培养基的制备程序
培养基的配制
实验五微生物培养基的配制和灭菌培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。
培养基为微生物的生长提供营养物质和生存空间。
它具有微生物正常生活所需的各种养料和适宜的环境条件；（1）适当组分和比例的营养物质；（2）适宜的pH值；（3）合适的渗透压；（4）保持无菌状态。
所以培养基是培养微生物所必需的最主要材料。
培养基的配制是微生物学工作者的主要技术操作之一。
培养基的种类：根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类：合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。
半合成培养基：由一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。
天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。
从培养基的物理状态来分：液体培养基：不加凝固剂的液态状培养基。
固体培养基：在液体培养基中加入2％左右的凝固剂的固体状培养基或固体状农副产品培养基。
半固体培养基：在液体培养基中加入0.2％-0.5％凝固剂而成的半固体状培养基。
微生物最常用的凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。
它不是一种营养物质，只能被极少数种类的细菌分解利用。
琼脂是从海藻中（主要是石花菜）提取而制成的。
是一种多糖类化合物，主要成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种可逆性胶体，在常规浓度下加热到96C以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42℃以下，又凝固为固体。
一、目的要求l. 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。
2. 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
3. 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。
二、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O等。
2. 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。
3. 其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养血、吸管、各种包装纸防水纸、绳索、棉花、标签等。
培养基制备实验报告
一、实验目的1. 掌握培养基的基本成分和配制方法。
2. 熟悉培养基的灭菌操作流程。
3. 了解培养基在微生物培养中的应用。
二、实验原理培养基是微生物生长繁殖的营养基质，通常由碳源、氮源、无机盐、生长因子和水等组成。
根据微生物的营养需求和实验目的，可以配制不同类型的培养基。
灭菌是保证培养基无菌的关键步骤，常用的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌、干热灭菌和过滤灭菌等。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 酵母提取物- 胰蛋白胨- 琼脂- NaCl- K2HPO4- MgSO4·7H2O- 水- 水平式电热灭菌锅- 高压蒸汽灭菌锅- 烧杯- 玻璃棒- 试管- 移液器- 灭菌指示剂- 灭菌棉塞2. 仪器：- 电子天平- 灭菌器- 玻璃器皿四、实验步骤1. 培养基的配制：- 称取酵母提取物10g、胰蛋白胨20g、琼脂15g、NaCl 5g、K2HPO4 1g、MgSO4·7H2O 0.5g，加入适量水溶解。
- 将溶液转移至烧杯中，用玻璃棒搅拌至完全溶解。
- 将溶液转移至锥形瓶中，用移液器定容至1000mL。
- 将锥形瓶置于电热灭菌锅中，进行121℃、20min的高压蒸汽灭菌。
2. 灭菌指示剂的加入：- 在灭菌后的培养基中，加入灭菌指示剂，观察指示剂的变化，确认培养基是否灭菌彻底。
3. 培养基的倒平板：- 将灭菌后的培养基冷却至50℃左右，倒入平板中，待凝固后，用无菌镊子取出平板，标记并放置于培养箱中。
五、实验结果与分析1. 培养基灭菌效果：- 通过观察灭菌指示剂的变化，确认培养基灭菌彻底。
2. 培养基平板制备：- 倒平板过程中，注意无菌操作，防止污染。
六、实验讨论1. 培养基的配制过程中，应注意称量准确，避免误差。
2. 灭菌过程中，应控制好温度和时间，确保培养基灭菌彻底。
3. 倒平板过程中，应注意无菌操作，防止污染。
七、实验总结通过本次实验，我们掌握了培养基的基本成分和配制方法，熟悉了培养基的灭菌操作流程，了解了培养基在微生物培养中的应用。
培养基制备的流程
培养基制备的流程
培养基制备的流程主要包括以下几个步骤：
1.计算配方：根据所需培养基的种类和实验需求，计算各成分的比例和用量。
2.称量：准确称取各种成分，如蛋白胨、牛肉膏、琼脂等。
3.溶解：将称取的成分放入适量的水中，搅拌均匀，使其充分溶解。
对于一些
不易溶解的物质，如琼脂，可能需要加热辅助溶解。
4.调pH：根据微生物的生长需求，调整培养基的pH值。
一般而言，细菌培养
基的pH值范围在6.5-7.5，真菌培养基的pH值范围在4.8-5.8。
5.过滤：将溶解好的培养基通过过滤器过滤，以去除可能存在的杂质。
6.分装：将过滤后的培养基倒入无菌的培养皿或瓶子中，注意留出适当的空隙，
以利于蒸汽的排出。
7.灭菌：将分装好的培养基进行灭菌处理，常用的方法有高压蒸汽灭菌和干热
灭菌。
灭菌过程中要注意保持培养基内部的温度和压力，确保微生物被有效杀灭。
8.检验：对制备好的培养基进行质量检验，如观察培养基的外观、透明度、pH
值等，确保符合实验要求。
9.储存：将检验合格的培养基在适当的条件下储存，如4℃冰箱或阴凉干燥处。
在使用前，如需再次检验，可进行细菌或真菌的接种试验。
需要注意的是，在培养基制备过程中要严格遵循无菌操作规程，避免微生物污染。
同时，根据实验需求选择合适的培养基类型和配方，以满足不同微生物的生长需求。
培养基配制
茎尖培养可看作是这方面较为特殊的一种方式。它采用极其幼嫩的顶芽的茎 尖分生组织作为外植体进行接种。在实际操作中，采用包括茎尖分生组织在内 的一些组织来培养，这样便保证了操作方便以及容易成活。 用靠培养定芽得到的培养物一般是茎节较长，有直立向上的茎梢，扩繁时主要 用切割茎段法，如香石竹、矮牵牛、菊花等。但特殊情况下也会生出不定芽，形 成芽丛。 2）不定芽的发育 在培养中由外植体产生不定芽，通常首先要经脱分化过程，形成愈伤组织的细 胞。然后，经再分化，即由这些分生组织形成器官原基，它在构成器官的纵轴 上表现出单向的极性（这与胚状体不同）。多数情况下它形成芽，后形成根。 另一种方式是从器官中直接产生不定芽，有些植物具有从各个器官上长出不 定芽的能力如矮牵牛、福禄考、悬钩子等。当在试管培养的条件下，培养基中 提供了营养，特别是提供了连续不断植物激素的供应，使植物形成不定芽的能 力被大大地激发起来。许多种类的外植体表面几乎全部为不定芽所覆盖。在许 多常规方法中不能无性繁殖的种类，在试管条件下却能较容易地产生不定芽 而再生，如柏科，松科，银杏等一些植物。许多单子叶植物储藏器官能强烈地 发生不定芽，用百合鳞片的切块就可大量形成不定鳞茎。 在不定芽培养时，也常用诱导或分化培养基。用靠培养不定芽得到的培养物， 一般采用芽丛进行繁殖，如非洲菊、草莓等。
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（4）配制MS铁盐母液
一般配制成100倍MS铁盐母液。 依次称取 EDTA二钠 3.73g FeSO4·7H2O 2.78g
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐 母液，共8种母液。 激素母液的配制 各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用
常用细菌培养基制备及注意事项
常用细菌培养基制备及注意事项细菌培养是生物学研究中一种重要的实验技术。
精准的细菌培养技术，可以让我们快速、准确地获得细菌样品，方便细菌的种类鉴定和活性测定。
因此，熟练掌握细菌培养基制备及其使用方法及注意事项，对于生物学研究来说是非常重要的。
一、常用细菌培养基的分类常用的细菌培养基可以分为两大类：标准培养基和特殊培养基。
标准培养基由四种基础成分构成，即营养源、碳源、离子源和碱源，重点是碱培养基。
标准培养基可以满足一般细菌的培养需求，但对于某些特殊细菌而言，可能不够充分，这时就需要特殊培养基。
特殊培养基是根据细菌的特殊需求而设计的，它可以弥补标准培养基的不足。
二、细菌培养基的制备1、准备培养基的原料首先，我们需要根据配方准备好必要的原料，比如，营养源、碳源、离子源，以及其他必要的调味料。
2、将原料进行混合然后，将所有原料放入容器中，使用搅拌器混合成细菌培养基溶液，以防止原料结块。
3、细菌培养基灭菌接下来，需要对混合好的细菌培养基进行灭菌处理，以杀灭所有混入的细菌菌株，避免对样品的污染。
一般采用蒸馏水或甲醛的方法进行灭菌处理。
4、灭菌后的细菌培养基存储至此，细菌培养基制备完毕，需要将其存放在室温下，避免阳光直射，以防菌种被破坏。
如果长期不用，应将细菌培养基冷藏或冷冻保存。
三、细菌培养基使用注意事项1、实验室清洁卫生实验室在使用细菌培养基时，应当保持良好的清洁卫生，以免在实验过程中污染样品。
2、实验前样品处理在实验前，应对样品进行必要的处理：将溶液过滤，以去除杂质；对固体样品进行消毒，以免被细菌污染。
3、避免污染在使用细菌培养基时，要谨慎操作，以避免被污染；操作过程中，应尽量避免气流，以减少培养基中的细菌数量；在使用细菌培养基后，要及时将容器盖好，以免空气中的微生物进入容器。
四、总结细菌培养基是实验研究中一种重要的实验技术，需要科学准确地进行制备和使用。
常用的细菌培养基可以分为标准培养基和特殊培养基。
细菌培养基的制备包括准备原料、混合、灭菌和存储等步骤。
制备培养基的操作要点和注意事项
制备培养基的操作要点和注意事项一、制备培养基的操作要点：1.熟化培养基：将适量的培养基用蒸馏水溶解，装入宽口烧瓶或容器中，用布覆盖并进行高压灭菌。
熟化培养基时需要使用高压灭菌器，确保培养基中的细菌等微生物被完全杀灭。
2.添加营养物质：根据所培养的微生物需要的营养物质，将适量的蛋白胨、葡萄糖、矿物盐等溶解于培养基中，并用蒸馏水调整pH值。
注意在添加营养物质时，要根据目标微生物对其需求的了解，以确保培养基中包含了所有必需营养物质。
3.混匀均匀：搅拌培养基时要保持匀速和均匀，避免产生泡沫和液面的震荡。
混匀均匀有助于营养物质的均匀分布，提高细菌等微生物的生长率。
4.测定pH值：培养基的pH值是细菌生长的重要因素之一，通常在6.5-7.5之间。
使用酸碱度计准确测定培养基的pH值，并根据需要进行调整。
过高或过低的pH值都可能影响细菌生长。
5.灭菌：培养基中的细菌、真菌等微生物会影响到目标微生物的生长和繁殖。
因此，在熟化后要进行灭菌处理，常用的方法有高压灭菌、过滤灭菌和化学灭菌等。
在灭菌的过程中要注意操作的严谨，确保培养基中不存在任何的污染源。
6.储存：制备好的培养基在灭菌后，应放置于干燥、阴凉通风处，避免阳光直射。
同时要注意储存方式，避免出现倒置、倾斜等情况，防止培养基发生泄漏。
二、制备培养基的注意事项：1.空气污染：在制备培养基的过程中，要保持操作地点的清洁和物品的无菌状态，避免空气中的细菌、真菌等污染源进入到培养基中。
2.器皿消毒：使用前需要对容器、烧杯、移液器等器皿进行充分消毒，避免残留有杂菌或有机物质。
3.营养物质选择：根据目标微生物的需要，选择合适的营养物质添加到培养基中。
要了解目标微生物对营养物质的需求，合理添加。
4.pH值调整：细菌对pH值的敏感度较高，因此需要精确调整培养基的pH值。
同时，注意pH值的稳定性，避免因为培养条件不合适而引起pH值的变化。
5.消毒处理：在制备培养基、添加营养物质等操作中，要对使用的器械进行彻底的消毒处理，以保证培养基的无菌状态。
培养基的制备实验报告
培养基的制备实验报告
实验目的，通过本次实验，掌握培养基的制备方法，为后续微生物实验提供基
础条件。
实验原理，培养基是微生物生长繁殖的营养物质，其主要成分包括碳源、氮源、磷源、微量元素和水。
培养基的制备需要根据不同微生物的生长需求进行配方，通常包括基础培养基和选择性培养基两种类型。
实验步骤：
1. 称取适量蔗糖和琼脂，加入蒸馏水中，混合搅拌至完全溶解；
2. 加入适量氨基酸、磷酸盐和微量元素，搅拌均匀；
3. 调节pH值至7.0，加热煮沸，然后灭菌；
4. 倒入培养皿中，待凝固后即可使用。
实验结果，制备好的培养基呈黄色透明凝胶状，无异味，pH值稳定在7.0左右。
实验分析，本次实验中，我们成功制备了基础培养基，为后续微生物的培养提
供了必要条件。
在实验过程中，需要注意控制好各种原料的比例和加热时间，以保证培养基的质量和稳定性。
实验结论，通过本次实验，我们掌握了基础培养基的制备方法，并取得了良好
的实验结果。
培养基的质量对微生物的培养和研究具有重要影响，因此在实验过程中需要严格按照配方和操作规程进行操作，确保培养基的质量和稳定性。
实验改进，在今后的实验中，可以尝试制备不同类型的培养基，以满足不同微
生物的生长需求，并且可以对培养基的配方和制备工艺进行进一步优化，提高培养基的质量和效率。
总结，培养基的制备是微生物实验的基础，掌握好培养基的制备方法对于后续实验的顺利进行具有重要意义。
通过本次实验，我们对培养基的制备方法有了更深入的理解，为今后的实验工作奠定了基础。
以上就是本次培养基的制备实验报告内容，希望对大家有所帮助。
大肠杆菌培养基制备过程
大肠杆菌培养基制备过程
制备大肠杆菌培养基的过程如下：
1. 准备培养基成分：大肠杆菌培养基的成分包括碳源、氮源、矿物质盐及其他添加物。
常用的
碳源有葡萄糖、蔗糖等；氮源可以选择氨基酸、氨基酸类化合物等；矿物质盐可以选择无机盐、有机盐等。
添加剂有pH调节剂、辅因子等。
2. 杀菌处理：将所需的碳源、氮源、矿物质盐及其他添加物加入适量的蒸馏水中，经过高温高
压灭菌处理。
3. 酶解处理：将培养基中添加的蛋白质进行酶解处理，以提供大肠杆菌生长所需的氮源。
4. 调整pH值：使用pH调节剂调整培养基的pH值，常见的调节剂有氢氧化钠和氢氧化钾等。
5. 分装和灭菌：将制备好的培养基分装到培养瓶或培养皿中，然后进行高温高压灭菌处理，以
保证培养基的无菌状态。
6. 储存和使用：将灭菌后的培养基在低温下储存，以延长其使用寿命。
使用时，将培养基回溶，配制成适当浓度的液态培养基，用于大肠杆菌的培养和研究。
需要注意的是，大肠杆菌培养基的制备过程可能存在一定的差异，具体的制备步骤和成分比例
可根据实验需求进行调整。
此外，操作过程中需要注意无菌操作，并保持培养基的无菌状态，
以避免杂菌污染。
实验4 培养基的制备
4）鉴别培养基(differential medium) 用于鉴别不同类型微生物的培养基
特定的化学反应，产生明显的特征性变化(大肠杆菌在伊红美蓝固体 培养基上呈现金属光泽)
根据这种特征性变化,可将该种微生物与其他微生物区分开来。 5）选择培养基(selective medium)
用于将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基 根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不 同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要 的微生物的生长，有利于所需微生物的生长(如用于沙门氏菌培养的 四硫磺酸钠培养基,其可抑制非沙门氏菌的细菌生长)。
2、接种操作
无菌操作： 火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行
任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素： 碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水
任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理
培养基配制原理
依据不同的微生物对生方法
（1）、选择适宜的营养物质
（2）、营养物的浓度及配比合适
（3）、物理、化学条件适宜(如酸碱度）
在一定条件下含有某种微生物生长繁殖所需的所有营养物质的培养基
一、无菌技术
微生物无处不在，在微生物的操作和研究中无菌 操作的概念必须贯串始终，因此：
1。用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物； 2。在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染；
二 培养基
培养基（medium）是人工配制的，适合微生物生长繁殖或 产生代谢产物的营养基质。
周四
营养琼脂：3000ml 6组，（每组500ml） 真菌培养基（沙保劳氏）1200ml 2组 （500ml，700ml） 麦康凯培养基：1100ml 2组（500ml，600ml
原种培养基的制备实验报告
原种培养基的制备实验报告一、引言原种培养基是一种用于细菌原种保存和增殖的培养基。
它提供了细菌生长所需的营养物质和环境条件，可以维持细菌的生命活动，并确保其纯度和活力。
本实验旨在制备一种适用于原种保存的培养基，并探究其制备方法及效果。
二、实验材料与方法2.1 实验材料本实验所需材料包括葡萄糖、酵母提取物、大豆胰蛋白酶胨、氯化钠、琼脂、纯水等。
2.2 实验方法1）称取适量的葡萄糖、酵母提取物、大豆胰蛋白酶胨、氯化钠，按一定比例加入纯水中。
2）将上述混合物溶解均匀，并加热至沸腾。
3）加入适量的琼脂，搅拌均匀，待冷却至约50℃时，倒入培养皿中。
4）待培养基凝固后，用无菌针将待保存的细菌原种划线接种于培养基上。
5）将接种好的培养皿倒置于恒温培养箱中，设定适宜的温度和湿度进行培养。
三、实验结果与分析经过一段时间的培养，观察到培养皿上有细菌生长，并呈现典型的菌落形态。
通过显微镜观察，发现菌落中细菌呈现出典型的形态特征，证明该培养基能够维持细菌的生长和繁殖。
四、实验讨论本实验制备的原种培养基采用了常见的成分，如葡萄糖、酵母提取物等，这些成分为细菌提供了所需的营养物质。
而大豆胰蛋白酶胨和氯化钠则提供了细菌生长所需的氮源和无机盐。
琼脂作为固化剂，使培养基凝固后能够提供良好的生长环境。
通过本实验制备的原种培养基，在适宜的温度和湿度条件下，成功保存了细菌原种，并促使其生长和繁殖。
这为细菌的后续研究提供了有力的支持和基础。
五、实验结论本实验制备的原种培养基有效地保存和增殖了细菌原种，证明其具有一定的生长促进作用。
该培养基的制备方法简单易行，成本较低，可广泛应用于细菌的原种保存和研究工作中。
六、致谢感谢实验组成员的共同努力和合作，为本次实验的顺利进行提供了有力的支持。
参考文献：1. 张三，李四，王五. 原种培养基的制备及应用[J]. 微生物学杂志，2010，28(3)：123-128.2. 陈六. 微生物学实验技术手册[M]. 北京：科学出版社，2008.（注：以上参考文献为虚构，仅供参考）以上就是本次原种培养基制备实验的全部内容。
培养基制备
微生物的接种技术
微生物接种技术是进行微生物实验和相关研 究的基本操作技能。 无菌操作是微生物接种技术的关键。斜面接 种、液体接种、固体接种和穿刺接种操作均以获 得生长良好的纯种微生物为目的。 由于接种方法不同，采用的接种工具也有区 别，如固体斜面培养体转接时用接种环；穿刺接 种时用接种针，液体转接用移液管等。
试管拔塞后过火灭菌和取菌
8)塞管塞 取出接种环，灼烧试管口，并在火 塞管塞 取出接种环，灼烧试管口， 焰旁将管塞旋上。 不要用试管去迎棉塞， 焰旁将管塞旋上 。 不要用试管去迎棉塞 ， 以免试管在移动时纳入不洁空气。 以免试管在移动时纳入不洁空气。 9)将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉 将接种环灼烧灭菌。 将接种环灼烧灭菌 放下接种环， 花塞旋紧。 花塞旋紧。
分装量的要求
• 琼脂平板： 脂平板： –先将灭菌琼脂融化后冷却至50℃左右，以无菌 先将灭菌琼脂融化后冷却至50℃左右， 先将灭菌琼脂融化后冷却至50℃左右 操作倾注于灭菌平皿内，水平旋转平皿， 操作倾注于灭菌平皿内，水平旋转平皿，待琼 脂凝固后将平皿翻转， 4℃保存备用。 脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。 保存备用
消毒和灭菌
采用强烈的理化因素使任何物体内外所有的微 生物永远丧失其生长繁殖能力的措施称之为灭菌。 生物永远丧失其生长繁殖能力的措施称之为灭菌 。 灭菌是要进行微生物纯培养的需要。 灭菌是要进行微生物纯培养的需要。 实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到 杀菌效果。 杀菌效果 。 高温主要是使微生物的蛋白质和核酸等 重要生物大分子发生变性。 重要生物大分子发生变性 。 高温灭菌分为干热灭菌 和湿热灭菌两大类。 和湿热灭菌两大类 。 湿热灭菌的效果比优于干热灭 湿热下热量易于传递， 菌 。 湿热下热量易于传递 ， 更容易破坏保持蛋白质 稳定性的氢键等结构， 加速其变性。 此外， 稳定性的氢键等结构 ， 加速其变性 。 此外 ， 过滤除 射线灭菌和消毒、 菌 、 射线灭菌和消毒 、 化学药物灭菌和消毒等也是 微生物学操作中不可缺少的常用方法。 微生物学操作中不可缺少的常用方法。
5.培养基的制备和消毒灭菌
6.灭菌 塞棉塞，包扎，灭菌。培养基做完后，要求 在2-4小时内灭菌，否则会被污染。 7.摆斜面 灭菌完毕，冷却到60℃左右再摆斜面，以免 产生过多冷凝水。
棉塞制作
牛肉膏蛋白胨培养基（ g/L,培养细菌用）
牛肉膏
3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g（取18g） 水 1000ml pH 7.0-7.2 121℃灭菌20min
3.调节pH值 培养基溶解用pH试纸测pH，然后根据要求 加酸或碱（一般用1M HCl和1M NaOH），要缓 慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然pH时， 不用调节。 4.过滤 用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要 求可省去。
5.分装 将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内， 管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。 分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污 染。分装量可分为下面几方面： （1）斜面：装量为管长的1/5。 （2）液体培养基：装量为管长的1/4。 （3）半固体培养基：装载量为管长的1/3。
高氏1号（ g/L,培养放线菌用）
可溶性淀粉 KNO3 NaCl
K2HPO4
MgSO4 FeSO4
琼脂
水 pH
20g 1g 0.5g 0.5g 0.5g 0.01g 15-20g（取18g） 1000ml 7.2-7.4
121℃灭菌20min
马丁氏培养基（g/L,分离真菌用）
NaCl、K2HPO4、 KH2PO4、 KNO3、MgSO4、 FeSO4、孟加拉红、1mol/L NaOH、
2.器材：
试管、烧杯、三角瓶、量筒、玻璃棒、铁架台、漏
斗、天平、牛角匙、高压锅、微波炉、 pH试纸 （5.5-9.0）、棉花、纱布、线绳、聚丙烯袋等。
微生物培养基的制备
微生物培养基的制备一、玻璃器皿的清洗在制备培养基的过程中，首先要使用一些玻璃器皿，如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。
这些器皿在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。
有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用。
1、新购的玻璃器皿除去包装沾染的污垢后，先用热肥皂水刷洗，流水冲净，再浸泡于１～２％的工业盐酸中数小时，使游离的碱性物质除去，再以流水冲净。
对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上将水空干，即可使用。
2、用过的玻璃器皿凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用后可随时冲洗，吸取过化学试剂的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。
有可能被病原菌污染的器皿，必须经过适当消毒后，将污垢除去，用皂液洗刷，再用流水冲洗干净。
若用皂液未能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。
洗液的主要成份是重铬酸钾和浓流酸，其作用是将有机物氧化成可溶性物质，以便冲洗。
洗液有很强的腐蚀作用，使用时应特别小心，避免溅到衣服、身体和其他物品上。
二、培养基的类型在实验室中配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物的任何营养基质，都叫做培养基(Media)。
由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。
我们可根据某种标准，将种类繁多的培养基划分为若干类型。
1、根据对培养基组成物质的化学成分是否完全了解来区分，可以将培养基分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。
１）天然培养基天然培养基是指利用各种动、植物或微生物的原料，其成分难以确切知道。
用作这种培养基的主要原料有：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、各种饼粉、马铃薯、牛奶、血清等。
用这些物质配成的培养基虽然不能确切知道它的化学成分，但一般来讲，营养是比较丰富的，微生物生长旺盛，而且来源广泛，配制方便，所以较为常用，尤其适合于配制实验室常用的培养基。
实验二常用基础培养基的制备
实验二常用基础培养基的制备同学们大家好欢迎来到微生物检验课堂今天我们做的实验是常用基础培养基的制备。
这节课我们一起来学习三种不同的培养基制备的操作;好那我们开始，这节课的实验原理是：培养基是人工合成的一种混合营养料，用以分离细菌。
基础培养基中含有大多数常见菌生长繁殖所需要的营养物质，并可制成液体、半固体、固体三种不同的性状。
实验项目是细菌培养基的制备，最常见的培养基包括：肉汤培养基的制备普通琼脂平板培养基的制备半固体斜面培养基的制备等三种方法实验目的是：掌握培养基制备方法实验材料有：牛肉膏、蛋白胨，氯化钠、蒸馏水琼脂粉，10%NaOH pH试纸、三角烧瓶量筒，天平酒精灯、等培养基的制备步骤：配料→熔化→测定pH→滤过+分装→灭菌→备用。
肉汤培养基:取1000ml蒸馏水,加人牛肉膏3-5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,混合加热溶解，调整pH至7.4-7.6,分装于烧瓶中，可供一般细菌生长。
(2) 普通琼脂培养基:取1000ml肉汤培养基，加入2% ~3%琼脂，加热溶化，过滤,分装于烧瓶或试管中。
(3)半固体培养基:取1000ml肉汤培养基，加人3-5g琼脂，分装于烧瓶或试管中，主要用于保存菌种或观察细菌动力三种培养基分装好后均在全自动高压灭菌器中高压。
高压灭菌的主要方法：首先把制备好的培养基放入灭菌器里，把盖子盖好，温度调制121.3摄氏度，时间调制30分钟，开始高压灭菌，好，灭菌时间到了，取出培养基，待冷却后即可以使用。
利用PPT照片展示结果：一下就是三种培养基制备好后的形态。
注意：通过今天的实验我们已经学到了固体培养基，液体培养基，半固体培养基等三种不同培养基的制备，下课后希望大家可以分组讨论本次实验收获。
好同学们，今天的课程就讲到这里，下节课再见。
固体培养基的制备流程和注意事项
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细菌培养基的制备步骤
细菌培养基的制备步骤
嘿，朋友！今天咱们来聊聊细菌培养基的制备步骤，这可是个挺有趣的事儿。
你知道吗，要准备细菌培养基，第一步得把要用的东西都找齐啦。
像什么培养皿、各种试剂、玻璃棒、天平等等，一个都不能少。
就像做饭前得把锅碗瓢盆都准备好一样。
东西齐了，那就开始称取各种材料。
这可得细心点儿，不能多也不能少。
比如说需要多少克的蛋白胨，多少克的氯化钠，都得量准了。
想象一下，要是盐放多放少了，做出来的菜味道可就不对啦，这培养基也是一个道理。
称好材料，就把它们一股脑儿地放到容器里，加上适量的水。
然后就开始加热搅拌，让它们充分溶解，混合均匀。
这时候就像是在熬一锅汤，得不停地搅和，让里面的东西都融合在一起。
等都溶解好了，还得调调酸碱度。
用 pH 试纸测一测，要是酸了或者碱了，就加些东西调整调整，直到达到合适的 pH 值。
这就好像做菜的时候尝尝咸淡，不合适就再加点调料。
分装完了，还得给它们消消毒。
一般会用高温高压灭菌的方法，把里面可能存在的杂菌都杀死，这样才能保证培养出来的细菌是我们想要的。
消毒完了，可别着急打开，得等冷却下来。
不然一下子打开，热气冲出来，说不定还会烫到自己呢。
等冷却好了，这细菌培养基就算是制备完成啦。
你看，制备细菌培养基其实也没那么难，只要一步一步认真做，就能成功。
以后要是有机会，你也可以自己动手试试哦！
怎么样，听我这么一说，是不是觉得还挺简单有趣的？其实啊，科学实验很多时候就像我们日常生活中的一些事情，只要用心去做，都能做好。
希望你也能在探索科学的道路上找到乐趣！。
培养基的制备步骤
培养基的制备步骤
嘿，咱今儿就来讲讲培养基的制备步骤，这可真是个有意思的事儿呢！
你想啊，培养基就像是微生物的小家园，咱得给它们打造一个舒适又营养的环境，让它们能开开心心地生长、繁殖。
首先呢，咱得准备好各种材料，这就好比是给小家园准备建筑材料一样。
什么水啊、各种营养成分啊，都得精挑细选，可不能马虎。
然后就是调配啦！就像做菜一样，得把各种材料按照一定的比例混合在一起，这可得有耐心，不能着急。
要是比例不对，那微生物们可就住得不舒服啦。
接着呢，要调节酸碱度。
这就好比给小家园调节温度和湿度一样重要，得让微生物们觉得刚刚好，不然它们可不乐意待。
再之后就是灭菌啦！这可是个关键步骤，就像给小家园来个彻底的大扫除，把那些坏家伙、杂菌都给消灭掉，给咱要培养的微生物一个干干净净的环境。
灭菌完了可不能马上就用哦，还得等它冷却下来，这就像是让小家园冷静冷静，准备迎接新主人。
等冷却好了，就可以把培养基倒到培养皿或者其他容器里啦。
这就像是给小家园摆上各种家具，让微生物们能舒舒服服地待着。
你说，这培养基的制备是不是挺有趣的？就像是在给微生物们盖房子、装修一样。
咱可得认真对待每一个步骤，这样才能培养出健康、
活泼的微生物呀！
想象一下，如果哪个步骤出了差错，那微生物们可能就长不好，或
者干脆不长了，那咱不就白忙活啦？所以啊，一定要细心细心再细心！
总之呢，培养基的制备虽然看起来有点复杂，但只要咱一步一步来，就一定能做好。
这不仅是一门技术，更是一门艺术呢！让我们一起努力，为微生物们打造出最棒的小家园吧！。
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培养基的制备程序不同类型培养基制备的程序也不尽相同。
但一般培养基的程序主要可分为：配料、溶化、矫正pH、澄清过滤、分装、灭菌及检定等8个步骤。
（一）配料
按培养基处方准确称取各种成分，先在三角烧瓶中加入少量蒸馏水，再加入各种成分，以防蛋白胨等粘附于瓶底，然后再以剩余的水冲洗瓶壁。
（二）溶化
将各种成分混匀于水中，最好以流通蒸气溶化半小时，如在电炉上溶化应随时搅拌，如有琼脂成分时更应注意防止外溢。
溶化完毕，补足失去的水分。
（三）矫正pH
1.pH测定
取与标准管同口径的试管（通常用华氏试管）3支，于第1、3管各加入欲测定pH的的培养基5ml，并于第一管中加入0.2g／L的酚红0.25ml作为测定管，混匀；于第2管加入蒸馏水5ml，第4管为pH标准比色管。
2.pH的校正
若测定管过酸或过碱可用0.1mol／L氢氧化钠或0.1mol／L盐酸溶液矫正，直至颜色与标准管相同为止，加碱或加酸时要精确缓慢，每加1滴后要充分混匀，比色后再加第2滴（有时仅加半滴）准确记录加入的量。
3.计算
设5ml培养基矫正pH至7.4时需0.1mol／L氢氧化钠0.15ml，现有培养基4990ml，需加氢氧化钠的量可按下列方法计算：5∶4990＝0.15∶X
X＝0.15×4990/5＝149.7（ml）
如将此0.1mol／L的氢氧化钠改用1mol／L的氢氧化钠时，则需14.9ml即可。
（四）过滤澄清
培养基配制后一般都有沉渣或混浊出现，需过滤成清晰透明后方可使用，常用的过滤方法如下：
1.液体培养基
液体培养基必须清晰，以便观察细菌的生长情况，常用滤纸过滤，亦可在加热前加入用水稀释的鸡蛋白（1000ml培养基用1个鸡蛋白）在100℃加热后保持60～70℃40～
60分钟，使其不溶性物质附于凝固的蛋白上而沉淀，然后再用虹吸法吸出上清液或以滤纸过滤。
2.固体培养基
如系琼脂培养基，于加热融化后需趁热以绒布或两层纱布中夹脱脂棉过滤；亦可用
自然沉淀法，即将琼脂培养基盛人铝锅或广口搪瓷容器内，以高压（103.43kPa）蒸汽融化15分钟后，静置高压锅内过夜，次日将琼脂倾出，用刀将底部沉渣切去，再融化即可收清晰的琼脂培养基。
（五）分装
1.根据需要将培养基分装于不同容量的三角烧瓶、试管中。
分装的量不宜超过容器的2／3以免灭菌时外溢。
2.琼脂斜面分装量为试管容量的1／5，灭菌后须趁热放置成斜面，斜面长约为试管长的2／
3.
3.半固体培养基分装量约为试管长的1／3，灭菌后直立凝固待用。
4.高层琼脂分装量约为试管的1／3，灭菌后趁热直立，待冷后凝固待用。
5.液体培养基分装于试管中，约是试管长度的1／3.
6.琼脂平板：将灭菌（或加热融化）后的培养基冷至50℃左右，以无菌手续倾人灭菌平皿内，内径9cm的平皿倾注培养基约13～15ml，轻摇平皿底，使培养基平铺于平皿底部，待凝固后即成，倾注培养基时，切勿将皿盖全部启开，以免空气中尘埃及细菌落入。
新制成的平板培养基（简称平板），表面水分较多，不利于细菌的分离，通常应将平皿倒扣搁置于37℃培养箱内约30分钟待平板平面干燥后使用。
（六）灭菌
不同成分、性质的培养基，可采用不同的灭菌方法。
高压蒸汽灭菌法：高压灭菌的温度与时间随培养基的种类及数量的不同有所差别，
一般培养基少量分装时高压（103.43kPa）灭菌15分钟即可，培养基分装量较大时，可高压（103.43kPa）灭菌30分钟，含糖的培养基高压（55.16kPa）灭菌15分钟。
以免糖类被破坏。
（七）检定
每批培养基制成后须经检定方可使用，检定时将培养基放37℃温箱内培养24小时后，证明无菌，同时用已知菌种检查在此培养基上生长繁殖及生化反应情况，符合要求者方可使用。
（八）保存
制好的培养基，不宜保存过久，以少量勤做为宜。
每批应注明名称，分装量，制作日期等，放在4℃冰箱内备用。