培养基适用性检查记录
微生物培养基适用性检查
培养基适用性检查▪计数实验的培养基适用性➢该部分内容均为新增➢规定了该内容的应用范围➢采用标准菌种计数，回收率以及形态比较的判定方法➢标准菌种为：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉；规定了稀释后的工作菌液的保存条件和保存期限➢引入了对照培养基的概念➢判定的依据：回收率大于70％，且形态一致▪控制菌检查的培养基适用性➢该部分内容均为新增➢规定了该部分内容的应用范围以及检查的项目➢采用标准菌种比较的判定方法➢根据培养基的用途不同，分为增菌培养基的促生长能力、固体培养基的促生长能力、培养基的抑制能力、固体培养基的指示能力、液体培养基的指示能力等5种检查方法➢在检查中引入了涂布接种的概念1.概述培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节。
计数测定用培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素，控制菌检查用培养基也可能由于其促生长能力、指示能力、抑制能力的差异，从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，影响结果判断的客观性。
培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价拍段检验用培养基是否符合检验要求。
微生物限度检查用培养基主要分为细菌、霉菌及酵母菌计数测定用培养基和控制菌检查用培养基两部分。
2010《版中国药典》微生物限度检查法中收载了“适用性检查”对培养基质量进行控制。
2、培养基适用性检查实验的一般要求培养基适用性检查适用范围2010版《中国药典》规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
培养基使用性检查试验可用于确定实验室所用培养基(包括购置的不同批号的成品培养基、不同批号的脱水培养基干粉、按处方自行配制培养基不同批次的原材料等)、制备程序（包括水质控制、配制方法、灭菌程序等）、保存条件（温度、湿度、时间及盛装培养基的容器条件等）等是否满足微生物限度检查用要求。
即上述影响培养基质量的各关键控制点应通过培养基使用性检查试验确定，如果任一控制点发生变化应重新进行培养基适用性检查。
硫乙醇酸盐流体培养基适用性检查记录-年回收
培养基名称
硫乙醇酸盐流体培养基
来源
批号
培养基名称
硫乙醇酸盐流体培养基
来源
中国食品药品鉴定研究院
批号
检验依据
2015年版《中国药典》及《培养基适用性检查标准操作规程》
检验日期
至
报告日期
培养箱型号
培养箱编号
稀释液
□0.9%无菌氯化钠溶液；
稀释液配制批号
□pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
11
12
13
14
□符合规定 □不符合规定
标准
若培养基无菌生长，则该培养基无菌性检查符合规定。
“+”代表：有菌生长，“—”代表：无菌生长。
3.2、灵敏度检查
培养温度：℃
培养时间：至
菌种名称
培养基
培养时间（天）
是否符合规定
1
2
3
金黄色葡萄球菌
管1
□符合规定 □不符合规定
管2
铜绿假单胞菌
管1
□符合规定 □不符合规定
胰酪大豆胨液体培养基配制批号
硫乙醇酸盐流体培养基配制批号
菌种
金黄色葡萄球菌
实验室编号
菌种
铜绿假单胞菌
实验室编号
菌种
生孢梭菌
实验室编号
检验方法：
1、无菌性检查：每批硫乙醇酸盐流体培养基（FTM）随机取不少于5支（瓶），置于30℃~35℃培养14天；应无菌生长。
2、灵敏度检查:
2.1、菌液制备：用接菌环分别挑斜面培养基上的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的单菌落，接种于胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24小时；取上述培养物用稀释液10倍递增稀释,制成不大于100cfu的菌悬液。将生孢梭菌接种于硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；取上述培养物用稀释液10倍递增稀释,制成不大于100cfu的菌悬液。
控制菌检查培养基适用性检查记录表
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控制菌检查培养基适用性检查记录
一、 菌液制备（需要的菌种在□内划“√” ）：
□（1）大肠埃希菌新鲜肉汤培养物1ml ，9ml0.9%无菌NaCl 溶液，10倍递增稀释； □（2）金黄色葡萄球菌新鲜肉汤培养物1ml ，9ml0.9%无菌NaCl 溶液，10倍递增稀释； □（3）乙型副伤寒沙门菌新鲜肉汤培养物1ml ，9ml0.9%无菌NaCl 溶液，10倍递增稀释； □（4）铜绿假单胞菌新鲜肉汤培养物1ml ，9ml0.9%无菌NaCl 溶液，10倍递增稀释； □（5）生孢梭菌新鲜硫乙醇酸盐流体培养物1ml ，9ml0.9%无菌NaCl 溶液，10倍递增稀释；
二、每ml 菌液含菌量的计数测定。
测定方法：取稀释后的菌液1ml （剩余的菌液冷藏保存）,置直径90mm 的无菌平皿中，注入15-20ml 已经过适用性检查确正的温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基（细菌类别计数选用该培养基）或玫瑰红钠琼脂培养基（霉菌、酵母菌类别计数选用该培养基），混匀，凝固，倒置培养。
每稀释级每种培养基至少制备2个平板。
细菌类别培养温度为30℃～35℃；霉菌、酵母菌类别培养温度为23℃～28℃。
细菌类别培养3天，霉菌、酵母菌类别培养5天。
计数培养基适用性检查 (2)
编号：SOP-VM-02-039版本号：00陕西同康药业有限公司微生物限度检查用培养基适用性检查方案陕西同康药业有限公司非无菌产品微生物限度检查用培养基适用性检查方案1 制定依据《中华人民共和国药典》2015年版，非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、控制菌检查法，纯化水、注射用水微生物限度检查法。
2 目的为保证微生物限度检查结果的正确性，供试品微生物检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
3 适用范围微生物计数法用胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基；控制菌（大肠埃希菌）检查用麦康凯液体培养基、麦康凯琼脂培养基；控制菌（沙门菌）检查用RV沙门菌增菌液体培养基、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基和三糖铁琼脂培养基；纯化水、注射用水微生物限度检查用R2A培养基适用性试验。
4 职责质量管理处QC主管对本方案的实施负责。
5 正文6 计数用培养基适用性检查6.1 菌种及菌液的制备6.1.1 菌种金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26 003]铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10 104]枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 503]白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98 001]黒曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98 003]上述标准菌株均来自中国医学细菌保藏管理中心，工作用菌株为第3代。
6.1.2菌液的制备取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌，接种至胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度35℃，培养时间18小时；用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每1ml不大于100cfu。
取白色念珠菌，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度25℃，培养3天，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每1ml不大于100cfu的菌悬液。
取黒曲霉，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度25℃，培养5天，加入5ml 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
培养基适用性检查记录A
培养基适用性检查记录A一、引言培养基的适用性检查是指通过相关试验和分析，对培养基的成分、性质和质量进行评估，以确认其适用性和可靠性。
本报告记录了对培养基A 的适用性检查结果。
二、试验目的本次检查的目的是评估培养基A在不同温度、pH值和气氛条件下的生长性能，以确定其适用范围和最佳条件。
三、试验设备和材料1.培养基A：按照制备方法配制得到的培养基。
2.培养皿：用于培养细菌的培养皿。
3.细菌菌种：选择一种常见的细菌菌种作为试验菌种。
4.灭菌器：用于培养基和培养器具的灭菌处理。
5.恒温培养箱：用于控制培养温度。
6.pH计：用于测量培养基的pH值。
四、试验方法1.培养基质量检查：对培养基进行外观检查，观察是否存在悬浮物、沉淀物或变色等异常情况。
2.培养基成分测试：对培养基进行化学分析，检测关键成分的含量是否符合规定标准。
3.温度适应性试验：将培养基A分装至多个培养皿中，接种细菌菌种后，在不同温度条件下培养一段时间，观察细菌的生长情况。
4.pH适应性试验：将培养基A分装至多个培养皿中，调整pH值到不同水平，接种细菌菌种后，在恒温培养箱中培养一段时间，观察细菌的生长情况。
5.气氛适应性试验：将培养基A分装至多个培养皿中，分别置于不同的气氛条件下，接种细菌菌种后，在恒温培养箱中培养一段时间，观察细菌的生长情况。
五、试验结果与分析1.培养基质量检查结果显示，培养基A外观正常，无悬浮物、沉淀物或变色等异常情况。
2.培养基成分测试结果显示，培养基A关键成分的含量符合规定标准，满足培养需求。
3.温度适应性试验结果显示，培养基A在不同温度条件下均能支持细菌的生长，生长速度和菌落数量与温度呈正相关关系。
4.pH适应性试验结果显示，培养基A在pH值在6~8范围内能够支持细菌的生长，菌落数量在不同pH值条件下有所差异，但均能生长。
5.气氛适应性试验结果显示，培养基A在不同气氛条件下均能支持细菌的生长，但生长速度和菌落数量会受到气氛条件的影响。
培养基适用性检查报告
培养基适用性检查报告1. 试验目的：对培养基性能的质量控制，以保证微生物检验的质量。
2. 适用范围：适用于细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基和控制菌检查用的培养基的适用性检查。
需检查的培养基包括成品培养基、由脱水培养基和按处方配制的培养基。
3. 试验内容：3.1 .计数培养基的适用性检查3.1.1. 菌种：大肠埃希菌[CMCC( B)44102]金黄色葡萄球菌[CMCC( B)26003]枯草芽抱菌[CMCC( B)63501]白色念珠菌[CMCC (F) 98001]黑曲霉[CMCC ( F) 98003]接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或琼脂斜面培养基中，33C培养24小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂斜面培养基中，26C培养48小时。
上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50〜100cfu的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，26C培养7天，加入4ml含0.05% ( ml/ml )聚山梨酯80的0.9%的无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。
然后，用管口带有薄的无菌棉花吸出抱子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50〜100cfu的菌悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在 2~8C ，可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2~8C ，在验证过的贮存期内使用。
3.1.3.适应性检查3.1.3.1.细菌计数用培养基适应性检查取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml (50〜100cfu ),分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备 2个平皿，混匀，凝固，置33C 培养48小时，计数。
用被检培养基和对照培养基(若无对照培养基可用其他厂家生产的培养 基)按上述方法进行试验，并记录。
试验结果报告见表 1。
药典增补本 培养基适用性检查(限度)
菌种→沙氏葡萄糖琼脂或马铃薯葡萄糖琼脂(20～25℃/5～7天)→加入3～5ml含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱→吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
适用性检查
胰酪大豆胨琼脂
培养基适用性检查（限度）
菌悬液制备
金黄色葡萄球菌
菌种→胰酪大豆胨琼脂或胰酪大豆胨肉汤(30～35℃/18～24小时)→用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
菌种→沙氏葡萄糖琼脂或沙氏葡萄糖肉汤(20～25℃/ 2～3天)→用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液
白色念珠菌
黑曲霉
加入菌悬液(≤100cfu)→培养(20～25℃/不超过5天)
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
加入菌悬液(≤100cfu)→培养(30～35℃/不超过3天)
白色念珠菌
黑曲霉
加入菌悬液(≤100cfu)→培养(30～35℃/不超过5天)Fra bibliotek胰酪大豆胨肉汤
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
加入菌悬液(≤100cfu)→培养(30～35℃/不超过3天)
沙氏葡萄糖琼脂
2010大肠菌群检查用培养基适用性检查记录
表：2.1—056 大肠菌群检查用培养基适用性检查记录1、适用范围：成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
2、验证目的：培养基适用性检查试验目的是为了确定实验室所使用培养基、制备程序、保存条件等是否满足微生物限度检查用要求。
3、参照标准：《中国药典》2010年版、《中国药品检验标准操作规范》2010年版6、实验操作6.1、乳糖胆盐发酵培养基：新鲜配制10ml/支的对照胆盐乳糖培养基，121℃灭菌15min，备用。
取5支，分别接种大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌，各2支，接种菌液1ml（不大于100cfu），另一支不接种菌作为空白对照；被检培养基同法操作。
置30～35℃，培养18h、24h，分别观察结果。
6.2、乳糖发酵培养基：新鲜配制10ml/支的对照乳糖发酵培养基，121℃灭菌15min，备用。
取3支，接种大肠埃希菌2支，接种菌液1ml（不大于100cfu），另一支不接种菌作为空白对照；被检培养基同法操作。
置30～35℃，培养18h、24h，分别观察结果。
6.3、曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB）：新鲜配制对照EMB琼脂培养基，121℃灭菌15min，冷却至60℃倾注平皿，35℃培养箱预培8h后备用。
取5个无菌EMB琼脂平板，分别涂布接种大肠埃希菌和乙型副伤寒沙门菌各2皿，接种菌液0.1ml（含菌50～100cfu），另一平板不接种菌作为空白对照，涂布均匀后于30～35℃倒置培养。
被检培养基同法操作。
18h、24h分别观察结果。
6.4、麦康凯琼脂培养基：新鲜配制对照麦康凯琼脂培养基，121℃灭菌15min，冷却至60℃倾注平皿，35℃培养箱预培8h后备用。
取5个无菌麦康凯琼脂平板，分别涂布接种大肠埃希菌和乙型副伤寒沙门菌各2皿，接种液0.1ml（含菌50～100cfu），另一平板不接种作为空白对照，涂布均匀后于30～35℃倒置培养。
被检培养基同法操作。
18h、24h分别观察结果。
微生物计数培养基适用性检查记录
微生物计数培养基适用性检查记录1、适用范围：成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
2、验证目的：培养基适用性检查试验目的是为了确定实验室所使用培养基、制备程序、保存条件等是否满足微生物限度检查用要求。
3、参照标准：《中国药典》2010年版、《中国药品检验标准操作规范》2010年版4、验证项目：营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基和酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基6、培养基制备：按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养基）、玫瑰红钠琼脂（被检培养基和对照培养基）和酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（被检培养基和对照培养基），灭菌后备用。
7、计数用培养基适用性检查试验用菌株大肠埃希菌（Escherichia coli）［CMCC（B）44102］金黄色葡萄球菌（StapHylococcus aureus）［CMCC（B）26003］枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ) ［CMCC（B）63501］白色念珠菌(Candida albicans) [CMCC(F) 98001]黑曲霉菌(Aspergillus niger ) [CMCC(F) 98003]8、菌液制备8.1、取经30-35℃培养18-24h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤新鲜培养物1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍递增稀释至10-6–10-8，约为50-100cfu/ml的菌悬液备用。
8.2取经23-28℃培养24-48h的白色念珠菌的改良马丁液体培养物1ml, 加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍递增稀释至10-5–10-8，约为50-100cfu/ml的菌悬液备用。
8.3、取经25℃培养一周的黑曲霉斜面培养物，加0.9%无菌氯化钠溶液10ml，将孢子洗脱，然户，吸出孢子悬液，用垫有脱脂棉的漏斗（湿热灭菌）过滤，除去菌丝，收集菌液至另一无菌试管内作为菌原液，取此菌原液0.1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9.0ml，稀释至10-5–10-8，每1ml约含孢子数小于100cfu的孢子悬液备用。
无菌检查用培养基适用性检查记录
□中国药品生物制品检定所□其他：
检验依据：版
仪器名称：生化培养箱型号：编号：
仪器名称: 超净工作台型号：编号:
二、检验方法
1.培养基的无菌性检查
每批培养基随机取不少于5支，培养14天, 逐日观察结果。
2.培养基的灵敏度检查
2.培养基的灵敏度检查
□硫乙醇酸盐流体培养基：取每管装量为12的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照。
于30～35℃培养3天，逐日观察结果。
□胰酪大豆胨液体培养基：取每管装量为9的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于100的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲菌各2支，另1支不接种作为空白对照。
于20～25℃培养5天，逐日观察结果。
三、检验结果
□培养基的无菌性检查
检验者：日期：复核者：日期：
□培养基的灵敏度检查
注：“+”为生长，“-”为不生长，“”为生长良好
检验者：日期：复核者：日期：
四、结论
本品照《无菌检查用培养基适用性检查操作规程》（00434）检查，结果：
□符合规定□不符合规定。
细菌用计数用培养基的适用性检查
细菌用计数用培养基的适用性检查
1. 菌液制备
接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，培养18～24小时。
上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。
2．适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
3、检查结果
细菌培养温度____℃ 3天培养时间：
70%，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。
判该培养基的适用性检查符合规定。
4结论：
按《中华人民共和国药典2010年版（二部）》附录微生物限度检查法计数培养基的适用性检查，结果_______________。
检验人：复核人：。
培养基适用性检查验证方案
编号: AB/06-31-B培养基适用性验证方案计数培养基****药厂有限公司标题培养基适用性验证方案编号AB/06-31-B页码共5页、第1页执行200 年月日颁发部门GMP综合办公室分发部门行政管理办公室分发数起草人起草日期审核人审核日期批准人批准日期目录1. 概述 (2)2. 验证目的 (2)3. 验证的范围 (2)4. 验证人员及职责 (2)5. 验证程序和方法 (2)6. 验证可接受的标准 (3)7. 验证步骤 (3)8. 结果分析及评价： (4)9. 验证报告 (5)10. 建议 (5)11. 最准批准 (5)12. 所使用的记录 (6)1. 验证目的：细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。
本次验证的目的是确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。
2. 参照标准：2010版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。
3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查。
4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。
4.2.2认真观察并做好验证原始记录。
4.2.3对实施验证的结果负责。
4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。
4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。
4.3.1.3负责验证方案的批准工作。
4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。
4.3.1.5负责验证报告的批准工作。
4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。
4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。
4.3.2.3负责验证方案的实施。
4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。
4.3.2.5参与验证结果的评价工作。
4.3.3质量部职责4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。
4.3.3.2负责验证方案的审核工作。
4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。
R2A培养基适用性检查方案
批准页1. 验证目的2. 参照标准3. 验证工程4. 验证人员及职责5. 判定标准6. 实验材料7. 菌液制备8. 菌液计数9. 适用性检查10. 阴性对照附件1.检测记录1.验证目的纯化水微生物计数用的培养基应进展培养基的适用性检查。
本次验证的目的是确认R2A培养基适合纯化水中总需氧菌总数测定。
2. 参照标准2015版中国药典二部1105微生物限度检查法。
3. 验证工程R2A培养基的适用性检查。
4. 验证小组人员及职责：4.1 验证小组人员:4.2 验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。
4.2.2认真观察并做好验证原始记录。
4.2.3对实施验证的结果负责。
4.3 验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总方案，负责全公司验证工作的管理4.3.1.2确定验证工程及验证工程负责人。
4.3.1.3负责验证方案的批准工作。
4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。
4.3.1.5负责验证报告的批准工作。
4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。
4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。
4.3.2.3负责验证方案的实施。
4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。
4.3.2.5参与验证结果的评价工作。
4.3.3质量部职责4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。
4.3.3.2负责验证方案的审核工作。
4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。
4.3.3.4负责检验仪器及检验方法的验证。
4.3.3.5负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。
4.3.3.6负责对验证人员的培训、考核工作。
4.3.3.7负责验证资料和报告的审核工作。
4.3.3.8负责验证文件回收、归档管理工作。
5. 判定标准被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2的围，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。
控制菌检查用培养基适用性检查记录
一、菌液制备：
培养基名称：
检查项目：需做的检查在口内划“√”。
培养箱编号：培养温度：
口1.增菌培养基促生长能力检查
分别接种不大于100cfu的试验菌于被检查培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。
培养结果：
检验标准：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。
结论：
口2.固体培养基促生长能力检查
培养结果：
检验标准：被检培养基菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。
判该培养基的适用性检查符合规定。
结论：
培养基名称：
口3.培养基抑制能力检查
划线接种于被检培养基平板上，在相应控制检查规定的培养温度和时间下培养培养结果：
检验标准：试验菌应不得生长。
结论：
口4.培养基指示能力检查
分别接种少量试验菌于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制检查规定的培养温度和时间下培养
培养结果：
检验标准：被检培养基试验菌生条的菌落形态大小、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。
结论：
复核人/日期：试验人/日期：。
培养基适用性检查
培养基适用性检查沙氏葡萄糖琼脂培养基适用性检查接种不大于100cfu白色念珠菌菌液及黑曲霉孢子悬液至沙氏葡萄糖琼脂培养基，至20~25℃培养不超过5天，每一试验菌株平行制备2个平皿。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5~2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。
检验时间: 对照培养基批号：被检配制批培养基批号：胰酪大豆胨琼脂培养基适用性检查接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml至胰酪大豆胨琼脂培养基平板上， 30~35℃培养不超过3天；接种不大于100cfu的白色念珠菌菌液及黑曲霉孢子悬液各1ml至胰酪大豆胨琼脂培养基平板上，30~35℃培养不超过5天，每一试验菌株平行制备2 个平皿；同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5~2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致检验时间: 对照培养基批号：被检配制批培养基批号：R2A琼脂培养基适用性检查取不大于100cfu的铜绿假胞杆菌液及枯草芽孢杆菌液各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾入R2A琼脂样品培养基，每一试验菌株平行制备2个平皿，混匀，凝固，置35℃培养120小时，计数。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5~2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。
检验时间: 对照培养基批号：被检配制批培养基批号：胰酪大豆胨液体培养基适用性检查接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌至胰酪大豆胨液体培养基中，至30~35℃培养18-24小时，每一试验菌株平行制备2管；同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
微生物限度检查用培养基适用性检查记录
30℃～35℃
23℃～28℃
被检培养基培养情况，被检培养基为：
菌种
金黄色葡萄 球菌
大肠埃希菌
平皿1长菌数（cfu/皿）
平皿2长菌数（cfu/皿）
平均长菌数（cfu/皿）
枯草芽孢 杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
对照培养基培养情况，对照培养基为：
菌种
金黄色葡萄 球菌
大肠埃希菌
平皿1长菌数（cfu/皿）
平皿2长菌数（cfu/皿）
平均长菌数（cfu/皿）
枯草芽孢 杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
被检培养基和对照培养基菌落平均数比值
标准要求：被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值大于70%，且菌落形态大小应 与对照培养基上的菌落一致。
培养皿编号 24H菌落数
48H菌落数
平均值 结果判定
无菌室菌落数测试
1
2
3
结果判定(Result):
培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数；
2.2 取白色念珠菌、黑曲霉各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠培养基，每株试验菌平行 制备2个平皿，混匀，凝固，置23～28℃培养72小时，计数；
3. 培养情况 培养仪器
生化培养箱
培养箱编号 校验有效期至
检
测
复核人/日期:
生效日期：2016年05月18日
KANGGU
嘉兴康谷医用材料有限公司
微生物限度检查用培养基适用性检查记录
QMR-099-00
产品描述
批号
数量
生产商
检测依据
2010ห้องสมุดไป่ตู้中国药典
ISO13485体系计数培养基适用性检查记录(固体培养基)表
1．检查方法：《中国药典2020版》四部非无菌药品微生物限度检查法：微生物计数法（通则1105）。
2．验证用仪器型号及编号：立式高压蒸汽灭菌柜：型号编号：恒温培养箱：型号编号：生化培养箱：型号编号：3．菌液制备：3.1接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基上，于30～35℃培养18～24h；上述培养物用PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液10倍递增稀释至1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液备用。
3.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基上，于20～25℃培养2～3天上述培养物用PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液10倍递增稀释至1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液备用。
3.3将黑曲霉菌菌悬液用PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液10倍递增稀释至1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液备用。
4.培养基配制按相应培养基产品说明分别配制胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、营A琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂对照培养基、沙氏葡萄糖琼脂对照培养养琼脂培养基、R2A琼脂对照培养基，并按照相应的灭菌方式灭菌备用。
基、营养琼脂对照培养基、R25、培养基计数适用性检查5.1胰酪大豆胨琼脂培养基适用性检查分别接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的菌悬液置直径90mm的无菌平皿中各2皿，另一个皿不接种菌作为空白对照。
倾注20ml温度不超过45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂对照培养基，混匀，凝固。
将接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的平皿倒置于30-35℃的生化培养箱培养不超过3天，计数；将接种白色念珠菌、黑曲霉菌的平皿倒置于20-25℃的生化培养箱培养不超过5天，计数。
被检培养基同法操作。
结果见表1。
表1 培养基适用性检查结果之间，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。
判该培养基的适用性检查符合规定。
5.1.2结果判定：____________________________________5.1.3结论：________________________________________5.2沙氏葡萄糖琼脂培养基适用性检查分别接种不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉菌的菌悬液置直径90mm的无菌平皿中各2皿，另一个皿不接种菌作为空白对照。
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培养基适用性检查记录质量部．培养基适用性检查记录培养基名称：沙氏葡萄糖琼脂培养基来源：批号：对照培养基：来源：批号：检验依据：检验人：检验日期：一、实验菌种：白色念珠菌[(F)98 001]第代黑曲霉 [(F)98 003]第代二、菌液制备将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培-5～100.9%无菌氯化钠溶液稀释至养5～7天；取上述培养物用-7将黑曲霉接种于沙氏葡萄糖琼脂培的菌悬液。
制成50～10010,（）聚山梨3-5含0.05%天。
加入20～25℃培养5～7养基上，-7-5的制成50100～100.9%酯80的无菌氯化钠溶液稀释至10～, 菌悬液。
培养基适用性检查三、皿，2取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌、黑曲霉各氯化钠1 ，另一皿接种7.0菌液（含菌适宜浓度）每皿接种1倾注对照沙氏葡萄糖琼脂培养蛋白胨缓冲液作为空白对照，-天计数。
被检5℃培养 20-25基，混匀。
凝固后倒置培养，培养基同法操作。
四、结果判断培养结果见下表：培养温年日～月年培养时间℃度日月被检培养基菌落数（）菌落大小、实验菌形态特征及培养基平皿株平皿2 平均数颜色是否一1致被检培养基白色念珠菌对照培被检培黑曲对照培被检培阴性对照培基被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平标准规均数的比值应在0.5～2范围内，且菌落形态大小与对定照培养基上的菌落一致A为被检培养基菌落平均数；B为对照培养基菌落平均备注数。
五、结论本品按《中国药典》2015年版“非无菌产品微生物检查：微生物计数法”及培养基适用性检验操作规程检验，结果：□符□不符合规定。
合规定培养基适用性检查记录培养基名称：胰酪大豆胨琼脂培养基来源：批号：对照培养基：来源：批号：检验依据：检验人：检验日期：一、实验菌种：金黄色葡萄球菌[(B)26 003]第代铜绿假单胞菌 [(B)10 104]第代枯草芽孢杆菌 [(B)63 501]第代白色念珠菌 [(F)98 001]第代黑曲霉 [(F)98 003]第代二、菌液制备将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24 小时；取上～,制成50～述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至-7-51001010～将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，的菌悬液。
20无菌氯化钠溶液稀释至7天；取上述培养物用0.9%25℃培养5～-7-5的菌悬液。
将黑曲霉接种于沙氏葡萄糖制成10050～～1010,（）天。
加入5～73-5含0.05%℃培养～琼脂培养基上，2025-7-5制成,10～10无菌氯化钠溶液制成稀释至0.9%的80聚山梨酯50～100的菌悬液。
三、培养基适用性检查取11个无菌平皿，分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接种1菌液（含菌适宜浓度），另一皿接种1 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作为空白对照，倾注对照胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀。
凝固后倒置培养，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌皿30-35℃培养3天计数；白色念珠菌、黑曲霉20-25℃培养5天计数。
被检培养基同法操作。
四、结果判断培养结果见下表：五、结论本品按《中国药典》2015年版“非无菌产品微生物检查：微生物计数法”及培养基适用性检验操作规程检验，结果：□符□不符合规定。
合规定培养基适用性检查记录培养基名称：麦康凯液体培养基来源：批号：对照培养基：来源：批号：检验依据：检验人：检验日期：一、实验菌种：大肠埃希菌 [(B)44 102]第代金黄色葡萄球菌[(B)26 003]第代二、菌液制备将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24 小时；取上述培养物用0.9%-7-5～100的菌悬液。
制成无菌氯化钠溶液稀释至10～10,50 三、培养基适用性检查大肠支麦康凯液体培养基，分别接种金黄色葡萄球菌、取5，另一支不接菌液（含菌适宜浓度）2埃希菌各支，每支接种1后观察结果。
被检培24-48h种菌作为空白对照，42-44℃培养养基同法操作。
四、结果判断培养结果见下表：五、结论本品按《中国药典》2015年版“非无菌产品微生物检查：微生物计数法”及培养基适用性检验操作规程检验，结果：□符□不符合规定。
合规定培养基适用性检查记录培养基名称：麦康凯琼脂培养基来源：批号：对照培养基：来源：批号：检验依据：检验人：检验日期：一、实验菌种：大肠埃希菌[(B)44 102]第代二、菌液制备将大肠埃希菌接种于胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24 小时。
无菌氯化钠溶液稀释至10～取上述培养物用 10050～-7-5,100.9%的菌悬液。
制成三、培养基适用性检查大肠埃希菌菌液其中两个接种13取个麦康凯琼脂培养皿，蛋白胨缓冲液作为-7.0（含菌适宜浓度），另一个接种1 氯化钠被检培养基同法后观察生长状况。
30-35℃培养24h空白对照，操作。
四、结果判断培养结果见下表：五、结论年版“非无菌产品微生物检查：本品按《中国药典》2015微生物计数法”及培养基适用性检验操作规程检验，结果：□符□不符合规定。
合规定培养基适用性检查记录培养基名称：胰酪大豆胨液体培养基来源：批号：对照培养基：来源：批号：检验依据：检验人：检验日期：一、实验菌种：金黄色葡萄球菌[(B)26 003]第代铜绿假单胞菌 [(B)10104 ]第代枯草芽孢杆菌 [(B)63 501]第代二、菌液制备将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24 小时；取上～5010～10,制成述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至-7-5100的菌悬液。
培养基适用性检查三、个无菌三角瓶，分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假取7菌液（含菌适宜个，每瓶接种1单胞菌、枯草芽孢杆菌各2蛋白胨缓冲液作为空白对氯化钠浓度），另一瓶接种1 7.0- 330-35照，℃培养天观察生长情况。
被检培养基同法操作。
四、结果判断培养结果见下表：五、结论本品按《中国药典》2015年版“非无菌产品微生物检查：微生物计数法”及培养基适用性检验操作规程检验，结果：□符□不符合规定。
合规定培养基适用性检查记录培养基名称：沙门增菌液体培养基来源：批号：对照培养基：来源：批号：检验依据：检验人：检验日期：四、实验菌种：金黄色葡萄球菌 [(B)26 003]第代乙型副伤寒沙门菌 [(B)10104 ]第代五、菌液制备将金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24 小时；取上述培养物用-7-5的菌悬液。
50～100,0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10～10制成六、培养基适用性检查℃灭5支，121新鲜配制10支的对照沙门菌增菌液体培养基支，分别接种乙型副伤寒沙门菌、金黄色葡，备用。
取4菌15；另一支不接种菌作为空白对照；12萄球菌各支，接种菌悬液℃，培养351824h，观察结果。
被检培养基同法操作。
置30～四、结果判断培养结果见下表：度月日促生长能力/抑制能力被检培养基菌落实验菌大小、形态特征培养基株试管2试管1及颜色是否一致被检培养金黄色基葡萄球对照培养菌基被检培养乙型副基伤寒沙对照培养门菌基被检培养基阴性对照对照培养基沙门菌增菌液体培养基对金黄色葡萄球菌有抑制能力标准规沙门菌增菌液体培养基对乙型副伤寒沙门菌有促生长定能力五、结论年版“非无菌产品微生物检查：2015本品按《中国药典》微生物计数法”及培养基适用性检验操作规程检验，结果：□符□不符合规定。
合规定培养基适用性检查记录培养基名称：木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基来源：批号：对照培养基：来源：批号：检验依据：检验人：检验日期：七、实验菌种：乙型副伤寒沙门菌 [(B)10104 ]第代八、菌液制备将乙型副伤寒沙门菌接种于胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24 小时；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀-7-5～100的菌悬液。
,释至10～10制成50 九、培养基适用性检查℃灭新鲜配制对照木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基，1213后备用。
取℃倾注平皿，35℃培养箱预培8h，冷却至菌1560涂布接种乙型副个无菌木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板，，另一平板不接种作100）皿，接种液伤寒沙门菌20.1（不大于。
被检培35℃倒置培养18-48h～为空白对照，涂布均匀后于30 养基同法操作。
四、结果判断培养结果见下表：五、结论年版“非无菌产品微生物检查：本品按《中国药典》2015微生物计数法”及培养基适用性检验操作规程检验，结果：□符□不符合规定。
合规定培养基适用性检查记录培养基名称：三糖铁琼脂培养基来源：批号：对照培养基：来源：批号：检验依据：检验人：检验日期：十、实验菌种：乙型副伤寒沙门菌 [(B)10104 ]第代十一、菌液制备将乙型副伤寒沙门菌接种于胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24 小时；取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀-7-5的菌悬液。
制成50～100释至10～10, 培养基适用性检查十二、，冷却至121新鲜配制对照三糖铁琼脂培养基，℃灭菌15个无菌三糖铁后备用。
取38h60℃倾注平皿，35℃培养箱预培皿，接种菌液琼脂培养基平板，涂布接种乙型副伤寒沙门菌2，另一平板不接种菌作为空白对照，涂布均匀）（不大于0.1100 ℃倒置培养3518-24h。
被检培养基同法操作。
后于30～四、结果判断培养结果见下表：五、结论本品按《中国药典》2015年版“非无菌产品微生物检查：微生物计数法”及培养基适用性检验操作规程检验，结果：□符□不符合规定。
合规定培养基适用性检查记录培养基名称：R2A琼脂培养基来源：批号：对照培养基：来源：批号：检验依据：检验人：检验日期：十三、实验菌种：铜绿假单胞菌 [(B)10104 ]第代枯草芽孢杆菌 [(B)63 501]第代十四、菌液制备将铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24 小时；取上述培养物用0.9%-7-5～100的菌悬液。
10无菌氯化钠溶液稀释至10～,制成50 培养基适用性检查十五、个无菌平皿，分别接种铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆取5，另一瓶不接种菌液（含菌适宜浓度）2菌各个，每瓶接种1天观察生长情况。
被检培养5菌作为空白对照，30-35℃培养基同法操作。
四、结果判断培养结果见下表：度月日菌落数（）被检培养基菌落大小、实验菌培养基形态特征及平皿株 2 平均数平皿颜色是否一1致被检培养基铜绿假单胞菌对照培养基被检培养基枯草芽孢杆菌对照培养基被检培养基阴性对照对照培养基被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平标准规且菌落形态大小与对～0.5均数的比值应在2范围内，定照培养基上的菌落一致数。