图1高效液相色谱仪的系统流程图原理
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分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可 达0.1pg。 色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。 样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收 集单一组分或做制备。
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
脱气器
脱气的目的是为了防止流动相从高压柱 内流出时释放出气泡进入检测器而使噪 声剧增，至使不能正常检测，一般情况 下通常采用氦气鼓泡来驱除流动相中溶 解的气体，因为氦气在各种液体中的溶 解度极低，所以必须先用氯气快速清扫 溶剂数分钟，然后再使氦气以极小流量 不断流过此溶剂。
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
色谱柱
色谱柱是整个色谱系统的心脏，它的质量优劣直接影响 到分离的效果，一般情况下色谱柱通常采用优质不锈钢 管制成，并且柱内壁必须光洁平滑，否则内壁的纵向沟 痕和表面多孔性也会引起谱带的展宽，柱接头的体积应 尽可能小，柱长一般为 10 cm ~25cm，内径 4 mm ~5mm。若使用直径为5μm~10μm 固定相颗粒，理论塔板 可达到 5×104/m。尺寸排阻色谱柱的内径通常大于 5mm，制备色谱柱则会更大 ；为了减少溶剂用量，可采 用微径柱，内径为 1mm，长度为 30mm ~75mm，若采用 3μm 颗粒，理论塔板数高达 1×105/m。为了保护分析柱 不被污染，有时需在分析柱前加一短柱，约数厘米长， 此柱称为卫柱，为了防止卫柱过分增加柱阻力，在卫柱 中使用的颗粒大小约为 10μm ~30μm
HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。因而被广 泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分 析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要 的发展方向。
液相色谱- 质谱连用技术受到普遍重视, 如分析氨基甲酸酯 农药和多核芳烃等; 液相色谱- 红外光谱连用也发展很快,如在环 境污染分析测定水中的烃类, 海水中的不挥发烃类, 使环境污染 分析得到新的发展。
高效液相色谱仪的应用
高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的 限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离 热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范 围的物质。
与试样预处理技术相配合,HPLC 所达到的高分辨率和高灵 敏度, 使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够 分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展, 有可能在充分 保持生化物质活性的条件下完成其分离。
组成。储液器中的流动相被高压泵打入系 统, 样品溶液经进样器进入流动相, 被流动 相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液 中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的 吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度 上产生较大的差别, 被分离成单个组分依 次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被 转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形 式打印出来。
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
贮液器
贮液器是用于存放溶剂的装置。贮液器 中的溶剂必须很纯，贮液器材料要耐腐 蚀，对溶剂呈惰性，一般情况下通常采 用1升~2升的大容量玻璃瓶，也可采用 不锈钢制成的容器，贮液器应配有溶剂 过滤器，以防止流动相中的颗粒进入泵 内，溶剂过滤器一般用耐腐蚀的镍合金
制成，孔隙大小一般为2μm。
高速——流速为0.1～10.0 mL/min。 高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达 100种。 高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品 少。 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：
速度快——通常分析一个样品在15～30 min，有些样品甚至在 5 min内即可完成。
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
检测器
高效液相色谱仪常用的检测器有紫外 吸收、示差折光率、荧光和安培检测 器等，对它们的要求和性能指标与气 相色谱检测仪基本相同。检测器主要 分为紫外吸收检测器、荧光检测器和 示差检测器。
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
高效液相色谱仪的优点
高压——压力可达150～300 kg/cm2。色谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
进样器
高效液相色谱仪进样器普遍使用高压进样 阀，用微量注射器将样品注入样品环管，使 用的样品环管分别有不同的尺寸，可根据分 析要求选用。当进样阀手柄放在吸液位置 时，流动相直接通过孔的通路流向色谱柱， 样品通过注射器从另外的位置进入样品环 管，如果有过量的样品则会从出口孔排出， 然后将手柄转到进样位置，此时流动相便将 样品带进了柱子。
高效液相色谱仪
制作人：何朦朦 组 员：沈夏洁
周天逸 吴方威
高效液相色谱仪的原理
来自百度文库原理 基本结构
特点 应用 使用注意事项
高效液相色谱仪的系统流程图如图 1所示。 图 1 高效液相色谱仪的系统流程图
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
由流程图可以看出系统由储液器、泵、进
样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
混合物中各组分在 固定相和流动相之 间会发生吸附、溶 色素 解或其他亲和作用， 这种作用存在差异，
玻璃柱
从而使各组分在色 谱柱中的迁移速度 不同得到分离
石油醚 碳酸钙颗粒
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
高效液相色谱仪的基本结构
贮液器 脱气器 高压泵 进样器 色谱柱 检测器
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
高压泵
泵应耐压、耐腐蚀、密封性好。高压泵主要用 于输送流动相，其压力一般为几兆帕至数十兆 帕。这是液体的黏度比气体大 100 倍，同时由 于固定相的颗粒极细，柱内压降大，为保证一 定的流速，必须借助高压迫使流动相通过柱 子。高压泵应无脉动或脉动极小，以保证输出 的流动相具有恒定的流速，同时采用脉动阻尼 装置可将产生的脉动除去，使流动相的流量变 动范围不宜超过 2%~3%。高压泵主要分为恒 压泵、恒流泵和螺旋传动注射泵三类。
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
脱气器
脱气的目的是为了防止流动相从高压柱 内流出时释放出气泡进入检测器而使噪 声剧增，至使不能正常检测，一般情况 下通常采用氦气鼓泡来驱除流动相中溶 解的气体，因为氦气在各种液体中的溶 解度极低，所以必须先用氯气快速清扫 溶剂数分钟，然后再使氦气以极小流量 不断流过此溶剂。
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
色谱柱
色谱柱是整个色谱系统的心脏，它的质量优劣直接影响 到分离的效果，一般情况下色谱柱通常采用优质不锈钢 管制成，并且柱内壁必须光洁平滑，否则内壁的纵向沟 痕和表面多孔性也会引起谱带的展宽，柱接头的体积应 尽可能小，柱长一般为 10 cm ~25cm，内径 4 mm ~5mm。若使用直径为5μm~10μm 固定相颗粒，理论塔板 可达到 5×104/m。尺寸排阻色谱柱的内径通常大于 5mm，制备色谱柱则会更大 ；为了减少溶剂用量，可采 用微径柱，内径为 1mm，长度为 30mm ~75mm，若采用 3μm 颗粒，理论塔板数高达 1×105/m。为了保护分析柱 不被污染，有时需在分析柱前加一短柱，约数厘米长， 此柱称为卫柱，为了防止卫柱过分增加柱阻力，在卫柱 中使用的颗粒大小约为 10μm ~30μm
HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。因而被广 泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分 析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要 的发展方向。
液相色谱- 质谱连用技术受到普遍重视, 如分析氨基甲酸酯 农药和多核芳烃等; 液相色谱- 红外光谱连用也发展很快,如在环 境污染分析测定水中的烃类, 海水中的不挥发烃类, 使环境污染 分析得到新的发展。
高效液相色谱仪的应用
高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的 限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离 热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范 围的物质。
与试样预处理技术相配合,HPLC 所达到的高分辨率和高灵 敏度, 使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够 分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展, 有可能在充分 保持生化物质活性的条件下完成其分离。
组成。储液器中的流动相被高压泵打入系 统, 样品溶液经进样器进入流动相, 被流动 相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液 中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的 吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度 上产生较大的差别, 被分离成单个组分依 次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被 转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形 式打印出来。
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
贮液器
贮液器是用于存放溶剂的装置。贮液器 中的溶剂必须很纯，贮液器材料要耐腐 蚀，对溶剂呈惰性，一般情况下通常采 用1升~2升的大容量玻璃瓶，也可采用 不锈钢制成的容器，贮液器应配有溶剂 过滤器，以防止流动相中的颗粒进入泵 内，溶剂过滤器一般用耐腐蚀的镍合金
制成，孔隙大小一般为2μm。
高速——流速为0.1～10.0 mL/min。 高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达 100种。 高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品 少。 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：
速度快——通常分析一个样品在15～30 min，有些样品甚至在 5 min内即可完成。
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
检测器
高效液相色谱仪常用的检测器有紫外 吸收、示差折光率、荧光和安培检测 器等，对它们的要求和性能指标与气 相色谱检测仪基本相同。检测器主要 分为紫外吸收检测器、荧光检测器和 示差检测器。
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
高效液相色谱仪的优点
高压——压力可达150～300 kg/cm2。色谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
进样器
高效液相色谱仪进样器普遍使用高压进样 阀，用微量注射器将样品注入样品环管，使 用的样品环管分别有不同的尺寸，可根据分 析要求选用。当进样阀手柄放在吸液位置 时，流动相直接通过孔的通路流向色谱柱， 样品通过注射器从另外的位置进入样品环 管，如果有过量的样品则会从出口孔排出， 然后将手柄转到进样位置，此时流动相便将 样品带进了柱子。
高效液相色谱仪
制作人：何朦朦 组 员：沈夏洁
周天逸 吴方威
高效液相色谱仪的原理
来自百度文库原理 基本结构
特点 应用 使用注意事项
高效液相色谱仪的系统流程图如图 1所示。 图 1 高效液相色谱仪的系统流程图
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
由流程图可以看出系统由储液器、泵、进
样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
混合物中各组分在 固定相和流动相之 间会发生吸附、溶 色素 解或其他亲和作用， 这种作用存在差异，
玻璃柱
从而使各组分在色 谱柱中的迁移速度 不同得到分离
石油醚 碳酸钙颗粒
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
高效液相色谱仪的基本结构
贮液器 脱气器 高压泵 进样器 色谱柱 检测器
原理 基本结构
优点 应用 使用注意事项
高压泵
泵应耐压、耐腐蚀、密封性好。高压泵主要用 于输送流动相，其压力一般为几兆帕至数十兆 帕。这是液体的黏度比气体大 100 倍，同时由 于固定相的颗粒极细，柱内压降大，为保证一 定的流速，必须借助高压迫使流动相通过柱 子。高压泵应无脉动或脉动极小，以保证输出 的流动相具有恒定的流速，同时采用脉动阻尼 装置可将产生的脉动除去，使流动相的流量变 动范围不宜超过 2%~3%。高压泵主要分为恒 压泵、恒流泵和螺旋传动注射泵三类。