质
1.氨基糖苷类抗生素结构：
氨基糖 苷元 氨基糖苷
碱性环己多元醇
缩合
链霉素
（streptomycin）
NH H2N NH OH HO
NH
链霉胍
NH
NH2
OH
链 霉 双 糖 胺
对二甲氨基苯甲醛 H+
樱桃红色
水解产物N-甲基葡萄糖胺特有反应：
NH NH H2N NH OH HO OH O CHO H3C OH O OH HO O CH3 NH O NH NH2
COCH 3 N H N CH H N CH 3 COCH3 CH 3
H3C H3C
对二甲氨基苯甲醛 H+
COCH3 HOCH2 CHOH
Ch.P（2010）
例 【鉴别】红外光吸收图谱
硫酸链霉素（光谱集491图）
第三节
特殊杂质检查
有关物质（甘露糖链霉素等）的检查
1. 来源
2. 方法
发酵时菌种产生
HPLC
例
硫酸链霉素
Ch.P（2010）
【检查】有关物质
色谱条件与系统适用性试验 ：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.15mol/L的三氟醋 酸溶液为流动相，流速为每分钟0.5ml，用蒸发光散射检测器检 测（漂移管温度：110℃，载气流速：2.8L/min），取链霉素对 照品适量，用水溶解并稀释制成每1ml中约含链霉素3.5mg的溶
取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含链 霉素3.5mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液适量， 加水稀释制成每1ml中约含链霉素35µ g、70μg和140μg的溶液，作 为对照溶液（1）、（2）、（3）。照含量测定项下的色谱条件， 量取对照溶液（2）10µ l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主 成分色谱峰的峰高为满量程的10%～20%，精密量取对照溶液 （1）、（2）、（3）各10µ l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。 以对照溶液浓度的对数值与相应峰面积的对数值计算回归方程， 相关系数（r）应不小于0.99。另取供试品溶液，同法测定，记录 色谱图至主成分峰保留时间的2倍，用回归方程计算，最大单一杂 质不得过2.0%，杂质总量不得过5.0%。
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O
/3 Fe3 + O
NH
NH2
O
CH3
H+ Fe3+
OH
分子重排
OH
O
CH3
麦芽酚
OH
例 硫酸链霉素
Ch.P（2010）
【鉴别】（2）取本品约20mg，加水5ml溶解
后，加氢氧化钠试液0.3ml，置水浴上加热5分钟,
加硫酸铁铵溶液（取硫酸铁铵0.1g，加0.5mol/L
硫酸溶液5ml使溶解） 0.5ml，即显紫红色。
（3）稳定性 链霉素pH5~7.5稳定
链霉素 链霉胍 链霉双糖胺 OH
坂口反应
链霉糖
OH-
H
N-甲基 葡萄糖 胺反应
麦芽酚反应
NH
（4）UV 链霉素 λmax=230nm
H2N
NH NH
NH OH HO
NH2
OH O CHO H3C OH O OH HO O CH3 NH O
3
N H
CH3
乙酰丙酮
OH
OH- (缩合)
（二）麦芽酚反应 链霉糖特征反应
（Maltol反应）
链霉素 链霉糖 △
紫红色 麦芽酚 + H
Fe
3
OH
分子重排
麦芽酚反应
NH NH H2N NH OH HO OH O CHO H3C OH O OH HO O CH3 NH O
（三）坂口反应
（Sakaguchi反应）
链霉胍特征反应
OH
链霉素 链霉胍
水解
次溴酸钠 8-羟基喹啉 （或α- 萘酚）
橙红色
坂口反应
NH NH H2N NH OH HO OH O CHO H3C OH O OH HO O CH3 NH
N O Br
N
- R N C N NH2
OH
单位相当于1mgC21H38N7O12。
液，置日光灯（3000Lx）下照射24小时，作为分离度试验用溶
液。取妥布霉素对照品适量，用分离度试验用溶液溶解并稀释制 成每1ml中约含妥布霉素0.06mg的溶液，量取10µ l注入液相色谱
仪，记录色谱图。链霉素峰保留时间约为10～12分钟，链霉素峰
（相对保留时间为1.0）与相对保留时间为0.9处的杂质峰的分离 度和链霉素峰与妥布霉素峰的分离度分别应不小于1.2和1.5。连 续进样5次，链霉素峰面积的相对标准偏差应不大于2.0%。
链霉糖
H3C
O CHO OH O OH HO O
O
CH3 NH
N-甲基葡萄糖胺
（氨基糖）
OH
2. 性质
（1）溶解性与碱性 溶解性
碱性
-OH
-NH2
水溶性
可与酸成盐
临床上多用硫酸盐
（2）旋光性
各种链霉素盐的分子，均含有许多 手性碳原子，故都具有旋光性。一定范 围内链霉素的比旋度与链霉素浓度的关 系可绘制曲线，利用这种关系就能直接 迅速测得链霉素的浓度。
单一杂质限量=C单一杂质浓度/C主成分浓度 ×100%≦2.0%
杂质总量= C杂质总浓度/C主成分浓度 ×100%≦5.0%
第四节 含量测定 微生物检定法 微生物检定法 （管碟法和浊度法）
例 硫酸链霉素 Ch.P（2010）
【含量测定】精密称取本品适量，加灭菌水
定量制成每1ml中约含1000单位的溶液，照抗生 素微生物检定法（附录Ⅺ A ）测定， 1000链霉素
OH
第二节
鉴别试验
NH
坂口反应
H2N
NH NH
NH OH HO
NH2
OH O CHO H3C OH O OH HO O CH3 NH O
麦芽酚反应
N-甲基葡萄 糖胺反应
OH
（一）N-甲基葡萄糖胺反应
（Elson-Morgan反应）
链霉素 N 甲基葡萄糖胺
水解
H
乙酰丙酮 OH-
吡咯衍生物
BrO
NH
NH2
+
O
OH
O
BrO
N
Br
O
OH
R NHCONH N
例 硫酸链霉素
Ch.P（2010）
【鉴别】（1）取本品约0.5mg，加水4ml溶解
后，加氢氧化钠试液2.5ml与0.1%8-羟基喹啉的乙
醇溶液1ml，放冷至约15℃，加次溴酸钠试液3滴,
即显橙红色。
（四）光谱法
IR 法
链霉素的分析
主 要 内 容
第一节 第二节 第三节 第四节 结构与性质 鉴别试验 特殊杂质检查 含量测定
第一节 结构与性质
1.氨基糖苷类抗生素结构：
氨基糖 苷元 氨基糖苷
碱性环己多元醇
缩合
链霉素
（streptomycin）
NH H2N NH OH HO
NH
链霉胍
NH
NH2
OH
链 霉 双 糖 胺
对二甲氨基苯甲醛 H+
樱桃红色
水解产物N-甲基葡萄糖胺特有反应：
NH NH H2N NH OH HO OH O CHO H3C OH O OH HO O CH3 NH O NH NH2
COCH 3 N H N CH H N CH 3 COCH3 CH 3
H3C H3C
对二甲氨基苯甲醛 H+
COCH3 HOCH2 CHOH
Ch.P（2010）
例 【鉴别】红外光吸收图谱
硫酸链霉素（光谱集491图）
第三节
特殊杂质检查
有关物质（甘露糖链霉素等）的检查
1. 来源
2. 方法
发酵时菌种产生
HPLC
例
硫酸链霉素
Ch.P（2010）
【检查】有关物质
色谱条件与系统适用性试验 ：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.15mol/L的三氟醋 酸溶液为流动相，流速为每分钟0.5ml，用蒸发光散射检测器检 测（漂移管温度：110℃，载气流速：2.8L/min），取链霉素对 照品适量，用水溶解并稀释制成每1ml中约含链霉素3.5mg的溶
取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含链 霉素3.5mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液适量， 加水稀释制成每1ml中约含链霉素35µ g、70μg和140μg的溶液，作 为对照溶液（1）、（2）、（3）。照含量测定项下的色谱条件， 量取对照溶液（2）10µ l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主 成分色谱峰的峰高为满量程的10%～20%，精密量取对照溶液 （1）、（2）、（3）各10µ l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。 以对照溶液浓度的对数值与相应峰面积的对数值计算回归方程， 相关系数（r）应不小于0.99。另取供试品溶液，同法测定，记录 色谱图至主成分峰保留时间的2倍，用回归方程计算，最大单一杂 质不得过2.0%，杂质总量不得过5.0%。