2第三章 红细胞血型检测

结果判读
• 阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管出 现凝集为阳性，不出现凝集判定为阴性。 • 阳性对照管不凝集或（和）阴性对照管出现凝集， 试验失败。分析原因，重新试验。
第四节
凝聚胺介质试验技术
重点提示
•实验原理 •实验方法
实验原理
• 凝聚胺是一种高价阳离子季铵盐多聚物， 可中和红细胞表面的负电荷，引起正常红 细胞可逆性的非特异性聚集。加入柠檬酸 重悬液(中和液)后，仅由凝聚胺引起的非特 异性聚集会因电荷中和而消失 • 灵敏度高，可检出IgM和IgG类抗体
结果判读
• 阳性结果 红细胞出现凝集反应或溶血 • 阴性结果 红细胞呈游离的混悬状态 • 溶血 阳性结果
第三节
酶介质试验技术
重点提示
• 实验原理 • 实验方法
实验原理
• 作用于红细胞表面的多糖链，减少红细胞 表面负电荷，缩短细胞间距，增强IgG抗体 与红细胞表面抗原的凝集反应 • 改变红细胞表面结构，暴露出某些隐蔽抗 原，使IgG类不完全抗体可以与酶处理的红 细胞在盐水介质中发生凝集反应
实验方法
•经典的血清学试验方法，主要用于检测 IgG、IgA等抗体参与的抗原-抗体反应， 也可测定补体组分C3、C4片段参与的免疫 反应。 •直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验
DAT用于检测在患者体内致敏红细胞的不完全抗体和 （或）补体wk.baidu.com IAT用于检测血清中的不完全抗体，即在体外将人血 清与红细胞致敏，再与抗球蛋白试剂反应。
实验原理
•分子筛技术和免疫学技术相结合的产物 •游离红细胞和凝集红细胞是否能通过特 殊结构的凝胶介质，从而使不同状态的红 细胞得以分离
阴性反应 离心力作用下，未与抗体结合的游离红细 胞因体积小通过凝胶层，沉淀于底部，形成“细胞扣” 阳性反应 与特异性抗体结合的红细胞因体积大被凝 胶阻滞不能通过凝胶层，留于凝胶介质的顶部或悬浮于 凝胶中
实验原理
• 常用：木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶 • Rh、Kidd血型系统的检出效果最好 • 对M、N、S、s、Fya、Fyb抗原破坏较显著
实验方法
• 一步法 在血清和红细胞反应体系中直接加 入酶液促进抗体与相应红细胞反应，敏感 性较差 • 二步法 用酶液消化红细胞后，洗涤去净酶 液，增强红细胞抗原性，使不完全抗体与 之发生反应，出现特异性凝集
实验方法
• 两步：红细胞去电荷、红细胞复电荷 • 无抗体致敏的红细胞可在试验过程中产生 可逆的非特异性凝集，抗体致敏的红细胞 产生的凝集则不可逆 • 试剂：低离子介质、凝聚胺溶液、重悬液
第五节
抗人球蛋白试验技术
重点提示
• 实验原理 • 实验方法 • 临床应用
实验原理
• 大部分IgG抗体与具有相应抗原的红细胞在 盐水介质中能够特异性结合，但不发生肉 眼可见的凝集反应，该类抗体称为不完全 抗体 • 抗球蛋白分子的Fab片段可与包被在红细胞 上的球蛋白分子的Fc片段结合，从而通过 抗球蛋白分子的搭桥作用使不完全抗体与 具有相应抗原的红细胞产生肉眼可见的凝 集反应
第二章 红细胞血型检测
穆士杰
目 录
• • • • • • 第一节 输血前免疫血液学检查 第二节 盐水介质试验技术 第三节 酶介质试验技术 第四节 凝聚胺介质试验技术 第五节 抗球蛋白试验技术 第六节微柱凝胶介质试验技术
目 录
• 第七节 吸收放散试验技术 • 第八节 凝集抑制试验技术 • 第九节 红细胞血型分子生物学检测
第一节 输血前免疫血液学检查
重点提示
• ABO血型和RhD血型鉴定 • 不规则抗体的筛查和鉴定 • 交叉配血试验
ABO血型和RhD血型鉴定
• 原理：利用抗原与抗体之间特异性结合的凝集反 应来完成。 • ABO血型鉴定：正定型、反定型。
正定型，检测红细胞表面是否存在A抗原和(或)B抗原；反 定型，检测血清中是否存在抗-A／抗-B抗体（凝集素）。
第二节
盐水介质试验技术
重点提示
• 实验原理 • 实验方法 • 结果判读
实验原理
• 在盐水介质（saline medium）中，IgM类天 然抗体分子链较长可直接与含有相应抗原 的红细胞结合，并呈现肉眼可见的凝集。 • 仅能检出IgM类抗体，无法检出IgG类抗体。
实验方法
• 平板法 应用于常规ABO血型和RhD抗原定 型，易出现假阳性或假阴性结果。 • 试管法 定型试验或半定量试验，如测定抗 体效价，结果准确、可靠。
临床应用
• DAT：胎母血型不合新生儿溶血病的诊断、 免疫溶血性输血反应的调查、自身免疫性 溶血性贫血的诊断及药物诱发型溶血病的 诊断 • IAT：血型鉴定、交叉配血、器官移植、妊 娠所致免疫性血型抗体以及自身免疫性血 型抗体的检出和鉴定
第六节
微柱凝胶介质试验技术
重点提示
• 实验原理 • 适用范围 • 优点
适用范围
多用于抗球蛋白试验、ABO血型正/反定 型、交叉配血及其他血型系统抗原检测。 •中性胶 不含抗体，相当于试管的作用 •特异性胶 含特异性抗体，如抗-A、抗-B， 可进行AB抗原检测 •抗球蛋白胶 含抗球蛋白，可进行IgG类抗体 的检测
优点
操作简便、结果准确、灵敏度高、便于 保存、节约标本、标准化、使用安全
• RhD血型鉴定：红细胞上存在D抗原时，可与抗D分型血清产生特异性的抗原抗体反应，出现红 细胞凝集为RhD阳性，不凝集者为RhD阴性。
不规则抗体的筛查和鉴定
• 不符合ABO血型系统Landsteiner法则的血型抗体， 即抗-A、抗-B之外的血型抗体 • ABO系统中的亚型，变异型的抗-A1或某种抗-B等 抗体 • 包括同种抗体和自身抗体 • 实验方法：盐水介质法、白蛋白介质法、低离子 强度介质法(LISS)、酶技术、抗球蛋白试验、凝 聚胺(polybrene)促凝技术和凝胶试验（Gel test） 等
交叉配血试验
1. 主侧交叉配血：受血者血清(浆)与供者红细胞 反应，检测受血者体内是否存在针对供者红细 胞的抗体。 2. 次侧交叉配血：受血者红细胞与供者血清(浆) 反应，检测供者血液中是否存在针对受血者红 细胞的抗体。 3. 自身对照：受血者红细胞与自身血清(浆)反应， 以排除自身抗体、直接抗球蛋白试验阳性及红 细胞缗钱状假凝集等干扰试验结果的因素。