本科生实验-水的细菌学检查
实验十 水的卫生细菌学检验(综合)
实验十水的卫生细菌学检验（综合）a)水中大肠菌群数的测定一、目的要求学习大肠菌群数的检测原理和方法。
二、实验材料样品: 水样2.培养基：乳糖胆盐发酵管(单料及双料), 伊红美兰琼脂(EMB)平板, 乳糖发酵管。
3.其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管(10m1、1m1)，接种环，载玻片等三、基本原理水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。
由于病原菌的数量少, 检测过程复杂, 因此, 直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。
由于大肠菌群在粪便中数量大, 在体外存活时间与肠道致病菌相近, 且检验方法比较简便, 因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌的数量来作为水被粪便污染的标志。
如果水中大肠菌群的菌数超过一定的数量, 则说明此水已被粪便污染, 并有可能含有病原菌。
大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的杆状细菌, 并能在乳糖培养基中, 经37℃24~48h培养能产酸产气。
我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过3个。
检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种, 其中稀释培养法是标准分析法, 为我国大多数卫生单位和水厂所使用。
它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
四、方法与步骤1.采样: 取100ml磨口带塞玻璃瓶, 包扎后, 干热灭菌备用。
2.取自来水样时, 至少应先放水5min, 以冲去龙头口所带的微生物, 获得主流管中有代表性的水样。
取样时, 用右手握瓶, 左手启开瓶塞, 用覆盖瓶口的纸托住瓶塞, 收集样品后, 连同覆盖纸一起将瓶口塞好, 并用线绳在原处扎好。
注意手指不得触及瓶口内部。
在静水中取样时, 先用右手揭去塞子, 瓶口朝下浸入水下约30cm处, 然后将瓶子反转过来, 待水注满后, 取出塞好瓶口。
如果水在流动, 瓶口必须迎着水流, 以免手上的细菌被水冲进瓶子。
3.水样放置过程中, 内含的细菌数目和类型会发生变化, 所以要求水样品应于6~10℃贮存,并不超过6h。
4.初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内, 10ml接种量采用双料发酵管, 而lml及lml以下接种量采用单料管。
实验11水的细菌学检查
（1）将水样稀释成Байду номын сангаас0-1。 （2）分别吸取10-1的稀释水样1ml和原水样1ml，分 别加入装有10ml乳糖蛋白胨发酵管中。另取10ml
2．细菌总数测定
自来水 （1）用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。共做两 个平皿。 （2）分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白 胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养 基充分混匀。 （3）另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基 15ml，作空白对照。 （4）培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24小时，进 行菌落计数。
二、实验原理
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌 种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不 可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能 生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落， 计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用 普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
和100ml原水样，分别注入装有 5 ml和50ml三倍
浓缩乳糖蛋白胨发酵液的试管（瓶）中。混匀后 置37℃培养24h。 以下步骤同生活饮用水的试验方法。
三、实验器材
1、实验仪器：培养箱
2、微生物材料：水样 3、培养基：乳糖蛋白胨液体培养基（内有倒置的杜 氏小管），3倍浓缩乳糖蛋白胨液体培养基（内有 倒置的杜氏小管），伊红美蓝琼脂平板培养基。
四、实验步骤
1．水样的采取 同水中细菌总数测定实验。
自来水检查
（1）初发酵试验 在2个含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养 液的烧瓶中，各加入水样10ml；在10支含有3ml三倍浓缩 乳糖蛋白胨发酵管中，各加入水样10ml。混匀后置37℃培 养24h。
微生物实验-水的细菌学检查
一、实验目的 1．学习水样细菌总数的测定方法。 2．了解大肠菌群的数量与生活饮用水的
重要性。
生活用水的水源常被生活污水或工业废水或人与动 物的粪便所污染，可能含有不同类型的微生物，有 腐生性的和病原性的。
腐生性微生物对人无害，而病原性微生物则能引起 传染病的发生。
必须对生活用水及其水源进行严格的细菌学检查。
（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30～ 300之间，则以最接近300或30的平均菌落数 乘以稀释倍数进行报告。
五、思考题
你所测的池塘水、河水或湖水的污秽程度 如何?通过实验你对保护水源水有何看法？
经检查，水样是否合乎饮用标准？
2.细菌总数的测定 (1)自来水 (2)池塘水、河水或湖水
①水样稀释 ②吸取稀释后水样1ml加入平板 ③向平皿内倾注培养基(15～20 mL) ④37℃温箱，倒置培养24h，进行菌落计数
3.菌落计数方法
（1）计算相同稀释度的平均菌落数 。
（2）选择平均菌落数在30～300之间稀释度 的平板。当只有一个稀释度的平均菌落数 符合此范围时，则以该平均菌落数乘以稀 释倍数，作为该水样的细菌总数进行报告。
我国规定1 ml自来水中的总菌数不得超过100个。
三．实验用品
培养基： 牛肉膏-蛋白胨培养基
四、实验操作
（一）细菌总数的测定 1. 水样采集
自来水 将自来水龙头用火焰烧灼3 min灭菌，再拧开水龙头 流水5 min，以排除管道内积存的死水，随后用已灭 菌的三角瓶接取水样，以供检测。
池水、河水或湖水 将无菌的带玻塞的小口瓶浸入距水面10～15 cm深的 水层中，瓶口朝上，除去瓶塞，待水流入瓶中装满 后，盖好瓶塞，取出后立即进行检测，或临时存于 冰箱，但不能超过24 h。
医学：水的细菌学检查-细菌总数的测定
[请在此处插入参考文献1]
01
03 02
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培养基
普通肉汤培养基
用于一般细菌的培养，含有适合细菌 生长的营养成分。
选择性培养基
根据需要选择适合特定细菌的选择性 培养基，以筛选和鉴别特定细菌。
实验设备
灭菌锅
恒温培养箱
显微镜
移液器
用于培养基和实验器具 的灭菌，确保无菌状态。
用于细菌的培养，保持 恒定的温度和湿度。
观察细菌形态和染色情 况，进行细菌鉴定。
取适量水样，加入培养基中， 在恒温培养箱中培养24小时， 观察并记录菌落数。
实验日期
XXXX年XX月XX日
实验材料
水样、培养基、无菌吸管、培 养皿
实验结果
菌落数分别为XX、XX、XX、 XX、XX。
结果解读
根据实验结果，可以 得出水样中细菌总数 的数量。
分析细菌总数高的可 能原因，如环境污染、 水质处理不当等。
将细菌总数与国家标 准进行比较，判断水 样的卫生质量。
误差分析
误差来源
取样过程中可能存在的污 染、培养基的质量问题、 操作过程中的失误等。
误差控制
采用无菌操作技术，确保 培养基的质量，提高实验 人员的操作技能和责任心。
误差消除
重复实验，取多次测量的 平均值作为最终结果，以 提高实验的准确性和可靠 性。
根据细菌的生长速度和培养基的特性，确定培养时间，一般为18-48小时。
结果观察
观察内容
在培养期间，观察细菌的生长情况， 记录菌落的数量、形态等信息。
结果判定
根据菌落的数量和分布情况，判断水 样中细菌总数的多少，并评估水质的 安全性。
水的细菌学检查
24h和48h产酸产气的初发酵菌落均需在 伊红美蓝琼脂或复红亚硫酸钠培养基上， 进行平板划线，分离出阳性菌落。
3．复发酵试验 阳性菌落经涂片染色鉴别为G-，无芽 孢杆菌者，再经过乳糖蛋白胨液体培养 基进行复发酵试验，经24h培养产酸产气 者，可确认为大肠菌群阳性结果。
三．实验用品
培养基： （一）牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 （二） 乳糖蛋白胨液体培养基 3倍浓缩乳糖蛋白胨液体培养基 红美蓝琼脂培养基（制成平板）
（5）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释 倍数进行报告。 （6）若所有稀释度的平均菌落数均不在 30～300之间，则以最接近300或30的平 均菌落数乘以稀释倍数进行报告。
四、实验操作
（二）多管发酵法测定水中的大肠菌群 1. 水样采集 2. 自来水检查 （1）初（步）发酵试验 （2）平板分离 （3）复发酵试验
2.细菌总数的测定 (1)自来水 (2)池塘水、河水或湖水 ①水样稀释 ②吸取稀释后水样加入平板 ③向平皿内倾注培养基(15～20mL) ④37℃温箱，倒置培养24h，进行菌落计数
水样稀释 取1ml水样加入到9ml无菌水的试管，振 1 荡混匀，得稀释度为10－1； 从10－1管中取水样1ml加到第二支9ml无 菌水的管中，振荡混匀，得10－2……
大肠菌群的测定 若水源被粪便污染，则有可能也被肠 道病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容 易死亡与变异，因此数量较少，要从中特 别是自来水中分离出病原菌常较困难与费 时，这样就要找到一个合适的指示菌，此 指示菌要求是大量出现在粪便中的非病原 菌，并且和水源病原菌相比是较易检出的。
若指示菌在水中不存在或数量很少，则 大多数情况也保证没有病原菌。最广泛 应用的指示菌是大肠菌群(coliform group)。 大肠菌群的定义是：一群好氧和兼性厌氧、 革兰氏阴性、无芽胞的杆状细菌，并在乳糖 培养基中，经37℃，24～48 h培养能产酸产气。 根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被 粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌 污染的可能性。
(完整版)水中细菌总数的测定
水中细菌总数的检测1.实验目的1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。
2.菌落总数standard plate-count bacteria水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48 h后,所得1 mL水样所含菌落的总数.细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。
由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。
3.培养基与试剂2.1 营养琼脂成分2.2 制法：根据实际需要量,按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7。
6,分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤.），经103。
43 kPa（121°C，15 lb）湿热灭菌20 min，储存于冷暗处备用。
4.仪器和材料4.1仪器:高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱.4.2材料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。
4.3放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。
5.样品采集5.1自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3—5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml.5.2纯净水取样:用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升.5.3地表水的取样:应取距水面10-15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中,然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后,将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查,否则需放入冰箱中保存。
6.检验步骤6.1生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15 ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
医学：水中的细菌学测定
条件致病菌
条件致病菌
是指在特定条件下能够引起疾病的细菌，如大肠杆菌、绿 脓杆菌、变形杆菌等。
条件致病菌的特性
通常为人体肠道或呼吸道正常菌群，但在特定条件下，如 机体免疫力降低或细菌数量增多时，可以引起疾病。
条件致病菌的测定
在水中条件致病菌的测定中，通常采用同样方法进行增菌、 分离培养、鉴定等，以了解水中是否存在条件致病菌，并 评估其对人群健康的潜在威胁。
体情况制定限量标准。
03
其他常见致病菌数量
根据具体情况制定其他常见致病菌的数量限量标准。
06 水中的细菌学测定在实际 应用中的问题与挑战
测定方法的局限性
培养基选择性
01
培养基的成分和培养条件可能对某些细菌的生长产生限制，导
致某些细菌无法被检测到。
培养时间
02
培养时间较长，需要一定时间才能得到结果，可能影响细菌的
背景
随着工业化和城市化的快速发展，水 污染问题日益严重，水中的细菌学测 定对于保障人类健康和生态平衡具有 重要意义。
重要性
健康保障
政策制定
通过水中的细菌学测定，可以及时发 现并控制水体中的有害细菌，防止水 源性疾病的传播，保障公众健康。
基于水中的细菌学测定结果，政府可 以制定和调整相关政策，加强水质监 管，提高水质标准。
细菌种类的鉴别挑战
形态学相似
有些细菌在形态上相似，可能难以区分，导致鉴定不准确。
基因测序技术
基因测序技术是更准确的方法，但需要较高的技术和设备支持，且 成本较高。
抗原性差异
不同细菌的抗原性存在差异，但抗原性检测需要特定的试剂和设备， 且结果可能存在主观性。
THANKS FOR WATCHING
〖医学〗水的细菌学检查---细菌总数的测定
实验报告及思考题
• 一 . 实验报告以论文形式提交 • 二. 思考题
• 1、从自来水水样细菌总数检测的结果判断是否符合饮用 水的卫生标准?
• 2、你所测的池塘水、河水、湖水的污秽度如何?通过实 验你对保护水资源有何认识?
• 3、试与其他同学的实验结果进行比较,从中判断你的实验 结果误差如何?原因是什么?
在西方，盖伦的一生生活在罗马帝国时 安东尼 父子的 执政期 。彼时 ，（高 血压心 脏病糖 尿病） 罗马帝 国的繁 荣，为 盖伦的 医学成 就、以 及西方 医学的 昌盛， 提供了 可靠的 政治、 经济、 科技和 文化保 证。盖 伦继承 希波克 拉底的 学术思 想，著 述200余 部著作 ，（肺 血液血 小板红 血球 白血球 ）现存 的83部 著作中 ，内容 涉及解 剖、生 理、病 理、卫 生、药 物、《 希波克 拉底文 集》研 究、哲 学、语 言学、 逻辑学 、数学 、历史 、法律 等。倡 导实证 医学， 他的科 学方法 论（传 染病丙 肝乙肝 甲肝） 具有重 视实验 、疾病 局部定 位思想 、重视 形式逻 辑、强 调演绎 法等特 点，对 后世西 医学的 （肺血 液血小 板红血 球白血 球）发 展影响 深远。 （肺炎青霉素肝炎）
水的细菌学检查---细菌总 数的测定(开放)
• 目的要求
1、培养学生自行设计实验流程,判断实验结 果的能力。
2、对所学习过的实验方法进行综合技能训练。
3、通过实验掌握水样的采集和水样中细菌总 数测定的方法。
实验原理
• 生活用水的水源常被生活污水、工业废水 以及人畜粪便所污染。
• 腐生性微生物对人无害,而病源性微生物则 能引起传染病甚至流行病,如霍乱、伤寒、 细菌性痢疾和阿米巴性痢疾以及脊髓灰质 炎和传染性肝炎等病毒性疾病。
水质的细菌学检查
水质的细菌学检查一、目的要求(一)学习水质的细菌学检查法(二)了解水质状况同细菌数量的关系及大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
二、基本原理检测水中的细菌数量是评价水质状况的重要指标之一。
饮水是否合乎卫生标准，需要进行水中细菌数量及大肠菌群数量的测定。
大肠菌群是肠道最普遍存在和数量最多的一群细菌，由于大肠菌群是一群能发酵乳糖的革兰氏阴性、无芽孢杆菌，它们在乳糖培养基中经37℃培养24小时即能产酸、产气，所以常将其作为粪便污染的标志。
饮用水一般规定：1毫升自来水中总菌数不得超过100个；1000毫升自来水肠菌群数不得超过3个。
三、实验材料培养基及器皿、牛肉膏蛋白胨培养基、乳糖蛋白胨发酵管（倒置小管）、三倍乳糖蛋白胨发酵管（倒置小管）、伊红美蓝琼脂培养基、无菌空瓶、无菌水、无菌培养皿、移液管、试管。
四、实验客(一)采取水样1、自来水：从学校各生活区取样。
先将自来水龙头用火焰灭菌,再开放水龙头使水流1—2分钟后，用无菌空瓶接取水样。
2、池水、湖水或河水：用无菌空瓶取距水面 10—15厘米深层水样。
水样采取后应立即检验，不得超过4小时。
(二）水中细菌总数测定l、自来水：稀释水样：原水样和10-1 水样，用无菌移液管分别吸取l毫升原水样和10-1水样，分别注入二个无菌培养皿中。
每皿各加13--15毫升已融化并冷却到4 5-- 50℃的牛肉膏蛋白胨培养基，轻轻旋转，使培养基与水样充分混匀，待凝固后，将平板倒置于37℃恒温箱，培养24小时进行菌落计数。
制作培养基方法、消毒灭菌、接种、计数皆参照参微生物学实验指导，具体如下：培养基制作：实验五、培养基的制备培养基配方：附录二、常用培养基之一培养基灭菌：实验六、灭菌与消毒水样接种：实验七、土壤微生物的分离与测数细菌总数测定：实验七、土壤微生物的分离与测数2、池水、湖水或河水等。
稀释水样：稀释倍数视水样污浊程度而定，使水样培养后每个平板中的菌落数在30--300之间的的稀释度最为合适。
试验六 水质的细菌学检验
试验六水质的细菌学检验Ⅱ、水中大肠菌群（Coliform group）细菌的检测一、目的和原理如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染而引起肠道传染病。
由于肠道病原菌在水中数量较少，故从水中特别是自来水中分离病原菌常常非常困难。
大肠菌群细菌是肠道好氧菌中最普遍和数量最多的一类细菌，所以常常将其作为粪便污染的指示菌。
即根据水中大肠菌群细菌的数目来判断水源是否受粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。
一般规定每1000ml自来水中大肠菌群细菌不得超过3个。
大肠菌群细菌是指一类好氧或兼性厌氧，能发酵乳糖，在乳糖培养基中经37℃24小时培养，能产酸产气，革兰氏阴性，无芽孢的杆菌。
本试验采用多管发酵法，以最近似数的方式来记载，此一数字是根据概率公式来估算，有大于实际数字的倾向，在增加每种稀释度的试管重复数后，可减少偏差。
本法除了用于检测水样（淡水或海水）外，尚可用于泥浆、沉积物、污泥等的检测。
测定时先将这类固体或半固体样品预先称重，再加水稀释，可取50克样品，置于盛有450ml灭菌磷酸盐缓冲液并装有玻璃珠、石英砂的锥形瓶中，振荡1—2分钟，便成10-1稀释，以用于检验。
二、材料与器皿1、培养基二倍浓度的乳糖胆汁液体培养基一倍浓度的乳糖胆汁液体培养基伊红——美蓝琼脂（E．M．B．）培养基亮绿乳糖胆汁（B．G．B）液体培养基营养琼脂培养基2、灭菌移液管、灭菌稀释水、试管、杜汉氏小管、革兰氏染液、灭菌培养皿。
方法与步骤（1）假定试验①用10ml水样，接种到二倍浓度的乳精胆汁管中去，重复接三支。
②用lml水样，接种到一倍浓度的乳精胆汁管中去，重复接种三支。
③制备水样10-1和10-2的稀释液。
④分别接种lml10-1和10-2稀释液到一倍浓度的乳糖胆汁管中，每个稀释液接种三支。
⑤在35℃中培养48小时，观察有无气体和酸产生。
⑥在48小时以内，培养管内倒置的杜汉氏管中有任何量的气体积累，便可断定为阳性假定试验。
水质的细菌学检测
水质的细菌学检测一、实验目的学习水中细菌总数及大肠菌群数测定的原理，并掌握其操作方法。
二、实验原理1、细菌总数的测定：水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。
由于重金属及其他有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。
本实验采用标准平皿法对水样中细菌做计数，这是一种测定水中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度。
由此法所得的菌落数实际上要低于水样中实际活菌的数目。
一般规定，1ml饮用水中总菌数不得超过100个。
2、大肠菌群数测定：采用多管发酵法，以最近似数的方法来记载。
此一数字是根据概率公式来计算，有大于实际数字的倾向，在增加每种稀释度的试管重复数后，可减小偏差。
三、实验器材培养基：营养琼脂培养基材料：无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养皿、盛有90ml及9ml灭菌蒸馏水的锥形瓶和试管、杜氏小管、革兰氏染液四、实验步骤（一）细菌总数的测定1、样品稀释液的制备采集水样，吸取10ml水样，注入盛有90ml无菌水或生理盐水与三角瓶中，混匀成10-1稀释液，按10倍稀释法将水样稀释成10-2、10-3，每个稀释度分别注入两个培养皿中，每皿1ml。
2、平板接种培养采用混合平板培养法计数，每一稀释度设置2个重复，然后在6个培养皿中分别倒入已融化并冷却至45~50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷凝后倒置，适温培养，至长出菌落即可计数。
3、结果报告与计算计算结果时，每个稀释度使用两个平板，取其平均值，达到规定培养时间，应立即计数，应将平板放置于0~4℃，但不得超过24h，不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比。
（二）大肠菌群检验1、乳糖发酵试验样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管，并留一管作为空白对照，36±1℃培养24±2h，观察是否产气。
2、报告根据观察到的产气管数，即大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml （g）大肠菌群的MPN值。
水和饮料的细菌学检验
四、操作步骤
（一）细菌总数的测定 1. 取水样：先将自来水龙头用火焰灼烧 取水样：先将自来水龙头用火焰灼烧3 min灭菌，再打开水龙头放水 min ，用无菌 灭菌， 灭菌 再打开水龙头放水5 三角瓶接取水样，将瓶塞盖好。 三角瓶接取水样，将瓶塞盖好。 池水、河水或湖水应取离岸边较远（ 池水、河水或湖水应取离岸边较远（5 m） ） 距水面10- 15 cm的深层水样。先将灭菌的带 的深层水样。 距水面 的深层水样 塞玻璃瓶，瓶口向下浸入水中， 塞玻璃瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过 除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后， 来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后， 将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检测， 将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检测， 否则需放入冰箱中保存。 否则需放入冰箱中保存。
滤膜法测定示意图
五、实验结果
（一）实验结果 1. 报告水样、饮料细菌总数测定结果。 报告水样、饮料细菌总数测定结果。 2. 根据有大肠菌群的阳性管数查表计算。 根据有大肠菌群的阳性管数查表计算。 （二）思考题 1. 国家对自来水的细菌总数有一标准，各 国家对自来水的细菌总数有一标准， 地能否自行设计其测定条件（如培养温度、 地能否自行设计其测定条件（如培养温度、时 间等）来测定水样中细菌总数？为什么？ 间等）来测定水样中细菌总数？为什么？ 2. 伊红美兰培养基含有那几种主要成分？ 伊红美兰培养基含有那几种主要成分？ 在检查大肠菌群时，各起什么作用？ 在检查大肠菌群时，各起什么作用？ 3. 所测水样、饮料是否合乎饮用标准？ 所测水样、饮料是否合乎饮用标准？ 实验目的
1. 学习水和饮料中细菌总数及大肠菌群 的测定原理、意义。 的测定原理、意义。 2. 掌握水和饮料中细菌总数及大肠菌群 的检测方法。 的检测方法。
二、实验原理
实验5 水中细菌总数的检测
实验五水中细菌总数的检测一、实验目的1.采用标准平皿法对水样中细菌作计数。
2.掌握微生物实验中无菌操作技术方法。
二、实验原理水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关，它是评价水质污染程度的一个重要指标之一。
由于重金属及某些其他有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。
试验采用标准平皿法对水样中细菌作计数，这是一种测定水中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度的方法，由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状，成簇或成团的形式存在，此外没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。
细菌总数是指l ml水样在营养琼脂培养基中，37ºC、24h 培养后所生长的菌落数。
一般规定，1ml自来水中总菌数不得超过100个。
三、材料和器皿1.培养基：营养琼脂培养基牛肉膏：3-5 g ；NaCl ：5 g ；蛋白胨：10 g ；琼脂：15-20 g；H2O ：1000 ml ；pH ：7.0-7.2.2.无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养皿，盛有90ml及9ml灭菌蒸馏水的锥形瓶和试管。
四、方法和步骤1.采集水样。
2.吸取10ml水样(河水、污水、游泳池水或港湾水等)，注入罐有90ml无菌水的三角瓶中，混匀成10-1稀释液，在吸水样前，水样应彻底搅动均匀。
3.按10倍稀释法将水样稀释成10-2、10-3、l0-4。
4.营养琼脂培养基(用于河水样)倒平皿(厚度约2-3毫米，12毫升）水平放置至固化。
5.根据水样的洁净程度，污染严重者选取10-2、10-3、l0-4稀释度；中等的选取10-1、10-2、10-3稀释度，每个稀释液分别注入两个培养皿，每皿0.2 ml，用玻璃刮刀涂匀。
稀释度的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于30～300个之间。
6.将培养皿倒置于37ºC 培养24h，可观察出明显菌落。
水细菌学检测
实验目的
1）学习水的细菌学检查方法及原理
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2) 学习水样的采集方法，了解大肠菌群的数量在饮 用水中的平板计数原则及其在饮用水中的重要性。 3）整个实验操作要求学生自己独立完成，培养学生 的实验设计及动手能力。
பைடு நூலகம் 实验原理
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饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总数和 大肠菌群数来确定。细菌总数是指1毫升水样在 普通琼脂培养基中，37℃24小时培养后所生长 的菌落数。一般规定，1毫升自来水的总菌数不 得超过100个。
总大肠菌群mpn100ml或cfu100ml不得检出耐热大肠菌群mpn100ml或cfu100ml不得检出大肠埃希氏菌mpn100ml或cfu100ml不得检出菌落总数cfuml100logowww1pptcom实验原理如果水源被粪便污染则有可能也被肠道病原菌污染而引起伤寒痢疾霍乱等肠道病的流行但肠道病原菌在水中数量较少又易变异与死亡故从水中特别是自来水中分离出病原菌常常有困难
杜氏小管：装满乳糖发酵液后倒置于发酵试管中，不能有气泡。
小试管：装满乳糖发酵液后倒置于三角瓶发酵管中，不能有气泡。
本节需准备的材料
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A
B
C
50mL三倍浓缩的三角瓶发酵管2个；5mL 三倍乳糖蛋白胨发酵管10支；25毫升移液 管1支（包扎、塞棉花）；无菌三角瓶1个 （塞棉塞） 50mL三倍浓缩的三角瓶发酵管2个；5mL 三倍乳糖蛋白胨发酵管10支；25毫升移液 管1支（包扎、塞棉花）；无菌三角瓶1个 （塞棉塞） 50mL三倍浓缩的三角瓶发酵管1个；5mL 三倍乳糖蛋白胨发酵管1支；10mL乳糖发 酵管3支；25毫升移液管1支（包扎、塞棉 花）；无菌三角瓶1个（塞棉塞）；1mL无 菌枪头2支；4.5mL无菌水2支
实验七 水中细菌学检查
一、目的及内容
目的：学习使用滤膜法测定水中大肠菌群
掌握过滤除菌的方法 掌握平板计数法测定菌落总数
内容：采用滤膜法测定自水水中菌落总数 和大肠菌群
二、实验原理
滤膜法是采用滤膜过滤器过滤水样，使其 中的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜放在 适当的培养基上进行培养，大肠菌群可直 接在膜上生长，从而可直接计数。所用滤 膜是一种多孔硝化纤维膜或乙酸纤维膜， 其孔径约0.45µm。
（二）菌落总数的测定
平板浇注法
用1mL无菌吸管或微量移液器分别吸取1mL自来水于一个无 菌培养皿中，再在培养皿中分别倒入10～15mL已融化并冷 却至45~50℃的培养基，盖好平皿盖子，趁热轻轻转动培养 皿，使菌液与培养基充分混合均匀，冷凝后在恒温培养箱 中倒置培养24～２８ｈ，培养温度为36℃±1℃。
四、实验结果 (1)根据实验结果，观察滤膜上的大肠菌群菌落 的外观。 (2) 1mL自来水的菌落总数 。 (3)滤膜上所取水样中的大肠菌群数 。
实验七 水中细菌学检查
（滤膜法测定水中大肠菌群）
生活用水的水源常被生活污水或工业废水或人与动物的粪便所 污染。粪便污物含有不同类型的微生物，有腐生性的和病原性 的。腐生性微生物对人无害，而病原性微生物则能引起传染病 的发生。水源水如湖水、河水、池水和溪水，常含有很多腐生 菌，但仍可安全地饮用。然而水源一旦被粪便污染，就可能也 被肠道病原体污染而引起肠道传染病甚至流行病，如霍乱、伤 寒、细菌性痢疾和阿米巴性痢疾以及脊髓灰质炎和传染性肝炎 等病毒性疾病。因此必须对生活用水及其水源水进行严格的细 菌学检查。 测定水样是否合乎饮用标准，通常包括下列两个项目：
洁的深井水或经处理过的河水与湖水等可以取样300—500 ml；对比较清洁的河 水或湖水，
实验6 水的卫生细菌学检验
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5.
EMB平板划线 平板划线
将接种环在酒精灯火焰上灭菌； 将接种环在酒精灯火焰上灭菌； 用灭菌的接种环沾取菌悬液少许； 用灭菌的接种环沾取菌悬液少许； 用接种环在EMB平板上划线（约平板 ）， 平板上划线（ 用接种环在 平板上划线 约平板1/4）， 将接种环加热灭菌，并旋转平板（ 将接种环加热灭菌，并旋转平板（约80～ ～ 90°），继续划线。如此反复进行 ～4次； 继续划线。 °），继续划线 如此反复进行3～ 次 倒置于37℃恒温培养箱中培养24h，观察结果。 倒置于 ℃恒温培养箱中培养 ，观察结果。
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五.
1.
实验结果报告与思考题
平板菌落计数：统计每个稀释度 个平板上生长的菌落 平板菌落计数：统计每个稀释度2个平板上生长的菌落 求出平均值，并按讲义P 数，求出平均值，并按讲义 27～ P28 所述原则计算出 菌液中细菌含量； 菌液中细菌含量； 大肠菌群数测定：观察每个稀释度中 管的生长 管的生长（ 大肠菌群数测定：观察每个稀释度中3管的生长（变混 ）、产酸 变黄）和产气（杜氏小管上端有气泡） 产酸（ 浊）、产酸（变黄）和产气（杜氏小管上端有气泡） 情况，记录，并查找讲义P 情况，记录，并查找讲义 26大肠菌群细菌的最近似数 检索表，计算所给菌液中大肠菌群细菌数。 检索表，计算所给菌液中大肠菌群细菌数。 EMB平板划线分离：观察每个区菌体生长情况，是否 平板划线分离：观察每个区菌体生长情况， 平板划线分离 有单菌落出现，出现在第几区以及菌落形态、 有单菌落出现，出现在第几区以及菌落形态、颜色和 表面色泽。 表面色泽。 思考题：讲义 思考题：讲义P20 6； P25 2 ； P28 4 ；Leabharlann 2012-4-61
检测水中细菌实验报告
检测水中细菌实验报告实验目的本实验旨在探究不同水源中细菌的存在情况，以检测水质是否安全，并且比较不同水源中细菌的数量差异。
实验材料1. 不同水源的取样瓶- A组：自来水，B组：河水，C组：井水2. 细菌培养基3. 培养皿4. 恒温培养箱5. 显微镜6. 微生物鉴定手册实验步骤1. 将取样瓶置于实验台上，避免受到其他污染源的干扰。
2. 分别取代表性的自来水、河水和井水样品，并将每个样品分别装入对应组别的取样瓶中。
3. 将每个样品的取样瓶稍微晃动，以确保细菌均匀分布于水中。
4. 取样瓶的标签上注明所属组别。
5. 在实验室中，为每个组别准备三个培养皿，并在每个培养皿中倒入细菌培养基（约满一半）。
6. 分别将A组、B组和C组的水样倒入相应的培养皿当中。
7. 用试管夹将每个培养皿退出4毫升的液体（水样+培养基），并转移到三个不同的培养皿中，确保菌液均匀地分散。
8. 紧密盖上培养皿的盖子，将其放入恒温培养箱中，设置合适的培养温度（例如37）。
9. 培养72小时后，取出培养皿进行观察，并使用显微镜观察细菌的形态。
10. 根据细菌的形态和相应的实验结果，使用微生物鉴定手册进行细菌的鉴定与分类。
实验结果观察培养皿后，我们发现以下结果：- A组（自来水）：培养皿上观察到一些细菌的生长，但数量较少。
- B组（河水）：培养皿上观察到大量细菌的生长，并且形成了密集的细菌菌落。
- C组（井水）：培养皿上观察到适量细菌的生长，数量介于A组和B组之间。
实验分析根据细菌的生长情况，可以初步得出以下结论：1. 自来水中的细菌数量较少，说明自来水的水质较为安全。
2. 河水中的细菌数量较多，可能存在潜在的食品污染风险，需要处理后才能安全饮用。
3. 井水中的细菌数量处于中等水平，需要进一步检测和处理，以确保水质安全。
实验总结通过实验我们了解到不同水源中细菌的存在情况，同时比较了各个水源中细菌数量的差异。
实验结果显示，自来水的水质较为安全，而河水和井水中细菌的数量则需要进一步处理。
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大肠菌群的测定
大肠菌群是指：一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的 杆状细菌，并在乳糖培养基中37℃培养24~48 h能产酸产气。水 中大肠菌群的数目可以说明水源是否被粪便污染，并间接推测 水源受肠道病原菌污染的可能性。标准：1000 ml自来水中大 肠菌群数不超过3个。
一 水中细菌总数的测定 目的要求
器
材
1 培养基：煌绿乳糖胆盐肉汁培养基发酵管（内 有倒置德氏小管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌 水 2 实验用具：灭菌三角烧瓶，灭菌吸管，灭菌试 管
操作步骤
1 采集水样
采用细菌总数测定实验中的池水样品，取其原水样、10–1稀释水 样、10–2 稀释水样。
2. 初发酵试验
吸取上述三种水样各1 ml，分别注入装有10 ml普通浓度煌绿乳 糖胆盐肉汁发酵管中。另取10 ml原水样注入装有5 ml三倍浓缩 煌绿胆盐乳糖肉汁的试管中。混匀后，37℃培养24 h。
3. 平板分离
经24 h培养后，将产酸产气的发酵管分别划线接种于伊红美蓝琼 脂平板上，于37℃培养24 h，将符合下列特征的菌落的一小部分， 进行革兰氏染色，镜检。 a. 深紫黑色、有金属光泽。 b. 紫黑色、不带或略带金属光泽。 c. 淡紫红色、中心颜色较深。
4. 复发酵试验
经镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，则挑取该菌落的另一部分，重 新接种于普通浓度的煌绿胆盐乳糖肉汁发酵管中，每管可接种来自 同一初发酵管的同类型菌落1~3个，37℃培养24h，结果若产酸又产 气，即证实有大肠菌群存在。 证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性结果，结合大肠 菌群检数表(接种水样总量为11.11 ml，10、1、0.1、0.01 ml各1份， “+”发酵阳性；“-”发酵阴性 )得到大肠菌群数。
操作步骤
1 采集水样
1) 自来水：打开水龙头使水流5 min后，用灭菌三角烧瓶接取 水样。 2) 池水：用灭菌三角烧瓶采集水样。
2
测定细菌总数
1) 自来水： a. 取三个空的灭菌培养皿，用灭菌吸管在其中两个分别加入1 ml水样，第三个不加。 b. 在以上三个培养皿中分别倾注15 ml已溶化并冷却到45℃左 右的营养琼脂培养基，并立即在实验台上作平面旋转，使 水样与培养基混匀。 c. 培养基凝固后，倒置于37℃温箱中培养24 h，计算菌落数。
1 学习水样细菌总数测定的方法。
2 了解水源水的平板菌落计数的原则。
基本原理
本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌 总数。目前一般是以在营养琼脂培养基平板上生长 出来的菌落来计算水中细菌总数，因此仅是一种近 似值。
器
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材
培养基：营养琼脂培养基，灭菌水
2 实验用具：灭菌三角烧瓶，灭菌培养皿，灭菌 吸管，灭菌试管
池水细菌总数测定(10-1)
初发酵实验
10ml原水样
1ml原水样
0.1ml原水样
0.01ml原水样
平板分离
3、0.1ml原水样
复发酵实验
1,2 1ml原水样 3,4 0.1ml原水样 5,6 0.01ml 原水样
水的细菌学
大肠菌群
First day
afternoon-night
night night
自来水，池水稀释 倒平板 营养琼脂平板
计算菌落数
自来水，池水稀释 接乳糖发 酵管（内置德氏管）
划线于Ｅ－Ｍ平板上 分离单菌落 镜检 并进行复发酵试验
Second day Third day
Fourth day
night
பைடு நூலகம்看复发酵试验结果
Thank you for your attention
发酵管内装有煌绿乳糖胆盐肉汁培养基（液体），培养基内加有溴 甲酚紫作为pH指示剂，并倒有一德氏小管。
2. 平板分离
产酸产气的菌液在伊红美蓝琼脂平板上培养，大肠菌群发酵培养 基中乳糖造成酸性环境时，伊红和美蓝两种染料结合成复合物， 使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色菌落。
3. 复发酵试验
上述深紫色菌落经涂片染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，再进行发 酵试验，24 h后产酸产气者确定为大肠菌群阳性结果。
水的细菌总数及大肠 菌群的测定
授课教师:
孙运军
研 究 生:
穰 杰 王冶红
张印江 陆秀青
概论
测定水样是否合乎饮用标准，通常包括下列两个 项目： 1 细菌总数的测定
细菌总数是指1 ml水样在营养琼脂培养基中37℃培养24 h后所 生长的菌落数。水中细菌总数可说明水样被有机物污染的程度。 标准：1 ml自来水中细菌总数不超过100个。
每组：
• • • • • • 2个灭菌三角瓶（300ml，装水样用） 5根2ml移液管 2根10ml移液管 15个平板 5支灭菌空试管（15ml，稀释水样用） 16支空试管
• 300mlLB琼脂培养基(蛋白腖3g, yeast extract 1.5g NaCl 3g ,琼脂粉 1.5%-2%)，分2瓶。 • 150 ml煌绿乳糖胆盐肉汁培养基，(已配好， 30 g /1000 ml )，分12支（带德氏小管，6支1 包）。 • 50ml 3倍浓缩煌绿乳糖胆盐肉汁培养基，（需 要另外配制），分3支(带德氏小管） • 100ml 伊红美蓝琼脂培养基（已配好，44g /1000 ml） • 100ml 乳糖复发酵胨水，(已配好，35 g /1000 ml )
2) 池水 a. 稀释水样：取4个灭菌空试管，分别加入9 ml灭菌水。取1 ml 水样注入第一管、摇匀，再从第一管取1 ml至下一管，如此 稀释到第四管，则4管稀释度分别为10–1 、10–2 、10–3 与10–4 。 b. 从以上4管中各取1 ml稀释水至空的灭菌培养皿中，每一稀释 度做两个培养皿。 c. 向上述8个培养皿各倾注15 ml已溶化并冷却至45℃左右的营 养琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。 d. 凝固后倒置于37℃温箱中培养24 h。
3 菌落计数方法
1) 先计算相同稀释度的平均菌落数（整板均匀、半板均匀、片 状菌苔超过一半）。 2) 根据各稀释度的平均菌落数按下表计算菌落总数（平均菌落 数理想值：30~300）。
二 多管发酵法测定水中大肠菌群
目的要求
学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。
基本原理
检查水中大肠菌群的方法有多管发酵法与滤膜法。多管 发酵法是将不同体积的水样接种到乳糖胆盐发酵培养基 中，然后对各发酵管进行初发酵试验、平板分离和复发 酵实验(本次试验初发酵使用煌绿胆盐肉汁培养基) 。 1. 初发酵试验