维生素C的定量测定
生物化学实验：维生素C定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
ʺ目的要求
学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法
ʺ实验原理
还原性Vc + 氧化性染料
氧化性Vc + 还原性染料
粉红色 (中性和碱性)
无色
•Vc放在滴定瓶中 •2,6-二氯酚靛酚放在微量滴定管中 •终点前, 2,6-二氯酚靛酚全部被还原为无色
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
•终点时, 剩下有2,6-二氯酚靛酚.呈现粉红色
【取10ml 1%草酸作空白对照 【用微量滴定管以0.01% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并 保持15s不褪色即达终点，得到V2
V1 - V2相当于0.1mg抗坏血酸
四、 样品抗坏血酸液的滴定V3
【取滤液10ml(相当于样品Vc的1/10)置100ml锥形瓶中
【 用微量滴定管以0.01% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并 保持15s不褪色即达终点，得到V3。
ʺ试剂和器材
一、试剂
•2%草酸溶液: 草酸2g溶于100ml蒸馏水中。 •1%草酸溶液: 草酸1g溶于100ml蒸馏水中。 •标准抗坏血酸溶液（0.1mg/ml）: 准确称取50mg纯抗坏血
酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶 液中，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用 前配制。
ʺ操作方法
一、提取 •水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸
吸干表面水分
•称取5g蔬菜或水果，剪碎,加入少量(1-3ml) 2%草酸，用研 钵研磨至浆状，倒入至100ml的容量瓶中，往研钵中加入少 量多次2%草酸，把研磨后的样品完全转移，并定容至100ml 容量瓶中（研磨，转移，定容）。
五、2%草酸的滴定V4
实验三维生素C的定量测定二氯靛酚滴定法
实验三维生素C的定量测定二氯靛酚滴定法This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020实验三 维生素C 的定量测定（2，6-二氯靛酚滴定法）一、原理维生素c 又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。
因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C ，当样品中的维生素C 被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C 的量成正比。
二、 实验仪器新鲜水果、吸管、容量瓶、滴定装置、锥形瓶、研钵、漏斗三、实验试剂1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，即浓度为0.1mg/ml ，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。
2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。
3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。
4、0.01% 2,6-二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6-二氯酚靛于300毫升含有104毫克 NaHCO 3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。
（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。
四、实验步骤（一）提取水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。
（二）滴定1、标定2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度：量取标准抗坏血酸溶液1ml 和9ml 1%草酸于50ml 锥形瓶1中，同时量取10ml 1%草酸加入另一个50ml 锥形瓶2中作空白对照V 2，用已标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。
维生素C的定量测定
三、方法和步骤
1、用天平准确称取柚果肉 克，或桔皮 克或草莓 克。 、用天平准确称取柚果肉5克 或桔皮4克或草莓 克或草莓2克 放入乳钵中， 盐酸5~10ml研磨。放置片刻，将提取 研磨。 放入乳钵中，加1%盐酸 盐酸 研磨 放置片刻， 液滤入50ml容量瓶。反复抽提 容量瓶。 液滤入 容量瓶 反复抽提2~3次，最后用 次 最后用1%盐酸稀 盐酸稀 释滤液至刻度并混匀，每次量取5或 释滤液至刻度并混匀，每次量取 或10ml放入小锥形瓶内 放入小锥形瓶内 进行滴定。 进行滴定。 2、用0.001N2，6-二氯酚靛酚钠溶液（兰色）滴定至 二氯酚靛酚钠溶液（ 、 ， 二氯酚靛酚钠溶液 兰色） 红色，保持15-30秒不褪色。滴定过程宜迅速，不超过2 红色，保持 秒不褪色。滴定过程宜迅速，不超过 秒不褪色 分钟。要使结果准确，滴定使用的2， 二氯酚靛酚钠不 分钟。要使结果准确，滴定使用的 ，6-二氯酚靛酚钠不 应少于1ml或多于 或多于4ml。假如滴定结果在 以外， 应少于 或多于 。假如滴定结果在1~4ml以外，则必 以外 须增减样品用量或将提取液适当稀释。另取1% HCl 5或 须增减样品用量或将提取液适当稀释。另取 或 10ml作空白对照滴定。 作空白对照滴定。 作空白对照滴定
（3）标准抗坏血酸溶液：溶解100毫克纯抗坏血酸粉结 标准抗坏血酸溶液：溶解100毫克纯抗坏血酸粉结 100 晶于1%草酸中，再稀释到500毫升。 1%草酸中 500毫升 晶于1%草酸中，再稀释到500毫升。
3、仪器设备
50ml三角瓶、乳钵、 ml微量滴定管、10ml吸量管、 50ml三角瓶、乳钵、5ml微量滴定管、10ml吸量管、量 ml三角瓶 微量滴定管 ml吸量管 筒、50ml量瓶 50ml量瓶 ml
ONa
兰色
实验七_维生素C的定量测定-2_6-二氯酚靛酚法
实验七_维生素C的定量测定-2_6-二氯酚靛酚法一、实验目的2. 掌握 2,6-二氯酚靛酚法的实验操作方法。
3. 提高实验操作技能，培养实验习惯。
二、实验原理2,6-二氯酚靛酚法是一种常用于测定维生素 C 的定量分析方法，其原理是利用维生素 C 对氧化剂的还原能力，在酸性条件下，与氧化剂溶液中的氧气直接发生反应，生成2,6-二氯酚靛酚，这是一种带有天蓝色色素的化合物。
其反应方程式为：C6H8O6 + 2C12H6Cl2O2 → C12H5Cl2O2（indophenol）+ 2HCl在测定中，利用紫外-可见光谱（UV-Vis）分析法，通过测量反应产物（2，6-二氯酚靛酚）的吸收光谱进行维生素 C 的浓度计算。
维生素 C 含量的测定范围为 0.1-2.0mg/mL。
三、实验操作A. 试剂和仪器1. 空白维生素 C 溶液：将 0.1 g 维生素 C 溶于 100 mL 的 0.05 M 磷酸缓冲液（pH=2.0），称取 1 mL 溶液，加入 10 mL 的 0.05 M 磷酸缓冲液当作空白维生素 C 溶液。
3. 柠檬酸铁铵溶液：称取 1 g 柠檬酸铁铵，加入 100 mL 的去离子水溶解得到 1% 的柠檬酸铁铵溶液。
4. 改良液：将5.5 g 的硫酸钾加入 100 mL 的 85% 磷酸（V/V），搅拌至溶解，加入 1 g 2,6-二氯酚靛酚，摇匀后吸入液面，加入水至 1 L。
B. 实验步骤1. 分别取 6 个试管，标号：1，2，3 为空白对比组，4，5，6 为实验组。
2. 将实验组试管中加入不同浓度的维生素 C 标准溶液（10 μg/mL，20 μg/mL，30 μg/mL），各加 2 mL，加入 2 mL 的柠檬酸铁铵溶液。
3. 将实验组试管加到热浴肢中，调节温度至37℃。
4. 在 1 分钟内，向实验组试管中加入 0.5 mL 的改良液，同时加入 1 mL 的硫酸（V/V = 4:1）。
5. 摇匀实验组试管，放置于常温下 20 分钟，直至颜色稳定。
维生素c含量测定的方法
维生素C含量测定方法一、荧光分析法荧光分析法是一种利用荧光物质与维生素C的特异性反应来进行定量测定的方法。
在一定条件下，维生素C能够激发荧光物质的荧光，通过测定荧光强度可以计算出维生素C的含量。
该方法具有较高的灵敏度和选择性，但需要使用荧光物质，且操作较为繁琐。
二、电化学法电化学法是一种利用电化学反应来测定维生素C的方法。
在一定条件下，维生素C可以被氧化或还原，产生电流或电位变化，通过测定这些变化可以计算出维生素C的含量。
该方法具有操作简便、快速、准确度高等优点，但需要使用电极和电解质溶液。
三、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种分离和测定复杂混合物中各组分含量的方法。
维生素C可以通过高效液相色谱法与杂质分离，然后通过紫外检测器或荧光检测器进行检测。
该方法具有高分辨率、高灵敏度、高准确度等优点，但需要使用有机溶剂和复杂的仪器设备。
四、分光光度法分光光度法是一种利用物质吸收光能量特性进行定量测定的方法。
维生素C在特定波长下有吸收峰，通过测定吸收光谱可以计算出维生素C的含量。
该方法具有操作简便、快速、准确度高等优点，但需要使用显色剂和特定波长的光源。
五、滴定法滴定法是一种利用化学反应进行定量测定的方法。
维生素C与特定的试剂发生化学反应，通过滴定操作可以计算出维生素C的含量。
该方法具有操作简便、快速、准确度高等优点，但需要使用特定的试剂和操作技巧。
六、酶分析法酶分析法是一种利用酶的特异性催化作用进行定量测定的方法。
维生素C在特定酶的作用下可以生成产物，通过测定产物可以计算出维生素C的含量。
该方法具有高灵敏度、高准确度等优点，但需要使用特定的酶和试剂。
实验五、维生素C的定量测定
注意各管滴定终点均为微红色
五、结果计算
(VA VB) S 100 维生素C含量（mg/100g样品）= W
VA为滴定样品提取液所用的 2,6-二氯酚靛酚溶液的mL数 VB为滴定空白对照所用的 2,6-二氯酚靛酚溶液的mL数 S为1mL染料能氧化抗坏血酸mg数(需根据标定值计算） W为待测样品的重量。 注意测定时样品有稀释的要乘上稀释倍数
实验五—维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚法）
一、目的与任务
学习维生素C 2，6-二氯酚靛酚定量测定法的原理
和方法。
进一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技术。
掌握果蔬类样品的处理及数据分析
了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
二、实验原理
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会
本实验在酸性条件下进行，此条件下副反应进行得很慢。
用2，6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在 抗血酸尚未完全被氧化时，滴下的2，6-二氯酚靛酚立即被 还原为无色，当抗坏血酸全被氧化时，滴下的2，6-二氯酚 靛酚溶液呈红色。所以在滴定过程中当溶液从无色转变为微 红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，为滴定的终点。
脱氢维生素C（氧化型）
二酮古乐糖酸
[O]
可以解离出两个H+ 烯二醇结构具有强还原性 还原型与氧化型可相互转化 脱氢形式不稳定易降解
草酸+苏阿糖酸
维生素C的特性
易溶于水，溶于乙醇，不溶于乙醚、苯。 容易被氧化。
酸性溶液(pH＜4)较稳定，中性以上极不稳定。 对光、热、金属离子（铁、铜）敏感。
结构
抗坏血酸分子中存在烯醇式结构
六、课后研讨
重点：结果记录和计算 总结本实验的操作要点和注意事项。
维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)一、目的要求:(1)学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
(2)了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
(3)熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理:维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶(抗坏血酸氧化酶)可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚(DCPIP)是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图:当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色;当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂:1(实验材料:多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等)2(主要仪器:(1)天平 (2)研钵1(3)容量瓶(50mL) (7)漏斗(4)刻度吸管(5mL，10mL) (8)脱脂纱布(9)滤纸 (5)锥形瓶(100mL)(6)微量滴定管(3mL)3(试剂:(1)2, HCl)标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)(2 25mg，溶于25ml 4,HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
实验八 维生素C的定量测定
• •
2.滴定 1) 标准液的滴定：准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0ml于 100ml锥形瓶中，加9ml1%草酸溶液，用2，6-二氯靛 酚滴定至淡红色。滴定终点要保持15秒钟。有所用2， 6-二氯靛酚的体积算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血 酸。
•
2) 样品液的滴定：准确吸取滤液两份，每份10ml，分 别放入两个100ml锥形瓶中，滴定方法同上。
• 五、结果计算 • 按下式计算100mg样品中含抗坏血酸的毫克数： • m=V*T/W*100 • V=滴定时所用染料ml数 • T=每毫升染料氧化抗坏血酸质量 • W=10ml样液相当于含样品的质量数
二、实验仪器 • 新鲜水果 • 吸管 • 容量瓶 • 滴定装置 • 锥形瓶 • 研钵 • 漏斗
• 三、实验试剂 • 1、2%草酸溶液：草酸2g，溶于100ml蒸馏水。 • 2、1%草酸溶液：草酸1g，溶于100ml蒸馏水。
• 3、标准维生素C液：准确称取10.0mg维生素C，溶于1%草酸溶液， 并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用时配制。此溶液 浓度0.1mg/ml.
实验十二 维生素C的定量测定（2， 6-二氯靛酚滴定法）
• 一、原理 • 维生素c又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛酚钠盐， 本身则氧化成脱氢抗坏血酸。 • 在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。 • 因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C，当样品中的维 生素C被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为淡红 色，即为终点。 • 如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品 中所含有维生素C的量成正比。
维生素c的定量测定
实验9：维生素C的定量测定（磷钼酸法）一、实验目的1、了解维生素C的测定方法。
2、加深理解维生素C的理化性质。
二、实验原理钼酸铵在一定条件下（有硫酸和偏磷酸根离子存在）与维生素C反应生成蓝色结合物。
在一定浓度范围（样品控制浓度在25—250ug/ml）吸光度与浓度成直线关系。
在偏磷酸存在下，样品所存在的还原糖及其它常见的还原性物质均无干扰，因而专一性好，且反应迅速。
MoO42-+维生素CMo（MoO4）2+维生素C（还原型）钼蓝（氧化型）三、实验器材1、松针、绿色蔬菜、橘子、广柑等富含维生素C的生物材料。
2、722型（或7220型）分光光度计。
3、水浴锅。
4、离心机4000r/min。
5、组织捣碎机。
6、吸管0.10ml(×2)，0.20ml (×2)，0.50ml (×2)，1.0ml (×3)，2.0ml (×1)，5.0ml (×1)。
试管1.5cm×15cm(×10)。
7、试管架。
8、吸管架。
四、实验试剂1、5%钼酸铵：5g钼酸铵加蒸馏水定容至100ml。
2、草酸（0.05mol/L）-EDTA(0.02mmol/L)溶液：称取草酸6.3g和EDTA二钠0.75g，用蒸馏水溶解后定容至1000ml。
3、硫酸（1：19）：取19份体积蒸馏水加入1份体积硫酸。
4、冰乙酸（1：5）：取5份体积蒸馏水加入1份体积冰乙酸即可。
5、偏磷酸-乙酸溶液：粉碎好的偏磷酸3g，加入48ml（1：5）冰乙酸，溶解后加蒸馏水定容至100ml；必要时过滤；此试剂放冰箱中可保存3天。
6、标准维生素C 溶液（0.25mg/ml ）：准确称取维生素C25mg ，用蒸馏水溶解，加适量草酸（0.05mol/L ）-EDTA(0.02mmol/L)溶液，然后用蒸馏水稀释至100ml ，放冰箱贮存，可用一周。
五、实验操作1、制作标准曲线取试管9支，按表1进行操作。
实验十六 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图：当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂：1．实验材料：多种蔬果（西红柿、尖椒、绿豆芽等）2．主要仪器：（1）天平（2）研钵（3）容量瓶（50mL）（4）刻度吸管（5mL，10mL）（5）锥形瓶（100mL）（6）微量滴定管（3mL）（7）漏斗（8）脱脂纱布（9）滤纸3．试剂：（1）2％ HCl（2）标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）25mg，溶于25ml 4％HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
实验十六维生素C的定量测定26二氯酚靛酚滴定法
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）一、目的要求：（1）学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
（2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
（3）熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理：维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图：当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂：1．实验材料：多种蔬果（西红柿、尖椒、绿豆芽等）2．主要仪器：（1）天平（2）研钵（3）容量瓶（50mL）（4）刻度吸管（5mL，10mL）（5）锥形瓶（100mL）（6）微量滴定管（3mL）（7）漏斗（8）脱脂纱布（9）滤纸3．试剂：（1）2％ HCl（2）标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）25mg，溶于25ml 4％HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
维生素C的定量测定
试剂和器材
1. 试剂： 试剂： （1）2%盐酸 ； ） 盐酸 （2）白陶土； ）白陶土； 溶液（ （3）标准维生素 溶液（0.5mg/mL） ： ）标准维生素C溶液 ） 精确称取25mg纯维生素 ，溶于 25mL 2% HCl 纯维生素C 精确称取 纯维生素 溶液中，移入50mL容量瓶中并用 溶液中，移入 容量瓶中并用2% HCl溶液稀释至 溶液稀释至 容量瓶中并用 刻度,置冰箱中保存 置冰箱中保存。 刻度 置冰箱中保存。 二氯酚靛酚溶液： （4）0.025% 2，6-二氯酚靛酚溶液： ） ， 二氯酚靛酚溶液 称取氧化型2， 二氯酚靛酚 二氯酚靛酚0.25g，溶于 称取氧化型 ，6-二氯酚靛酚 ，溶于1000mL蒸 蒸 充分振荡， 馏水中， 馏水中，加NaHCO3 0.21g充分振荡，装入棕色瓶内， 充分振荡 装入棕色瓶内， 置冰箱内保存。临用前过滤，用标准维生素C溶液标 置冰箱内保存。临用前过滤，用标准维生素 溶液标 定其浓度。 定其浓度。 标定方法： 标准维生素C溶液及 标定方法：取5mL标准维生素 溶液及 标准维生素 溶液及5mL 2% HCl溶液于 mL的锥形瓶中，用配制好的 ，6-二氯 溶液于50 的锥形瓶中， 溶液于 的锥形瓶中 用配制好的2， 二氯
2. 脱色 若有色样品提取液的颜色妨碍滴定 终点的观察， 终点的观察，则可以将提取液倒入干燥锥形 瓶中，加白陶土2.5g(1g/20mL样品液 充分 样品液),充分 瓶中，加白陶土 样品液 振摇5min,再静置 再静置5min后,通过滤纸过滤 滤液 通过滤纸过滤,滤液 振摇 再静置 后 通过滤纸过滤 备用。 备用。 3. 滴定 取50mL锥形瓶两个 各加脱色的滤 锥形瓶两个,各加脱色的滤 锥形瓶两个 溶液2mL，然后用 液10mL及2%HCl 溶液 及 ，然后用2,6-二 二 氯酚靛酚溶液滴定，直至出现微红色， 氯酚靛酚溶液滴定，直至出现微红色，并保 不褪色为终点， 持15s不褪色为终点，记录两次滴定所用 ， 不褪色为终点 记录两次滴定所用2， 6-二氯酚靛酚溶液的 数,取其平均值。 二氯酚靛酚溶液的mL数 取其平均值 取其平均值。 二氯酚靛酚溶液的
维生素C的定量测定
实验7 维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）一目的了解定量测定VC的原理和方法。
掌握微量滴定法的基本技术，了解蔬菜中的VC含量。
二原理因VC能防治坏血病，又称抗坏血酸，是一种水溶性维生素。
VC是一个具有6个碳原子的酸性多羟基化合物，其分子中2、3位碳原子的两个烯醇式羟基极易极易解离，释放出氢离子，而被氧化成脱氢抗坏血酸。
氧化型抗坏血酸与还原型抗坏血酸可以相互转变，在生物组织中自成一个氧化还原体系。
人体不能自身合成VC，必须从食物中摄取。
在新鲜的水果和蔬菜中含量丰富。
在鉴定果蔬品质时，常常分析抗坏血酸的含量。
染料2，6-二氯酚靛酚（2,6-D）的颜色反应具有两种特性：一取决于其氧化还原状态，氧化态为深蓝色，还原态为无色；二是受其介质的酸碱度影响，在碱性溶液中呈深蓝色，在酸性溶液中呈浅红色。
用2,6-D的碱性溶液（深蓝色）对含抗坏血酸的酸性提取液进行氧化还原滴定，染料被还原至无色。
达到滴定终点时，多余的2,6-D在酸性条件下呈浅红色。
这样，可以利用染料消耗量计算出样品中还原型VC的含量。
三操作1 样品处理取辣椒（去蒂、种子）165g于大烧杯中，加1%草酸200ml，打浆，用1%草酸定容至500ml，纱布过滤，滤液即为VC提取液。
2 标定2,6-D的实际浓度准确量取2ml标准VC溶液（0.2mg/ml）、4ml草酸溶液于三角瓶中，用2,6-D滴定，当溶液呈现淡红色且15s不褪色即为滴定终点，记录体积V1。
重复上述操作一次，记录体积V2。
（取V1、V2的平均值V）3 空白滴定准确量取1%草酸6ml于三角瓶中，用2,6-D滴定，记录体积VB1。
重复上述操作一次，记录体积VB2。
（取VB1、VB2的平均值VB）4 样品滴定准确量取1ml提取液、5ml草酸溶液于三角瓶中，用2,6-D滴定，记录体积V A1。
重复上述操作一次，记录体积V A2。
（取V A1、V A2的平均值V A）5 计算结果VC（mg/100g）含量= （V A-VB）×C×T×100 / (D×W)VA：滴定样品消耗的2,6-D的平均毫升数。
维生素C的定量测定
维生素C的定量测定一、原理：维生素C具有化学还原性。
2，6-二氯酚靛酚钠盐水溶液呈蓝色，在酸性环境中为玫瑰色，当其被还原时，则脱色。
根据其各自性质，利用2，6，-二氯酚靛酚在酸性环境中滴定有维生素C的样品溶液。
开始时，样品液中的维生素C立即将滴入的2，6-二氯酚靛酚还原脱色，当样品液中维生素全部被氧化时，再滴入2，6-二氯酚靛酚就不再被还原脱色而呈玫瑰色。
故当样品液用2，6-二氯酚靛酚标准液滴定时，溶液出现浅玫瑰色时表明样品液中的维生素C全部被氧化，达到滴定终点。
此时，记录滴定所消耗的2，6-二氯酚靛酚标准量，按下述计算出样品中还原型维生素C的含量。
二、材料与试剂绿豆芽、10%盐酸溶液2，6-二氯酚靛酚溶液：称取0.21g碳酸氢钠，0.26g2，6-二氯酚靛酚溶于250ml蒸馏水中，稀释至1000ml。
过滤，装入棕色瓶内，置于冰箱中保存，不得超过3天。
使用前用新配制的标准抗坏血酸溶液标定。
取5ml标准抗坏血酸加入5ml偏磷酸-醋酸溶液。
然后用2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度，以每ml2,6-二氯酚靛酚溶液的浓度，以每毫升2，6-二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的mg数来表示。
标准抗坏血酸溶液：准确称取纯抗坏血酸结晶50mg溶于偏磷酸-醋酸溶液定容到250ml。
装入棕色瓶中，储于冰箱内。
偏磷酸-醋酸溶液：称取偏磷酸15g，溶于40ml冰醋酸和450ml蒸馏水所配的混合液中。
过滤。
储于冰箱内，此液保存不得超过10天。
三、操作方法1、制备含维生素C的样品提取液：称取30g绿豆芽置于研钵中研磨，放置片刻(约10分钟)，用2层纱布过滤，将滤液(如混浊可离心)滤入50ml容量瓶中。
反复抽提2-3次，将滤液并入同一容量瓶中。
最后，用酸化的蒸馏水(每10ml蒸馏水加10%盐酸1滴)定容，混匀，备用。
2、维生素C含量的测定：量取样品提取液10ml于锥形瓶中。
用微量滴定管，以2，6-二氯酚靛酚溶液滴定样品提取液，呈微弱的玫瑰色，持续5秒钟不褪为终点，记录所用2，6-二氯酚靛酚的ml数。
维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C一、目的和要求掌握2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
二、原理维生素C (Vc)又称抗坏血酸(ascorbic acid)。
最初于1928年从牛的肾上腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效。
维生素C能够还原染料2,6-二氯酚靛酚，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，被还原后成无色。
当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有Vc的酸性溶液时，在Vc未全部氧化前，滴下的染料立即被还原成无色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的Vc刚刚被氧化完全。
因此，从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中Vc的含量。
三、试剂和器材（一）试剂2%草酸溶液：2g草酸溶于100ml蒸馏水中1%草酸溶液：1g草酸溶于100ml蒸馏水中标准抗坏血酸溶液（0.1mg/mL）: 准确称取50mg纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀释至500mL，贮于棕色瓶中，冷藏。
最好临用前配制。
存，冷藏(最好临用时配置)；5. 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液，棕色瓶贮存，冷藏(4℃下可保存一周)，临用时以标准抗坏血酸液标定。
0.1%2.6―二氯靛酚溶液称取2.6―二氯靛酚钠盐500mg，溶于300ml热水中，冷后加水稀释至500ml，过滤后盛于棕色药瓶内，保存在冰箱中。
（二）器材1. 新鲜蔬菜(辣椒、青菜、西红柿等)、新鲜水果(橘子、柑子、橙、苹果等)；2. 吸管1.0ml、10.0ml；3. 容量瓶25ml, 100ml；4. 微量滴定管5ml；5. 天平；6. 研钵；7. 漏斗Φ8cm.。
四、操作步骤1. 样液制备适量称取青椒一份10g，分别加少量2%草酸(1%草酸因浓度太低而不能抑制抗坏血酸氧化酶作用)用研钵磨成浆，抽滤（或四层纱布过滤，纱布再用少量2%草酸洗几次，合并滤液），滤液转入50ml容量瓶后用2%草酸定容，若不易过滤研磨后以2%草酸洗涤，离心(4000r/min，10min)2—3次，合并上清液于50mL 容量瓶中，定容至刻度。
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(6) 提取的浆状物如不易过滤，亦可离心，留取上清液进行滴定。
思考题：
1．为了测得准确的维生素C含量，实验过程中都应注意哪些操作步 骤？为什么？
2．试简述维生素C的生理意义。
操作方法:
一、提取 水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸吸干表面
水分。然后称取20g，加入20ml 2%草酸，用研钵研磨，四层纱布过滤， 滤液备用。纱布可用少量2%草酸洗几次，合并滤液，滤液总体积定容 至50ml。 二、标准液滴定
准确吸取标准抗坏血酸溶液1ml置100ml锥形瓶中，加9ml 1%草 酸，用微量滴定管以0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并保持 15s不褪色，即达终点。由所用染料的体积计算出1ml染料相当于多少毫 克抗坏血酸（取10ml 1%草酸作空白对照，按以上方法滴定）。 三、样品滴定
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）
目的要求:
（1）学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法。 （2）了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
实验原理:
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血 病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。它对物质代谢的调节具有 重要的作用。近年来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化 学致癌物的阻断作用。
本法用于测定还原型抗坏血酸，总抗坏血酸的量常用2,4-二硝基苯肼 法和荧光分光光度法测定。
试剂和器材:
一、试剂 2%草酸溶液: 草酸2g溶于100ml蒸馏水中。 1%草酸溶液: 草酸1g溶于100ml蒸馏水中。 标准抗坏血酸溶液（1mg/ml）: 准确称取100mg纯抗坏血酸（应为洁
白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀释至100ml，贮 于棕色瓶中，冷藏。最好临用前配制。
准确吸取滤液两份，每份10ml, 分别放入2个锥形瓶内，滴定方法同 前。另取10ml 1%草酸作空白对照滴定。 四、计算
式中：VA为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数； VB为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数； C为样品提取液的总毫升数； D为滴定时所取的样品提取液毫升数； T为1ml染料能氧化抗坏血酸毫克数（由操作二计算出）； W为待测样品的重量（g）。
注意事项:
(1) 某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫太多，可加 数滴丁醇或辛醇。
(2) 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程 一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于1ml或多于4ml，如果样品含 维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。
(3) 本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行
还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），本身则氧化 为脱氢型。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。 因此，当用此染料滴定含有维生素C的酸性溶液时，维生素C尚未全部 被氧化前，则滴下的染料立即被还原成无色。一旦溶液中的维生素C已 全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以，当溶液从 无色变成微红色时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为 滴定终点。如无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品 中所含还原型抗坏血酸量成正比。
0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液: 250mg 2,6-二氯酚靛稀释至250ml，贮于棕色瓶中冷藏 （4℃）约可保存一周。每次临用时，以标准抗坏血酸溶液标定。 二、材料
苹果、卷心菜等。 三、器材
锥形瓶（100ml），组织捣碎器，吸量管（10ml），漏斗，滤纸， 微量滴定管（5ml），容量瓶（100ml，250ml）。
维生素C是具有L系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它 分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂 等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。
维生素C具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型。金属铜和酶 （抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。根据它具有还原 性质可测定其金属含量。
得很慢。 (4) 2%草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用，而1%草酸无此作用。 (5) 干扰滴定因素有： 若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱
色，或加1ml氯仿，到达终点时，氯仿层呈现淡红色。 Fe2＋可还原二氯酚靛酚。对含有大量Fe2＋的样品可用8%乙酸溶液
代替草酸溶液提取，此时Fe2＋不会很快与染料起作用。 样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸