48.姜半夏产地加工炮制一体化方法及工艺研究----梁君

姜半夏产地加工炮制一体化方法及工艺研究
梁 君，刘小鸣，张振凌*，沈莎莎，吴瑞环，都盼盼 （河南中医学院/呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心，河南 郑州 450008） 摘要 目的：对姜半夏产地加工炮制一体化方法和工艺进行客观评价和优化。方法：以草酸钙针 晶含量为指标筛选加姜方式和加热方法，以草酸钙针晶含量、水溶性浸出物含量及白矾残留量为 指标，采用正交设计法和综合评分法优选鲜半夏的炮制工艺。结果：优选出的炮制方法和工艺为： 每 100 kg 鲜半夏，加白矾 10 kg、生姜（捣烂）20 kg，共同加热至沸腾 30 min 后原液浸泡 1 天， 再以 120 ℃加压蒸煮 40 min，清水洗净，晾半干，切片后干燥。结论：优选的姜半夏产地加工炮 制一体化方法和工艺不仅降低了刺激性毒性成分草酸钙针晶含量，还避免了有效成分损失，提高 饮片质量。 关键词 半夏；一体化；炮制工艺
120 ℃ pressure cooking 40min, rinse, dry to semi dry,slicing and drying. Conclusion: The selected origin integration method and technology not only reduce the irritant toxic components of calcium oxalate crystal content,also avoid losses of active ingredients, improve the quality of decoction pieces. Keywords: Pinellia ternata; the integration ; processing technology
基金项目：国家中医药管理局中医药行业科研专项--全国中药炮制技术规范研究（201207004-8） 作者：梁君(1988-)，女，硕士研究生，研究方向为中药饮片及新药研发，Tel：13623863036，E-mail： liangj3036@163.com 通讯作者：张振凌（1957-），女，教授，从事中药饮片及新药研究，Tel：（0371）65680970，E-mail： zhangzl6758@163.com
Development of Henan Province, Henan university of Traditional Chinese medicine) Abstract: Objective: Objective evaluation and optimization of processing Rhizome Pinelliae Preparata origin integration method and process. Methods: Taking calcium oxalate crystal content as an index screening the way of adding ginger and heating method ,taking calcium oxalate crystal content, the content of water-soluble extracts and Alum residue as the index, with the method of orthogonal design and the comprehensive scoring method to optimize the processing technology of fresh Pinellia ternata. Result: The processing method and technology optimization for per 100kg fresh pinellia tuber, plus alum 12kg, mashed ginger 24kg, the common heat to boil after 30 min solution for 1 days, and then to
Study on the processing of origin integration method and technology of Rhizome Pinelliae Preparata
LIANG Jun, LIU Xiaoming ZHANG Zhenling*,SHEN Shasha，WU Ruihuan,DU Panpan .(Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine
表 4 姜半夏炮制工艺因素水平表
因素
水平
白矾用量 （g/100g）
A
浸泡时间（d） B
加压温度（℃） C
加压时间（min） D
1
8
1
110
20
2
10
2
120
30
3
12
3
130
40
2.3 草酸钙针晶含量测定
2.3.1 色谱条件的选择 色谱条件为:SymmetryShield RP18(4.6×250 mm，5μm)色谱柱，流动相 为磷酸二氢钾-TBA（ph2.0）：甲醇=92：8，流速 0.6 ml·min-1，检测波长 210 nm，柱温 30℃，
样品重量 /g
生姜用量 /g
白矾用量 加热时间
/g
/h
口尝结果
草酸钙针晶 含量/%
生姜煎汤
20
4
1.6
4
麻舌感
1.2612
生姜榨汁
20
生姜捣烂
20
4
1.6
4
麻舌感
1.3409
4
1.6
4
稍麻舌感
1.1575
以上实验结果表明，生姜加入方式可影响草酸钙针晶含量，以生姜捣烂的方式加入比较好。
2.1.2 不同加热方法的比较 采用常压煮、中低火微波煮、120℃加压蒸煮等不同的加热方法对鲜
2.1 半夏产地加工炮制一体化方法的考察 为使炮制后姜半夏的刺激性毒性最大程度地降低，以 口尝麻辣感及草酸钙针晶含量为指标筛选炮制方法。
2.1.1 加姜方式的考察 采用姜片煎汤、生姜榨汁、生姜捣烂等不同的加姜方式对鲜半夏进行炮
制，筛选最佳的加姜方式，结果见表 1。
表 1 不同加姜方式的比较
加姜方式
0.5 h 即可。
2.2 半夏产地加工炮制一体化工艺的优选 取 100 g 鲜半夏，洗净，去皮，生姜 20g，按上述筛
选的炮制方法对鲜半夏进行炮制，以草酸钙针晶含量、水溶性浸出物含量、白矾残留量为指标，
选取白矾用量、浸泡时间、加热时间、加热温度 4 个因素的 3 个水平，采用 L9（34）进行正交设 计，优选鲜制姜半夏的炮制工艺。正交设计见表 4。
4
1.6
未处理
120
/
微麻辣感
0.1030
20
4
1.6
煮至沸
120
0.5 微Leabharlann Baidu舌感
0.7562
20
4
1.6 煮沸 0.5h
120
0.5 微麻舌感
0.6740
20
4
1.6
煮沸 1h
120
0.5 微麻舌感
0.6963
以上实验结果表明，加压前煮沸 0.5 h 与煮沸 1 h 的结果差异不明显，为经济考虑常压煮沸
100
0.5
麻舌感
1.3567
加压蒸煮 20
4
1.6
120
0.5 稍麻舌感
1.1050
微波煮
20
4
1.6
中低火 0.5
麻舌感
1.4232
以上实验结果表明，常压煮 4 h 与加压蒸 0.5 h 效果相当，但鲜半夏煮 4h 容易煮烂，考虑采 用加压方法，节省时间；直接对鲜半夏其进行加压，表面有白矾析出，不易渗入药材内部，考虑 加压前浸泡。 2.1.3 浸泡前处理方法的比较
进样量 5μl。
2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取 H2C2O4·2H2O 13.95 mg，置于 50ml 容量瓶中，纯水定容至刻 度，摇匀。吸取 2 ml，定容至 10 ml 容量瓶中，用 0.45 μm 微孔滤膜过滤，备用。
2.3.3 供试品溶液的制备[3] 精密称取各姜半夏样品粉末 0.1 g（50 目)，置 10ml 离心管中，加入
半夏进行炮制，优选姜半夏趁鲜加工方法，结果见表 2。
表 2 不同加热方法的比较
样品重 生姜用 加热方法
量/g 量/g
白矾用 量/g
加热温 加热时 度/℃ 间/h
口尝结果
草酸钙针晶 含量/%
常压煮
20
4
0
100
4 强烈麻舌感
1.6338
常压煮
20
4
1.6
100
4
稍麻舌感
1.1575
常压蒸煮 20
4
1.6
半夏为天南星科植物半夏 Pinellia ternata(Thunb.) Breit.的干燥块茎，是临床常用的中药，有毒。 半夏生品的毒性主要表现为刺激性毒性，产生原因是生品中含有大量的草酸钙针晶[1]，这些大量 极细长并质地坚韧的草酸钙针晶直接刺激黏膜细胞导致细胞破损，产生大量炎症介质，从而引起 刺激疼痛感[2]。经炮制后，刺激性毒性明显降低。2010 版中国药典记载其产地加工方法是除去外 皮和须根，晒干。日晒至干燥时间较长，而且容易腐烂、变质。但在姜半夏炮制过程中又需先将 半夏用水浸泡至内无干心，每日换水，加生姜煎汤和白矾共煮透，切片，干燥，产地加工与饮片 炮制存在经水处理又重复干燥的过程，势必会损失其中的有效成分含量。本研究直接对鲜半夏进 行产地加工炮制，以草酸钙针晶含量为其中一个指标设计和优选姜半夏的产地加工炮制一体化方 法和工艺。不仅避免因为复杂的加工炮制和贮藏造成的中药材损耗和质量下降,同时还能减少人力 资源和能源的消耗，加快饮片上市时间，达到降低中药材加工成本和提高中药饮片质量的目的。 1.材料 1.1 仪器 岛 津 LC-20AT 高 效液 相色 谱 分析 仪（ 岛 津企 业管 理 有限 公司 ）； LZDX-75KB 立 式 压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；BS224S 型电子天平（北京塞多利斯仪器系统有限公 司）；TGL-16gR 台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；PHs-3c 型精密 pH 计（上海雷磁分析仪器有 限公司）；高速万能粉碎机（北京中兴伟业仪器有限公司）；恒温培养振荡器（天津欧诺仪器仪表 公司）。 1.2 试剂 草酸对照品（北京化工厂，批号：120915）；磷酸二氢钾（广州化学试剂厂，批 号 :910310-3 ）； 10% 四 丁 基 氢 氧 化 铵 （ 天 津 市 光 复 精 细 化 工 研 究 所 ）； 甲 醇 （ 天 津 四 友 精 细 化 学 品 有 限 公 司 出 品 ，批 号 ：432726 -09136 ）；磷酸（天津市登科化学试剂有限公司）；盐酸（烟 台市双双化工有限公司，批号：20081229）； 硫 酸 锌 （ 天 津 市 登 科 化 学 试 剂 有 限 公 司 ， 批 号 ： 1292-2008 ）， 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 （ 天 津 市 凯 通 化 学 试 剂 有 限 公 司 ， 批 号 ： 1401-1998 ）； 水 为纯水。 1.3 药材 半夏鲜品由郑州瑞龙制药股份有限公司提供，经河南中医学院陈随清教授鉴定为天南 星科半夏 Pinellia ternata(Thunb.) Breit.的块茎。 2.方法与结果
鲜半夏质地坚硬，单纯的浸泡效果可能不太明显，为使辅料能更多的渗入药材内部，浸泡前 对鲜半夏进行不同方法处理，浸泡 1 天，再进行加压炮制，结果见表 3。
表 3 浸泡前处理方法的比较
样品重 生姜用 白矾用 浸泡前处理
量/g 量/g 量/g
方法
加压温 度/℃
加压时 间/h
口尝结果
草酸钙针晶 含量/%
20
3 ml 纯水混匀，振荡 5 min，然后置 60℃水浴加热并搅拌 10 min，8000 r·min-1 离心 10 min，，
残渣加 60℃热纯水 2ml，洗涤 2 次，同上混匀离心，弃去上清液，在药材残渣中加 0.2 mlHCL（1：
1）溶液及 2.0 ml 纯水混匀，置 70℃水浴 10 min，不断搅拌，离心，吸取上清液，残渣用 0.1 mol· L-1 的 HCL，同上法处理 2 次，每次 2 ml，离心，合并上清液，置 10 ml 容量瓶，纯水定容至刻度， 用 0.45μm 微孔滤膜过滤，备用。 2.3.4 标准曲线 精密吸取草酸对照品溶液 2、4、6、8、10、12、16、20μl，按上述色谱条件分 别重复进样,测定峰面积，以对照品进样量为横坐标，色谱峰面积平均积分值为纵坐标绘制标准曲 线。回归方程为 Y=684704.9210X-5942.4200,r=0.9996，结果表明草酸在 0.08-0.8μg 范围内线 性关系良好。 2.3.5 精密度试验 取对照品溶液 5μl,注入液相色谱仪，连续进样 6 次，测定峰面积积分值。 计算草酸对照品 RSD 值为 1.94%，表明对照品精密度良好。 2.3.6 稳定性试验 取同一份供试品溶液分别在 0，2，4，8，12h 进样，测定峰面积积分值，计 算 RSD 值为 1.91%。表明样品溶液在 0～12h 内稳定性良好。 2.3.7 重复性试验 取同一批次样品 6 份，按照上述供试品溶液制备方法制备，分别进样 5μl，测定峰面积积分值。计算 RSD 值为 1.94%，表明其重复性良好。 2.3.8 加样回收试验 取同一批次已知含量的半夏样品粉末 6 份，分别精密加入草酸对照 品,按供试品溶液制备方法制备，测定峰面积积分值，结果计算加样回收率为 100.46%，RSD 值为 1.85%。 2.3.9 样品含量测定 分别精密吸取各供试品溶液 5μＬ注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定 草酸峰面积，根据标准曲线计算草酸含量。草酸基准试剂分子量是 126,草酸钙针晶的分子量是 146，按此换算成草酸钙针晶含量，结果见表 5。 2.4 水溶性浸出物测定[4] 按 2010 年版中国药典附录水浸出物测定项下的冷浸法测定，结果见表 5。 2.5 白矾残留量测定[5] 按 2010 年版中国药典清半夏项下白矾残留量测定方法测定，结果见表 6。 2.6 结果分析 正交试验结果以草酸钙针晶、水溶性浸出物及白矾残留量 3 个指标进行评价，用 综合指标评分法对实验结果进行分析，故设计一个综合指标“隶属度”[6]。对于欲达到最大值的 指标（如水溶性浸出物），其指标隶属度=(指标值-指标最小值)/(指标最大值-指标最小值)；对于 要求最小化的指标(如草酸钙针晶、白矾残留量),其指标隶属度=(指标最大值-指标值)/(指标最大 值-指标最小值)。综合分数=草酸钙针晶含量隶属度×50%+水溶性浸出物隶属度×20%+白矾残留量 隶属度×30%[7]，满分为 1，评分结果以综合分数作为总指标进行方差分析，结果见表 6、7。