药理学实验讲义

药理学实验讲义南方医科大学药学院２０１０－７目录实验一实验动物操作的基本机能 (2)实验二不同给药途径对药物作用的影响 (4)实验三全血水杨酸二室模型药物代谢动力学参数测定 (5)实验四肝肾功能对药物作用的影响 (6)实验五药物镇痛实验 (7)实验六巴比妥类药物的抗惊厥作用 (9)实验七利多卡因对抗氯化钡引起的心律失常实验 (13)实验八有机磷酸酯类中毒及解救 (14)附录1 药理学实验基本要求 (19)附录2 药理学在新药研究中的应用 (22)实验一、实验动物操作的基本机能一、目的：学习实验动物编号、捉持、给药、采血等基本操作方法。

二、实验材料（一）动物：小白鼠10只，雌雄各半，体重18g ~ 22g。

家兔1只，雌雄均可。

（二）器材：1 ml注射器，5 ml注射器，针头，灌胃针头，大烧杯，天平。

三、方法1. 性别鉴别小鼠的性别鉴别通常以肛门与生殖孔之间的距离来判断，距离近者为雌性，距离远者为雄性。

家兔可以从生殖器分辨其性别。

2. 编号可根据情况和习惯而定，符合清晰易辨、简便耐久的要求即可。

例如小鼠，右前肢皮肤外侧涂色标记为1号，腹部右外侧皮肤涂色标记为2号，右后肢皮肤外侧涂色标记为3号，头部皮肤涂色标记为4号，背部正中皮肤标记为5号，尾巴根部标记为6号，7、8、9号在左侧同1、2、3号，第10号不色。

3.捉持右手提起鼠尾，放在粗糙物（如鼠笼）上面，轻轻向后拉其尾，此时小鼠前肢抓住粗糙面不动；用左手的拇指和食指捏住其头部皮肤和双耳；其余三指和掌心夹住其背部皮肤及尾部。

这样小鼠便可被完全固定在手中。

4. 给药(1)小鼠的给药方法①灌胃（po）：将小鼠固定后，右手持装有灌胃针头的注射器，自口角处插入口腔，沿上腭插入食道。

如遇阻力，可将灌胃针头抽出再另插，以免穿破食道或误入气管，造成动物死亡。

灌注量一般为0.1～0.2ml/10g，不超过0.5ml/只。

②肌内注射（im）：两人合作，注射部位多选后腿上部外侧。

一处注射量不超过0.1ml。

③皮下注射(ih)：注射时用左手拇指及食指轻轻捏起皮肤，右手持注射器将针头刺入,固定后即可进行注射。

一般小鼠在背部或前肢腋下。

注药量一般为0.1～0.2 ml/10g。

④腹腔注射（ip）：左手将小鼠握持固定，使其腹部朝上。

右手持注射器，取300角从下腹部外侧向头端刺入腹腔，进针部位不宜太高，刺入不能太深。

注射量0.05～0.2ml/10g，不超过0.5ml/只。

⑤静脉注射（iv）：将小鼠置于固定筒内，使其尾巴露在外面，用70%酒精涂擦尾部，或将鼠尾浸入50℃水中。

待尾部静脉扩张后，左手拉住尾尖，右手进针，注射量不超过0.5m/只。

(2)家兔的给药方法①灌胃：一人将兔身固定于腋下，一手固定兔头，另一手将开口器放入兔口。

另一人将导尿管从开口器孔插入口内，再慢慢插入食道和胃。

为慎重起见，可将胃管外端放入水中，如无气泡，则可证实导尿管在胃内。

灌胃量一般为10 ml/kg。

如用兔固定盒，可由一人操作。

②静脉注射：一人固定兔身和兔头，另一人在使兔耳边缘血管(耳缘静脉)扩张后，从静脉末端刺入血管，左手拇指和食指固定针头和兔耳，右手注药(图2-10)。

注药量一般为2 ml/kg，等渗液可达10 ml/kg。

③皮下、肌肉、腹腔注射与鼠类相似。

常用注药量分别0.5、1.0、5.0 ml/kg。

5.取血(1) 小鼠取血的方法①眼眶取血法：左手持鼠，拇指与食指捏紧头颈部皮肤，使鼠眼球突出，右手持弯镊或止血钳，钳夹一侧眼球部，将眼球摘出，鼠倒置，头部向下，此时眼眶很快流血，将血滴入预先加有抗凝剂的玻璃管内，直至流血停止。

此法由于取血过程中动物未死，心脏不断跳动，一般可取鼠体重4％～5％的血液量，是一种较好的取血方法，但只适用一次性取血。

②剪尾取血法：将清醒鼠装入深颜色的布袋中，将鼠身裹紧，露出尾巴，用酒精涂擦或用温水浸泡使血管扩张，剪断尾尖后，尾静脉血即可流出，用手轻轻地从尾根部向尾尖挤捏，可取到一定量的血液。

取血后，用棉球压迫止血。

由于鼠血易凝，需要全血时，应事先将抗凝剂置于采血管中，如用血细胞混悬液，则立即与生理盐水混合。

③小鼠的采血还有眼球后静脉丛取血法、断头取血、心脏取血等。

(2) 家兔取血的方法①耳缘静脉取血：选好耳缘静脉，拔去被毛，用二甲苯或75％酒精涂擦局部，小血管夹子夹紧耳根部，使血管充血扩张．术者持粗针头从耳尖部的血管逆回流方向入静脉取血，或用刀片切开静脉，血液自动流出，取血后用棉球压迫止血，一般取血量为2～3 ml。

②耳中央动脉取血：免置入固定箱内，用手揉擦耳部，使中央动脉扩张。

左手固定兔耳，右手持注射器，中央动脉末端进针，与动脉平行，向心方向刺入动脉。

一次取血量可达15 ml，取血后棉球压迫止血。

注意兔中央动脉易发生痉挛性收缩。

抽血前要充分使血管扩张，在痉挛前尽快抽血，抽血时间不宜过长。

中央动脉末端抽血比较容易，耳根部组织较厚，抽血难以成功。

③家兔的采血还有心脏取血、股静脉取血、颈静脉取血等方法。

实验二、不同给药途径对药物作用的影响一、目的和原理观察不同给药途径对药物作用的性质和快慢的影响。

大多数药物需进入血液分布到作用部位才能发生作用。

药物自给药部位进入全身血液循环的过程为吸收（absorption），吸收速度的快慢及吸收数量的多少直接影响药物的起效时间及强度，其中给药途径是决定药物起效时间及强度的重要因素之一。

给药途径不同，药物吸收快慢亦不同，其吸收快慢顺序除静脉注射以外是：腹腔注射>吸入>舌下>直肠>肌内注射>皮下注射>口服>皮肤。

给药途径不同，其吸收程度又不同，由此使药物作用强度不同。

药物经不同给药途径所致的吸收程度是：吸入、舌下、直肠、肌内注射较为完全，口服次之，皮下较差；皮肤表面吸收程度最差，脂溶性特别高的药物才能通过此途径较好地吸收。

而胃肠道给药，影响因素较多，包括有首关消除的影响等，使药物吸收程度有所不同。

二、实验材料（一）动物：小白鼠6只，体重18g ~ 22g。

（二）器材：1 ml注射器，针头，灌胃针头，大烧杯，天平。

（三）药品与试剂：8%硫酸镁溶液，1% 异戊巴比妥，苦味酸。

三、观察指标（一）观察小鼠正常活动情况。

（二）给药后观察两只小鼠的反应有何不同。

四、方法与步骤(一)不同给药途径对硫酸镁作用的影响1. 取健康小白鼠2只，称体重后，分别作标记，然后观察正常活动情况。

2. 甲鼠腹腔注射8%硫酸镁溶液0.2 ml/10 g体重，乙鼠以同样剂量灌胃。

给药后将小鼠放入烧杯内，观察两只小鼠的反应有何不同？为什么？表2-1 实验结果记录鼠号体重药物及剂量给药途径动物反应甲乙(二)不同给药途径对异戊巴比妥作用的影响1. 取小鼠4只称重、编号，观察正常活动、呼吸状况及翻正反射后，分别给予1%异戊巴比妥溶液0.1ml/20g，甲鼠灌胃，乙鼠皮下注射，丙鼠腹腔注射，丁鼠尾静脉注射。

观察比较4鼠给药后表现有何不同，并记录给药后翻正反射消失开始发生所需的时间。

五、注意事项掌握正确的灌胃给药操作技术，不要误入气管或插破食管，前者可致窒息死亡，后者可出现如同腹腔注射的吸收症状，重则死亡。

六、思考题不同给药途径在哪些情况下使药物的作用产生质的不同？在哪些情况下则使药物的作用只产生量的不同？实验三、全血水杨酸二室模型药物代谢动力学参数测定一、目的和原理药物代谢动力学（pharmacokinetics）是研究机体对药物的作用过程及体内药物浓度随时间动态变化的规律，包括药物在体内吸收、分布、代谢（转化）和排泄的特点及影响因素，以及运用数学方法定量地阐明机体内药物浓度随时间变化的规律，求出药物的药代动力学参数如半衰期、分布容积、生物利用度、吸收速率常数、消除速度常数等，为临床用药方案的制定、用药剂量的调控、治疗效果及不良反应的监测等提供理论依据，有利于更好地发挥药物的防治作用，尽量减少和避免不良反应。

药物在体内的变化过程可以用药—时曲线来表示，即以时间为横坐标，血药浓度为纵坐标绘出曲线。

利用曲线可以分析并最终阐明该药的药动学特征。

从单次口服后时量曲线，可以看出该药物的体内过程对血浆浓度变化的影响。

曲线升段反映药物吸收与分布过程，坡度反映该过程的速度。

坡度陡，则吸收快、分布慢，曲线的峰值反映给药后所达到的最高血药浓度。

曲线降段反映药物的消除速度，坡度陡消除快，坡度平则消除慢。

当然，在药物吸收过程中药物消除过程已经开始，血药浓度达到峰值时吸收过程也未完全停止，只是在曲线升段时吸收快于消除，在曲线降段时消除快于吸收。

峰浓度表示吸收与消除速度相等。

半衰期（half-life time, t1/2）指血浆药物浓度下降一半所需的时间，是表示药物消除速度的参数。

药物的半衰期长表示它在体内消除慢，滞留时间长。

绝大多数药物是按一级动力学的规律消除，其血浆半衰期的数值是固定的；而半衰期的任何变化，可反映消除器官（肝、肾）的功能状态。

半衰期可从血药时间曲线上查到，即血浆浓度下降一半所对应的时间，也可以应用公式t1/2＝0.693/Ke求出。

半衰期是药动学参数中最基本的参数，它对制订和调整给药方案具有重要作用。

一般情况下，一次给药后经过5个t1/2，约有96%以上的药物被消除；每隔一个半衰期给药1次，约经5个t1/2可达稳态浓度。

房室模型：药物分子分布于各器官、组织的特点各不相同，为便于分析，可将分布特点相同，且药物浓度同步增减的器官、组织简化为一个或几个“房室”，这种数学分析模式称房室模型。

一室模型：将集体看作一个房室，给药后药物可立即均匀地分布在整个房室，并以一定速率从该室消除。

将属于一室模型的药物单次静脉注射，用血药浓度对数值与时间作图可得到一直线，即药－时曲线呈指数消除。

二室模型：将集体看作两个房室即中央室与周边室，并有两种转运速率，药物进入体内几乎立即分布到中央室，然后缓慢地分布到周边室。

中央室包括血液与能瞬时取得平衡的组织，如心、肝、肾、脑、腺体、肌肉等组织即细胞外液，周边室包括血液灌注贫乏的难以瞬时取得平衡的组织，如骨、脂肪、皮肤等。

将属于二室模型的药物单次快速静脉注射后药物进入中央室，一面消除，一面向周边室分布，称之为α相（分布相）。

分布平衡后，曲线进入下降较慢的β相（消除相），主要反映药物的消除过程。

二、实验材料（一）动物：家兔，体重2.0 kg～3.0 kg。

（二）器材：10 ml试管，10 ml离心管，1 ml、2 ml、5 ml刻度吸管，1 ml、5 ml注射器，移液吸管，坐标纸，粗天平，分光光度计，离心机，计算器（Casio fx-180P），兔手术台，纱布，滤纸，（三）药品与试剂：10%三氯化铁，10%三氯醋酸，10%水杨酸钠，0.04%水杨酸钠标准液，0.1 U/L肝素溶液。

三、观察指标（一）用分光光度计，波长为510 nm 处，测定给药前及给药完毕后第1，3，5，10，20，50，80和110 min 兔血的光密度。