酪蛋白的提取

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牛奶中酪蛋白的提取

实验五牛奶中酪蛋白的提取
一、实验目的
学习从牛奶中制备酪蛋白的方法
了解从牛奶中制取酪蛋白的原理
二、实验原理
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5/100ml。

酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25~1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。

三、实验材料与仪器
纯牛奶、白醋、滤纸、被子、锅等
四、实验步骤
将250ml或200ml牛奶置于锅中，隔水水浴小火加热，不断搅拌，加热至沸腾时停止搅拌和加热。

在牛奶中加入少量盐，并慢慢加入白醋，并轻轻搅拌，观察到牛奶中开始有白色絮状沉淀出现后，停止搅拌和加醋，静置10min。

待上述悬浮液冷却至室温，用滤纸过滤，得到滤渣。

用水清洗滤渣3次，每次都过滤得滤渣。

滤渣再用白酒清洗3次，每次都过滤得滤渣。

将滤渣摊在滤纸上风干，得酪蛋白制品
称重并品尝酪蛋白制品
五、实验结果记录与分析
酪蛋白（g/100ml）=（酪蛋白（g）/200ml或250ml ）*100
得率=测得含量/理论含量*100%
酪蛋白=（13.3g/200ml）*100=6.65 g/ml
结论：闻起来有较大的奶香味和酒精味。

在过滤的过程中，粘在滤纸上跟纱布，抠不下来，所以数据应该会偏小了。

酪蛋白的提取与测定

牛乳中酪蛋白得制备与浓度测定一、实验目得1、学习从牛乳中分离酪蛋白得原理与方法２、掌握等电点沉淀法提取蛋白质得方法3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度得原理,熟悉紫外分光光度计得使用4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度二、实验原理1、准备酪蛋白原理:牛乳中主要含有酪蛋白与乳清蛋白两种蛋白质,其中酪蛋白占了牛乳蛋白质得80%、牛乳在PH４。

7时酪蛋白等电聚沉后剩余得蛋白质统称为乳清蛋白、酪蛋白就是白色、无味得物质,不溶于水、乙醇等有机溶剂,但溶于碱溶液。

乳清蛋白不同于酪蛋白,其粒子得水与能力很强,分散性高,在乳中呈高分子状态。

本法利用等电点时溶解度最低得原理,将牛乳得PH调至4。

７时,酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物,除去脂类杂质后便可得到纯得酪蛋白。

2、紫外吸收法测定蛋白质浓度得原理:大多数蛋白质由于有酷氨酸与色氨酸得存在,在紫外光280nm有吸收高峰,可以进行蛋白质含量得测定。

但就是核酸在２80nm也有吸收,干扰测定,不过核酸得最大吸收峰在２６0nm,通过测定在28０nm与260ｎｍ时Ａ得比值,然后通过计算消除核酸存在得影响,可以求得有核酸存在时蛋白质得浓度。

3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理:考马斯亮蓝能与蛋白质得疏水微区相结合,这种结合具有高敏感性。

考马斯亮蓝Ｇ250得磷酸溶液呈棕红色,最大吸收峰在465nm、当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色,其最大吸收峰改变为5９5nｍ,考马斯亮蓝G２5０—蛋白质复合物得高消光效应导致了蛋白质定量测定得高敏感度。

在一定范围内,考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后,在595nm下,吸光度与蛋白质含量呈线性关系,故可以用于蛋白质浓度得测定。

三、实验器材与试剂1、制备酪蛋白:烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、9５%乙醇、无水乙醚２、紫外光吸收法:紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿0.9％NaＣl、1ｍoｌ／LNaOH溶液、1ｍol/Ｌ乙酸溶液3、考马斯亮蓝法:紫外可见光分光光度计、试管1．5cm×１5cm(×9)、玻璃比色皿牛血清白蛋白(0.1ｍg／ｍl)、考马斯亮蓝、0。

酪蛋白提取及定量测定

实验酪蛋白提取及定量测定摘要本实验通过调节pH至酪蛋白等电点的方法，从蒙牛牛乳中提取酪蛋白并计算得率，然后分别用双缩脲和考马斯亮蓝G250染色法测定提取出的物质中酪蛋白的含量，实验的结果将在下文陈述出来。

因为提取出的酪蛋白不太纯，所以导致后面的定量测试中有一定的误差，这是要注意的。

材料与方法蒙牛牛乳酪蛋白的提取试剂的配制1 0.2 mol/L 乙酸钠缓冲液（4.6）：准确称量1.15ml的乙酸，用氢氧化钠调至pH为4.6，加水定容至1000ml。

2 95%乙醇3 乙醚4 乙醇-乙醚混合液：取乙醇，乙醚各30ml按1：1的比例混合。

5 1% 氢氧化钠：取0.1g氢氧化钠溶于10ml去离子水中方法取新鲜蒙牛牛乳100ml，放入250ml烧杯中，加热至40℃.加入100ml加热至同样温度的醋酸缓冲液，边加边摇动，并用pH计检测，调整混合液的pH4.6（用1%氢氧化钠溶液或10%醋酸溶液进行调整），冷却至室温，静置5min，然后用细沙布或滤纸过滤，收集沉淀物。

将沉淀物用少量蒸馏水洗几次，过滤。

将洗净的沉淀物悬浮在约30ml 95% 乙醇溶液中，用布氏漏斗抽滤。

所得沉淀物用无水乙醇和乙醚等量混合液洗涤两次，抽干。

最后用50ml乙醚洗一次并抽干。

取出抽干的粉状物，摊开在表面皿上，使乙醚完全挥发，干燥后得到的是酪蛋白纯品。

准确称重并计算其产量。

酪蛋白的得率=测得含量/理论含量*100% （理论含量为35g/L）结果提取出的酪蛋白净重为32.2g，为白色粉末状，中夹杂黄色块状物体。

酪蛋白得率为92%。

酪蛋白的测定双缩脲法试剂配制（1）酪蛋白溶液：5mg/mL，用0.1mol/LNaOH溶液配制；（2）双缩脲试剂:称取1.5gCuSO4和6.og酒石酸钾钠，溶于500mL水中，在搅拌下加入10%NaOH溶液300mL，用水稀释至1000mL，用棕色瓶避光保存。

方法将各管混匀后，在室温（15~25℃）下放置30min ，在波长540nn 处比色，已1号管调零点测定各管吸光度，一吸光度为纵坐标，蛋白质含量为横坐标，绘制标准曲线。

酪蛋白的提取与定性鉴定

酪蛋白的提取与定性鉴定酪蛋白的提取与定性鉴定摘要牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白含量约为35g/L，本实验以市面上出售的伊利纯牛奶为原料进行酪蛋白的提取。

酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。

利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至４.７时，酪蛋白就会沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后，便可得到较纯的酪蛋白。

利用显色反应对所提取的酪蛋白进行定性鉴定，结果发现它能与双缩脲反应生成紫红色化合物；与印三酮反应生成蓝紫色物质；与浓硝酸发生黄色反应，在碱性溶液中进一步形成深黄色的硝醌酸钠。

关键词酪蛋白提取定性鉴定双缩脲反应茚三酮反应黄色反应牛奶对人体有很多好处，可以促进心血管的健康，控制高血压，增强免疫机能，还能改善睡眠状况，对人类有很大的益处。

而牛奶的主要成分是酪蛋白，所以我们去提纯分析牛奶中酪蛋白的含量很有意义，可以此来初步判断市场销售牛奶的质量。

另外，通过对提取的酪蛋白进行定性鉴定，可以了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式，知道其与某些氨基酸的呈色反应原理，并学习常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。

1材料和方法1.1材料伊利纯牛奶（从超市购得）离心机抽滤装置（布氏漏斗）精密pH试纸电炉电子称烧杯试管移液管玻璃棒滤纸温度计药匙锥形瓶1.2酪蛋白的提取取两个锥形瓶，分别放入50mL牛奶和50mL醋酸缓冲液，在水浴锅中加热至40℃。

在搅拌下慢慢将两者混合。

用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。

将上述悬浮液冷却至室温。

离心15分钟（3000r/min），弃去上清夜，得酪蛋白粗制品。

用蒸馏水洗沉淀3次，每次离心10分钟（3000r/min），弃去上清液。

在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。

用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2 次，最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。

将沉淀摊开在表面皿上，风干；得到酪蛋白纯品。

准确称重，计算含量和得率。

含量：酪蛋白g/100mL 牛乳（g%）得率：测得含量/理论含量X100%1.3双缩脲反应取少量尿素结晶，放在干燥试管A中。

酪蛋白的提取与测定

牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定一、实验目的1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度二、实验原理1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。

牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。

酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。

乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。

本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。

2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。

但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。

3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。

考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。

当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。

在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。

三、实验器材与试剂1、制备酪蛋白：烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚2、紫外光吸收法：紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液3、考马斯亮蓝法：紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl四、实验步骤制备酪蛋白1、将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热至40℃2、将20mL牛奶加热至40℃，在搅拌下缓慢地加入20mL预热的pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3、用精密pH试纸调pH至4.7，可见溶液变为乳白色悬浮液4、待悬浮液冷却至室温，4000rpm离心5min，弃上清，得酪蛋白粗制品5、用蒸馏水洗沉淀3次，3000rpm离心5min，弃上清6、在沉淀中加入20mL95％乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤7、用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次（10ml/次），最后用乙醚洗涤沉淀2次（10ml/次），抽干8、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品9、准确称量，计算含量和得率紫外光吸收法1．取待测样品溶液置于的石英比色皿中，于分光光度计波长280nm和260nm，分别读取A280nm和A260nm，用生理盐水为比色空白对照。

从牛奶中提取酪蛋白实验报告

从牛奶中提取酪蛋白实验报告实验目的：通过牛奶中的酪蛋白提取实验，学习酪蛋白的结构、性质和提取方法，掌握酪蛋白的分离技术和纯化技术，进一步了解蛋白质的基本研究方法。

实验原理：酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质成分，它具有重要的营养和功能作用。

酪蛋白是一种具有多种构象和功能的复合蛋白质，在水溶液中可形成多种不同类型的聚集体，如微胶粒、聚集和凝胶，这些聚集类型与酪蛋白的结构和功能密切相关。

酪蛋白具有一定的疏水性，分子内具有四个疏水和一个亲水的疏水环和亲水链结构，酪蛋白还含有大量的氨基酸残基，其中包括5%左右的带电氨基酸。

牛奶中的酪蛋白可以通过离心、酸沉淀、盐析和凝胶过滤等方法进行分离和纯化。

酸沉淀法是目前常用的分离和提取方法，其原理是在酸性条件下，酪蛋白分子失去电荷平衡，发生凝固，形成凝胶状物，从而与其他物质分离。

实验步骤：1、准备工作(1) 将所有试剂和设备准备好，并洗涤干净。

(2) 将牛奶样品加热至80℃，进行杀菌处理。

2、酸沉淀法提取酪蛋白(1) 取适量的牛奶样品置于容器中，加入适量的盐酸调节至pH值为4.6，搅拌均匀。

(2) 加入同等体积的乙醇，混合均匀。

(3) 离心分离出沉淀，用纯净水洗涤数次，使沉淀中的酸性物质除去。

(4) 将沉淀转移到干燥皿，放置于低温干燥箱中干燥。

(5) 称取干燥后的酪蛋白样品重量，计算得到收率。

3、检测酪蛋白的含量和纯度(1) 构建标准曲线，按照酪蛋白样品体积一定比例浓度溶液进行稀释，分别取10μl、20μl、30μl、40μl、50μl的样品，加入PBS缓冲液中，浓度从高到低依次用Bradford 法进行检测吸光度，并通过标准曲线计算出待测样品的酪蛋白含量。

(2) 通过SDS-PAGE方法检测酪蛋白的纯度和电泳图谱。

将待测样品和已知浓度的酪蛋白标准品一同进行SDS-PAGE电泳，经过染色和脱色处理后，观察分离出的蛋白条带，利用比色、图像分析软件等工具进行定量测定，并计算出待测样品中酪蛋白的纯度和分子大小。

酪蛋白和乳蛋白素的提取流程

酪蛋白和乳蛋白素的提取流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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1. 准备原料，新鲜牛奶或脱脂牛奶。

实验四、酪蛋白的制备

3、将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。
（三）准确称重，计算含量和得率。
含量=酪蛋白g/10mL牛乳（g%）
得率=﹝测得含量/理论含量﹞X100%
式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。
五、注意事项
1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。最好用酸度计测定。
2、精制过程用乙醚是挥发性、有毒的有机溶剂，最好在通风橱内操作。
取A液1770ml，B液1230ml混合即得Ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。
4、乙醇——乙醚混合液
乙醇：乙醚=1：1（V/V）
（二）器具
1、离心机2、抽滤装置
3、精密pH试纸或酸度计4、恒温水浴箱
5、烧杯
四、操作步骤
（一）酪蛋白的粗提
10mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液10mL.用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。
3、目前市面上出售的牛奶是经加工的奶制品，不是纯净牛奶，所以计算时应按产品的相应指标计算。
六、实验报告
1、根据实际操作，以流程图形式总结酪蛋的制备方法。
2、合理分析实验所得率
七、思考题
1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？
2、试设计另一种提取酪蛋白的方法？
琼州学院实验项目卡
生物科学与技术学院生化实验室设日期_ห้องสมุดไป่ตู้_年__月__日
实验项目
酪蛋白的制备
面向专业
课程性质
1、必修
2、选修
实验类型
1、还未开设的新实验
2、手段更新的实验
3、已开设过的实验
本实验学时数
4
实验分组概况
所用主要仪器

从奶粉中分离酪蛋白的原理

从奶粉中分离酪蛋白的原理
从奶粉中分离酪蛋白的主要原理是通过酪蛋白在特定条件下的溶解和沉淀。

下面是一种常见的分离方法：
1. 将奶粉溶解在适量的水中，使其充分溶解成悬浮液。

2. 调节溶液的酸碱度，使其达到酪蛋白的最佳溶解条件。

通常使用酸性条件，如加入适量的醋酸或盐酸。

3. 在溶解后的奶粉悬浮液中加入酪蛋白沉淀剂，例如酒石酸或乙酰巴豆酸钠。

这些沉淀剂能与酪蛋白形成复合物，并促使酪蛋白沉淀。

4. 搅拌溶液，使沉淀剂与酪蛋白充分反应。

5. 离心沉淀液，使酪蛋白沉淀到底部。

6. 倒掉上清液，得到含有酪蛋白的沉淀物。

7. 用适量的清洁水洗涤沉淀物，以去除掉一部分杂质。

8. 继续离心，除去多余的水分。

9. 最后得到纯净的酪蛋白沉淀物，可以用于进一步的分析或加工。

从牛奶中提取酪蛋白[必读]

实验二从牛奶中提取酪蛋白一、实验目的要求1.学习从牛乳中制备酪蛋白的方法。

2.了解从牛奶中制取酪蛋白的原理。

二、实验原理牛乳中的主要蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/100ml。

酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25-1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。

三、原料与器材鲜牛奶、恒温水浴锅、台式离心机、抽滤装置。

四、试剂1.95%乙醇2.无水乙醚3.0.2mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液A液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取NaAc.3H2O54.44g，定容至2000ml。

B液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取优级纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g，定容至1000ml。

取A液1770ml与B液1230ml混合即得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。

4.乙醇-乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（体积比）。

五、操作步骤1.将5ml牛奶置试管或小烧杯中，在水浴中加热至40℃，在搅拌下漫漫加入预热至40℃（应注意两种液体都应先预热至40℃再用），pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液5ml，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7(用1%NaOH或10%醋酸溶液进行调整)。

观察牛奶开始有絮状沉淀出现后，保温一定时间使沉淀完全。

将上述悬浮液冷却至室温。

离心分离8min（8000r/min）或15min（2000r/min），弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。

2.用蒸馏水洗涤沉淀3次（洗涤时将沉淀颗粒用干净吸管吹开或用毛细管的封闭一端搅开，充分洗涤），离心5min（12000r/min）或10min（3000r/min），弃去上清液。

3.在沉淀中加入3ml95%的乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。

用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次，最后用乙醚洗涤沉淀2次，抽干。

酪蛋白的提取流程

酪蛋白的提取流程如下：
1.调节温度。

在浸泡时要结合气候、季节来调节温度，避免时间
过长而使之变质，一般需在10℃到16℃的水中浸泡24小时左
右。

2.加酸使酪蛋白凝固。

把浓盐酸稀释约2倍容量左右，在不断的
搅拌下，缓慢地加入到豆浆中去，直到PH值达到4.6，酪蛋白
凝固沉淀。

当沉淀的酪蛋白颗粒用手捏具有良好的弹性时，即
可认为酪蛋白沉淀完成。

3.排出液体、洗涤脱水。

从贮罐中排出上部清液，加入温水，短
时搅拌洗涤凝块，静止一段时间，凝块沉降之后排出上部清液，再用冷水洗涤。

然后放入离心机中脱水，使酪蛋白的水份含量
约为4.5到5.5。

4.干燥。

脱水后的酪蛋白颗粒大小不均，需经粉碎后，放入干燥
器内进行干燥。

热空气温度不宜过高，以防止焦化，一般控制
在100℃以下。

干燥至酪蛋白水份在10%以下即可。

牛奶中酪蛋白的提取 (1)_19090

牛奶中酪蛋白的分离
一、引言
牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。

酪蛋白在乳中是以酪蛋白酸钙-磷酸钙复合体胶粒存在，胶粒直径约为20～800纳米，平均为100纳米。

在酸或凝乳酶的作用下酪蛋白会沉淀，加工后可制得干酪或干酪素。

本实验利用加酸，当达到酪蛋白等电点PH=4.7-4.8时，酪蛋白沉淀。

二、实验材料和试剂
1.脱脂乳或脱脂奶粉。

2.器材：（1）台式离心机；（2）精密pH试纸或酸度计；（4）表面皿；（5）纱布或滤纸；（6）毛细管或细口吸管；（7）离心管（10mL，或与离心机配套）若干，本实验中用10mL离心管约5个/小组。

三、实验步骤
1. 从牛奶中分离酪蛋白
在烧杯中加入2g脱脂奶粉（纯牛奶水分含量87-88%），再加入40℃，PH=4.7的醋酸-醋酸钠缓冲溶液(0.2mol/L或1mol/L)，用PH精密试纸检验液体的PH值，调至PH4.8。

静置冷却至室温，倾去上层清液，剩下的悬浮液分别装入两支离心试管中，用转速为3000转/分离心分离3～5分钟，倾出上层清液，（合并于上一清液中），得酪蛋白粗品。

2. 酪蛋白含量的测定
离心管中加入5mL蒸馏水，用玻棒充分搅拌，洗涤除去其中的水溶性杂质（如乳清蛋白，乳糖以及残留的缓冲溶液），离心后弃去上层液，再用蒸馏水洗一次。

于试管中加入5mL95%乙醇，充分搅拌，离心后弃去乙醇溶液，用乙醇洗涤主要是除去磷脂类物质。

最后再用5mL 乙醚以同样方法洗涤，以除去脂肪类物质。

将酪蛋白沉淀物凉干，称重、并计算得率（酪蛋白约占牛奶蛋白80%）。

从牛奶中分离酪蛋白(实验原理及步骤)

从牛奶中分离酪蛋白
实验原理
牛奶中含丰富的蛋白质，其中主要是酪蛋白。

蛋白质在其等电点PI溶液中溶解度最低。

据此原理，将牛奶的PH调至 4.7，即酪蛋白的等电点时，酪蛋白即沉淀出来。

酪蛋白不溶于乙醇和乙醚，利用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的磷脂类物质脂肪，用乙醚除去脂肪类物质，得到纯的酪蛋白。

实验步骤
1. 将100 mL牛奶和100 mL pH为4.7的乙酸-乙酸钠缓冲溶液加热至40-45℃，在搅拌下将缓冲溶液慢慢加至牛奶中，直到pH值达到4.7，可用精密pH试纸检查，此过程应保持温度在40-45℃。

将上述悬浊液冷却至室温，离心15min(3000r/min),弃去上层清液，得酪蛋白粗制品。

2. 向沉淀中加入10mL蒸馏水，用玻璃棒将沉淀充分搅匀，离心10 min(3000r/min)，弃去上层清液。

重复此过程一次。

3. 在沉淀中加入20mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。

用乙醇-乙醚混合液（乙醇:乙醚=1:1 V/V）洗涤沉淀2次（每次加洗涤液10 mL，加洗涤液时将抽气系统断开）抽干，最后用乙醚洗涤沉淀2次，抽干。

4. 将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品。

准确称重，计算含量。

酪蛋白制作实验报告

一、实验目的1. 了解酪蛋白的来源和性质。

2. 掌握从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。

3. 熟悉等电点沉淀法提取蛋白质的实验操作。

二、实验原理酪蛋白是牛奶中主要的蛋白质，含量约为35g/L。

酪蛋白是一种含磷蛋白质的混合物，其等电点为4.7。

在等电点时，酪蛋白的溶解度最低，容易从溶液中沉淀出来。

通过调节牛奶的pH值至酪蛋白的等电点，使酪蛋白沉淀，然后进行离心、洗涤、干燥等步骤，可以得到纯酪蛋白。

三、实验材料与试剂1. 材料：新鲜牛奶2. 试剂：95%乙醇、无水乙醚、0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液3. 器具：离心机、抽滤装置、精密pH试纸或酸度计、电炉、烧杯、温度计四、实验步骤1. 酪蛋白粗提（1）取100mL新鲜牛奶，加热至40℃。

（2）在搅拌下，缓慢加入预热至40℃的0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液100mL。

（3）用精密pH试纸或酸度计调节pH值至4.7。

（4）将混合液冷却至室温，离心15分钟。

（5）弃去清液，得到酪蛋白粗制品。

2. 酪蛋白纯化（1）用水洗涤沉淀3次，离心10分钟，弃去上清液。

（2）在沉淀中加入30mL 95%乙醇，搅拌。

（3）将悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。

（4）用乙醇-乙醚混合液清洗沉淀2次。

（5）最后用乙醚清洗沉淀2次，抽干。

五、实验结果与分析通过上述实验步骤，成功从牛奶中提取了酪蛋白。

实验过程中，观察到以下现象：1. 当pH值调节至4.7时，酪蛋白开始沉淀。

2. 经过离心、洗涤、干燥等步骤，得到纯酪蛋白。

六、实验结论1. 本实验成功从牛奶中提取了酪蛋白，证明了等电点沉淀法提取蛋白质的可行性。

2. 通过实验，掌握了酪蛋白的制备原理和实验操作方法。

3. 酪蛋白是一种重要的蛋白质资源，具有广泛的应用前景。

七、实验注意事项1. 在实验过程中，注意保持实验环境的清洁，避免污染。

2. 调节pH值时，应缓慢加入酸碱溶液，避免剧烈反应。

3. 离心速度不宜过快，以免损坏离心机。

酪蛋白提取及定量测定

因为提取出的酪蛋白不太纯，所以导致后面的定量测试中有一定的误差，这是要注意的。

材料与方法蒙牛牛乳酪蛋白的提取试剂的配制1 0.2 mol/L 乙酸钠缓冲液（4.6）：准确称量1.15ml的乙酸，用氢氧化钠调至pH为4.6，加水定容至1000ml。

2 95%乙醇3 乙醚4 乙醇-乙醚混合液：取乙醇，乙醚各30ml按1：1的比例混合。

将沉淀物用少量蒸馏水洗几次，过滤。

将洗净的沉淀物悬浮在约30ml 95% 乙醇溶液中，用布氏漏斗抽滤。

所得沉淀物用无水乙醇和乙醚等量混合液洗涤两次，抽干。

最后用50ml乙醚洗一次并抽干。

取出抽干的粉状物，摊开在表面皿上，使乙醚完全挥发，干燥后得到的是酪蛋白纯品。

准确称重并计算其产量。

酪蛋白的得率=测得含量/理论含量*100% （理论含量为35g/L）结果提取出的酪蛋白净重为32.2g，为白色粉末状，中夹杂黄色块状物体。

酪蛋白得率为92%。

实验4酪蛋白的制

• 4. 沉淀中加入6ml 乙醚——搅拌——然后将滤纸称重，记录重量 m ——再用滤纸过滤——滤纸上留下的即为纯品酪蛋白
• 5. 将滤纸上的酪蛋白自然风干一个星期——然后称重,记录重量M
• 6. 计算得率：
酪蛋白得率 g = ( M – m ) / 35 ×100%
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• 3. 离心清洗去杂过程： • ① 往离心管沉淀中倒入 10ml 的 DW——用玻璃
棒搅拌——盖上盖子，再离心 5min,v=5000—— 弃去上清液
• ② 沉淀中加入6ml 乙醇——搅拌均匀——盖上盖子，离心 5min,v=5000——弃去上清液
• ③沉淀中加入6ml 乙醇-乙醚混合液——搅拌均匀——盖上盖子，离心 5min,v=5000——弃去上清液
二实验步骤
• 1. 用量筒取蒙牛纯牛奶35ml——倒入锥形瓶中—— 在水浴锅中加热到40℃——然后缓慢加入醋酸缓冲液35ml,同时用玻璃棒搅拌—— 然后用精密pH试纸测验pH值，看是否在4.7左右——若未到再加入醋酸缓冲液，直到pH在4.7左右
• 2. 然后拿出锥形瓶冷却——将牛奶液倒入大离心管中，盖好盖子——离心15min,v=5000——弃去上清液——沉淀即为粗酪蛋白

酪蛋白的提取

酪蛋⽩的提取⼀、实验⽬的1、掌握⼀种提取蛋⽩的⽅法。

2、掌握⼀种检测⽜乳质量的⽅法。

⼆、实验原理酪蛋⽩是乳蛋⽩质中最丰富的⼀类蛋⽩质，约占乳蛋⽩的80~82%，酪蛋⽩不是单⼀的蛋⽩质，是⼀类含磷的复合蛋⽩质混合物，以⼀磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。

它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。

它在⽜乳中的含量约为35g/L，⽐较稳定，利⽤这⼀性质，可以检测⽜乳中是否掺假。

酪蛋⽩在其等电点时由于静电荷为零，同种电荷间的排斥作⽤消失，溶解度很低，利⽤这⼀性质，经⽜乳调到pH4.6，酪蛋⽩就从⽜乳中分离出来。

酪蛋⽩不溶于⼄醇，这个性质被利⽤来从酪蛋⽩粗制剂中将脂类杂质除去。

三、仪器和试剂仪器：温度计、布⽒漏⽃、pH 试纸、抽滤瓶、电炉、烧杯、量筒、表⾯⽫、天平等。

试剂：1. 95%⼄醇、⼄醚2. pH4.6⼄酸钠缓冲液0.2mol/L3. ⼄醇、⼄醚混合液：⼄醇∶⼄醚=1∶1（体积⽐）4. 市售⽜乳四、实验步骤1.酪蛋⽩等电点沉淀将100ml⽜乳放到500ml烧杯中，加热⾄40℃左右的⼄酸钠缓冲液，直到pH达4.6左右，⽤pH试纸或酸度计调试。

将上述悬浮液冷却⾄室温，然后放置5min，⽤细布过滤，收集沉淀。

2.除脂类杂质将上述沉淀⽤少量⽔洗数次，然后悬浮于30ml95%的⼄醇中。

将此悬浮液倾于布⽒漏⽃中，抽滤除去⼄醇溶液，再倒⼊⼄醇—⼄醚混合液洗涤沉淀两次，最后再⽤⼀⽶洗涤沉淀两次，抽⼲。

将沉淀从布⽒漏⽃中移去，在表⾯⽫上摊开以除去⼄醚，⼲燥后得到的是酪蛋⽩纯品。

准确称重后，计算出每100ml⽜乳所制备出的酪蛋⽩数量（g%），并与理论产量（3.5g%）相⽐较，求出实际获得百分率。

⼀、实验⽬的酶是植物体内具有催化作⽤的蛋⽩质，植物体内的⽣化反应，⼀般都是在酶的作⽤下进⾏的，没有酶的催化反应，植物的⽣命也就停⽌了，因此对酶的研究是阐明⽣命现象本质中⼗分重要的部分。

为要研究酶⾸先要将酶从组织中提取出来，加以分离、纯化，不同的研究⽬的对酶制剂的纯度要求也不相同，有些⼯作只需要粗的酶制剂即可，⽽有些⼯作则要求较纯的酶制剂，需根据不同情况区别对待。