实验四 静脉采血、血涂片的制备与染色
实验四 血涂片的制备与染色
实验四血涂片的制备与染色【目的】掌握血涂片的制备和染色方法（preparation and staining of thin blood films）。
【原理】将一小滴血液均匀涂在玻片上，呈单层紧密分布，制成薄血片。
用含天青B和伊红的Romannowsky类染料进行染色。
细胞中的碱性物质如RBC中的血红蛋白及嗜酸性粒细胞胞质中的嗜酸性颗粒等与酸性染料伊红结合染成红色；细胞中的酸性物质如淋巴细胞胞质及嗜碱性粒细胞质中的嗜碱性颗粒等与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色；中性粒细胞的中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染成淡紫红色。
【器材】1．载玻片使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。
2．推片选择边缘光滑的载玻片，在两角分别作斜线标记，然后用玻璃切割刀裁去两角，制成约15mm 宽度的推片。
3．吸耳球。
4．显微镜。
5．酒精灯或Bunsen灯。
6．采血针。
7．注射器和针头。
【试剂】1．瑞氏（Wright）染液（1）Ⅰ液：包含瑞氏染料1.0g、纯甲醇（AR级以上)600ml、甘油15ml。
将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少量甲醇慢慢地研磨（至少30min），以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒入洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。
再加15ml甘油密闭保存。
（2）Ⅱ液：磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8），包含磷酸二氢钾（KH2PO4）0.3g、磷酸氢二钠（Na2HPO4）0.2g、蒸馏水加至1000ml。
配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口贮存。
如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。
2．吉姆萨染液包含吉姆萨染料0.75g、甘油35ml、甲醇65ml。
将吉姆萨染料、甘油和甲醇放入含玻璃珠的容器内，每天混匀3次，连续4天，最后过滤备用。
3．瑞-吉复合染液（1）I液：包含瑞氏染料1g、吉姆萨染料0.3g、甲醇500ml、中性甘油10ml。
血涂片制作与染色
姬姆萨染色法
总结词
姬姆萨染色法是一种高分辨率的血涂片染色方法，能够更好地显示出细胞的细节 和特征。
详细描述
姬姆萨染色法使用姬姆萨染料对血涂片进行染色，能够使细胞核呈蓝色，细胞质 呈红色，各种血细胞在染色后呈现出不同的颜色和形态，易于鉴别。该方法染色 效果较为稳定，但需要较长的染色时间。
苏木素-伊红染色法
05 血涂片制作与染色注意事项
CHAPTER
采血注意事项
采血部位
选择合适的采血部位，通常为手指或耳垂，确保 采血过程无菌操作，避免感染。
采血量
根据实验需求，控制采血量，确保足够用于制作 血涂片，同时避免过多采血造成浪费。
采血时间
选择合适的时间进行采血，避免在进食、运动后 等情况下采血，以免影响结果。
染色注意事项
染色剂选择
根据实验需求选择合适的染色剂，确保染色效果良好，能够清晰 显示细胞结构。
染色时间
控制染色时间，确保染色均匀，避免染色过度或不足。
冲洗与脱水
在染色完成后，进行充分的冲洗与脱水，去除多余的染色剂，使观 察效果更佳。
结果观察注意事项
观察方法
01
采用正确的观察方法，如显微镜观察，确保观察结果准确可靠。
观察指标
02
关注细胞形态、大小、染色情况等指标，综合分析结果，避免
片面解读。
结果解读
03
结合临床情况和其他检查结果，综合分析血涂片结果，为临床
诊断和治疗提供依据。
谢谢
THANKS
总结词
苏木素-伊红染色法是一种常用的组织学染色方法，常用于显 示组织结构和细胞形态。
详细描述
苏木素-伊红染色法使用苏木素染料和伊红染料对组织切片进 行染色，能够使细胞核呈蓝色，细胞质呈粉红色，便于观察 组织结构和细胞形态。该方法染色效果稳定，但对某些特殊 类型的细胞可能染色效果不佳。
血涂片制备实验报告
血涂片制备实验报告血涂片制备实验报告引言：血涂片制备是一项重要的实验技术，通常用于临床血液学检查和疾病诊断。
本实验旨在探究血涂片制备的步骤和技巧，以及其在血液学研究中的应用。
一、材料和方法1. 实验材料：- 血液样本：采用新鲜的全血样本。
- 血液薄片：玻片、刮刀、洗净的无菌玻璃片。
- 染色剂：Wright染色液、甲醇、乙醇。
- 实验仪器：显微镜、离心机。
2. 实验步骤：- 步骤一：准备血液样本。
使用无菌针头采集新鲜全血样本，将其转移到干净的离心管中。
- 步骤二：制备血涂片。
取一块洗净的玻璃片，将其倾斜放置于离心管中的血液样本上，使血液与玻璃片接触，形成一条薄而均匀的血涂片。
- 步骤三：干燥血涂片。
将制备好的血涂片放置于通风处，使其自然干燥。
- 步骤四：固定血涂片。
将干燥的血涂片浸入甲醇中，使其固定。
- 步骤五：染色血涂片。
将固定的血涂片浸入Wright染色液中，保持一定时间，使细胞染色。
- 步骤六：洗净血涂片。
将染色后的血涂片放入乙醇中，轻轻摇晃，将多余的染色剂洗净。
- 步骤七：干燥血涂片。
将洗净的血涂片放置于通风处，使其自然干燥。
- 步骤八：观察血涂片。
将干燥的血涂片放置于显微镜下，调节倍率和焦距，观察细胞形态和结构。
二、结果与讨论通过血涂片制备实验，我们成功制备了一张血涂片，并进行了染色和观察。
观察结果显示，血涂片中可见红细胞、白细胞和血小板等细胞成分。
红细胞呈圆形或椭圆形，中间凹陷，具有较大的体积；白细胞则呈现不同的形态和大小，包括淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞等；而血小板则呈现为小而不规则的颗粒状结构。
血涂片制备的关键在于制备过程中的技巧和细节注意。
首先，采集血液样本时应使用无菌针头，以避免污染。
其次，在制备血涂片时，要保持玻璃片与血液的均匀接触，避免形成过厚或过薄的血涂片。
此外，干燥和固定过程中的时间和条件也会对血涂片的质量产生影响。
过长或过短的干燥时间都会导致血涂片的异常，而固定过程中甲醇的使用量和浸泡时间也要控制适当。
制作血涂片的实验报告
一、实验目的1. 掌握血涂片的制作方法。
2. 了解血涂片在临床医学中的应用。
3. 观察血细胞的形态和分布。
二、实验原理血涂片是临床医学中常用的一种检测方法，通过将血液涂抹在载玻片上，经过固定和染色处理，使血细胞在显微镜下清晰可见，从而对血液中的各种细胞进行形态学和数量的观察，有助于诊断某些疾病。
三、实验器材1. 载玻片2. 盖玻片3. 刺血针4. 消毒酒精5. 蒸馏水6. 瑞氏染液7. 显微镜8. 移液器9. 计数板四、实验步骤1. 采血：选择合适的采血部位（如耳垂或手指尖），用消毒酒精消毒皮肤，待干。
用刺血针刺破皮肤，血液自然流出。
2. 制备血涂片：a. 将载玻片倾斜45度，用移液器吸取少量血液。
b. 将血液滴在载玻片的右端，用另一载玻片作为推片，将推片的末端斜置于血液滴的左缘，成30°～40°角。
c. 将推片稍向后退，使之与血液滴接触，使血液在两载玻片之间充满斜角。
d. 将推片向前推动，使血液均匀涂抹在载玻片上，形成薄薄的一层。
e. 将盖玻片轻轻放置在血涂片上，避免产生气泡。
3. 固定：将血涂片放入固定液（如甲醇）中浸泡5分钟，取出晾干。
4. 染色：将固定后的血涂片放入瑞氏染液中染色10分钟，取出后用蒸馏水冲洗，晾干。
5. 观察：将染色的血涂片放在显微镜下观察，先低倍镜观察，再高倍镜观察。
五、实验结果与分析1. 观察到血涂片上红细胞呈两面凹的圆饼状，没有细胞核，细胞质呈淡红色。
2. 观察到白细胞有核，呈圆形、椭圆形或不规则形，细胞质呈蓝色或紫色。
3. 观察到血小板呈不规则形，细胞质呈蓝色或紫色。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了血涂片的制作方法，了解了血涂片在临床医学中的应用。
在实验过程中，我们观察到了红细胞、白细胞和血小板的形态和分布，为后续的医学诊断提供了基础。
七、注意事项1. 采血时，要确保采血部位消毒彻底，避免感染。
2. 制备血涂片时，要保持推片与载玻片之间的角度，避免血液涂抹不均匀。
静脉采血、血涂片的制备与染色
一次性器材
只能使用一次，不能反复使用。
二、血涂片制备
目的：掌握普通手工制备血涂片的方法。 实验用品： 1、器材：一次性采血针、消毒棉签、推波片、
载玻片等。 2、试剂：75%乙醇、30g/L碘酊。 标本：EDTA-K2抗凝静脉血或末梢血。
操作方法
步骤：可分5个步骤进行 消毒→取血→推片→染色→观察
实验四 静脉采血、血涂片制备与染色
一、普通静脉采血法
原理：将注射器针头刺入静脉后，
利用后抽拉针栓时所形成的负压使 血液被吸入针筒 实验用品： 1、器材 一次性注射器、压脉带、 消毒棉签、试管。 2、试剂 30g/L碘酊、75%乙醇。 标本 静脉血
操作
准备试管
仔细阅读受检者申请单，决定采血量，准备 每个试验所需的试管，并应按一定顺序排 列，如患者仅作凝血试验一项，最初1ml血 液必须丢弃。如做血细胞沉降率测定，需 取试管1支，加入适当抗凝剂（109mmol/L 枸橼酸钠0.4ml）。
放血
从注射器上取下针头。将血液沿试管壁 缓缓注入，到达标记处。含抗凝剂试管需 迅速轻轻颠倒混匀几次。
操作中
注意事项
1、采血前准备 采血前应向患者耐心解释，以消除不必
要的凝虑和恐惧心理。如遇个别患者进针 时或采血后发生眩晕，应立即拔出针头让 其平卧休息片刻，即可恢复。必要时可给 患者嗅吸芳香酊、针刺（或拇指按掐）人 中和合谷等穴位。若因低血糖诱发眩晕， 可立即静注葡萄糖或嘱患者服糖水即可。 如有其它情况，应立即找医师共同处理。
涂片经水洗干燥后用油镜 分类计数100个白细胞
李 四
血涂片的观察
低倍镜观察 1.染色情况(满意、偏酸、偏碱） 2.细胞分布情况 油镜下分类计数：体尾交界处。 油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。（共计
制作血涂片实验报告
制作血涂片实验报告制作血涂片实验报告引言：血涂片是一种常见的实验技术，用于观察和分析血液中的细胞形态和数量。
本次实验旨在通过制作血涂片，了解血液中各种细胞的形态特征，并掌握制作血涂片的步骤和技巧。
材料与方法：1. 血液样本：从健康人士的指尖或静脉采集新鲜全血。
2. 血液采集器：使用无菌注射器或采血针。
3. 血涂片：玻璃片或载玻片。
4. 血涂片制备工具：无菌棉签、无菌盖玻片、无菌滴管等。
5. 染色剂：酒精、甲苯、吉姆萨染色液等。
步骤：1. 消毒：将玻璃片、棉签、滴管等工具用酒精或甲苯擦拭消毒，保证实验无菌。
2. 采集血液：用无菌注射器或采血针采集适量血液样本，避免空气污染。
3. 制作血涂片：将一滴血液滴在玻璃片上，用无菌棉签将血液涂抹成薄膜状。
4. 干燥：将制作好的血涂片放置在通风处晾干，避免外界污染。
5. 固定：将干燥的血涂片浸入酒精或甲苯中，使细胞固定在玻璃片上。
6. 染色：将固定的血涂片浸入吉姆萨染色液中，使细胞染色。
7. 清洗：用蒸馏水或生理盐水轻轻冲洗血涂片，去除多余的染色剂。
8. 干燥：将清洗后的血涂片放置在通风处晾干，避免水分残留。
结果与讨论：通过制作血涂片并观察，我们可以看到血液中包含了许多不同类型的细胞。
其中，红细胞是最常见的细胞类型，呈圆形或凹陷状，无核，主要负责携带氧气和二氧化碳。
白细胞则有多种类型，包括中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞等。
它们在免疫和炎症反应中起着重要作用。
血涂片的制备过程中，固定和染色是关键步骤。
固定可以使细胞保持原有形态，并防止细胞脱落。
染色则能够突出细胞的形态特征，使其更易于观察和分析。
吉姆萨染色液是常用的染色剂，可以染出细胞核和胞质的颜色差异，便于细胞分类和计数。
制作血涂片的技巧也需要注意。
首先，血涂片的制备过程应尽量快速，避免血液样本在空气中暴露时间过长，以免细胞形态发生变化。
其次，血涂片的涂抹要均匀且薄，以确保细胞分布均匀，不会重叠或过于稀疏。
血涂片实验实习报告
一、实习目的通过本次实习，使学生掌握血涂片的制备、染色和显微镜观察的基本方法，了解血细胞的基本形态和数量，从而为临床诊断提供依据。
二、实习时间2021年X月X日三、实习地点XX医学院检验科实验室四、实习内容1. 血涂片的制备（1）采集静脉血：使用无菌注射器抽取受试者静脉血2ml。
（2）涂片：将血液滴在载玻片上，用另一张载玻片的一端轻轻刮过血液，制成薄而均匀的血涂片。
（3）固定：将涂有血液的载玻片放入固定液中，浸泡5-10分钟。
2. 血涂片的染色（1）瑞氏染色：将固定好的血涂片放入瑞氏染液中，浸泡5-10分钟。
（2）自来水冲洗：用自来水冲洗掉多余的染液。
（3）伊红染色：将血涂片放入伊红染液中，浸泡1-2分钟。
（4）自来水冲洗：用自来水冲洗掉多余的染液。
3. 显微镜观察（1）低倍镜观察：将染好的血涂片放在显微镜下，先用低倍镜观察，找到合适的区域。
（2）高倍镜观察：将低倍镜观察到的区域移至高倍镜视野，仔细观察血细胞形态和数量。
五、实习结果1. 血涂片制备：成功制备了薄而均匀的血涂片。
2. 血涂片染色：成功进行了瑞氏染色和伊红染色，染色效果良好。
3. 显微镜观察：（1）红细胞：呈双凹圆盘状，大小不一，数量较多。
（2）白细胞：分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞，形态各异。
（3）血小板：呈不规则形状，数量较少。
六、实习心得1. 通过本次实习，我掌握了血涂片的制备、染色和显微镜观察的基本方法，提高了自己的实验技能。
2. 在实验过程中，我了解到血细胞的基本形态和数量，为临床诊断提供了依据。
3. 实验过程中，我学会了如何与同学合作，共同完成实验任务。
4. 我认识到，实验操作要严谨，确保实验结果的准确性。
5. 通过本次实习，我对医学检验专业有了更深入的了解，增强了学习兴趣。
七、总结本次血涂片实验实习使我受益匪浅，不仅提高了自己的实验技能，还加深了对医学检验专业的认识。
在今后的学习和工作中，我将继续努力，为成为一名优秀的医学检验专业人才而努力。
血涂片制作与染色
血涂片制作与染色1.血涂片的制备血涂片的制备需要用到标本采集工具如无菌化的注射器、针头、试管、硅化玻璃片以及一些实验室试剂如无菌生理盐水、巴氏溶液和电解溶液等。
具体步骤如下：（1）将患者指尖的表面清洁卫生。
（2）选择一个适合的静脉穿刺点，通常是患者的中指或无名指。
（3）用酒精棉球清洁穿刺点，使其干燥。
（4）将无菌化的注射器连接到无菌生理盐水的瓶口上，并抽取一定量的生理盐水。
（5）将针头插入穿刺点后，将生理盐水匀速注射入患者的静脉内。
（6）在生理盐水滴入试管的同时，用眼微观检查，如果有血液进入注射器和管道内，即可采集。
宜用自来水洗净试管外表面，先不带盖座放倾空液。
（7）用试管夹夹住注射针，将针头推入试管内，然后轻轻射入试管底部液面下，同时向上抽手，保持抽液缓慢，可避免气泡产生。
（8）将采集到的血液缓缓带走，同时注入试管内，让其与100ml巴氏溶液进行搅拌。
（9）将混合液倾入瓷漏斗中，从中取出干燥了的血细胞。
2.血涂片的染色血涂片染色可使用湿涂片法或干涂片法，其中湿涂片法应用更广泛。
下文将以湿涂片法为例进行介绍。
（1）取一根硅化玻璃片，用纸巾或棉球擦拭干净。
（2）用血涂片染色钳将准备好的血涂片床放在玻璃片上。
（3）将一滴适量的Wright液倒在血涂片的中段。
Wright液包含了染色剂和辅助剂，其中主要成分是吡啶基甲重氮盐和三氧二氮菲盐。
（4）用另一根玻璃片的尾部将液滴均匀地扩开，并迅速在血涂片上来回涂抹，在染液与血涂片上充分接触并混合。
（5）保持血涂片在室温下静置5-10分钟，以促进染色反应的进行。
（6）用蒸馏水冲洗玻璃片上的染料，并将其晾干。
3.血涂片的观察与分析观察血涂片需用光学显微镜，常规放大倍数为1000倍。
观察血涂片时，应注意血细胞的形态、大小、核形态、细胞质染色情况及相关细胞间的比例等。
根据各种细胞的数量和比例，可以初步评估出是否存在异常细胞，及其可能的病理性质，如感染、贫血等。
总结：血涂片制作与染色是血液检查中重要的步骤之一，它能够帮助医生判断病情，制定治疗方案。
静脉采血血涂片的制备与染色课件
血小板观察
血小板数量
观察血小板数量是否正常，判 断是否存在血小板减少症或血
小板增多症。
血小板形态
观察血小板的大小、形状、染 色深浅等，判断是否存在异常 形态，如巨大血小板、血小板 卫星现象等。
血小板分布
观察血小板在血涂片中的分布 情况，判断是否存在血小板分 布不均的现象。
血小板功能
观察血小板的功能状态，如血 小板黏附、聚集等。
静脉采血血涂片的制备与染色 课件
CONTENCT
录
• 血涂片制备 • 血涂片染色 • 血涂片观察 • 血涂片诊断 • 血涂片质量控制
01
血涂片制 备
采血
采血部位
通常选择肘部静脉，确保血管粗壮、清晰，便于采血。
采血器材
使用一次性采血针和真空采血管，确保器材的清洁 和安全。
采血步 骤
对采血部位进行消毒，然后使用采血针穿刺静脉， 将血液抽入真空采血管中。
常细胞。
观察标准的统一
制定统一的观察标准，避免因观察 人员的个人差异导致结果的偏差。
复核制度的建立
建立复核制度，对观察结果进行复 核，确保结果的准确性和可靠性。
THANK YOU
感谢聆听
05
血涂片质量控制
制备过程的质量控制
血涂片制备的仪器和试剂
血涂片细胞分布
确保使用高品质的显微镜、推片、血 细胞计数仪等仪器，以及经过批准的 试剂。
确保血涂片上的细胞分布均匀，无重 叠、无气泡，以便于观察和诊断。
血涂片制备技术
掌握正确的血涂片制备技术，包括采 血、推片、干燥等步骤，确保血涂片 的质量。
血小板疾病诊断
总结词
血涂片检查可以帮助诊断血小板疾病， 如血小板减少症、血小板增多症等。
静脉采血血涂片的制备与染色课件
实验操作步骤
根据所使用的染色液， 按照说明书进行染色 操作。
在显微镜下观察染色 后的血涂片，观察细 胞的形态和分布。
一般来说，将染色液 滴加在血涂片上，用 吸水纸吸去多余的染 色液。
实验结果分析
血涂片质量评估
01
评估血涂片中的白细胞、红细胞和血小板 等细胞的形态和数量。
03
02
观察血涂片的制备是否均匀，细胞分布是否 清晰。
载玻片
用于制作血涂片。
染色液
如瑞氏染液或姬姆萨染液， 用于给血涂片染色。
其他
酒精灯、火柴、吸水纸等。
实验操作步骤
血涂片制备 将载玻片用酒精灯火焰灭菌，自然冷却。
用火柴点燃酒精灯，用吸水纸吸取少量酒精，涂抹在载玻片的中央区域。
实验操作步骤
用推片蘸取少量血液，均匀涂抹在载玻片的酒精区域。 等待血液干燥，即可得到血涂片。
搅拌
在稀释过程中，需要轻轻摇晃或搅拌， 以促进血液与抗凝剂充分混合。
涂片制备方法
制备涂片
使用玻璃片或专用涂片制备器，将稀释后的血液均匀涂抹在载玻片上。
干燥
将涂片放在干燥处自然干燥或用吹风机轻轻吹干。
02
血涂片染色
瑞氏染色法
瑞氏染色法是一种常用的血涂片染色方法，能够清晰地显示出细 胞的结构和形态。
姬姆萨染色法使用姬姆萨染料和伊红等染料，通过特定的染色程序，能够更清晰 地显示出细胞的内部结构和核特征，如核沟、核孔等。该方法对于鉴别和诊断血 液疾病具有重要意义，尤其在骨髓穿刺和血液肿瘤诊断中广泛应用。
苏木素-伊红染色法
苏木素-伊红染色法是一种广泛用于组织学和病理学检查的染色方法，能够清晰地显示细胞核和细胞质的形态特征。
红细胞形态观察
实验四 血涂片的制备与染色
实验四血涂片的制备与染色【目的】掌握血涂片的制备和染色方法（preparation and staining of thin blood films）。
【原理】将一小滴血液均匀涂在玻片上，呈单层紧密分布，制成薄血片。
用含天青B和伊红的Romannowsky类染料进行染色。
细胞中的碱性物质如RBC中的血红蛋白及嗜酸性粒细胞胞质中的嗜酸性颗粒等与酸性染料伊红结合染成红色；细胞中的酸性物质如淋巴细胞胞质及嗜碱性粒细胞质中的嗜碱性颗粒等与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色；中性粒细胞的中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染成淡紫红色。
【器材】1．载玻片使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。
2．推片选择边缘光滑的载玻片，在两角分别作斜线标记，然后用玻璃切割刀裁去两角，制成约15mm 宽度的推片。
3．吸耳球。
4．显微镜。
5．酒精灯或Bunsen灯。
6．采血针。
7．注射器和针头。
【试剂】1．瑞氏（Wright）染液（1）Ⅰ液：包含瑞氏染料1.0g、纯甲醇（AR级以上)600ml、甘油15ml。
将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少量甲醇慢慢地研磨（至少30min），以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒入洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。
再加15ml甘油密闭保存。
（2）Ⅱ液：磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8），包含磷酸二氢钾（KH2PO4）0.3g、磷酸氢二钠（Na2HPO4）0.2g、蒸馏水加至1000ml。
配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口贮存。
如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。
2．吉姆萨染液包含吉姆萨染料0.75g、甘油35ml、甲醇65ml。
将吉姆萨染料、甘油和甲醇放入含玻璃珠的容器内，每天混匀3次，连续4天，最后过滤备用。
3．瑞-吉复合染液（1）I液：包含瑞氏染料1g、吉姆萨染料0.3g、甲醇500ml、中性甘油10ml。
血涂片的制备与染色(29)
血涂片的制备
◈ 制备合格的血涂片，是血液学检查的最基本的技 术和方法， ◈ 血片的质量及染色的好坏，直接影响到细胞形 态的观察、和诊断。
（一） 载玻片的清洁
1. 新玻片：常带有游离碱质，用1mol/L HCl 浸泡24h， 清水冲净，干燥备用。
2. 用过的玻片：肥皂（洗涤剂）水煮沸20 min，再用 热水将肥皂和血膜洗净，清水反复冲洗，干燥备用。
3. 自动推片机法
标准化 自动化 智能化
第四部分 血细胞常用的染色方法
细胞染色技术
细胞涂片，在光学显微镜观察之前需要固定、染色。
固定：将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联和凝固，
以保持细胞原有的形态结构不发生变化。
染色目的：使细胞的主要结构（细胞质、细胞核、
细胞器等）染上不同的颜色，便于显微镜下观察。
Hale Waihona Puke 碱性美蓝结合，偏碱：出现异常蓝染。 ⓑ PH<PI: 酸性环境，蛋白质分子带正电荷多，易与酸
性伊红结合，因此偏酸：氢离子较多，降低对碱性染料 的亲和力，增强伊红着色，出现异常红染。
最佳PH：6.4～6.8，应使用缓冲液。
同时使用优质甲醇（AR）和清洁的中性玻片。
【染色方法】
以血涂片为例 ① 血膜干后，在两端用蜡笔化线，平放在染
色架上； ② 加染液数滴，固定1min； ③ 加等量或稍多的缓冲液，与染液充分混匀，
有一定的空隙（0.3cm和1.5cm），血膜长度
占载玻片的2/3左右。玻片的一端应留有贴标
签的地方。
0.3cm
临
沂 市
1.5cm
人
民
医
院
制血膜
白细胞显微镜分类
瑞氏染色
血涂片制作与染色
淋巴细胞：可观察到中、小型两种。小淋巴 细胞与红细胞大小相似，圆形，核致密，染 成深紫色。周围仅一薄层嗜碱性染成淡蓝的 细胞质。中淋巴细胞较大，核圆形。直径6-8 微米。
单核细胞：体积最大，细胞圆形。胞质染成 灰蓝色。核呈肾形或马蹄形，染色略浅于淋 巴细胞的核。直径14-20微米。
血小板
血小板为不规则小体，直径2 - 3微米。其周 围部分浅蓝色，中央有细小的紫红色颗粒， 聚集成群。
红细胞
淋巴细胞
单核细胞
嗜中性粒细胞
嗜酸性粒细胞
嗜碱性粒细胞
汇报结束
谢谢大家! 请各位批评指正
白细胞
中性粒细胞：体积略大于红细胞，细胞核被染 成紫色分叶状，可分1-5叶。直径10-12微米。 嗜酸性粒细胞：略大于嗜中性白细胞，细胞核 染成紫色，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆 颗粒，被染成鲜红色。直径10-15微米。 嗜碱性粒细胞：体积略小于嗜酸性白细胞，细 胞质中有大小不等被染成紫色的颗粒，颗粒数 目较嗜酸性白细胞的颗粒少，核1-2叶，染成 淡蓝色。直径10-11微片做推片。 将其一端置于血滴 前方，向后移动到 接触血滴，使血液 均匀分散在推片与 载片的接触处。然 后使推片与载片呈 30°～40°角，向 另一端平稳地推出， 如右图所示。涂片 推好后，迅速在空 气中摇，使之自然 干燥。
观察
红细胞
淡红色，无核的圆形细胞，因红细胞为双凹形， 故边缘部分染色较深，中心较浅，直径7-8微 米。
血涂片制备与染色
器 建议不重复使用。
材
2.推片：推片一般选用边缘有切角且切角光滑、整齐的玻璃，推 片能否在载玻片上平稳推出是保证血涂片质量的关键。
（1）采血 ：静脉采血后，使用玻璃棒、毛细管、注射针头 等在距载玻片一端1cm处加1滴抗凝血。
（2）推片 ：左手平执载玻片，或放在类似桌子等平坦地方， 右手持推片从前方接近血滴，使血液沿推片边缘展开成适当 的宽度，立即将推片与载玻片呈 30~45°角，轻压推片边缘将 血液推制成厚薄适宜的血涂片，血涂片应呈舌状，头、体、 尾清晰可见。
1.采血：一般选用EDTA-K2抗凝的静脉血或毛细血管血液， 注ห้องสมุดไป่ตู้观察避免血细胞破坏、凝集及使用长时间放置的血液 标本因渗透压改变曹成的细胞形态、数量上的改变造成错 误判断；
2.材料：载玻片及推片应干燥无油腻，光滑无缺齿，防治推 出的血片空泡状、拉丝、不均匀；
3.推片水平：血滴大小适中，待血滴顺着推片边缘移动未至 载玻片边缘处开始推片，整个推片过程应当力度适中、速 度均匀，载玻片与推片夹角一般控制在45°角左右。血滴过 大、角度大、推片速度快、推片力度小造成血片偏厚，反 之血片则越薄，用力不匀及速度不均易造成血片厚薄不匀。
1、载玻片：载玻片必须选用正规厂家生产的表面光洁得非磨砂
玻璃，新开封的载玻片需要用1mol/L的氯化氢洗液浸泡24小时以
主 去除载玻片表面的碱性物质，浸泡后用清水冲洗风干。用过的
要
载玻片和通过酸性洗液或碱性洗液煮沸消毒20-30分钟，并用毛 刷及流动水清洗干净方能重复使用，但有划伤及交叉污染风险，
5、血膜很短：血滴太小；
6、血膜边缘无空隙：推片太宽或血滴展开太宽；
7、血膜太厚：血滴大、血黏度高推片角度大、推 片速度快；
血涂片制作实验报告
一、实验目的1. 掌握血涂片的制作方法。
2. 熟悉血细胞的基本形态和分布特点。
3. 了解血涂片染色技术。
二、实验原理血涂片是血液学检查的基本方法，通过将血液涂布在载玻片上，经过固定、染色等步骤，使血液中的各种细胞在显微镜下呈现出不同的颜色和形态，便于观察和分析。
血涂片制作的关键在于血液的涂布、固定和染色。
三、实验器材与试剂1. 器材：载玻片、推片、采血针、酒精棉球、生理盐水、瑞氏染液、蒸馏水、显微镜等。
2. 试剂：10%甲醛溶液、95%乙醇、甘油等。
四、实验步骤1. 消毒与采血（1）取一支采血针，用酒精棉球消毒皮肤。
（2）将采血针对准皮肤，轻轻刺入，使血液自然流出。
（3）用生理盐水湿润载玻片，取少量血液滴在载玻片中央。
2. 推片（1）将推片的一端放在血滴上方，另一端紧贴载玻片。
（2）以30-40°角将推片平稳地推出，使血液均匀分布在载玻片上。
3. 固定（1）将血涂片在空气中晾干。
（2）将血涂片浸入10%甲醛溶液中固定5-10分钟。
4. 染色（1）将固定好的血涂片浸入95%乙醇中脱色2-3分钟。
（2）将脱色后的血涂片浸入瑞氏染液中染色3-5分钟。
（3）将染色的血涂片浸入蒸馏水中分化1-2分钟。
5. 观察（1）将染色的血涂片放在显微镜下观察。
（2）低倍镜下观察红细胞、白细胞和血小板的形态和分布特点。
（3）高倍镜下观察白细胞和血小板的细节结构。
五、实验结果与分析1. 红细胞：呈两面凹的圆饼状，无细胞核，细胞质内充满血红蛋白，略呈碱性。
2. 白细胞：分为三种类型：中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。
中性粒细胞呈圆形或椭圆形，细胞核分叶；嗜酸性粒细胞呈椭圆形，细胞核为2-3叶；嗜碱性粒细胞呈圆形或椭圆形，细胞核为2-3叶。
3. 血小板：呈不规则形状，无细胞核，细胞质内含有血小板颗粒。
六、实验总结本次实验成功制作了血涂片，并观察到了红细胞、白细胞和血小板的形态和分布特点。
通过本次实验，我们掌握了血涂片的制作方法，提高了对血液细胞形态学知识的认识，为今后的临床诊断工作打下了基础。
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放血
从注射器上取下针头。将血液沿试管壁 缓缓注入，到达标记处。含抗凝剂试管需 迅速轻轻颠倒混匀几次。
Байду номын сангаас
操作中
注意事项
1、采血前准备 采血前应向患者耐心解释，以消除不必 要的凝虑和恐惧心理。如遇个别患者进针 时或采血后发生眩晕，应立即拔出针头让 其平卧休息片刻，即可恢复。必要时可给 患者嗅吸芳香酊、针刺（或拇指按掐）人 中和合谷等穴位。若因低血糖诱发眩晕， 可立即静注葡萄糖或嘱患者服糖水即可。 如有其它情况，应立即找医师共同处理。
血涂片的观察
低倍镜观察 1.染色情况(满意、偏酸、偏碱） 2.细胞分布情况
油镜下分类计数：体尾交界处。
油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。（共计
数100个白细胞）
李 四
123
体尾交界处
理想区域
理想区域
细胞重叠
细胞太稀
区分：红细胞、中性粒细胞 、淋巴细胞、单核 细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞等
(3)PH对细胞染色有影响。细胞各种成分均为 蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带 电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中正电 荷增多，易与伊红结合，染色偏红;在偏碱 性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结 合，染色偏蓝。
染色方法： 1、 取病料涂片、自然干燥 2、 滴加瑞氏染液染0.5-1分钟,使标本被其中甲
选择进针部位
采用左食指，触摸进针部位的静脉。
操作中
静脉采血的常用部位
贵要静脉 正中静脉 头静脉
消毒皮肤
用30g/L碘酊棉签自所选静脉穿刺处从 内向外，顺时针方向消毒皮肤，待碘酊挥 发后，再用75%乙醇棉签以同样的方式拭 去碘酊，待干。
穿刺皮肤
取下针头无菌冒，以左手拇指固定静 脉穿刺部位下端，右手持注射器，食指固 定针头下座。保持针头斜面和针筒刻度向 上，沿静脉走向使针头与皮肤成30°角斜 行快速刺入皮肤，然后成5°角向前穿破静 脉壁进入静脉腔。确认穿刺入静脉中心位 置，并沿着静脉走向将针头推入10~15mm。
取血 待酒精干后，刺破皮肤，使血自然流出， 勿挤。取干净载片，让血滴在离载片一端 中4～5毫米处，注意手指 持握载片的边缘， 勿触及其表面。不能使载片接触取血部位 的皮肤。
推片 取一块边缘光滑的载片做推片。将其一 端置于血滴前方，向后移动到接触血滴， 使血液均匀分散在推片与载片的接触处。 然后使推片与载片呈30°～40°角，向另 一端平稳地推出。涂片推好后，迅速在空 气中挥干，使之自然干燥。
2、准备试管 不同检查项目可根据试验需要选择不同 的抗凝剂及与血液的稀释比例，如血细胞 计数及MCV、MPV等参数测定时应选择适 当的抗凝剂，不要用肝素抗凝剂，因为肝 素抗凝会影响RBC和PLT的计数结果。
选择静脉
如果肥胖患者的静脉暴露不明显，可以左手 示指经碘酊、乙醇消毒后，在采血部位触摸，发 现静脉走向后凭手感方向与深度试探性穿刺。
三、血涂片的染色
染色原理： (1)瑞氏染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成的复合 染料。 (2)细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用， 各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一 样。因此，用本染料液染后，在同一血片上，可以看到各 种不同的色彩，例如血红蛋白，嗜酸性颗粒为碱性蛋白质， 与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质;细胞 核蛋白和淋巴细胞 胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青 结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态 与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。
止血 放血
试管。
不能弯曲手臂，以免形成血肿。 颠倒混匀时，需防止溶血和泡沫产生。切忌振荡
标本检测与保存
血液标本采集后应立即送检，实验室接到标本后应尽快地 检查。抗凝静脉血可稳定8～12h，如不能及时测定，应将 其置于较稳定的环境中，如4℃冰箱，减少和降低条件的 变化。测定前，将其从冰箱内取出，恢复至室温状态，混 匀后再测定。用于生物化学检查的标本若不能及时检查， 应将血清或血浆与细胞分离，进行适当的处理。
标记试管
在试管上贴上标签，著名患者姓名、项目名 称、采集日期、门诊或住院号。
消毒双手
采血前，操作人员应用肥皂或消毒液和水洗手。
选择静脉
采血前，要求受检者坐在实验台前。将前臂放在 实验台上，掌心向上，并在肘下放一枕垫。卧床 受检者要求前臂申展，暴露穿刺部位。常用采血 位置是肘前静脉，因其粗大、容易辨认。
实验四 静脉采血、血涂片制备与染色
一、普通静脉采血法
原理：将注射器针头刺入静脉后， 利用后抽拉针栓时所形成的负压使 血液被吸入针筒 实验用品： 1、器材 一次性注射器、压脉带、 消毒棉签、试管。 2、试剂 30g/L碘酊、75%乙醇。 标本 静脉血
操作
准备试管 仔细阅读受检者申请单，决定采血量，准备 每个试验所需的试管，并应按一定顺序排 列，如患者仅作凝血试验一项，最初1ml血 液必须丢弃。如做血细胞沉降率测定，需 取试管1支，加入适当抗凝剂（109mmol/L 枸橼酸钠0.4ml）。
检查注射器
打开一次性注射器包装，左手持针头下 座，右手持针筒，将针头和针筒紧密连接， 并使针头斜面对准针筒刻度，抽拉针栓检 查有无阻塞和漏气。最后排尽注射器中的 空气，备用。使用前，保持针头无菌状态。
操作前准备
操作前准备
操作前准备
扎压脉带
在采血部位上端约6cm处，将压脉带绕 手臂一圈打一活结，压脉带末端向上。要 求患者紧握和放松拳头几次，使静脉隆起。 压脉带应能减缓远端静脉血液回流，但又 不能紧到压迫动脉血流。
检查注射器
静脉采血前要仔细检查针头是否安装牢固， 针筒内是否有空气和水分。所用针头应锐利、光 滑、通气，针筒不漏气。抽血时针栓只能向外抽， 不能向静脉内推，以免形成空气栓塞，造成严重 后果。
扎压脉带
采静脉血时止血带压迫时间不能过长、 绑扎不能过紧，以避免淤血和血液浓缩， 最好不超过1min，否则会影响某些试验结 果，如造成血红蛋白和血细胞比容增高。
操作中
抽血
用左手缓缓向后拉注射器针栓，见少量 回血后，松开压脉带。然后，向后拉针栓 到达采血量刻度。若使用一次性真空采血 装置，当针头进入血管后会见少量回血， 将真空采血管插入试管托内采血针中，因 试管内负压作用，血液自动流入试管，到 达采血量刻度后拔出试管即可。
止血
嘱受检者松拳，用消毒棉签压住进针部 位，迅速向后拔出针头。继续紧按住消毒 棉签3min。
血涂片制备
推片
血液 载玻片
一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾鲜明
涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号
B 123
李 四
取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘， 先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开 成线状。
不 良 血 涂 片
标准血涂片：标准的血涂片为舌形，边缘整 齐，厚薄适宜，头体尾分明的血膜片，长 约4cm,两端和两侧留有空隙（1.5cm和 0.3cm)
穿刺皮肤
不能从静脉侧面进针。针头进入静脉的 感觉是：皮肤有一定阻力，而静脉壁阻力 较小，更富有弹性。
抽血
血液加入抗凝试管中应与抗凝剂充分混匀达 到抗凝目的；无需抗凝时则将血液直接注入试管 中。要防止血液标本溶血，因为溶血后标本不仅 红细胞和血细胞比容减低，还会使血清（浆）化 学成分发生变化。造成溶血的原因有：注射器和 容器不干燥、不清洁；压脉带捆扎时间太久，淤 血时间长；穿刺过程中损伤组织过多；抽血速度 太快；血液注入容器时未取下针头或用力推出时 产生大量气泡；抗凝血用力振荡；离心时速度过 快等。
一次性器材
只能使用一次，不能反复使用。
二、血涂片制备
目的：掌握普通手工制备血涂片的方法。 实验用品： 1、器材：一次性采血针、消毒棉签、推波片、 载玻片等。 2、试剂：75%乙醇、30g/L碘酊。 标本：EDTA-K2抗凝静脉血或末梢血。
操作方法 步骤：可分5个步骤进行 消毒→取血→推片→染色→观察 消毒与取血 消毒 先按摩取血部位，使血流通畅；再用酒精 消毒取血部位（如指尖）。
醇所固定;
3、 加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量 超纯水)轻轻晃动玻片,均匀静置5-10分钟; 4、 水洗、吸干、镜检。
血涂片染色
涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴 覆盖整个血膜1分钟 勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和 Ⅱ液充分混匀静置10分钟
直接流水冲洗3-5分钟 （切勿先倒掉染液） 涂片经水洗干燥后用油镜 分类计数100个白细胞 李 四 123