植物组织培养中常见问题及解决办法(课堂PPT)
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三、 玻璃化
（一）定义
在组培过程中，叶片和嫩梢 呈透明或半透明水浸状的培养 物称为玻璃苗。
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（二）玻璃化苗的特点
1、玻璃化苗植株矮小肿胀、失绿，叶片皱缩成 纵向卷曲，脆弱易碎。
2、叶表面缺少角质层蜡质，没有功能性气孔， 仅有海绵组织而无栅栏组织。
3、体内含水量高，但干物质、叶绿素、蛋白质、 纤维素和木质素含量低。
4、吸收营养与光合功能不全，分化能力大大降 低，苗生长缓慢、繁殖系数大为降低，甚至 死亡。
5、生根困难，移栽成活率低。
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（三）防治措施
1、增加培养基中的溶质水平，以降低培养 基的水势； 2、减少培养基中含氮化合物的用量；
3、增加光照；
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4、增加容器通风，最好进行CO2施肥，这 对减轻试管苗玻璃化的现象有明显的作用；
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二、褐变
（一）定义 在组培过程中，培养材料向培养基中 释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色， 培养材料也随之变褐死亡的现象。
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（二）褐化的主要原因
1、品种：由于多酚氧化酶活性上的差异， 有些品种的外植体在接种后较易褐变，而有 些品种的外植体在接种后不易褐变。 2、生理状态：一般来说，幼嫩的组织在接 种后褐变程度并不明显，而老熟的组织在接 种后褐变程度较为严重。
后才表现出来，主要症状是培养基 上出现绒毛状菌丝，然后形成不同 着色的孢子层。
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（三）引起污染的原因：
1、培养基灭菌不彻底 2、外植体消毒不彻底 3、操作人员不遵守操作规程 4、无菌室和培养室环境不清洁 5、操作设备及使用工具消毒不彻底
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（四）预防措施
1、防止材料带菌，材料预培养。 2、严格外植体灭菌。 3、培养基灭菌彻底。 4、严守无菌操作规程。 5、各室保持良好卫生。
组培中常见问题 及解决办法
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一、污染
（一）定义 是指在培养过程中，培养基
或培养材料上滋生细菌、真菌等 微生物，使培养材料不能正常生 长导致培养失败的现象。
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（二）常见的菌源 真菌和细菌
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1、细菌污染一般在接种1-2天后即
可发现，表现为培养基表面出现黏 液状菌斑。
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2、真菌污染一般在接种3天甚至10天以
7Baidu Nhomakorabea
（五）污染原因判断
1、若污染菌类是零星分散在培养 基中，则可确定是人为引起的污染。 若是外植体，菌类从材料培养基以上 部分长起，且发生在5天以后，则说 明是材料带的内生菌。若从培养基以 下开始长菌，发生时间较早，且有从 里向外的趋势，则说明是切口引起的 污染。
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2、真菌污染后，如果已形成孢子，则 必须经高压灭菌后扔掉。但若是细菌 污染，因此只要及时发现，将材料上 部未感菌的部分剪下转接，材料仍可 以用。
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3、使用抗氧化剂：在培养基中，使用半胱氨 酸、抗坏血酸等抗氧化剂能够较为有效地 避免或减轻很多外植体的褐变现象。另外 使用0．1％～0．5％的活性炭对防止褐变 也有较为明显的效果。
4、连续转移：对容易褐变的材料可间隔12～ 24小时培养后，再转移到新的培养基上， 这样经过连续处理7～10天后，褐变现象便 会得到控制或大为减轻。
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3、培养基成分：如浓度过高的无机盐会使 褐化程度增加，细胞分裂素的水平过高 也会刺激某些外植体的多酚氧化酶的活 性，从而使褐化现象加深。
4、培养条件不当：例如光照过强、温度过 高、培养时间过长等，均可使多酚氧化 酶的活性提高，从而加速被培养的外植 体的褐变程度。
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（三）防治措施
1、选择合适的外植体：一般来说，最 好选择生长处于旺盛的外植体。 2、合适的培养条件：无机盐成分、植 物生长物质水平、适宜温度、及时继代 培养均可以减轻材料的褐变现象。
5、降低培养温度，进行变温培养，有助于 减轻试管苗玻璃化的现象发生；
6、降低培养基中细胞分裂素含量，可以考 虑加入适量脱落酸。
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三、 玻璃化
（一）定义
在组培过程中，叶片和嫩梢 呈透明或半透明水浸状的培养 物称为玻璃苗。
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（二）玻璃化苗的特点
1、玻璃化苗植株矮小肿胀、失绿，叶片皱缩成 纵向卷曲，脆弱易碎。
2、叶表面缺少角质层蜡质，没有功能性气孔， 仅有海绵组织而无栅栏组织。
3、体内含水量高，但干物质、叶绿素、蛋白质、 纤维素和木质素含量低。
4、吸收营养与光合功能不全，分化能力大大降 低，苗生长缓慢、繁殖系数大为降低，甚至 死亡。
5、生根困难，移栽成活率低。
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（三）防治措施
1、增加培养基中的溶质水平，以降低培养 基的水势； 2、减少培养基中含氮化合物的用量；
3、增加光照；
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4、增加容器通风，最好进行CO2施肥，这 对减轻试管苗玻璃化的现象有明显的作用；
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二、褐变
（一）定义 在组培过程中，培养材料向培养基中 释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色， 培养材料也随之变褐死亡的现象。
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（二）褐化的主要原因
1、品种：由于多酚氧化酶活性上的差异， 有些品种的外植体在接种后较易褐变，而有 些品种的外植体在接种后不易褐变。 2、生理状态：一般来说，幼嫩的组织在接 种后褐变程度并不明显，而老熟的组织在接 种后褐变程度较为严重。
后才表现出来，主要症状是培养基 上出现绒毛状菌丝，然后形成不同 着色的孢子层。
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（三）引起污染的原因：
1、培养基灭菌不彻底 2、外植体消毒不彻底 3、操作人员不遵守操作规程 4、无菌室和培养室环境不清洁 5、操作设备及使用工具消毒不彻底
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（四）预防措施
1、防止材料带菌，材料预培养。 2、严格外植体灭菌。 3、培养基灭菌彻底。 4、严守无菌操作规程。 5、各室保持良好卫生。
组培中常见问题 及解决办法
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一、污染
（一）定义 是指在培养过程中，培养基
或培养材料上滋生细菌、真菌等 微生物，使培养材料不能正常生 长导致培养失败的现象。
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（二）常见的菌源 真菌和细菌
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1、细菌污染一般在接种1-2天后即
可发现，表现为培养基表面出现黏 液状菌斑。
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2、真菌污染一般在接种3天甚至10天以
7Baidu Nhomakorabea
（五）污染原因判断
1、若污染菌类是零星分散在培养 基中，则可确定是人为引起的污染。 若是外植体，菌类从材料培养基以上 部分长起，且发生在5天以后，则说 明是材料带的内生菌。若从培养基以 下开始长菌，发生时间较早，且有从 里向外的趋势，则说明是切口引起的 污染。
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2、真菌污染后，如果已形成孢子，则 必须经高压灭菌后扔掉。但若是细菌 污染，因此只要及时发现，将材料上 部未感菌的部分剪下转接，材料仍可 以用。
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3、使用抗氧化剂：在培养基中，使用半胱氨 酸、抗坏血酸等抗氧化剂能够较为有效地 避免或减轻很多外植体的褐变现象。另外 使用0．1％～0．5％的活性炭对防止褐变 也有较为明显的效果。
4、连续转移：对容易褐变的材料可间隔12～ 24小时培养后，再转移到新的培养基上， 这样经过连续处理7～10天后，褐变现象便 会得到控制或大为减轻。
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3、培养基成分：如浓度过高的无机盐会使 褐化程度增加，细胞分裂素的水平过高 也会刺激某些外植体的多酚氧化酶的活 性，从而使褐化现象加深。
4、培养条件不当：例如光照过强、温度过 高、培养时间过长等，均可使多酚氧化 酶的活性提高，从而加速被培养的外植 体的褐变程度。
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（三）防治措施
1、选择合适的外植体：一般来说，最 好选择生长处于旺盛的外植体。 2、合适的培养条件：无机盐成分、植 物生长物质水平、适宜温度、及时继代 培养均可以减轻材料的褐变现象。
5、降低培养温度，进行变温培养，有助于 减轻试管苗玻璃化的现象发生；
6、降低培养基中细胞分裂素含量，可以考 虑加入适量脱落酸。
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