肾功能不全试验的实验报告课件

肾功能不全试验的实验报告
• ARF发病机制的中心环节是GFR的降低。肾血流量 减少，肾小管阻塞、肾小管原尿回漏或肾细胞损伤 等均可导致GFR的降低。
•
本实验通过皮下注射1％HgCl2造成家兔急性肾
小管性坏死。
• 通过本实验学习复制急性中毒性肾衰动物模型； 观察肾衰家兔的一般状态、酚红排泄率、肌酐清除 率等变化；观察急性肾衰时肾脏大体形态；根据实 验指标，判断、分析急性肾衰的发病机制及病理生 理变化；对急性肾衰的病因、发病机制和功能代谢 变化加深理解。
• 将收集的尿液倒入500ml量筒内，加10％NaOH lOml，用自来水 补充至500ml处，混匀后，取出适当量放入与比色管口径相同的 试管中与标准比色管比较，得出15min或30min内肾脏酚红排泄 率。
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实验步骤
• 肾脏酚红排泄率：是反映肾血流量与肾小管排泌功能的指标。正 常情况下从静脉注入酚红后15min或30min，肾脏酚红排泄率分 别＞30%与＞45%。
• [Cr]p(mg%)=OD测－OD’测/ OD标－OD’标 ×0.01/0.2×100
• 正常值:0.7～0.8mg%(1mg%=88.4mol/L)。
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表2 尿肌酐测定
单位（ml）
尿液（原尿或1： 50稀释）
尿肌酐标准应 用液
（0.5mg/ml） 蒸馏水
碱性苦味酸
12．5%NaoH
尿量”的尿液样品做尿肌酐[Cr]尿测定，才能与血肌酐 [Cr]血比，计算出GFR。肌酐能自由从肾小球滤过，在 肾小管中很少被重吸收，但有少量是由近曲小管分泌。 内生肌酐在血浆中的浓度相当低，近曲小管分泌的肌 酐量可忽略不计，因此Ccr与菊粉清除率相近，可以代 表肾小球滤过率。
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实验步骤
• 尿肌酐/血肌酐的意义：器质性肾衰时比值＜20；功能性肾衰时 比值＞40。
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内生肌酐清除率(Ccr)：
能较准确的反映肾小球滤过率(GFR) • Ccr=[Cr]尿×尿量（ml/min）/[Cr]血 • 为此，实验步骤收集尿液必须采集有“记录单位时间的
• 分离右侧颈外静脉，插管用于输液。输液速度一定要慢 • 下腹部正中剪毛，在耻骨联合上约1．5cm处做切口，长约4cm，
暴露膀胱，用注射器收集2ml尿液于试管中，做尿肌酐检查。
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实验步骤
• 在膀胱底部，找出两侧输尿管，并分离之。在近膀胱端结扎输尿 管，稍等片 刻，待其略充盈后，用眼科剪剪一小口，向肾脏方向 插入一细塑料管(塑料管事先用肝素冲洗或充满肝素)，结扎并固 定，用于收集尿液。
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实验步骤
• 血清和尿液肌酐含量测定——苦味酸沉定蛋白法 • 原理：在碱性条件下，苦味酸与（血、尿中）肌
酐作用，生成黄红色苦味酸肌酐，使溶液呈色后 进行比色测定；然后加醋酸，在酸性环境中，黄 红色的苦味酸肌酐被清除，非肌酐物质（假肌酐） 呈色，两者比色之差为血及尿中肌酐。按表1、表 2的操作步骤测定血清及尿液肌酐。
肾功能不全
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实验目的
• 复制急性中毒性肾衰动物模型，通过对肾功能指标的检测及肾脏 形态学改变的观察，了解中毒家兔肾功能的改变。判断、分析致 病因素及导致急性肾衰的可能发病机制。
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实验原理
• 肾脏是一个多功能器官，其主要功能之一是泌尿 功能。肾脏通过调节肾血流、肾小球滤过率、肾 小管排泌与重吸收以及排泄体内代谢物质以维持 机体内环境的稳定。当肾血流量减少，肾小球滤 过率下降或肾小管排泌重吸收功能障碍时，肾的 泌尿功能受到影响，从而导致肾功能不全。
测定管 0.1 _
标准管 _ 0.1
_
_
2
2
0.5
0.5
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空白管 _ _
0.1 2 0.5
实验步骤
• 混匀，放10min后加蒸馏水6。0ml，摇匀，以530nm波长比色， 空白管调零，读OD值。计算：
• [Cr]u(mg%)=OD测/OD标×0.05mg×100ml/0.1ml
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实验步骤
酚红排泄率测定： • 1)两组家兔分别耳缘静脉注射o．6％酚红溶液(1ml／kg)，接着
从颈外静脉插管处注射20％葡萄糖溶液(30ml／kg)。收集从开始 注射酚红起15min或30min的尿液。换算成单位时间的尿量(ml／ min)。
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实验步骤
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实验对象
• 家兔2—3kg。
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实验药品与器材
• 1％HgCl2、生理盐水、25％氨基甲酸乙酯、0．6％酚红、20％葡 萄糖、10％NaOH、手术器械一套，注射器、试管、加样器、721 分光光度计、水浴锅、离心机。
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实验Байду номын сангаас骤
• 复制肾功能衰竭模型：于实验前一天，取两只家兔，称重，一只 皮下或肌肉注射1％HgCl2(o．8～1．0ml／kg)造成急性肾功能衰 竭，为实验组兔；另一只皮下或肌肉注射等量的生理盐水 (1．0ml／kg)作为对照组兔。
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实验步骤
• 如果心脏采血失败，则颈总动脉采血 • 颈部正中剪毛，切开皮肤，分离左侧颈总动脉，在动脉下穿两根
丝线，用一根丝线结扎动脉的远心端，近心端用动脉夹夹闭，在 结扎线下方的动脉壁上剪一小斜口，然后向心脏方向插入动脉导 管放血3ml备测血肌酐
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实验步骤
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表1 血清肌酐测定
单位（ml）
肌酐标准应 用液
（0.05mg/m l） 血清
蒸馏水
碱性苦味酸
标准管 0.20
测定管 _
_
0.20
_
_
2.0
2.0
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空白管 _
_ 0.20 2.0
实验步骤
• 混匀，37OC水浴30 min，以510nm波长比色， 空白管调零，读OD值，然后，各管加50%醋酸液 两滴，放置6min后，在测OD’值。计算：
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实验步骤
• 观察：24h后，比较两组动物的一般状态、活动情况与尿量。 • 家兔称重，耳缘静脉注射25％氨基甲酸乙酯4．0ml／kg，待动
物麻醉后，固定于兔台。
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角 膜 反 射
夹 肢 反 射
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实验步骤
家兔心脏采血3~5ml置于一干燥管中（不抗凝），放置10min后， 3000r/min离心15min，小心吸取血清置于另一干燥管中，备测 血肌酐