微生物学实验：实验六 微生物的生理生化反应
生理性生化实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应原理；2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些糖的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。
微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色物质，为甲基红反应阳性。
三、实验方法1. 吲哚试验：将细菌接种于含有色氨酸的培养基中，加入吲哚试剂，观察颜色变化。
2. 甲基红试验：将细菌接种于含有葡萄糖的培养基中，加入甲基红试剂，观察颜色变化。
四、实验结果1. 吲哚试验：接种了大肠杆菌的试管在加入乙醚和吲哚试剂后，能在乙醚和液体培养基的交界面上产生红色环状物质，大肠杆菌的吲哚试验显阳性。
2. 甲基红试验：大肠杆菌甲基红试验阳性，即大肠杆菌在培养期仍维持酸性pH。
五、实验分析1. 吲哚试验失败原因分析：可能是因为乙醚加量太少，影响实验现象的观察；另一个可能的原因是大肠杆菌菌种有问题。
2. 甲基红试验结果分析：大肠杆菌在培养后仍能维持酸性，而产气杆菌则转化为非酸性末端产物。
六、实验结论1. 通过本实验，我们了解了细菌生理生化反应原理；2. 掌握了细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 认识到生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
七、实验注意事项1. 实验过程中要严格按照操作规程进行，避免污染；2. 注意观察实验现象，记录实验数据；3. 分析实验结果，找出实验失败的原因。
第2篇一、实验目的1. 了解生理性生化实验的基本原理和方法。
2. 掌握常用的生理性生化指标及其检测方法。
3. 通过实验，学会使用生理性生化检测仪器，提高实验技能。
二、实验原理生理性生化实验是研究生物体内各种生化反应及其代谢过程的重要手段。
微生物的生理生化反应
实验六微生物的生理生化反应一、实验目的掌握细菌鉴定中主要生理生化反应的常规实验法。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体个原理如下：1、淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种两种细菌（1—枯草杆菌，5—大肠杆菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2、明胶水解试验：穿刺接种于明胶培养基中的细菌，若能产生明胶酶利用明胶，则该培养基在4摄氏度条件下会处于液体状态，从而区别于正常条件下4摄氏度时固态的明胶培养基。
3、糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
4、IMVC实验包括四个试验，主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水环境的细胞血检查。
①吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
②甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙算和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
③柠檬酸盐利用试验：有些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一的碳源，而有些细菌则不能利用。
由于细菌不断地利用柠檬酸盐并生成碳酸盐，使培养基PH由中性变为碱性，培养基中的指示剂有浅绿色变为蓝色。
④伏-普试验（乙酰甲基甲醇试验 VP）：某些细菌在代谢过程中，能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸在羧化酶的催化下脱羧后形成活性乙醛，后者与丙酮酸缩合，脱羧形成乙酰甲基甲醇，或者乙醛化合生成乙酰甲基甲醇。
实验六细菌的生理生化试验教学
02
酶活性测定是了解细菌代谢途径的重要手段。
03
在实验中，我们对该细菌的几种关键酶进行了活性测定。通过分析酶活性，我 们发现该细菌具有较高的酶活性水平，这表明该细菌具有较为活跃的代谢状态 。这些结果有助于我们进一步了解该细菌的生化特性和代谢途径。
结果总结与讨论
总结
通过对生理和生化试验结果的综合分析，我们对该细 菌的生理生化特性有了更深入的了解。这些结果不仅 有助于我们更好地认识该细菌的生长、繁殖和代谢特 点，还为进一步研究该细菌的生物学特性和应用提供 了重要的参考依据。
糖发酵试验是鉴定细菌生化特性的重要手段。
生化试验一：糖发酵试验
在糖发酵试验中，我们观察到该细菌能够利用不同的 糖类作为碳源进行发酵。通过分析不同糖类的发酵产 物，我们可以了解该细菌对不同糖类的代谢能力和发 酵特性。这些结果对于进一步了解该细菌的生化特性 具有重要的意义。
生化试验结果与分析
01
生化试验二：酶活性测定
生理试验结果与分析
生理试验二：对数生长期的代谢产物
在细菌的对数生长期，其代谢产物具有一定的特点。
在对数生长期，我们观察到该细菌产生了一些具有特殊性质的代谢产物， 这些代谢产物可能对该细菌的生长和繁殖具有重要作用。通过对这些代 谢产物的分析，我们可以更深入地了解该细菌的生理特性。
生化试验结果与分析
实验六细菌的生理生化试验 教学
contents
目录
• 实验目的与简介 • 实验材料与试剂 • 实验步骤与操作 • 实验结果与分析 • 实验结论与建议 • 参考文献与拓展阅读
生理生化 特性，了解不同细菌 在生化反应中的差异。
通过实验结果分析， 能够对细菌进行初步 鉴定。
《细菌与人类健康》
生化反应鉴定实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解生化反应在微生物鉴定中的重要性。
2. 掌握常见生化反应的原理和方法。
3. 通过实验，对给定的微生物进行鉴定。
二、实验原理生化反应是指微生物在生长过程中，通过酶的催化作用，将营养物质转化为自身所需的物质，同时产生一些代谢产物。
这些代谢产物可以用来鉴定微生物的种类。
常见的生化反应包括糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
- 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂等。
- 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等。
- 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等。
2. 仪器：- 酒精灯- 接种环- 超净工作台- 恒温培养箱- 高压灭菌锅- 试管- 移液枪- 滴管四、实验方法1. 菌种培养：将菌种接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
2. 糖发酵试验：- 将培养好的菌种接种于糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖），置于恒温培养箱中培养24小时。
- 观察培养基颜色变化，记录发酵结果。
3. 吲哚试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入吲哚试剂，观察颜色变化，记录结果。
4. 甲基红试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入甲基红试剂，观察颜色变化，记录结果。
五、实验结果与分析1. 糖发酵试验：- 大肠杆菌：发酵葡萄糖、乳糖，不发酵蔗糖。
- 金黄色葡萄球菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 枯草芽孢杆菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 变形杆菌：发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
2. 吲哚试验：- 大肠杆菌：吲哚试验阳性。
- 金黄色葡萄球菌：吲哚试验阴性。
- 枯草芽孢杆菌：吲哚试验阴性。
- 变形杆菌：吲哚试验阳性。
实验六 微生物生理生化反应观察
2.明胶水解实验：每人接种二支明胶生化 管（分别接种大肠杆菌和金黄色葡萄球 菌），20℃培养2天，从20℃取出即观察 和记录各管的明胶水解情况，得出结论。
3.尿素水解实验：每人接种两支尿素生化 管（分别接种变形杆菌和金黄色葡萄球 菌），37℃培养2天，观察和记录每管培 养前后颜色变化，得出结论。
结果观察
克氏双糖铁
乳糖 葡萄糖 硫化氢
大肠杆菌 +黄色
黄 色
-
+ 伤寒杆菌 红 黑 黄 色 色色
痢疾杆菌
红 色
黄 色
-
变形杆菌
红 色
黑 色
+
生化反应管
尿素 H2S 葡萄糖 乳糖
- - ++ +
动力
+
-+ +- +
-- +- + ++ -+
智仙也。名之者/谁？太守/自谓也。太守与客来饮/于此，饮少/辄醉，而/年又最高，故/自号曰/醉翁也。醉翁之意/不在酒，在乎/山水之间也。山水之乐，得之心/而寓之酒也。节奏划分思考“山行/六七里”
生化反应管原理（2）
糖发酵试验，细菌具有多种酶系统能分解糖类，产 酸产气。不同的细菌对各种糖类的分解不同，因而 可以利用糖发酵进行各种细菌(特别是肠道细菌)的 鉴别。
大肠杆菌能发酵乳糖、葡萄糖产酸产气。 志贺痢疾杆菌、沙门氏菌、变形杆菌不分解乳糖，
但能分解葡萄糖产酸。 宋内氏痢疾杆菌迟缓发酵乳糖产酸，能分解葡萄糖
译文的美感，培养学生的翻译兴趣，但可能会降低译文的准确性。因此，需两种翻译方式都做必要引导。全文直译内容见《我的积累本》。目标导学四：解读文段，把握文本内容1．赏析第一段，说说本文
细菌生理生化实验
细菌的生理、生化实验简介微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。
因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物检验中常用的生化反应介绍如下：一、糖酵解试验不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。
可用指示剂及发酵管检验。
试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。
接种后，置36±°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。
本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。
一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。
二、淀粉水解试验某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。
淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1°C培养24~48h，或于20℃培育5天。
然后将碘试剂直接滴浸于培育表面，假设为液体培育物，那么加数滴碘试剂于试管中。
当即检视结果，阳性反映（淀粉被分解）为琼脂培育基呈深蓝色、菌落或培育物周围显现无色透明环、或肉汤颜色无转变。
阴性反映那么无透明环或肉汤呈深蓝色。
淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。
培养基pH必须为中性或微酸性，以最适。
淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。
三：V-P试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。
实验六、细菌分解代谢系列实验
3、明胶液化试验
明胶是一种动物蛋白。明胶培养基本身低于 20℃时凝固，高于25℃则自行液化。某些细 菌能够产生蛋白酶将明胶水解成小分子物质， 因此培养后的培养基即使在低于20℃的温度 下，明胶也不再凝固，而由原来的固体状态 转化为液体状态。
三、操作步骤：
（一）淀粉水解试验：
(1)准备淀粉培养基平板：将熔化后冷却至50℃左右的淀粉培养基 倒入无菌平皿中，待凝固后制成平板。
（二）油脂水解试验：
（1）将装有油脂培养基的三角瓶置于沸水浴中 熔化，取出并充分振荡（使油脂均匀分布）， 再倾入无菌平皿中，待凝固制成平板。
（2）划线接种于同一平皿的两边(其中一种是 金黄色葡萄球菌作为对照菌)。置于37℃恒温箱 培养24h，取出后观察平板底层长菌的地方， 如出现红色斑点，即说明脂肪被水解了，此反 应为正反应。
（三）明胶液化试验：
（1）接种：用穿刺接种法接种大肠杆菌或产气肠杆菌 于明胶培养基中。
（2）培养：放20℃恒温箱中培养48h。若细菌在20℃下 不长，则应放在最适温度下培养。 （3）观察结果：观察培养基有无液化情况及液化后的 形状。 因明胶在低于20℃时凝固，高于25℃时自行液化，若 是在高于20℃下培养的细菌，观察时应放在冰浴中观 察，若明被被细菌液化，即使在低温下明胶也不会再 凝固。
二、实验原理
1、乙酰甲基甲醇试验 a、实验目的：检测细菌分解葡萄糖的代谢产物 b、原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖 产生丙酮酸，丙酮酸脱羧通过缩合和脱羧后转变 成乙酰甲基甲醇，然后被还原成2，3—丁二醇。 乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被空气中的氧气氧 化成为二乙酰，二乙酰再与蛋白胨中的精氨酸的 胍基作用生成红色化合物，此为乙酰甲级甲醇反 应。在试管中加入α—萘酚时，可促进反应出现。
实验六微生物的生理生化反应.
实验六微生物的生理生化反应一、实验目的掌握i 微生物（细菌）鉴定中主要生化反应的常规实验法二、实验原理（一）大分子物质（如淀粉、明胶）在常规条件下不被降解成小分子物质，但某些微生物细胞能分泌胞外酶，使大分子物质降解。
大分子物质在微生物分泌的胞外酶的作用下分解成小分子物质。
1. 淀粉水解实验根据淀粉遇碘变蓝的原理，向含有淀粉培养基中加入碘产生淀粉酶无色透明圈微生物细胞无淀粉酶蓝色2. 明胶水解实验产生明胶酶的，明胶培养基在4 度时成液体状微生物细胞无明胶酶时，在明胶培养基在4 度成固体状（二）糖发酵实验不同的细菌分解糖，醇的能力不同，有些细菌分解某些糖产酸并产气，有的分解糖仅产酸而不产气，因此，可根据其分解利用糖的差异作为鉴定菌种的依据之一。
在糖发酵实验中，用溴甲酚紫作为指示剂，PH6.8时为紫色，当PH< 5.2时变为黄色，若细菌分解糖产酸，则培养液由紫色变为黄色，有无气体产生，可以从德汗氏小管中观察。
（三）IMVC 实验IMVC 实验主要包括吲哚（indol test）试验、甲基红（methyl red test）试验、柠檬酸盐（citrate test）试验、伏-普（Voges-Prokauer test）试验，这四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水环境的细菌学检查甲基红试验（M.R.试验）某些细菌在糖代谢过程中，分解培养基中的糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解为甲酸，乙酸等，使培养基的PH 值降至4.5 以下。
酸的产生可由甲基红的变色来指示。
甲基红的变色范围是PH4.2-6.3，PH4.2 时为红色，PH6.3 时为黄色。
若细菌分解葡萄糖产酸量少时，则培养基PH 值在6.3以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性。
伏普试验有些细菌可以分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸通过缩合和脱羧产生乙酰甲基甲醇。
在碱性条件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，二乙酰可以与培养基中的蛋白胨中的精氨酸的胍基产生红色化合物。
环境工程微生物学实验
（1）试管编号；
（2）2只试管分别穿刺接种大肠杆菌和变形杆菌； （3）37 ℃ ，培养24h 3、柠檬酸盐利用试验
（1）试管编号；
（2）2只试管分别划线接种大肠杆菌和枯草杆菌； （3）37 ℃ ，培养24h
四、实验结果观察与记录
1、将实验结果填入下表，＋表示阳性，－表示阴性。 2、思考题：微生物生理生化反应的意义何在？
三操作步骤1微生物大小的测量1枯草杆菌标本片的制作2目镜测微尺的标定放置镜台测微尺放置目镜测微尺校正目镜测微尺计算不同放大倍数下目镜测微尺每格代表的长度3枯草杆菌大小的测量四实验报告1将目镜测微尺校正结果填入下表接物镜接物镜倍数目镜测微尺目镜测微尺每格代表的长度2在高倍镜下测量枯草杆菌大小的实验结果填入下表菌体编号长度的目镜测微尺格数宽度的目镜测微尺格数平均值菌体大小平均值m3分析实验结果一实验目的明确显微镜计数的原理
酵母菌的形态构造
线 粒 体 芽体液泡 芽 体 核 液 泡 膜 细 胞 壁 细 胞 膜
根霉（Rhizopus)
青霉（Penicillum):
曲霉(Aspergillus)
四、实验报告
1. 分析实验结果，绘制酵母菌、青霉、黑曲霉的形
态图，并注明各部位名称，。 2. 怎样才能观察到较为完整的霉菌形态，各种霉菌 制片过程中分别有哪些注意事项？
121℃,灭菌20~30min
使用时, 将培养基加热融化, 待温度降至50 ℃左右时在 100mL培养基中加入1%链霉素0.3mL
糖发酵培养基：
蛋白胨2g，葡萄糖10g， K2HPO4 0.2g, NaCl 5g, 琼脂5～6g， pH7.0～7.2 ，蒸馏水1L ， 1%溴百里酚蓝 3ml. 分装试管，每管4～5cm， 112℃,灭菌30min.
微生物生理生化反应实验报告
微生物的生理生化反应一、实验目的1.掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的测定方法。
2.了解细菌代谢类型的多样性。
3.了解细菌生长现象及代谢产物在鉴别中的意义。
4.学习接种技术。
二、实验原理在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌。
1.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气.例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。
产酸后再加入溴甲酚紫指示剂后会使溶液呈黄色，且杜氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且杜氏小管中无气体。
2.甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，培养基就会变酸，使加入培养基中的甲基红指示剂由橙黄色转变为红色，即甲基红反应。
大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
3.伏-普试验（VP）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成非酸性或中性末端产物，某些细菌产生丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇，在碱性条件下被氧化成二乙酰，二乙酰与胍基作用，生成红色化合物，为阳性。
4.靛基质（吲哚）试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测的指标。
大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。
5.硫化氢实验：某些细菌分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫酸铵亚铁等铁盐可与硫化氢反应生成不溶性硫化亚铁之黑色沉淀，为硫化氢实验阳性。
最新微生物学实验指导书
微生物学实验指导书生物技术教学部初立业编重庆邮电学院生物信息学院2003年12月30日前言一、本课程的性质和任务微生物学实验是生物学重要的基础课之一，特别是随着分子生物学的发展与拓宽，微生物学方法与技术显得尤为重要。
此外，医学、农学、林学等学科，甚至地质学、太空学等也需微生物的方法与技术。
因此，熟悉掌握微生物学方法与技术，对其它很多学科的发展有直接的影响。
无菌操作技能和无菌概念的建立是微生物学实验中最重要的内容，微生物学实验课主要任务是使学生掌握研究与应用微生物的主要方法与技术，包括经典的、常规的、以及现代的方法与技术，使学生具有适应于从事相关学科的基础理论研究与实际生产应用的微生物学实验技能。
与微生物学基础理论课紧密结合，使学生将理性知识与感性认识有机地结合，将书本知识用于实验，在实验中更深地理解基础理论，提高学生的综合能力与创新意识。
提高学生分析问题和解决问题的能力。
根据本学科的特点，逐步使学生认识微生物的基本特性，比较它们与其它生物的相似和不同之处，知道如何研究微生物以及对研究中所出现的问题点样分析，并加以解决。
二、教学要求与教学方法1.教学要求1)注重微生物学基础实验技能的掌握与提高，克服盲目追求新颖而忽视基础的倾向；2)实验课前要预习，明确每次实验的目的与基本步骤；3)在实验中要有严紧的科学态度，尊重事实与实验结果，要善于发现新现象；4)树立密切合作的风气，包括学生与老师、班与班、组与组、组长与组员之间的密配合。
2.教学方法1)以学生自己动手为主，老师在适当时间予以提示；2)对实验中所出现的一些现象多向学生提出问题，使它们学会分析结果，并与理论知识有机结合；3）根据实验的进行程度，引导学生更深入思考，逐步树立他们的创新意思；4）严格要求使操作技能规范化，老师作示范，强调其要点学生自己练。
三. 教学学时分配与安排本课程按每周3学时安排，共6个实验，总学时18。
目录实验一细菌的革兰氏染色 (3)实验二根霉、酵母菌形态结构的观察 (4)实验三培养基制备 (6)实验四灭菌与消毒 (9)实验五微生物的分离和纯化 (12)实验六微生物的生理生化反应 (14)实验七水中细菌总数的测定 (19)实验八放线菌形态的观察 (21)实验九细菌的芽胞染色 (22)实验十微生物菌种保藏 (24)实验一细菌的革兰氏染色法实验目的：1．学习并初步掌握革兰氏染色法。
实验6-微生物的生理生化反应
实验六微生物的生理生化反应1、实验目的探究菌株在碳源同化、氮源利用、乙醇发酵和抗生素效价分析等方面不同的生长特性，观察并简要分析不同微生物的生理生化特征及其形成机理。
2、实验过程简述2.1 培养基与试剂准备2.1.1碳源同化培养基准备碳源为葡萄糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、棉籽糖、蜜二糖、纤维二糖、海藻糖、松三糖、可溶性淀粉、α-甲基葡萄糖苷的YNB 培养基，放入一根杜氏管。
2.1.2氮源同化培养基准备氮源为硫酸铵，尿素，蛋白胨，硝酸钾，无氮源YNB 的固体、液体培养基。
2.1.3 乙醇发酵用种子培养基：YPD 培养基2.1.4乙醇发酵用发酵培养基葡萄糖，酵母粉，蛋白胨，尿素，磷酸二氢钾，硫酸镁，氯化钙。
2.1.5抗生素效价测定用培养基：LB 培养基2.1.6青霉素：用pH 6.0 磷酸缓冲液配制，浓度为100 mg/ml，0.22μm 孔径过滤灭菌。
2.2 微生物的碳源同化和发酵1、从菌体斜面接一环菌于1 ml 无菌水中，室温静置2 h。
2、取200 μl 菌悬液，分别转接于含杜氏管的小试管中，静置培养48 h。
3、每24 h 观察记录生长和产气情况。
4、根据实验结果判断不同菌株对不同碳源的同化或发酵。
2.3 微生物的氮源利用1、从菌体斜面接一环菌于1 ml 无菌水中，室温静置2 h。
2、取200μl 菌悬液，分别转接于上述培养基小试管中，30℃或37℃静置培养48 h。
3、各取20μl 菌悬液，分别划线于不同氮源的固体平板上，待菌液被吸收后，培养皿倒置，静置培养48 h。
4、每24 h 观察记录生长情况，48 h 测定液体培养物的OD 600。
5、根据实验结果判断不同菌株对不同氮源的利用能力或偏好性。
2.4 酵母菌的乙醇发酵1、种子液培养：将酿酒酵母从菌种斜面上接一接种环至YPD 种子培养基中，30℃，200rpm，培养18 h。
2、乙醇发酵：按照10%（v/v）的比例将培养好的种子液接入100 ml 发酵培养基中，用无菌塑料布将封口密封，30℃，静置培养，每24 h 手摇1 次，发酵3-4 d。
实验六__微生物生理生化反应观察共31页文档
6、纪律是自由的第一条件。——黑格 尔 7、纪律是集体的面貌，集体的声音， 集体的 动作， 集体的 表情， 集体的 信念。 ——马 卡连柯
8、我们现—马 克思 9、学校没有纪律便如磨坊没有水。— —夸美 纽斯
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10、一个人应该：活泼而守纪律，天 真而不 幼稚， 勇敢而 鲁莽， 倔强而 有原则 ，热情 而不冲 动，乐 观而不 盲目。 ——马 克思
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
各类微生物生化实验方式原理
各类微生物生化实验方式原理通常利用生化实验的方式，检测细菌对各类物质的代谢作用及其代谢产物，称为细菌的生化反映，经常使用于细菌的辨别。
一、糖类分解产物（1）糖发酵实验（carbohydrate fermentation test）不同种类的细菌对糖的分解利用能力不同，一样以可否分解某种糖，是不是产酸产气等现象来辨别。
例如大肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖，产酸且产气；而伤寒杆菌只分解葡萄糖产酸不产气，且不分解乳糖。
这是因为大肠杆菌分解葡萄糖等产生甲酸，经甲酸解氢酶的作用生成H2和CO2。
而伤寒杆菌无此酶，故分解葡萄糖只产酸不产气。
（2）VP实验（Voges-Proskauer test）产气杆菌将分解葡萄糖产生的两分子丙酮酸脱羧，生成一分子乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中氧气氧化，生成二乙酰，二乙酰可与培育液中含胍基的化合物（如蛋白胨中的精氨酸）反映，生成红色的化合物，此为VP实验阳性。
大肠杆菌分解葡萄糖不生成乙酰甲基甲醇，故VP实验阴性。
（3）甲基红实验（methyl red test）大肠杆菌和产气杆菌均属G-短杆菌，且都能分解葡萄糖、乳糖产酸产气，二者不易区别。
但二者所产生的酸类和总酸量不一：大肠杆菌可产生甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，而产气杆菌只产生甲酸、乙醇及乙酰甲基甲醇。
故大肠杆菌培育液PH在以下，加入甲基红指示剂呈红色，为甲基红实验阳性；产气杆菌培育液PH在以上，加入甲基红后呈桔黄色，为甲基红实验阴性。
（4）枸橼酸盐利用实验(citrate utilization test）产气杆菌在以枸橼酸盐为唯一碳源的培育基上生长，分解枸橼酸盐产生CO2，并转变成碳酸盐，使培育基由中性变成碱性，含溴麝香草酚蓝（BTB）指示剂的培育基由淡绿色变成深兰色，此为枸橼酸盐利用实验阳性。
大肠杆菌不能利用枸橼酸盐，故在此培育基上不能生长，培育基仍为绿色。
二、蛋白质及氨基酸的分解产物（1）硫化氢实验（hydrogen sulfide test）有些细菌能分解培育基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸等）产生H2S，如遇醋酸铅或硫酸亚铁，能生成黑色的硫化物，为硫化氢实验阳性。
微生物学实验201310
打开皿盖，把培养基平板暴露于空气中10min，盖好皿盖； 打开皿盖，把培养基平板暴露于空气中30min，盖好皿盖；
2. 比较洗手前后手指上微生物的区别：在培养皿底部用记号笔分四个区（A、B、C、 D区），洗手前后分别用手指在培养基表面轻按。（注意不要按碎培养基。） 盖好皿盖。 3.口气中的微生物：打开皿盖，对着培养基吹气。 4.实验台面的微生物：用灭菌棉签揩拭实验台面，再用此棉签在培养基表面滚动一 下，也可用同样方法检测你所感兴趣的其他地方或物品。显微镜的放大倍数和分辨率
1. 放大倍数=接物镜放大倍数×
接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微 镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间 的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角（即入射角）。
处理完成后，盖好皿盖，倒置培养皿，置于37℃温箱培养1-2天观察，记录实验结果。
五． 实验结果： 将实验结果记录于下表（P8）：
表1：微生物检测的结果记录表
处理方法 菌落数量 菌落特征
（大小、形状、透明 度、颜色等）
（ 1）
（ 2）
（ 3）
（ 4）
简要说明
菌落数量可用“+”和“-”来表示，从多到少依次表示为++++，+++，++，+，-
二．基本原理：
1. 显微镜直接计数法: (P52)
每一个大方格边长为1mm， 则每一大方格的面积为 1mm2，盖上盖玻片后，载 玻片与盖玻片之间的高度为 0.1mm，所以计数室的容积 为0.1mm3。
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实验结果
记录实验结果：“+”表示产酸或产气；“-”表示不产酸或 不产气。
糖照
思考题
假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现 什么结果？
三、IMViC试验
目的要求 了解IMViC反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。 实验器材 菌种
➢ 大肠杆菌，产气肠杆菌 培养基
➢ 蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，柠檬酸盐斜面培养 基
溶液或试剂 ➢ 甲基红指示剂，40%KOH，5%α-萘酚，乙醚，吲哚试剂等。
1、吲哚试验
基本原理 检测细菌代谢色氨酸产生吲哚的能力。 有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产
生吲哚和丙酮酸；吲哚和对二甲基氨基苯甲醛结合， 形成红色的玫瑰吲哚。
而有些细菌则不能利用柠檬酸盐，如大肠杆菌。细菌 在分解柠檬酸盐及培养基中的磷酸铵后，产生碱性化 合物，使培养基的pH升高，当加入1%溴麝香草酚蓝 指示剂时，培养基由绿色变为深蓝色。
操作步骤 分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌于柠檬酸盐斜面培养基 37℃培养2d 观察斜面培养基上有无细菌生长和变色 培养基变为蓝色—阳性；培养基变为绿色—阴性
实验结果
记录实验结果：“+”表示阳性反应；“-”表示阴性反应。
菌名
大肠杆菌 产气杆菌 对照
吲哚试验
IMViC试验 甲基红试验 伏-普试验 柠檬酸盐试验
思考题
讨论IMViC试验在医学检验上的意义。
解释在细菌培养中吲哚检测的化学原理，为什么 在这个试验中用吲哚的存在作为色氨酸酶活性的 指示剂，而不用丙酮酸？
橘黄色（pH6.3）变为红色（pH4.2）。
操作步骤 分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌于葡萄糖蛋白胨水培养基
37℃培养2d 加入甲基红指示剂2滴 培养基变为红色—阳性；培养基变为黄色—阴性
3、伏-普（V.P）试验
基本原理
测定细菌发酵葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能 力，如丙酮酸。
某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸， 丙酮酸缩合、脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇；乙酰甲 基甲醇在碱性条件下被氧化为二乙酰；二乙酰与蛋白 胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物，即为V·P 试验阳性。
37℃ 均 倒匀 置铺 培满 养平 24h 板
↓ 滴 入 少 量 碘 液 ，
实验结果
记录实验结果：“+”表示阳性；“-”表示阴性。
菌名
淀粉水解
枯草芽孢杆菌
大肠杆菌
普通变形杆菌
思考题
你怎样解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？ 不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？
二、糖发酵试验
目的要求
了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要 作用；
实验六 微生物的生理生化反应
实验内容
大分子物质的水解试验
淀粉水解试验
糖发酵试验
葡萄糖发酵 乳糖发酵
IMViC试验
吲哚试验 甲基红试验 伏-普试验 柠檬酸盐试验
一、大分子物质的水解试验
目的要求 证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，
从而说明不同微生物有着不同的酶系统； 掌握进行生物大分子水解试验的原理和方法。 基本原理 大分子物质淀粉、蛋白质和脂肪必须通过胞外酶水
操作步骤 分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌于葡萄糖蛋白胨水培养基
37℃培养2d 加入5-10滴40%KOH，再加入等量的5%α-萘酚，用力振荡
置于37℃温箱中保温15-30min 若培养物呈红色—伏-普反应阳性
4、柠檬酸盐试验
基本原理 检测细菌利用柠檬酸盐的能力。 有些细菌可利用柠檬酸钠作为碳源，如产气肠杆菌；
为什么大肠杆菌是甲基红反应阳性，而产气肠杆 菌为阴性？这个试验与伏-普试验最初底物与最终 产物有何异同处？为什么会出现不同？
解成较小的化合物后，才能被微生物吸收利用。
实验器材 菌种
➢枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，变形杆菌 培养基
➢固体淀粉培养基 溶液或试剂
➢卢戈氏碘液 仪器或其他用具
➢无菌平板，接种针
淀粉水解试验
枯草芽孢 杆菌
变形杆菌
大肠 杆菌
菌苔周围出现无色透明圈：说明淀粉已被水解，阳性； 透明圈大小表明胞外淀粉酶活力的高低。
操作步骤 分别接种大肠杆菌、产气肠杆菌于蛋白胨水培养基 37℃培养2d 加6-7滴乙醚，充分摇动，静置1-3min； 乙醚上升后，沿管壁徐徐加入2滴吲哚试剂 若在乙醚和培养物之间产生红色环状物——阳性反应
2、甲基红（M.R）试验
基本原理 检测细菌是否能分解葡萄糖产酸，如甲酸、乙酸、乳
酸等。 当细菌代谢糖产生酸时，培养基中的甲基红指示剂由
仪器或其他用具 ➢试管架，接种环
操作步骤 取葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试管各3支
分别接种普通变形杆菌、大肠杆菌 第3支不接种（对照,老师提供）
6支试管37℃培养24-48h
观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡产生
产酸：溴甲酚紫指示剂由紫色（pH6.8）→黄色（pH5.2）
糖发酵试验 左侧——阳性结果 右侧——阴性结果
掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
基本原理
糖类是绝大多数细菌的碳源和能源，但是，不 同种细菌对不同糖的分解性能和产物并不一致。 有些细菌能分解某种糖产酸和产气，有些细菌 只产酸不产气，有些细菌则不能分解。
实验器材 菌种
➢大肠杆菌，普通变形杆菌 培养基
➢葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试 管各3支（内装有倒置的德汉氏小管）